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1、第六章 细菌和噬菌体的遗传重组第一节 细菌杂交的关键因子w1 1、F F因子因子( (致育因子致育因子) )的结构与功能的结构与功能三个基因丛:原点插入基因转移基因 负责DNA的转移 与细菌结合有关 与性繖毛的形成有关复制基因 trp复制蛋白 inc决定不相容基因 oriv复制起点2 2、F F因子在因子在EcoliEcoli中的存在形式中的存在形式整合(成为染色体的一部分)高频重组品系(Hfr品系) 与F-菌株杂交时,重组子出现的频率几乎比F+高上1000倍。 F- F+ HfrF因子整合过程(P226)F因子的切离游离(与染色体相独立)F-F+第二节 细菌的连锁图 把细菌染色体的相对基因位
2、子标识出来把细菌染色体的相对基因位子标识出来w中断杂交中断杂交w重组作图重组作图1 1、中断杂交、中断杂交F因子的转移接合(核酸内切酶)断链向F- cell转移并复制转移的链在F-中合成双链DNA转移和合成完成,连接酶封闭缺口Hfr F-Thr+leu+azirtonrlac+gal+strs (2x107) X thr-leu-azistonslac-gal-strr (4x108)肉汤培养液中通气培养定期取样(隔二分钟一次)组织捣碎器搅拌 2 4 6 8 10 12 (鉴定菌落的基因型)MM+STRHfr中非选择性标记进入F所需时间转移Hfr基因 时间0 9azir 9azirtonr 1
3、1azirtonrlac+ 18azirtonrlac+galr 25越早出现,越接近原点。不是以1重组值为图距,而是以时间为图距。混合两种亲本后的时间2 2、重组作图、重组作图供体仅仅提供一个染色体片段,而受体提供完整的染色体。供体受体 部分二倍体(部分合子体)外基因子内基因子(1)特点q只有偶次交换才能进行稳定的重组。q一次重组仅得一种重组子。(2)作图重组值重组子总菌落数 X 100 lac-ade+(lac+ade+)+(lac-ade+) X 100% 22% Hfr品系不同主要是由于F因子插入的位置,方向不同,导致与F-杂交的起点不同。第三节 噬菌体的遗传重组(一)遗传重组现象(一
4、)遗传重组现象噬菌体T2的两对性状h:寄主范围 h+ E.coli B(B/2) 噬菌斑半透明突变型h E.coli B(B/2) 噬菌斑透明r: 噬菌斑形态 r+ 小噬菌斑,周围有朦胧光环 突变型r 大噬菌斑,边缘清晰hr+ X h+r (放在E.coliB平板上生长混合感染) E.coliB 子代噬菌体混合平板(E.coliB 和E.coliB /2)四种噬菌斑重组值 重组噬菌斑数总数 X 100 (h+r+ + hr)总噬菌斑数(二)噬菌体作图(二)噬菌体作图不同快速溶菌突变型表型不同记做ra,rb,rcrxh+ X r+h 判断顺序判断顺序结论:结论:T2T2噬菌体的连锁图是环状的噬菌体的连锁图是环状的