菊花组织培养ppt课件

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1、病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程课题一课题一 菊花的组织培养菊花的组织培养病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程学习目标：n掌握植物细胞的全能性，明确植物细胞体现全能性的条件。n了解植物组织培养技术在生产中的应用。n熟悉植物组织培养的基本过程。n了解影响植物组织培养的各种因素。n掌握植物组织培养的基本技术。病原体侵入机体，消弱机体防御机能

2、，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程有丝分裂有丝分裂受精卵受精卵细细胞胞分分化化 在个体发育中，由一个或一种在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态、细胞增殖产生的后代，在形态、结构和生理功能上发生稳定性差结构和生理功能上发生稳定性差异的过程。异的过程。1 1、细胞分化的概念、细胞分化的概念一、知识回顾病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程 黑色素细胞在体外培养黑色素细胞在体外培养3030多代后仍能合多代后仍能合成黑色素；离体培养的上皮细胞，始终保持成黑色素；离体培养的

3、上皮细胞，始终保持为上皮细胞，而不会变成其他类型的细胞。为上皮细胞，而不会变成其他类型的细胞。 2 2、稳定性、稳定性3 3、不可逆性、不可逆性细胞分化发生在整个生命进程中。细胞分化发生在整个生命进程中。1 1、持久性、持久性2 2、细胞分化的特点、细胞分化的特点 造血干细胞造血干细胞 原红细胞原红细胞 早幼红细早幼红细胞胞 中幼红细胞中幼红细胞 晚幼红细胞晚幼红细胞 成成熟红细胞熟红细胞 死亡死亡4 4、普遍性、普遍性病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程 细胞分化是细胞分化是否意味着细胞否意味着细胞中遗传物质的中遗传物

4、质的改变？改变？ 遗传物质遗传物质没有改变没有改变，不同组织的细胞共同不同组织的细胞共同来源于受精卵，经有来源于受精卵，经有丝分裂产生。丝分裂产生。病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程3、细胞分化的实质、细胞分化的实质A AB BD DC CE EEDCA BEDCA BEDCA BEDCA B基因基因在个体发育过程中，不同细胞中在个体发育过程中，不同细胞中遗传信息的执行情况不同即基因遗传信息的执行情况不同即基因的选择性表达的过程的选择性表达的过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位

5、生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程 红细胞红细胞合成血红蛋白合成血红蛋白 ( (不合成肌动蛋白不合成肌动蛋白) )肌细胞肌细胞肌动蛋白基因开启肌动蛋白基因开启合成肌动蛋白合成肌动蛋白 ( (不合成血红蛋白不合成血红蛋白) )肌动蛋白基因关闭肌动蛋白基因关闭血红蛋白基因关闭血红蛋白基因关闭血红蛋白基因开启血红蛋白基因开启4、细胞分化的结果、细胞分化的结果 细胞产生了不同种类的蛋白质细胞产生了不同种类的蛋白质即出现了不同的结构和功能即出现了不同的结构和功能病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程愈伤组织愈伤组织胚状体胚状体19

6、581958，美国，斯图，美国，斯图尔德尔德 植物组织培养植物组织培养离体二、基础知识二、基础知识病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程（一）植物组织培养概念关键词：关键词： 外植体、脱分化、再分化、愈伤组织外植体、脱分化、再分化、愈伤组织 在在无菌无菌和和人工控制人工控制条件下，将条件下，将离体的植物（离体的植物（ ） 培养在人工配置的培养基上，给培养在人工配置的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其脱分予适宜的培养条件，诱导其脱分化产生愈伤组织再分化形成丛芽，化产生愈伤组织再分化形成丛芽，最终形成最终形成 。又称：又称：

7、植物离体培养植物离体培养器官、组织、细胞器官、组织、细胞完整的植株完整的植株病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程 由高度分化的植物组织或细胞产生由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。愈伤组织的过程。 ：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官的过程。又可以重新分化成根或芽等器官的过程。 ：用于离体培养的植物器官或组织片段用于离体培养的植物器官或组织片段。 ：细胞排列疏松、无规则、高度液：细胞排列疏松、无规则、高度液泡化的无定形的薄壁细胞。泡化的无定形的薄壁

8、细胞。外植体外植体脱分化（或去分化）脱分化（或去分化）：再分化再分化愈伤组织愈伤组织病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程切取切取形成层形成层无菌无菌接种接种诱导愈伤组织诱导愈伤组织的形成的形成试管苗的形成试管苗的形成培养室培养室移栽移栽脱分化脱分化再分化再分化（二）植物组织培养的基本过程（二）植物组织培养的基本过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程（三）植物组织培养的理论基础-细胞全能性n概念概念：高度分化的植物细胞，仍然具有发育：高度分化的植物

9、细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能。成完整个体的潜能。n基础基础：生物体的每一个细胞都包含有该物种：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质。所特有的全套遗传物质。n表达条件表达条件：离体条件：离体条件 无菌操作无菌操作 适宜物质的诱导和调节（植物激素）适宜物质的诱导和调节（植物激素） 适宜的营养物质适宜的营养物质 温度、酸碱度、光照等条件的控制温度、酸碱度、光照等条件的控制病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程思考思考这个试验说明了已经分化的细胞核这个试验说明了已经分化的细胞核具有什么特性？具有什么特性？高度

10、分化的动物体细胞的细胞高度分化的动物体细胞的细胞核有发育成完整个体的潜能核有发育成完整个体的潜能对比：对比：多利羊的诞生多利羊的诞生动物细胞有没动物细胞有没有这种能力？有这种能力？病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程已经分化的细胞（核），仍然具有已经分化的细胞（核），仍然具有发育成完整个体的潜能。发育成完整个体的潜能。细胞全能性细胞全能性思考思考为什么已经分化的细胞具有全能性呢？为什么已经分化的细胞具有全能性呢？高度分化的细胞含有保持物种发育高度分化的细胞含有保持物种发育所需要的所需要的全套基因全套基因植物组织培养技术植

11、物组织培养技术动物的克隆技术动物的克隆技术病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程1 1、培育无病毒植株、培育无病毒植株2 2、大规模培养愈伤组织（提取紫草素，治疗、大规模培养愈伤组织（提取紫草素，治疗烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料）烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料）4 4、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法（受体细胞为植物细胞）（受体细胞为植物细胞）（四（四) )植物组织培养的应用：植物组织培养的应用： 3 3、人工种子（解决有些作物品种繁殖能力差，、人工种子（解决有些

12、作物品种繁殖能力差，结子困难或发芽率低等问题）结子困难或发芽率低等问题）病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程人工种子人工种子病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程三、影响植物组织培养的因素n1、材料的种类、年龄及保存时间长短等、材料的种类、年龄及保存时间长短等n2、营养、营养n3、植物激素、植物激素n4、PH、温度、光照等条件、温度、光照等条件病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过

13、程1 1、植物材料的选择植物材料的选择 -直接关系实验的成败直接关系实验的成败 不同植物的组织培养难度不同不同植物的组织培养难度不同egeg：烟草和胡萝卜的组织培养较为容易烟草和胡萝卜的组织培养较为容易 枸杞愈伤组织的芽诱导比较难枸杞愈伤组织的芽诱导比较难菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝上部新萌生的侧枝同一种植物同一种植物材料，材料，材料的年龄、保存时材料的年龄、保存时间的长短间的长短等也会影响实验结果。等也会影响实验结果。 病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程2

14、2、营养营养-MS-MS培养基培养基A A、大量元素、大量元素（ ） B B、微量元素（、微量元素（ ） C C、有机物：、有机物：( )( )D D、植物激素：、植物激素：( )( )赤霉素赤霉素赤霉素赤霉素等等 、主要影响蛋白质、核酸的合成；、主要影响蛋白质、核酸的合成；、主要影响蛋白质、核酸的合成；、主要影响蛋白质、核酸的合成； K K K K、 Ca Ca Ca Ca、MgMgMgMg、S S S S主要影响酶的活性。主要影响酶的活性。主要影响酶的活性。主要影响酶的活性。无无机机盐盐蔗糖蔗糖蔗糖蔗糖既是碳源也是调节渗透压的物质；既是碳源也是调节渗透压的物质；既是碳源也是调节渗透压的物质

15、；既是碳源也是调节渗透压的物质；维生素维生素维生素维生素能能能能促进细胞分裂和诱导器官分化；促进细胞分裂和诱导器官分化；促进细胞分裂和诱导器官分化；促进细胞分裂和诱导器官分化；甘氨酸甘氨酸甘氨酸甘氨酸是蛋白质是蛋白质是蛋白质是蛋白质的组成成分，也是有机氮源。的组成成分，也是有机氮源。的组成成分，也是有机氮源。的组成成分，也是有机氮源。N、P、K、Ca、Mg、SB B、MnMn、CuCu、ZnZn、FeFe、MoMo、I I、CoCo甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖蔗糖蔗糖蔗糖生长素、细胞分裂素、生长素、细胞分裂素、生

16、长素、细胞分裂素、生长素、细胞分裂素、萧县郝集中学病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程MSMS固体培养基成分及比例固体培养基成分及比例病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？答：答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的的无机盐无机盐；蔗糖提供；蔗糖提供碳源碳源，同时能够维持细胞的，同时能够维持细胞的渗渗透

17、压透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求特殊营养需求。 微生物培养基以微生物培养基以有机营养有机营养为主。与微生物的培养为主。与微生物的培养不同，不同，MSMS培养基则需提供大量培养基则需提供大量无机营养无机营养，无机盐混，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。类。病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程n常用植物激素：

18、常用植物激素：生长素、细胞分裂素生长素、细胞分裂素和和赤霉赤霉素素 n生长素、细胞分裂素生长素、细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素化和再分化的关键性激素n在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈呈加强加强的趋势的趋势n激素的激素的使用顺序使用顺序、使用的量及比例使用的量及比例影响植物影响植物细胞的发育方向细胞的发育方向3、植物激素的影响病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程生长素类：生长素类：2 2 2 2，4 4 4 4二氯苯氧乙酸（二氯苯氧乙酸

19、（二氯苯氧乙酸（二氯苯氧乙酸（2 2 2 2，4 4 4 4DDDD）、吲哚）、吲哚）、吲哚）、吲哚乙酸（乙酸（乙酸（乙酸（IAAIAAIAAIAA）、萘乙酸（）、萘乙酸（）、萘乙酸（）、萘乙酸（NAANAANAANAA）、吲哚丁）、吲哚丁）、吲哚丁）、吲哚丁酸（酸（酸（酸（IBAIBAIBAIBA）等。）等。）等。）等。细胞分裂素类：细胞分裂素类：激动素（激动素（激动素（激动素（KTKTKTKT）、）、）、）、6 6 6 6苄基嘌呤（苄基嘌呤（苄基嘌呤（苄基嘌呤（ 6 6 6 6BABABABA）、玉米素（）、玉米素（）、玉米素（）、玉米素（ZTZTZTZT）等。）等。）等。）等。赤霉素类：

20、赤霉素类：赤霉酸（赤霉酸（赤霉酸（赤霉酸（GAGAGAGA3 3 3 3）等）等）等）等作用：2，4D有利于愈伤组织的生长； IAA、NAA、IBA有利于器官分化。作用：促进细胞的分裂与分化，其中KT能 明显促进芽的分化而抑制根的形成。作用：促进不定芽和幼株伸长。病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程使用顺序使用顺序使用顺序使用顺序实验结果实验结果实验结果实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素先使用生长素，后使用细胞分裂素先使用生长素，后使用细胞分裂素先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于细胞分裂，但不利分化有利于细胞分裂，

21、但不利分化有利于细胞分裂，但不利分化有利于细胞分裂，但不利分化先使用细胞分裂素后使用生长素先使用细胞分裂素后使用生长素先使用细胞分裂素后使用生长素先使用细胞分裂素后使用生长素细胞既分裂、也分化细胞既分裂、也分化细胞既分裂、也分化细胞既分裂、也分化同时使用同时使用同时使用同时使用分化频率高分化频率高分化频率高分化频率高使用比例使用比例使用比例使用比例实验结果实验结果实验结果实验结果生长素生长素生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素 生长素生长素生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素 生长素生长素生长素生长素细胞分裂细胞分裂细胞分裂细胞分裂素素素素 生长素生长素生长素生

22、长素再分化再分化再分化再分化植物细胞培养植物细胞培养植物细胞培养植物细胞培养不需要光不需要光不需要光不需要光需要光需要光需要光需要光需光否需光否abABC补充下图（注：补充下图（注：a、b过程，过程，A、B、C为激素使用比例）为激素使用比例）a过程分裂方式（过程分裂方式（ ）b过程分裂方式（过程分裂方式（ ）有丝分裂有丝分裂有丝分裂有丝分裂思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？生长素生长素生长素生长素/ /细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素高高高高 利于根的形成利于根的形成利于根的形成利于根的形成适中适中适中适中 利于愈伤组织的形成利于愈伤组

23、织的形成利于愈伤组织的形成利于愈伤组织的形成病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程供参考的配方供参考的配方n1 1、诱导菊花愈伤组织：、诱导菊花愈伤组织：n在在MSMS培养基中加入培养基中加入BABA和和NAANAA，质量浓度均为，质量浓度均为0.5mg0.5mgn、诱导菊花从芽、诱导菊花从芽：n在在MSMS培养基中加入培养基中加入BABA和和NAANAA，质量浓度分别为，质量浓度分别为2-2-3mg3mg和和0.020.03mg0.020.03mgn3 3、诱导菊花生根：、诱导菊花生根：n在在MSMS培养基各成分用量减半

24、，并添加入培养基各成分用量减半，并添加入NAANAA或或IAAIAA，质量浓度均为，质量浓度均为0.1mg0.1mg病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程4温度、光照、pH的影响光照：光照：菊花每日用日光灯照射菊花每日用日光灯照射12h12h。温度：温度： 大多数植物组织培养控制在大多数植物组织培养控制在23232727，低于，低于1515时植物组织会表现生长停止；时植物组织会表现生长停止；高于高于3535时对植物生长不利。时对植物生长不利。菊花的组织培养控制在菊花的组织培养控制在18182222。pHpH： 不同植物对培

25、养基最适不同植物对培养基最适pH的要求不的要求不 同，大多数控制在同，大多数控制在56.5。 菊花的组织培养控制在菊花的组织培养控制在5.8左右。左右。制备制备MS固固体培养基体培养基外植体消毒外植体消毒 接种接种 培培 养养栽栽 培培四、实验操作四、实验操作 移移 栽栽冲洗冲洗酒精酒精无菌水冲洗无菌水冲洗氯化汞氯化汞无菌水冲洗至少三无菌水冲洗至少三次之上次之上配制各种母液配制各种母液配制培养基配制培养基灭菌灭菌病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程（一）制备（一）制备MSMS固体培养基固体培养基MSMSMSMS培养基包括

26、培养基包括培养基包括培养基包括20202020多种营养成分，实验室一般使用多种营养成分，实验室一般使用多种营养成分，实验室一般使用多种营养成分，实验室一般使用4 4 4 4保存配制好的保存配制好的保存配制好的保存配制好的培养基培养基培养基培养基母液母液母液母液来制备来制备来制备来制备1 1、配制各种母液、配制各种母液无机物中大量元素浓缩无机物中大量元素浓缩无机物中大量元素浓缩无机物中大量元素浓缩10101010倍，微量元素浓缩倍，微量元素浓缩倍，微量元素浓缩倍，微量元素浓缩100100100100倍，常温保存倍，常温保存倍，常温保存倍，常温保存激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按激素类

27、、维生素类以及用量较小的有机物一般可按激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml1mg/ml1mg/ml1mg/ml的质量浓度的质量浓度的质量浓度的质量浓度单独单独单独单独配制成母液配制成母液配制成母液配制成母液用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量倍数，计算用量倍数，计算用量倍数，计算用量病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理

28、过程2 2、配制培养基、配制培养基分装到锥形瓶中，每瓶分装分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml50ml或或100ml100ml（ ）（ ）（ ） 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素因此不必添加植物激素3 3、灭菌、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行分装好的培养基连同其他器械一起进行分装好的培养基连同其他器械一起进行分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌配制培养液配制培养液配制培养液配制培养液调调调调PHPH培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的分装病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内

29、环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程在植物组织培养的过程中，在植物组织培养的过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作？并且要求无菌操作？病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程1、植物组织培养所利用的植物材料、植物组织培养所利用的植物材料体积小、体积小、抗性差，对培养条件的要求较高抗性差，对培养条件的要求较高：2、用于植物组织培养的培养基同样适合于某些用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长微生物的生长,微生物产生的代谢废物会毒害培养微生

30、物产生的代谢废物会毒害培养 的对象；培养物一旦受到微生物的污染，就会导的对象；培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃；致实验前功尽弃；因此要进行严格的无菌操作。因此要进行严格的无菌操作。病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程1 1 1 1、选材：、选材：、选材：、选材： （二）外植体消毒（二）外植体消毒2 2 2 2、消毒、消毒、消毒、消毒流水冲洗流水冲洗流水冲洗流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻菊花茎段用流水冲洗

31、后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在轻刷洗，刷洗后在轻刷洗，刷洗后在轻刷洗，刷洗后在 下冲洗下冲洗下冲洗下冲洗20min20min20min20min左右左右左右左右 酒精处理酒精处理酒精处理酒精处理用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入 中摇中摇中摇中摇动动动动2 2 2 23 3 3 3次，持续次，持续次，持续次，持续6 6 6 67s7s7s7s，立即将外植体取出，在，立即将外植体取出，在，立即将外植体取出，在，立即将外植体取出，在无菌水无菌水无菌水无菌水中清洗中清洗中清

32、洗中清洗 消毒液处理消毒液处理消毒液处理消毒液处理取出后用取出后用取出后用取出后用 吸干外植体表面的水分，放入吸干外植体表面的水分，放入吸干外植体表面的水分，放入吸干外植体表面的水分，放入 中中中中1 1 1 12min2min2min2min，取出后在，取出后在，取出后在，取出后在无菌水无菌水无菌水无菌水中至少清洗中至少清洗中至少清洗中至少清洗3 3 3 3次，次，次，次，漂净漂净漂净漂净消毒液消毒液消毒液消毒液流水流水流水流水菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝体积分数体积分数体积分数体积分数为为为为7070的的的的酒精酒

33、精酒精酒精质量分数为质量分数为质量分数为质量分数为0.10.1的氯化汞溶液的氯化汞溶液的氯化汞溶液的氯化汞溶液无菌吸水纸无菌吸水纸无菌吸水纸无菌吸水纸病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程（三）接种（三）接种1、接种前用体积分数、接种前用体积分数70%酒精擦拭工作台，点燃酒酒精擦拭工作台，点燃酒精灯，所有操作在酒精灯旁边进行，每次使用器精灯，所有操作在酒精灯旁边进行，每次使用器械后都要灼烧灭菌械后都要灼烧灭菌2、将装有培养基的锥形瓶整齐的排列在、将装有培养基的锥形瓶整齐的排列在酒精灯左侧酒精灯左侧，将消过毒的菊花茎段在无菌

34、培养皿中将消过毒的菊花茎段在无菌培养皿中切成小段切成小段（0.5-1cm）3、左手持锥形瓶，右手拉开捆扎锥形瓶的绳子，并、左手持锥形瓶，右手拉开捆扎锥形瓶的绳子，并将将封口膜攥于右手手心封口膜攥于右手手心，以避免封口膜接触瓶口，以避免封口膜接触瓶口的一面被污染。左手持瓶，使瓶口的一面被污染。左手持瓶，使瓶口旋转通过火焰。旋转通过火焰。4、右手用镊子夹取菊花茎段，插入培养基中，、右手用镊子夹取菊花茎段，插入培养基中，不要不要倒插，每瓶倒插，每瓶6-8块外植体块外植体，接种后，将封口膜重新，接种后，将封口膜重新扎好。扎好。病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生

35、长繁殖，引起不同程度的病理生理过程5 5、接种注意事项、接种注意事项每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为70707070的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种一遍，冷却后再接种一遍，冷却后再接种一遍，冷却后再接种外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根外植体在培养基中要分布均匀，

36、放置外植体数量根外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般据锥形瓶的大小确定，一般据锥形瓶的大小确定，一般据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜胡萝卜胡萝卜胡萝卜3 3 3 34 4 4 4块，菊的茎块，菊的茎块，菊的茎块，菊的茎或叶或叶或叶或叶6 6 6 68 8 8 8块块块块，也不要太少，以充分利用培养基中的，也不要太少，以充分利用培养基中的，也不要太少，以充分利用培养基中的，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件营养成分和光照条件营养成分和光照条件营养成分和光照条件插入时应注意方向：插入时应注意方向：插入时应注意方向：插入时应注意方向：（ ）不要倒插。茎段

37、、茎尖基部插入培养基利于吸收水不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分分和养分分和养分分和养分形态学上端朝上，形态学下端朝下形态学上端朝上，形态学下端朝下形态学上端朝上，形态学下端朝下形态学上端朝上，形态学下端朝下病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程思考：你打算做几组重复？你打算设置思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？对照实验吗？答：每种材料或配方至少要做答：每种材料或配方至少要做一组以上一组以上的重复。的重复。

38、设置对照实验可以取用一个设置对照实验可以取用一个经过灭菌经过灭菌的装有培养的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程（四）培养（四）培养n接种后的锥形瓶最好放在接种后的锥形瓶最好放在无菌箱无菌箱中培养，中培养，培养期间应定期消毒培养期间应定期消毒n培养温度控制在培养温度控制在18-22n每日用日光灯每日用日光灯光照光照12h病原体侵入机体，消弱机体防御机能，

39、破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程正常苗正常苗污染苗污染苗病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程1、外植体带菌、外植体带菌2、培养基及接种、培养基及接种器具灭菌不彻底器具灭菌不彻底3、接种操作时带入、接种操作时带入4、环境不清洁、环境不清洁污染途径污染途径病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程（五）移栽（五）移栽 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的移栽生根的菊花

40、试管苗之前，应先打开培养瓶的移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日封口膜，让试管苗在培养间生长几日封口膜，让试管苗在培养间生长几日封口膜，让试管苗在培养间生长几日。一般放置在一般放置在一般放置在一般放置在2020202025252525的的的的遮荫环境遮荫环境遮荫环境遮荫环境中，适应中，适应中，适应中，适应5 5 5 57d7d7d7d。试管苗不萎蔫，有试管苗不萎蔫，有试管苗不萎蔫，有试管苗不萎蔫，有新生长的趋势，便可移栽。新生长的趋势，便可移栽。新生长的趋势，便可移栽。新生长的趋势，便可移栽。1 1、打开封口膜、打开封口膜2 2、清洗转移、清洗转移 用流水

41、清洗根部的培养基，用流水清洗根部的培养基，用流水清洗根部的培养基，用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒将幼苗移植到消过毒将幼苗移植到消过毒将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下的蛭石或珍珠岩等环境下的蛭石或珍珠岩等环境下的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间生活一段时间生活一段时间生活一段时间3 3、移栽、移栽幼苗长壮后，移栽到土壤中幼苗长壮后，移栽到土壤中幼苗长壮后，移栽到土壤中幼苗长壮后，移栽到土壤中病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程固体基质型，含水量高、固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培蓄水性强

42、、透性好，适合栽培珍珠岩珍珠岩 ,珍珠岩是一种火山喷发珍珠岩是一种火山喷发的酸性熔岩，经急剧冷却而成的的酸性熔岩，经急剧冷却而成的玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，如珍珠的结构，所以被命名为珍如珍珠的结构，所以被命名为珍珠岩珠岩 。蛭石蛭石是一种天然、无毒的矿物质，是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的矿物。它在高温作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物，属于硅是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。酸盐。 病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程（六）栽培（六）栽培 幼苗移栽后，每天观察并记

43、录幼苗的生长幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，情况，适时浇水、施肥，直至开花适时浇水、施肥，直至开花1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）灼烧）4、无菌箱中的培养；、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。小组讨论：在整个操作过程中，是如何来实现小组讨论：在整个操作过程中，是如何来实现无无菌菌环境的？环境的？结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析（一）对接种操作中污染情况的分析

44、（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（三）是否进行了统计、对照与记录（三）是否进行了统计、对照与记录（四）生根苗的移栽是否合格（四）生根苗的移栽是否合格病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程五、课题延伸五、课题延伸1 1、一般来说，容易进行、一般来说，容易进行无性繁殖无性繁殖的植物，也的植物，也容易进行组织培养容易进行组织培养2 2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季营养繁殖营养繁殖扦插扦插嫁接嫁接压条压条 扦插扦插嫁接嫁接压条压条 病原体侵入

45、机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程探究植物激素的使用比例探究植物激素的使用比例（A=生长素生长素/细胞分裂素细胞分裂素）对植物组织培养的影响对植物组织培养的影响 例如：设计对照实验例如：设计对照实验 （1）不加植物激素）不加植物激素 （2）A1 （3）A1 （4）A1菊菊花花的的组组织织培培养养再分化再分化材料性质、营养物质、材料性质、营养物质、调节物质、环境条件调节物质、环境条件外植体的消毒外植体的消毒接种接种基本原理基本原理:细胞的全能性细胞的全能性基本过程基本过程:脱分化脱分化愈伤组织愈伤组织影响因素：影响因素：操作流程：

46、操作流程：配制配制MS固体培固体培养基养基培养培养移栽移栽栽培栽培练习练习1.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。2.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养答：外植体的生理状态是成功进

47、行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。好，容易诱导脱分化和再分化。病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程1下列四个选项中，下列四个选项中， 肯定没有采用植物组织培养技术的一项是（肯定没有采用植物组织培养技术的一项是（ ） A花药离体培养得到单倍体植株花药离体培养得到单倍体植株 B秋水仙素处理萌发的种子秋水仙素处理萌发的种子 或幼苗得到多倍体植株或幼苗得到多倍体植株 C基因工程培育的抗棉铃虫的棉花植株基因工程培育的抗棉铃虫的棉花植株 D细胞工程培育细

48、胞工程培育“番茄马铃薯番茄马铃薯”杂种植株杂种植株病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程2菊花的花粉经组织培养可发育成一株幼苗，菊花的花粉经组织培养可发育成一株幼苗， 这一过程不涉及下列哪一项（这一过程不涉及下列哪一项（ ） A有丝分裂、细胞分化、组织器官的形成有丝分裂、细胞分化、组织器官的形成 B呼吸作用、光合作用、相关激素的调控呼吸作用、光合作用、相关激素的调控 CDNA的复制、转录、蛋白质的生物合成的复制、转录、蛋白质的生物合成 D等位基因的分离、非等位基因的自由组合等位基因的分离、非等位基因的自由组合病原体侵入机体

49、，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程3某花卉感染了植物病毒，叶子呈现疱状，欲培某花卉感染了植物病毒，叶子呈现疱状，欲培养出无病毒的后代，应采取的方法是（养出无病毒的后代，应采取的方法是（ ）A用种子培养后代用种子培养后代 B用无明显症状部分的枝扦插用无明显症状部分的枝扦插C用茎尖进行组织培养诱导出植株用茎尖进行组织培养诱导出植株D用叶表皮细胞进行组织培养，诱导出植株用叶表皮细胞进行组织培养，诱导出植株病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程4下列关于影响植物组织培养

50、的因素的叙述下列关于影响植物组织培养的因素的叙述 不正确的是（不正确的是（ ）A幼嫩组织较成熟组织易培养成功幼嫩组织较成熟组织易培养成功B给外植体消毒用给外植体消毒用70%的酒精的酒精C接种花药后一段时间内不需要光照，接种花药后一段时间内不需要光照， 但幼小植株形成后需要光照但幼小植株形成后需要光照D生长素与细胞分裂素含量之比较高时生长素与细胞分裂素含量之比较高时 有利于芽的分化有利于芽的分化病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程5乙醇等乙醇等“绿色能源绿色能源”的开发备受关注，利用玉米秸秆等的开发备受关注，利用玉米秸秆等

51、生产燃料酒精已成大势所趋。植物组织培养可实现玉米生产燃料酒精已成大势所趋。植物组织培养可实现玉米等的大规模快速繁殖，图解如上，由外植体通过植物组等的大规模快速繁殖，图解如上，由外植体通过植物组织培养技术培育成完整植株，织培养技术培育成完整植株， 这项技术利用了这项技术利用了 原理，原理， 通过组织培养技术进行植物繁育，通过组织培养技术进行植物繁育， 可以很好地保持亲本的优良性状，可以很好地保持亲本的优良性状， 原因是原因是 A、B分别代表分别代表 和和 ， 过程过程、分别表示分别表示 和和 。植物细胞全能性植物细胞全能性 子代遗传物质与亲代相同，子代遗传物质与亲代相同，不会像有性生殖一样出现不会像有性生殖一样出现性状分离性状分离 愈伤组织愈伤组织 胚状体胚状体 脱分化脱分化 再分化再分化