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1、呼吸道感染病原体抗体呼吸道感染病原体抗体检测及应用检测及应用云南昆钢医院检验科湛成国一、一、呼吸道感染概述呼吸道感染概述二、二、九项呼吸道感染病原体九项呼吸道感染病原体IgMIgM抗体检测抗体检测一、一、呼吸道感染概述呼吸道感染概述 1. 1.概述概述 呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。分为上呼吸道感染和下呼气管和支气管等呼吸系统。分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染，吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染，指鼻腔、咽喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的指鼻腔、咽喉部急性炎症的概称
2、，是呼吸道最常见的一种传染病。常见病因为病毒，少数由细菌引起一种传染病。常见病因为病毒，少数由细菌引起，患患者不者不分年龄、性别、职业和地区分年龄、性别、职业和地区，不仅具有较强的传不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。下呼吸道感染是最常染性，而且可引起严重并发症。下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管见的感染性疾患，包括急性气管支气管支气管炎炎、慢性支气慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起衣原体、军团菌等微生物引起。其其防治应遵循防治应遵循预防为预防为主、准确诊断、及时治疗主、准确诊断
3、、及时治疗的原则的原则，治疗时必须明确引，治疗时必须明确引起感染的起感染的病原体病原体以选择有效的抗生素。以选择有效的抗生素。 2 2、临床症状、临床症状 1 1）局部症状：鼻塞、流涕、喷嚏、干咳、咽部不）局部症状：鼻塞、流涕、喷嚏、干咳、咽部不适和咽痛等，多于适和咽痛等，多于3 34 4天内自然痊愈。天内自然痊愈。 2 2）全身症状：发热、烦躁不安、头痛、全身不适、）全身症状：发热、烦躁不安、头痛、全身不适、乏力等。部分患者有食欲不振、呕吐、腹泻、腹痛等乏力等。部分患者有食欲不振、呕吐、腹泻、腹痛等消化道症状。腹痛多为脐周阵发性疼痛，无压痛，可消化道症状。腹痛多为脐周阵发性疼痛，无压痛，可能
4、为肠痉挛所致；如腹痛持续存在，多为并发急性肠能为肠痉挛所致；如腹痛持续存在，多为并发急性肠系膜淋巴结炎。系膜淋巴结炎。 3 3）婴幼儿起病急，全身症状为主，局部症状较轻。）婴幼儿起病急，全身症状为主，局部症状较轻。多有发热，体温可高达多有发热，体温可高达39394040，热程，热程2 23 3天至天至1 1周左周左右，起病右，起病1 12 2天可因高热引起惊厥。年长儿以局部症天可因高热引起惊厥。年长儿以局部症状为主，全身症状较轻，可仅轻度发热。状为主，全身症状较轻，可仅轻度发热。 3 3、非典型呼吸道病原体、非典型呼吸道病原体 呼吸道非典型病原体是指除肺炎双球菌以外的病呼吸道非典型病原体是指除
5、肺炎双球菌以外的病原体，原体，已报道的非典型呼吸道病原体有很多，最常见已报道的非典型呼吸道病原体有很多，最常见的有嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、的有嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、Q Q热立克热立克次体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感次体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒等。病毒等。 4 4、非典型呼吸道病原体的检测方法、非典型呼吸道病原体的检测方法 分子生物学检测：分子生物学检测：PCR PCR 病原检测：病原体分离培养病原检测：病原体分离培养 血清学检测：血清学检测：ELISAELISA、IFA(IFA(间接免疫荧光抗体法间接免疫荧光抗体法) ) 5 5、呼
6、吸道传染病的预防措施、呼吸道传染病的预防措施 避免受凉避免受凉 净化环境净化环境 管理传染源，切断传播途径管理传染源，切断传播途径 补充营养补充营养 注意生活规律注意生活规律 加强个人卫生和个人防护加强个人卫生和个人防护 自动免疫自动免疫二、九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测 目前市场上商品化的呼吸道九联检产品基本都是目前市场上商品化的呼吸道九联检产品基本都是检测以下九项：嗜肺军团菌、肺炎支原体、检测以下九项：嗜肺军团菌、肺炎支原体、Q Q热立克次热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒（感病毒、乙型流
7、感病毒和副流感病毒（1 1、2 2、3 3型）。型）。 西班牙西班牙VIECELLVIECELL公司出品公司出品 安图代理安图代理 1.1.检测样本要求检测样本要求 本试剂盒仅适用于检测人血清。其血液采集需由本试剂盒仅适用于检测人血清。其血液采集需由专业人员无菌静脉穿刺采集。建议使用消毒或无菌技专业人员无菌静脉穿刺采集。建议使用消毒或无菌技术，以保持样本的完整性。血清样本采集后如不在术，以保持样本的完整性。血清样本采集后如不在8 8小小时内检测应时内检测应2 28 8 C C冷藏，如冷藏，如7 7天内不检测，则应冷冻天内不检测，则应冷冻（-20-20 C C）保存。不要反复冻融以防止免疫球蛋白
8、滴度）保存。不要反复冻融以防止免疫球蛋白滴度降低，特别是降低，特别是IgMIgM。不要使用高血脂或污染的血清。若。不要使用高血脂或污染的血清。若样本中含有微粒要离心使之澄清。样本中含有微粒要离心使之澄清。 2.2.检测方法原理检测方法原理 间接免疫荧光法（间接免疫荧光法（IFAIFA）是基于待测样本中的抗体）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。样本中存在的与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。在下一步骤中，抗原在洗涤步骤中除去。在下一步骤中，抗原- -抗体复
9、合物抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应，用免疫荧光显微镜与荧光素标记的抗人球蛋白反应，用免疫荧光显微镜观察结果。观察结果。 3.3.操作流程操作流程 4.4.4.4.显微镜观察显微镜观察显微镜观察显微镜观察病原体病原体病原体病原体形态或荧光模式形态或荧光模式形态或荧光模式形态或荧光模式嗜肺军团菌嗜肺军团菌杆状杆状肺炎支原体肺炎支原体细胞外围荧光模式细胞外围荧光模式立克次体立克次体球杆状球杆状肺炎衣原体肺炎衣原体球状球状腺病毒腺病毒混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒 混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞
10、膜）甲型流感病毒甲型流感病毒混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）乙型流感病毒乙型流感病毒混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）副流感病毒副流感病毒混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜） 5.5.结果判读结果判读 1 1）阳性结果：可以观察到腺病毒、流感病毒、呼吸）阳性结果：可以观察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%1-15%细胞的细细胞的细胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光（在副流感病毒胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光（在副流感病毒和呼吸
11、道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色荧光。荧光。 2 2）阴性结果：可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克）阴性结果：可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。 6.6.注意事项注意事项 1 1）每一次
12、试验都应设立阳性和阴性对照，以确认试）每一次试验都应设立阳性和阴性对照，以确认试验和试剂盒的有效性。观察到的荧光模式应与说明书验和试剂盒的有效性。观察到的荧光模式应与说明书要求相符合，否则检验无效。要求相符合，否则检验无效。 2 2）洗涤时注意不要直接对着孔直接冲洗，以免冲洗）洗涤时注意不要直接对着孔直接冲洗，以免冲洗掉已经固化反的应复合物。掉已经固化反的应复合物。 3 3）单一样本抗体检测结果不能帮助作出近期感染的）单一样本抗体检测结果不能帮助作出近期感染的诊断。应采集双份样本（急性期和康复期）同时检测诊断。应采集双份样本（急性期和康复期）同时检测来观察血清转化或抗体水平的明显升高。来观察血清转化或抗体水平的明显升高。 4 4）载玻片上病人样本交叉污染会导致错误结果，要）载玻片上病人样本交叉污染会导致错误结果，要小心操作防止发生。小心操作防止发生。 5 5） 吸附剂加入样本后要注意观察是否有明显的沉吸附剂加入样本后要注意观察是否有明显的沉淀出现。淀出现。 谢谢！
