《实验诊断学教学资料9实验诊断学三细菌耐药性检测》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验诊断学教学资料9实验诊断学三细菌耐药性检测（72页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第一部分第一部分 细菌真菌涂片检测细菌真菌涂片检测第二部分第二部分 细菌真菌培养鉴定细菌真菌培养鉴定第三部分第三部分 细菌耐药性检测细菌耐药性检测一、一、MIC法、法、K-B法、法、E-test法药敏试验法药敏试验二、药敏试验抗生素选取及药敏结果解读二、药敏试验抗生素选取及药敏结果解读三、三、2014年南方医院细菌种类及耐药性年南方医院细菌种类及耐药性第三部分第三部分 细菌耐药性检测细菌耐药性检测一、一、MIC法、法、K-B法、法、E-test法药敏试验法药敏试验（一）（一）MIC法药敏试验法药敏试验MIC稀释法稀释法一般在琼脂或肉汤中将抗菌药物系列对倍一般在琼脂或肉汤中将抗菌药物系列对倍稀释
2、，定量接种待检菌，稀释，定量接种待检菌， 35培养培养18至至24小时后观小时后观察结果；察结果；抑制检测菌肉眼可见生长的最低药物浓度，即最小抑抑制检测菌肉眼可见生长的最低药物浓度，即最小抑菌浓度；菌浓度；MIC稀释法稀释法结果以结果以MIC（g/ml）数值报告，数值越）数值报告，数值越小越敏感，与小越敏感，与K-B法相反；法相反；MIC稀释法药敏检测稀释法药敏检测BD Phoenix 100 细菌自动鉴定及药敏分析仪细菌自动鉴定及药敏分析仪MICMIC稀释法稀释法药敏试验孔药敏试验孔生化试验生化试验细菌鉴定孔细菌鉴定孔MIC稀释法药物浓度主要包括折点浓度，可以判断敏稀释法药物浓度主要包括折点
3、浓度，可以判断敏感、中介、耐药，感、中介、耐药，少数药物如亚胺培南、美罗培南、头孢他啶，万古霉少数药物如亚胺培南、美罗培南、头孢他啶，万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺等在判断敏感的基础上，又素、替考拉宁、利奈唑胺等在判断敏感的基础上，又增加了一些低浓度，以利于合理选用药量，增加了一些低浓度，以利于合理选用药量，不同抗生素判断的折点浓度不同，故不同抗生素之间不同抗生素判断的折点浓度不同，故不同抗生素之间的的MIC值没有可比性。值没有可比性。MIC稀释法药敏检测稀释法药敏检测（二）（二）K-B法药敏试验法药敏试验KB法药敏试验基本原理法药敏试验基本原理l补充药敏板没有的抗生素，如头孢哌酮补充药敏板没有
4、的抗生素，如头孢哌酮/ /舒巴坦。舒巴坦。l含有定量抗菌药物的纸片，贴在已接种待检菌的含有定量抗菌药物的纸片，贴在已接种待检菌的MHMH平板上，平板上，l纸片中所含的药物，吸取琼脂中的水分溶解后，纸片中所含的药物，吸取琼脂中的水分溶解后，不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的药物梯不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的药物梯度浓度。度浓度。KB法药敏试验基本原理法药敏试验基本原理l在纸片周围抑菌浓度范围内，细菌的生长被抑制，在纸片周围抑菌浓度范围内，细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。形成透明的抑菌圈。l抑菌圈大小，反映待检菌对测定药物敏感程度。抑菌圈大小，反映待检菌对测定药物敏感程度。l不同抗生
5、素有不同的判断标准，不同抗生素的抑不同抗生素有不同的判断标准，不同抗生素的抑菌圈大小没有可比性。菌圈大小没有可比性。（三）（三）E-test法药敏试验法药敏试验E-testE-test药敏检测药敏检测结合结合K-BK-B法和稀释法的优点；法和稀释法的优点；原理同稀释法检测，操作同原理同稀释法检测，操作同K-BK-B法简单；法简单；试纸条上含干化、稳定、浓度由高到低呈指数梯试纸条上含干化、稳定、浓度由高到低呈指数梯度分布的某种抗菌药物。度分布的某种抗菌药物。补充鉴定药敏板没有的抗生素，如替加环素（老补充鉴定药敏板没有的抗生素，如替加环素（老虎素）。虎素）。替加环素替加环素MIC Test Str
6、ipl从从28冰箱中取出琼脂平板（江门市凯林贸易冰箱中取出琼脂平板（江门市凯林贸易公司）。公司）。l从从20冰箱中取出冰箱中取出MTS测试条（替加环素测试条（替加环素MIC Test Strip ，0.016256g/ml，意大利，意大利liofilchem公司），美国辉瑞公司惠赠。公司），美国辉瑞公司惠赠。l平衡至室温，半小时至平衡至室温，半小时至1小时。小时。二、药敏试验抗生素选取及药敏结果解读二、药敏试验抗生素选取及药敏结果解读（一）（一）CLSI要求药敏试验选取及报告抗生素要求药敏试验选取及报告抗生素（二）南方医院药敏试验中选取抗生素（二）南方医院药敏试验中选取抗生素（三）（三）CLS
7、I药敏试验结果报告要求药敏试验结果报告要求（一）（一）CLSI要求药敏试验选取及报告抗生素要求药敏试验选取及报告抗生素（二）南方医院药敏试验中选取抗生素（二）南方医院药敏试验中选取抗生素氨基糖甙类：氨基糖甙类：阿米卡星阿米卡星AmikacinAmikacin、庆大霉素、庆大霉素GentamicinGentamicin1 1代头孢：代头孢：头孢唑啉头孢唑啉CefazolinCefazolin2 2代头孢：代头孢：头孢呋辛钠头孢呋辛钠Cefuroxime sodiumCefuroxime sodium3 3代头孢：代头孢：头孢他啶头孢他啶CeftazidimeCeftazidime、头孢噻肟、头孢
8、噻肟CefotaximeCefotaxime4 4代头孢：代头孢：头孢吡肟（马斯平）头孢吡肟（马斯平）CefepimeCefepime单环单环-内酰胺类：内酰胺类：氨曲南氨曲南AztreonamAztreonam广谱青霉素类：广谱青霉素类：氨苄西林氨苄西林AmpicilinAmpicilin、青霉素、青霉素G G PenicillinPenicillin、苯唑西林、苯唑西林Oxacillin Oxacillin 抗假单胞菌广谱青霉素：抗假单胞菌广谱青霉素：哌拉西林哌拉西林PiperacillinPiperacillin复方复方-内酰胺类：内酰胺类：阿莫西林阿莫西林- -克拉维酸（奥格门丁）克拉
9、维酸（奥格门丁）Amoxicilin/clavelanateAmoxicilin/clavelanate、氨苄西林氨苄西林- -舒巴坦（优力新）舒巴坦（优力新）Ampicillin/SulbactamAmpicillin/Sulbactam、哌拉西林哌拉西林- -他唑巴坦（特治星）他唑巴坦（特治星）Piperacillin/TazobactamPiperacillin/Tazobactam、头孢哌酮头孢哌酮- -舒巴坦（舒普深）舒巴坦（舒普深）cefoperazone/Sulbactamcefoperazone/Sulbactam碳青霉烯类：碳青霉烯类：亚胺培南亚胺培南ImipenemImip
10、enem、美罗培南、美罗培南MeropenemMeropenem多肽类：多肽类：多粘菌素多粘菌素E Colistin EE Colistin E、替考拉宁、替考拉宁TeicoplaninTeicoplanin、万古霉素、万古霉素VancomicinVancomicin唑烷酮类：唑烷酮类：利奈唑胺（斯沃利奈唑胺（斯沃 ）LinezolidLinezolid林可霉素类：林可霉素类：克林霉素克林霉素ClindamycinClindamycin大环内脂类：大环内脂类：红霉素红霉素ErythromycinErythromycin氯霉素：氯霉素：氯霉素氯霉素ChloramphenicolChloramph
11、enicol三代喹诺酮：三代喹诺酮：环丙沙星环丙沙星Ciprofloxaxin Ciprofloxaxin 、氧氟沙星、氧氟沙星Ofloxaxin Ofloxaxin 、左旋氧氟沙星、左旋氧氟沙星Levofloxacin Levofloxacin 四环素类：四环素类：四环素四环素TetracyclineTetracycline磺胺类：磺胺类：复方新诺明（甲氧苄唑复方新诺明（甲氧苄唑- -磺胺甲唑）磺胺甲唑）Timethoprim/SulfamethoxazoleTimethoprim/Sulfamethoxazole利福平利福平Rifampin Rifampin （三）（三）CLSI药敏试验结
12、果报告要求药敏试验结果报告要求临床和实验室标准化委员会标准（临床和实验室标准化委员会标准（clinical and laboratory standards of institute, CLSI）敏感敏感（susceptiblesusceptible，S S）是是指指菌菌株株能能被被使使用用推推荐荐剂剂量量治治疗疗感感染染部部位位可可达达到到的的抗菌药物浓度所抑制，推荐使用。抗菌药物浓度所抑制，推荐使用。中介中介（intermediateintermediate，I I）指抗菌药物指抗菌药物MICMIC接近血液和组织中通常可达到的浓度，接近血液和组织中通常可达到的浓度，疗效低于敏感菌株。疗效低
13、于敏感菌株。还表示药物在生理浓集的部位具有临床效力（如尿还表示药物在生理浓集的部位具有临床效力（如尿液中的喹诺酮类和液中的喹诺酮类和- -内酰胺类），或者可用高于正内酰胺类），或者可用高于正常剂量的药物进行治疗（如常剂量的药物进行治疗（如- -内酰胺类）。内酰胺类）。另外，中介还作为缓冲区，以防止微小的、未受控另外，中介还作为缓冲区，以防止微小的、未受控制的技术因素导致较大的错误结果，特别是对那些制的技术因素导致较大的错误结果，特别是对那些药物毒性范围窄的药物。药物毒性范围窄的药物。耐药耐药（resistantresistant，R R）指指菌菌株株不不能能被被常常规规剂剂量量抗抗菌菌药药物物
14、达达到到的的浓浓度度所抑制，所抑制，和和/ /或或证证明明MICMIC或或抑抑菌菌圈圈直直径径落落在在某某些些特特殊殊的的微生物耐药机制范围（如微生物耐药机制范围（如- -内酰胺酶），内酰胺酶），在在治治疗疗研研究究中中表表现现抗抗菌菌药药物物对对菌菌株株的的临临床床疗疗效不可靠。效不可靠。抗菌药物的作用靶位抗菌药物的作用靶位 耐甲氧西林葡萄球菌（耐甲氧西林葡萄球菌（methecillin resistance methecillin resistance staphylococcusstaphylococcus，MRSMRS） CLSICLSI规定，葡萄球菌如对苯唑西林（或甲氧西林）规定，葡
15、萄球菌如对苯唑西林（或甲氧西林）耐药：耐药：对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类和含酶对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类和含酶抑制剂的复方制剂均应报告耐药，而不考虑体外药敏抑制剂的复方制剂均应报告耐药，而不考虑体外药敏结果。结果。 产产 超超 广广 谱谱 -内内 酰酰 胺胺 酶酶 G-G-杆杆 菌菌 (extended (extended spectrum-lactamase G- bacillusspectrum-lactamase G- bacillus，ESBLs)ESBLs) 该该酶酶水水解解青青霉霉素素、头头孢孢菌菌素素及及单单胺胺类类的的超超广广谱谱-酶酶，主主要要由由肺肺炎炎克克雷
16、雷伯伯菌菌和和大大肠肠埃埃希希菌菌、肠杆菌等细菌产生。肠杆菌等细菌产生。 耐万古霉素肠球菌（耐万古霉素肠球菌（VREVRE） 再用再用E-testE-test法验证；法验证； 如如发发现现VREVRE，则则应应注注意意对对相相应应病病人人做做好好隔隔离离，以以防防医院感染扩散。医院感染扩散。 耐碳青霉烯类耐碳青霉烯类G-G-杆菌杆菌 耐碳青霉烯肠杆菌科，超级细菌；耐碳青霉烯肠杆菌科，超级细菌； 耐碳青霉烯不动杆菌和铜绿假单胞菌。耐碳青霉烯不动杆菌和铜绿假单胞菌。三、三、2014年南方医院细菌种类及耐药性年南方医院细菌种类及耐药性 耐碳青霉烯酶肠杆菌科，超级细菌耐碳青霉烯酶肠杆菌科，超级细菌 菌
17、株鉴定及药敏试验，均用两种不同方法复核；菌株鉴定及药敏试验，均用两种不同方法复核； 应对相应病人做好隔离，以防医院感染扩散；应对相应病人做好隔离，以防医院感染扩散； 耐药机制主要是产碳青霉烯酶引起。耐药机制主要是产碳青霉烯酶引起。50株耐碳青霉烯不动杆菌替加环素株耐碳青霉烯不动杆菌替加环素MTS药敏结果药敏结果g/ml株数株数百分比百分比0.7536%11224%1.52550%2816%324%嗜麦芽窄食单胞菌对碳青霉烯类抗生素天然耐药嗜麦芽窄食单胞菌对碳青霉烯类抗生素天然耐药一、一、MIC法、法、K-B法、法、E-test法药敏试验法药敏试验二、药敏试验抗生素选取及药敏结果解读二、药敏试验抗生素选取及药敏结果解读三、三、2014年南方医院细菌种类及耐药性年南方医院细菌种类及耐药性第三部分第三部分 细菌耐药性检测细菌耐药性检测第一部分第一部分 细菌真菌涂片检测细菌真菌涂片检测第二部分第二部分 细菌真菌培养鉴定细菌真菌培养鉴定第三部分第三部分 细菌耐药性检测细菌耐药性检测Thank you!
