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1、放射自显影术（放射自显影术（ARGARG） 1一、发展史一、发展史 18671867年年 Nieple Nieple de de st st victervicter发发展展铀铀盐盐能能使使胶片感光，但引出错误的结论胶片感光，但引出错误的结论 1896 1896年年 H.Becqueral H.Becqueral证实上述是辐射引起。证实上述是辐射引起。 1898 1898年年 Bq. Bq.和居里夫妇和居里夫妇 发现发现210210popo，226226RaRa 19241924年年 Lacassagae Lacassagae 首首次次研研究究铀铀在在生生物物体体内内分布分布 19391945
2、 19391945 各种记录粒子径迹的专用乳胶各种记录粒子径迹的专用乳胶 19461946年年 BelangerBelanger和和leblandlebland更更好好的的液液体体乳乳胶，胶，ARGARG分辨力大为提高。分辨力大为提高。 1950 1950年年 Pelc Pelc揭膜乳胶揭膜乳胶 1956 1956年年 超微结构及电镜超微结构及电镜ARGARG2ARGARG的特点：的特点：定位准确定位准确 敏感度高敏感度高 可定量测量，还可做形态定量分析可定量测量，还可做形态定量分析 不需复杂设备，应用广泛。不需复杂设备，应用广泛。 ARGARG的一般过程：的一般过程： 引引入入示示踪踪剂剂制
3、制备备标标本本制制备备ARGARG曝曝光光照像处理照像处理标本染色标本染色分析分析3二、感光材料组成：银盐组成：银盐+明胶：明胶：分类：分类： 原子核乳胶：核乳胶，干板，揭膜原子核乳胶：核乳胶，干板，揭膜 氚片氚片 X片片 电影正片及幻灯片电影正片及幻灯片4各类材料的性质和应用各类材料的性质和应用1、乳胶及制品、乳胶及制品a、液体核乳胶：粘稠、液体核乳胶：粘稠、10以下呈胶冻状，以下呈胶冻状， 40温溶，极限温溶，极限50，出厂本底，出厂本底3个银粒个银粒 /1000m应用：核应用：核4所有带电粒子所有带电粒子 核核2a粒子粒子 HW34电镜电镜ARGb、干板：宏观及光镜、干板：宏观及光镜AR
4、Gc、揭膜乳胶：光镜定量、揭膜乳胶：光镜定量ARG5d、国外产品：、国外产品： 美美 EastmanKodak NTE 英英 Kodak 英英 Ilford L-4 比利时比利时 Gevaert Nuc-307 银粒银粒 0.07-0.4 Exp-6M 按敏感度分为：按敏感度分为： 0型：型：a粒子粒子 2型：型：3H, 125I 5型型：用用于于低低电电离离作作用用的的粒粒子子径径迹迹ARG62、电影正片、电影正片 or 幻灯片：幻灯片： 粒粒径径1m，单单面面涂涂乳乳胶胶，厚厚15m，外外加加保保护护层层，除除3H以以外外的的各各种种核核素素宏宏观观ARG3、X 光光片片：粒粒径径2.5m
5、，敏敏感感性性强强，但但分分辨力低，宏观辨力低，宏观ARG，低能核素不适应。，低能核素不适应。4、氚氚片片：进进口口 LKB产产品品，国国产产也也有有了了，粒粒径径1m，暗暗室室安安全全光光相相当当耐耐受受，宏宏观观3H ARG5、彩色乳胶片干板：彩显、彩色乳胶片干板：彩显ARG7三、三、ARGARG原理原理 原原理理：造造成成核核乳乳胶胶的的点点阵阵发发生生缺缺陷陷（形形状状不不一一、颗颗粒粒不不完完整整、缺缺一一个个或或一一对对离离子子等等）也也叫叫“敏化中心敏化中心”。 当当射射线线作作用用乳乳胶胶时时，电电离离的的电电子子向向“敏敏化化中中心心”移移动动，.较较多多时时或或形形成成静静
6、电电膜膜，吸吸引引Ag+Ag+移移动动。虽虽量量少少1/1001/100亿亿，但但有有巨巨大大催催化化作作用用，能能使使溴溴化化银银结结晶晶还还原原成成金金属属银银粒粒。当当显显影影时时两两者者被被显显出出的的速速度度不不同同，很很容容易易区区分。分。81、潜影形成：、潜影形成：2、潜影消退：、潜影消退：3、显影及显影剂：、显影及显影剂： 最常用的显影剂：最常用的显影剂： D-196和和D-19 1）米米吐吐尔尔（硫硫酸酸甲甲基基对对氨氨基基苯苯酸酸）主主份份，强强还还原原剂剂2）亚亚硫硫酸酸钠钠：保保护护剂剂，能能中中和和还还原原剂剂的的氧氧化化物物，延延长长显显影影效效力力，还还可可溶溶解
7、解部部分分银银粒粒，减减少其相互结合而导致粒变粗少其相互结合而导致粒变粗 3）海德尔（以苯二酚）：强还原剂，但与米）海德尔（以苯二酚）：强还原剂，但与米吐尔不同。但与米吐尔不同。它还原力低，吐尔不同。但与米吐尔不同。它还原力低，影像出现缓慢，可使影像密度增加影像出现缓慢，可使影像密度增加 94）碳酸钠：促进剂，增加显影）碳酸钠：促进剂，增加显影5）溴溴化化钾钾：抑抑制制剂剂，抑抑制制未未感感光光的的银银盐盐，防防止止溴溴折折出出而而增增加加灰灰雾雾，从从而而增增加加显显象象的反差，使力象更清晰的反差，使力象更清晰影响显影的因素：影响显影的因素：（1）显影时间）显影时间（2）显影温度）显影温度（
8、3）显影液的搅动）显影液的搅动（4）显影液的效力）显影液的效力104、定影：、定影：海波海波（硫代硫酸钠）（硫代硫酸钠）溶去未形成潜影的银晶体溶去未形成潜影的银晶体亚亚硫硫酸酸钠钠：保保护护剂剂，能能与与酸酸形形成成亚亚硫硫酸酸氢氢根根离子，从而抑制海波被酸分解。离子，从而抑制海波被酸分解。醋酸：停显剂：终止显影液继续使用。醋酸：停显剂：终止显影液继续使用。钾钾矾矾：坚坚膜膜剂剂，防防止止乳乳胶胶在在定定影影和和水水洗洗过过程程中中因因膨膨胀胀而而造造成成脱脱落落，防防止止操操作作中中的的擦擦伤伤or划痕。划痕。5、水水洗洗及及干干燥燥：洗洗去去杂杂质质等等，防防止止析析出出硫硫磺磺，它与空气
9、中水份氧化为硫酸，影象变黄。它与空气中水份氧化为硫酸，影象变黄。干燥：人工电吹风，干燥：人工电吹风，or自然干燥，防空气灰自然干燥，防空气灰法沾染法沾染。 11四、射线与乳胶的相互作用四、射线与乳胶的相互作用1、粒粒子子：质质量量大大，高高LET，穿穿透透力力弱弱，但但电电离离密密度度大大，直直线线传传播播，粒粒子子径径迹迹粗粗短短而而致致密密，不不需灵敏度高的乳胶需灵敏度高的乳胶2、粒粒子子：质质量量轻轻，射射程程较较粒粒子子长长些些，穿穿行行路路径径易易改改变变，不不一一定定是是直直线线传传播播，径径迹迹为为不不规规则则曲线，射程仅为乳胶表面的几个颗粒层。曲线，射程仅为乳胶表面的几个颗粒层
10、。3、射射线线：是是一一种种电电磁磁辐辐射射，本本身身不不带带电电，不不会会引引起起电电离离，但但它它能能与与核核or核核外外电电子子碰碰撞撞损损失失能能量量而而产产生生次次级级带带电电粒粒子子；它它穿穿透透力力强强，在在靶靶物物质质中中损损失失的的能能量量少少，故故很很难难留留下下清清晰晰的的径径迹迹，但但对对低低能能线线可可形形成成小小点点状状径径迹迹。它它产产生生的的次次级级带电离子常使乳胶本底增加。带电离子常使乳胶本底增加。 12 4、EC、IT：在电子俘获和内转换的衰变中产：在电子俘获和内转换的衰变中产生的生的、X线不被乳胶记录，但俄歇电子和内转换线不被乳胶记录，但俄歇电子和内转换电
11、子与电子与粒子的性质相同，可使乳胶感光。粒子的性质相同，可使乳胶感光。纯纯衰变的核素：衰变的核素：3H、14C、45Ca、35S、32P r：131I EC：125I IT：99mTc 径径迹迹ARG：乳乳胶胶厚厚度度超超过过射射线线粒粒子子的的射射程程，记记录到的是粒子的全部径迹，物理学研究范畴。录到的是粒子的全部径迹，物理学研究范畴。 银银粒粒密密度度ARG：薄薄的的乳乳胶胶层层，只只要要求求留留下下径径迹迹超始部分的银粒。超始部分的银粒。ARG常常用用核核素素，能能量量及及射射程程P270表表146（参考书（参考书 夏宗勤主编实验核医学与核药学）夏宗勤主编实验核医学与核药学）13五、五、
12、ARG的分辨力、效率、本底及示踪的分辨力、效率、本底及示踪1、分分辨辨力力：定定义义，区区别别示示踪踪物物在在组组织织中中准准确确位位置的能力。置的能力。 区分两个邻近结构（放射源）区分两个邻近结构（放射源）表示方法：半距离表示方法：半距离HD 半半径半半径 HR 它是反映影象散射情况的常用指标。它是反映影象散射情况的常用指标。应应注注意意：HD、HR指指反反映映颗颗粒粒的的散散射射情情况况，并并不说明不说明ARG所能分辨的最小距离或源的大小。所能分辨的最小距离或源的大小。HD、HR越小，分辨力越高越小，分辨力越高3H 光镜光镜ARG HD在在0.30.4m 电镜电镜ARG HD在在80180
13、nm14影响分辨力的因素：影响分辨力的因素：a、银粒的大小、银粒的大小b、乳胶厚度、乳胶厚度c、标本与乳胶间距、标本与乳胶间距d、射线能量、射线能量e、曝光时间、曝光时间f、显影时间、显影时间g、标本厚度、标本厚度h、本底、本底 152、效率：、效率：定定义义：曝曝光光t内内，示示踪踪剂剂每每100次次衰衰变变所所造造成的显影银颗粒数目成的显影银颗粒数目。 表示方法：百分比表示方法：百分比/100m2 影响效率的因素影响效率的因素a、LET f、 曝光时间曝光时间b、标本厚度、标本厚度 g、 源乳距源乳距c、乳胶厚度、乳胶厚度 h、显影条件、显影条件d、 银粒大小银粒大小 i、曝光时间太长时、
14、曝光时间太长时e、乳胶敏感度、乳胶敏感度163、本底：没有放射性时的银颗粒、本底：没有放射性时的银颗粒本底增高的因素：本底增高的因素：a、红灯过亮、红灯过亮b、外环境辐射、外环境辐射c、显影时间过长、显影时间过长d、乳胶受到压力或张力的作用、乳胶受到压力或张力的作用e、标本中有还原物、标本中有还原物f、乳胶保存过久、乳胶保存过久174、示踪剂用量与曝光时间、示踪剂用量与曝光时间 一一般般原原则则：辐辐射射强强时时，曝曝光光时时间间可可缩缩短短，而而射线弱时，曝光时间相应延长。射线弱时，曝光时间相应延长。影响因素：影响因素：a、核素的性质、核素的性质b、核素引入的途径、核素引入的途径c、示踪剂剂
15、型、示踪剂剂型d、核素在体内的分布和蓄积状况、核素在体内的分布和蓄积状况e、标本制备时间长时，核素易丢失、标本制备时间长时，核素易丢失f、 感光材料的灵敏度感光材料的灵敏度目前最常用的是：实验确定曝光法。目前最常用的是：实验确定曝光法。18六、六、ARG的各种方法的各种方法1、宏观、宏观ARG： 接触法：适于磨片，动物整体切片植物片接触法：适于磨片，动物整体切片植物片2、光镜、光镜ARG：用于非扩散性示踪剂（石蜡切片）用于非扩散性示踪剂（石蜡切片） 浸膜法：从乳胶中提出来浸膜法：从乳胶中提出来 裱贴法：在温水中捞起标本和干板裱贴法：在温水中捞起标本和干板 揭膜乳胶法：在温水中捞起标本和揭膜揭膜
16、乳胶法：在温水中捞起标本和揭膜 用于扩散性示踪剂（冰冻切片）：用于扩散性示踪剂（冰冻切片）： 融表法：冷沾取切片融表法：冷沾取切片 绞链接触法：复杂绞链接触法：复杂193、电电镜镜ARG：亚亚细细胞胞水水平平，分分辨辨力力极极高高，要要求求标标本本和和乳乳胶胶层层极极薄薄，Ilford L4或或HW4乳乳胶胶常常用用，颗颗粒粒140nm，示示踪踪剂用量是光镜的剂用量是光镜的10倍。倍。 浸膜法：浸膜法： 金属环法：金属环法：4、细胞涂片、细胞涂片ARG： a、血涂片、血涂片ARG b、骨髓涂片、骨髓涂片ARG20ARG图像阅读分析图像阅读分析 图图像像中中银银粒粒沉沉着着处处，反反映映标标本本
17、中中核核素素的的存存在在部位，也表示标记物定位。部位，也表示标记物定位。一一、宏宏观观ARG：可可直直接接看看or放放大大镜镜，黑黑度度表表示示放放素素所所在在部部位位，越越黑黑说说明明放放射射性性越越强强，含含某某物物标标记记物物越越多多，如如要要精精确确定定位位，必必须须与与原原标标本本重重合合在在一一起观察。起观察。二、微观二、微观ARG：a、银粒与组织结构的关系用微调来确定。、银粒与组织结构的关系用微调来确定。b、银银粒粒与与其其它它颗颗粒粒的的区区别别，用用改改变变焦焦点点来来观观察察它们的大小，颜色和外形。它们的大小，颜色和外形。c、 区别标本内与标本外乳胶中的银粒区别标本内与标本
18、外乳胶中的银粒d、定量以银粒计数表示。、定量以银粒计数表示。 21 定定量量分分析析法法：预预先先制制作作一一套套已已知知活活度度梯梯度度的的放放射射源源标标准准系系列列片片，与与待待测测标标本本在在同同一一张张乳乳胶上曝，显，定。胶上曝，显，定。图图像像用用黑黑度度计计or光光密密度度计计读读数数，以以标标准准梯梯度度活活度度为为纵纵坐坐标标，光光密密度度值值为为横横坐坐标标，绘绘一一条条标准曲线，即可定量。标准曲线，即可定量。 还有如下定量法：还有如下定量法： 视测颗粒计数：颗粒数视测颗粒计数：颗粒数/cm 显微光度计测定：显微光度计测定： 电视扫描装置电视扫描装置（三）亚微观（三）亚微观
19、ARG：电电镜镜ARG，它它图图象象中中银银粒粒呈呈扭扭曲曲的的丝丝团团状，故易辨认。状，故易辨认。 22八、荧光增敏微观八、荧光增敏微观ARG适于显影不太清楚适于显影不太清楚or放射性较弱的组织放射性较弱的组织AGR。特点：在乳胶中加入了闪烁剂。特点：在乳胶中加入了闪烁剂。九、双标记九、双标记ARG当当需需要要研研究究机机体体同同时时摄摄入入的的多多种种放放素素掺掺入入细细胞的区别时，必须用双标记。胞的区别时，必须用双标记。依据：选用两种不同的辐射类型依据：选用两种不同的辐射类型不同能量不同能量不同半衰期不同半衰期不同分布定位不同分布定位23选选用用、辐辐射射体体，粒粒子子密密度度大大，呈呈
20、直直线线形形径迹，径迹，密度小，单个银颗粒。密度小，单个银颗粒。能能量量不不同同：两两次次涂涂乳乳胶胶法法得得到到ARG影影像像加加以以区别。区别。 3H、14C 第一次乳胶，反映第一次乳胶，反映3H、14C之和之和第第二二次次乳乳胶胶，先先涂涂一一层层火火棉棉胶胶，只只反反映映高高能能量量14C不不同同的的T1/2： 131I， 3H，两两者者衰衰变变速速率率相相差差极极大大，可可先先涂涂火火棉棉胶胶做做中中间间层层，阻阻断断3H射射出出，此此时时是是131I造造成成显显影影。放放置置60天天左左右右，去去掉掉上上边两层边两层or在标本背面涂乳胶每曝一次光。在标本背面涂乳胶每曝一次光。24两种感光材料的不同两种感光材料的不同25
