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1、大家好大家好2021/3/21生物安全柜的选择、使用及维护生物安全柜的选择、使用及维护李 仁 清 博士北京市疾病预防控制中心 2021/3/22依依 据据GB 194892007实验室生物安全通用要求实验室生物安全通用要求实验室生物安全手册实验室生物安全手册（第三版，（第三版，2004）ISO 151902003医学实验室医学实验室安全要求安全要求YY0569-2005 生物安全柜（生物安全柜（2005.7.18）JG170-2005 生物安全柜（生物安全柜（2005.3.25）实验室生物安全指南（第三版，实验室生物安全指南（第三版，2004）生物危害一级防护：生物安全柜的选择、安装和使生物危
2、害一级防护：生物安全柜的选择、安装和使用（第二版，用（第二版，2000.9）微生物和生物医学实验室生物安全手册（第四版，微生物和生物医学实验室生物安全手册（第四版，1999.4）2021/3/23目目 的的掌握生物安全柜的选择、放置、使掌握生物安全柜的选择、放置、使用和维护用和维护熟悉生物安全柜的检测方法熟悉生物安全柜的检测方法2021/3/24需要解决的六个问题需要解决的六个问题l为什么选择生物安全柜？为什么选择生物安全柜？l选择什么样的生物安全柜？选择什么样的生物安全柜？l怎样放置生物安全柜？怎样放置生物安全柜？l怎样使用生物安全柜？怎样使用生物安全柜？l怎样维护生物安全柜？怎样维护生物安
3、全柜？l怎样检测生物安全柜？怎样检测生物安全柜？2021/3/25选择生物安全柜的理由选择生物安全柜的理由u工作对象具有生物危害工作对象具有生物危害原代培养物、菌毒种以及诊断性标本等原代培养物、菌毒种以及诊断性标本等 -具有潜在感染性的实验材料具有潜在感染性的实验材料属于属于人间传染的病原微生物名录人间传染的病原微生物名录中第一、中第一、二、三和四类微生物二、三和四类微生物2021/3/26人间传染的病原微生物名录人间传染的病原微生物名录2021/3/27类与级对应表类与级对应表-GB19489-2004实验室生物安全通用要求第一类第一类 第二类第二类第三类第三类第四类第四类2021/3/28
4、选择生物安全柜的理由选择生物安全柜的理由u容易产生气溶胶的工作行为容易产生气溶胶的工作行为 对液体或半流体进行摇动、倾注或搅拌操作时，对液体或半流体进行摇动、倾注或搅拌操作时， 将液体滴加到固体表面上或另一种液体中时，将液体滴加到固体表面上或另一种液体中时， 在对琼脂板划线接种、用吸管接种细胞培养瓶，在对琼脂板划线接种、用吸管接种细胞培养瓶， 采用多道加样器将感染性试剂的混悬液转移到微采用多道加样器将感染性试剂的混悬液转移到微量培养板中，量培养板中， 对感染性物质进行匀浆及涡旋振荡，对感染性物质进行匀浆及涡旋振荡， 对感染性液体进行离心，对感染性液体进行离心， 进行动物操作时。进行动物操作时。
5、2021/3/29选择生物安全柜的理由选择生物安全柜的理由u生物安全柜能够阻止工作中所产生生物安全柜能够阻止工作中所产生的气溶胶对外环境或者操作者本身产的气溶胶对外环境或者操作者本身产生危害，还可以减少样本之间由于气生危害，还可以减少样本之间由于气溶胶产生的交叉污染。溶胶产生的交叉污染。2021/3/210生物安全柜基本工作原理生物安全柜基本工作原理l定向气流：定向气流： 风幕风幕lHEPA滤器：滤器： 一种一次性使用，一种一次性使用，框架内有多重褶迭框架内有多重褶迭的干性过滤材料的过滤器，对的干性过滤材料的过滤器，对0.3微米气溶胶的过滤效微米气溶胶的过滤效能达到能达到99.97%。 保证排
6、出气体和内循环气体的无菌状态。保证排出气体和内循环气体的无菌状态。2021/3/211生物安全柜的选择生物安全柜的选择要素：要素：样品的生物危害样品的生物危害第一、二、三和四类病原微生物第一、二、三和四类病原微生物保护样品保护样品I级生物安全柜不保护样品级生物安全柜不保护样品其他其他是否涉及到挥发性、放射性核素或化学品是否涉及到挥发性、放射性核素或化学品2021/3/212生物安全柜的选择（一）生物安全柜的选择（一）生物安全柜生物安全柜进风面速率进风面速率（m/s）气流百分数气流百分数排风系统排风系统重新循环重新循环部分部分排出部分排出部分 I 级级0.360100硬管硬管级级A1型型0.38
7、0.517030排到房间或套管排到房间或套管连接处连接处外排风型外排风型级级A2型型0.517030套管连接处套管连接处级级B1型型0.513070硬管硬管级级B2型型0.510100硬管硬管III级级不适用不适用0100硬管硬管2021/3/213生物安全柜的选择（二）生物安全柜的选择（二）生物安全柜生物安全柜保护类型保护类型保护对象保护对象 I 级级第二、三和四类病原微生物；第二、三和四类病原微生物；挥发放射性核素挥发放射性核素/化学品化学品操作者，环境操作者，环境级级A1型型第二、三和四类病原微生物第二、三和四类病原微生物操作者，环境和样品操作者，环境和样品外排风型外排风型级级A2型型第
8、二、三和四类病原微生物；第二、三和四类病原微生物；痕量挥发放射性核素痕量挥发放射性核素/化学品化学品操作者，环境和样品操作者，环境和样品级级B1型型第二、三和四类病原微生物；第二、三和四类病原微生物；少量挥发放射性核素少量挥发放射性核素/化学品化学品操作者，环境和样品操作者，环境和样品级级B2型型第二、三和四类病原微生物；第二、三和四类病原微生物；挥发放射性核素挥发放射性核素/化学品化学品操作者，环境和样品操作者，环境和样品III级级第一、二、三和四类病原微生第一、二、三和四类病原微生物；挥发放射性核素物；挥发放射性核素/化学品化学品操作者，环境和样品操作者，环境和样品2021/3/214II
9、级级A2型生物安全柜型生物安全柜室内空气污染的空气HEPA 滤过的空气正压污染空气2021/3/215生物安全柜的选择（三）生物安全柜的选择（三）l生物安全柜的宽度：生物安全柜的宽度：工作需要；空间工作需要；空间l费用：费用：安全柜本身；运输费用；附件费安全柜本身；运输费用；附件费用（支架，紫外灯，椅子等）；排风和送用（支架，紫外灯，椅子等）；排风和送风系统：风系统： 风机和管道（风机和管道（II级级B2）l认证：认证： NSF 49 美国美国 EN12469 欧洲欧洲 YY05692005 中国中国2021/3/216生物安全柜放置生物安全柜放置l五个远离点（气流）五个远离点（气流）门门风扇
10、风扇空调空调开着的窗户开着的窗户人员活动频繁的区域人员活动频繁的区域l摆放要求摆放要求稳固的平台或支架稳固的平台或支架两侧、后面和上端留两侧、后面和上端留30cmAir Register设备设备首选位置首选位置候候选选位位置置工工 作作 台台设备视频2021/3/217反面反面 教材教材2021/3/218生物安全柜的使用要求生物安全柜的使用要求个人防护要求个人防护要求柜内物品的摆放柜内物品的摆放紫外灯紫外灯明火明火工作前准备工作前准备工作中操作及溢出处理工作中操作及溢出处理工作结束后处理工作结束后处理2021/3/219生物安全柜的使用生物安全柜的使用个人防护要求：个人防护要求： 在使用生物
11、安全柜时必须穿个人防在使用生物安全柜时必须穿个人防护服，戴手套（手套应套在隔离衣的护服，戴手套（手套应套在隔离衣的外面）外面）最好带口罩和帽子，根据需要带防护最好带口罩和帽子，根据需要带防护眼罩或者面罩。眼罩或者面罩。视频2021/3/220生物安全柜的使用生物安全柜的使用生物安全柜内物品摆放原则生物安全柜内物品摆放原则按照从洁净区到污染区的方向摆放按照从洁净区到污染区的方向摆放所有物品尽可能放在工作台后部所有物品尽可能放在工作台后部将废弃物袋、盛放废弃吸管的盘子以及吸滤瓶将废弃物袋、盛放废弃吸管的盘子以及吸滤瓶等体积较大的物品放在柜内某一侧等体积较大的物品放在柜内某一侧前进气格栅不能被纸、仪
12、器设备或者其他物品前进气格栅不能被纸、仪器设备或者其他物品阻挡阻挡2021/3/221生物安全柜的使用生物安全柜的使用洁净区半污染区污染区2021/3/222生物安全柜的使用生物安全柜的使用对紫外灯的三点要求：对紫外灯的三点要求：每周进行清洁，除去可能影响杀菌效果的每周进行清洁，除去可能影响杀菌效果的灰尘和污垢灰尘和污垢每次生物安全柜的认证，要检查紫外线强每次生物安全柜的认证，要检查紫外线强度，以确保有适当的光发射量度，以确保有适当的光发射量房间中有人时一定要关闭紫外灯，以保护房间中有人时一定要关闭紫外灯，以保护眼睛和皮肤，避免因不慎暴露而造成伤害眼睛和皮肤，避免因不慎暴露而造成伤害2021/
13、3/223生物安全柜的使用生物安全柜的使用避免使用明火，原因有三：避免使用明火，原因有三：明火可造成生物安全柜的气流紊乱，明火可造成生物安全柜的气流紊乱，干扰气流模式干扰气流模式可损坏可损坏HEPA过滤器过滤器处理挥发性物品和易燃物品时易造成处理挥发性物品和易燃物品时易造成危险危险2021/3/224生物安全柜的使用生物安全柜的使用工作前需要准备的内容：工作前需要准备的内容： 首先紫外灯照射首先紫外灯照射30分钟分钟 关紫外灯，打开安全柜的日光灯和风机，用消关紫外灯，打开安全柜的日光灯和风机，用消毒剂对生物安全柜的内表面进行消毒擦拭毒剂对生物安全柜的内表面进行消毒擦拭 将实验中需要用到的物品集
14、中用消毒剂擦拭后将实验中需要用到的物品集中用消毒剂擦拭后放在台面相应位置上（切记勿阻挡风口！）放在台面相应位置上（切记勿阻挡风口！）等待等待5min，净化工作区的空气污染物，净化工作区的空气污染物视频2021/3/225生物安全柜的使用生物安全柜的使用工作时操作规范：工作时操作规范： 双臂垂直缓慢进入前面的开口，在生物安全双臂垂直缓慢进入前面的开口，在生物安全柜中等待大约一分钟，以使安全柜调整完毕柜中等待大约一分钟，以使安全柜调整完毕后才可对物品进行处理。后才可对物品进行处理。所有操作应在离前窗所有操作应在离前窗10cm以外的工作区进行。以外的工作区进行。废弃物应丢弃在生物安全柜内的处理容器中
15、废弃物应丢弃在生物安全柜内的处理容器中视频2021/3/226生物安全柜的使用生物安全柜的使用操作时注意事项：操作时注意事项：避免胳膊在前开口处快速移动和频繁进出。避免胳膊在前开口处快速移动和频繁进出。尽量避免污染的物品进入洁净区。尽量避免污染的物品进入洁净区。在生物安全柜内进行操作时，不能进行文字在生物安全柜内进行操作时，不能进行文字工作。工作。尽量减少操作者身后的人员活动。尽量减少操作者身后的人员活动。视频2021/3/227生物安全柜的使用生物安全柜的使用 溢出处理：溢出处理： GB194892007实验室生物安全通用实验室生物安全通用要求要求中生物安全柜内溢出时的处理方法中生物安全柜内
16、溢出时的处理方法滴状溢出或体积不足滴状溢出或体积不足1 mL 的，可简单地的，可简单地用消毒剂擦洗。用消毒剂擦洗。2021/3/228生物安全柜的使用生物安全柜的使用n大量溢出，则要做特殊的处理：大量溢出，则要做特殊的处理：1、 使生物安全柜保持开启状态。使生物安全柜保持开启状态。2、 在溢出物上覆盖浸有消毒剂的吸水材料，在溢出物上覆盖浸有消毒剂的吸水材料，作用大约作用大约10分钟以发挥消毒作用。分钟以发挥消毒作用。3、 在安全柜内对污染的手套消毒后，脱下在安全柜内对污染的手套消毒后，脱下手套。如果衣服已经污染，也要先脱下消手套。如果衣服已经污染，也要先脱下消毒。穿戴干净的手套和衣服作如下进一
17、步毒。穿戴干净的手套和衣服作如下进一步的清洁工作。的清洁工作。2021/3/229生物安全柜的使用生物安全柜的使用4、 用消毒剂喷洒或擦拭安全柜内壁、工作用消毒剂喷洒或擦拭安全柜内壁、工作表面以及前视窗的内侧。作用表面以及前视窗的内侧。作用20 min后，后，擦干消毒剂并将擦拭物置于生物危害袋中。擦干消毒剂并将擦拭物置于生物危害袋中。5、 如果溢出情况需要浸泡接液槽，则不得如果溢出情况需要浸泡接液槽，则不得现场清理接液槽。应报告实验室主管后采现场清理接液槽。应报告实验室主管后采用适当的气体消毒方式。用适当的气体消毒方式。2021/3/230生物安全柜的使用生物安全柜的使用6、 将所有清理用物品
18、以及防护服进行高将所有清理用物品以及防护服进行高压消毒。用消毒肥皂和水洗手和暴露皮压消毒。用消毒肥皂和水洗手和暴露皮肤。肤。7、 立即通知实验室主管。如果溢出物流立即通知实验室主管。如果溢出物流入安全柜内，可能需要对安全柜进行更入安全柜内，可能需要对安全柜进行更为广泛的消毒处理。为广泛的消毒处理。视频2021/3/231生物安全柜的使用生物安全柜的使用工作结束后的要求：工作结束后的要求：将安全柜继续运行至少将安全柜继续运行至少3min来完成来完成“净化净化”过程。过程。将柜内物品移出前，应使用有效的消毒剂将柜内物品移出前，应使用有效的消毒剂擦拭擦拭每天实验结束后，对生物安全柜的内壁和每天实验结
19、束后，对生物安全柜的内壁和台面进行擦拭。台面进行擦拭。等待等待5分钟后，关闭前窗，关灯，关风机，分钟后，关闭前窗，关灯，关风机，紫外灯照射紫外灯照射30分钟。分钟。视频2021/3/232生物安全柜的维护生物安全柜的维护保持生物安全柜表面清洁和无污染状态保持生物安全柜表面清洁和无污染状态用用70%酒精或者合适的消毒剂擦拭内壁和工作酒精或者合适的消毒剂擦拭内壁和工作台面；台面；如果使用漂白剂等腐蚀性消毒剂后，需要用无如果使用漂白剂等腐蚀性消毒剂后，需要用无菌水再次进行擦拭除去残余的消毒剂；菌水再次进行擦拭除去残余的消毒剂；定期抬起工作台面对其下面的区域进行清洁；定期抬起工作台面对其下面的区域进行
20、清洁；消毒后，用玻璃清洁器对前窗玻璃和紫外灯进消毒后，用玻璃清洁器对前窗玻璃和紫外灯进行清洁。行清洁。2021/3/233生物安全柜的维护生物安全柜的维护l定期保养：定期保养：用湿布擦拭内壁和工作台面；用湿布擦拭内壁和工作台面；每年按需要更换紫外灯和日光灯；每年按需要更换紫外灯和日光灯；每年至少认证一次每年至少认证一次 医学实验室医学实验室安全要求安全要求 YY0569-2005 生物安全柜生物安全柜 实验室生物安全手册实验室生物安全手册（第三版，（第三版，2004）视频2021/3/234生物安全柜的维护生物安全柜的维护生物安全柜的污染清除生物安全柜的污染清除甲醛、过氧化氢熏蒸等方法甲醛、过
21、氧化氢熏蒸等方法 应由有资质的专业人员来进行应由有资质的专业人员来进行在以下情况下需要进行熏蒸：在以下情况下需要进行熏蒸：在检查和维修之前在检查和维修之前 在更换在更换HEPAHEPA滤器之前滤器之前在移动安全柜之前在移动安全柜之前 安全柜被严重地污染安全柜被严重地污染变换使用目的变换使用目的 长时间未用长时间未用需要熏蒸的其它时间需要熏蒸的其它时间2021/3/235生物安全柜的维护生物安全柜的维护甲醛熏蒸步骤之一甲醛熏蒸步骤之一-准备准备电电炉炉两两个个；福福尔尔马马林林；氨氨水水；100mL100mL烧烧杯杯4 4个个；胶带；透明塑料薄膜、胶带；透明塑料薄膜、75%75%酒精等。酒精等。
22、使使用用75%75%酒酒精精对对生生物物安安全全柜柜内内、外外表表面面进进行行消毒清洁；消毒清洁；将生物安全柜和放置在同一房间内的冰箱、将生物安全柜和放置在同一房间内的冰箱、CO2CO2培养箱等仪器用胶带纸进行密封处理。培养箱等仪器用胶带纸进行密封处理。视频2021/3/236生物安全柜的使用生物安全柜的使用甲醛熏蒸步骤之二甲醛熏蒸步骤之二-熏蒸熏蒸将电炉放在生物安全柜中，连接电源将电炉放在生物安全柜中，连接电源用用两两个个烧烧杯杯分分取取福福尔尔马马林林20mL20mL、水水50mL50mL，置置电电炉上炉上关闭视窗，用胶带封严窗门关闭视窗，用胶带封严窗门开开启启电电源源，水水和和福福尔尔马
23、马林林同同时时被被加加热热，待待福福尔尔马马林林挥挥发发完完毕毕时时，关关闭闭电电源源, , 保保持持密密闭闭状状态态，过夜过夜视频2021/3/237生物安全柜的使用生物安全柜的使用甲醛熏蒸步骤之三甲醛熏蒸步骤之三-中和中和取取氨氨水水36mL36mL、水水50mL50mL，分分放放于于2 2个个烧烧杯杯中中，置电炉上置电炉上再次将生物安全柜门密封再次将生物安全柜门密封开启电源，待氨水挥发完后，关闭电源开启电源，待氨水挥发完后，关闭电源密闭过夜密闭过夜视频2021/3/238生物安全柜的熏蒸2021/3/239生物安全柜的熏蒸2021/3/240生物安全柜的检测生物安全柜的检测什么情况下需要
24、检测？什么情况下需要检测？应该由什么人来进行检测？应该由什么人来进行检测？需要进行哪些内容的检测？需要进行哪些内容的检测？2021/3/241生物安全柜的检测生物安全柜的检测生物安全柜的检测的情况发生在：生物安全柜的检测的情况发生在：最初的购买安装完毕最初的购买安装完毕年检年检移动移动修理修理2021/3/242生物安全柜的检测生物安全柜的检测生物安全柜的检测应由有资质的单位检测生物安全柜的检测应由有资质的单位检测在美国必须有美国在美国必须有美国NSF授权的单位；没有授权的单位；没有NSF授权，也得有以下经历的：授权，也得有以下经历的： 有过检测经验；参加过技术课程或者厂商培训有过检测经验；参
25、加过技术课程或者厂商培训会；参加过象会；参加过象CETA水平的商业会议；检测设水平的商业会议；检测设备拥有的校准证书备拥有的校准证书在我国有检测资质的单位：在我国有检测资质的单位： 国家食品药品监督管理局国家食品药品监督管理局 医疗器械质量监督检医疗器械质量监督检验中心和军事医学科学院验中心和军事医学科学院2021/3/243生物安全柜的检测生物安全柜的检测安全柜防护效果的评估涉及到以下内容：安全柜防护效果的评估涉及到以下内容：安全柜的完整性安全柜的完整性 人员、产品及交叉污染保护人员、产品及交叉污染保护HEPA过滤器的泄漏过滤器的泄漏 向下气流的速度向下气流的速度正面气流的速度正面气流的速度
26、 负压换气次数负压换气次数气流的烟雾模式气流的烟雾模式 警报和互锁系统警报和互锁系统电气安全电气安全 光照度光照度还包括紫外线强度、噪声水平、震动性、集液槽泄漏、还包括紫外线强度、噪声水平、震动性、集液槽泄漏、柜体稳定性（包括柜体抗翻倒、柜体抗变形、工作台面柜体稳定性（包括柜体抗翻倒、柜体抗变形、工作台面抗变形、柜体抗向前倾倒）、温升、电机与风机等性能抗变形、柜体抗向前倾倒）、温升、电机与风机等性能的测试。的测试。2021/3/244生物安全柜的检测生物安全柜的检测人员、产品和交叉污染保护测试人员、产品和交叉污染保护测试 下降气流流速测试下降气流流速测试 流入气流流速测试流入气流流速测试 工作
27、舒适度有关标准：噪音、照度和震动测试工作舒适度有关标准：噪音、照度和震动测试 高效过滤器完整性测试高效过滤器完整性测试 柜体泄漏的测试柜体泄漏的测试气流烟雾模式测试气流烟雾模式测试 排溢槽泄露排溢槽泄露柜体稳定性柜体稳定性其其他他各各类类测测试试 ：电电机机和和风风机机性性能能测测试试、工工作作区区温温升测试、压差测试。升测试、压差测试。2021/3/245生物安全柜的检测生物安全柜的检测出厂检验出厂检验型式检验型式检验安装检验：安装检验： 安全柜安装完成、位置移动后安全柜安装完成、位置移动后常规维护检验：常规维护检验：至少每年一次至少每年一次 更换过滤器和内部部件维修后更换过滤器和内部部件维修后2021/3/246生物安全柜的检测生物安全柜的检测安装检验和常规维护检验至少安装检验和常规维护检验至少以下内容：以下内容：外观外观高效过滤器完整性高效过滤器完整性下降气流流速下降气流流速流入气流流速流入气流流速气流模式气流模式负压负压2021/3/247烟雾试验烟雾试验风速检测风速检测2021/3/248ThanksThanks！2021/3/249
