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1、引入新课 1970年，有两位科学家做了一个人鼠细胞融合实验，以证明细胞膜上的蛋白质分子是运动的。那么，如何实现人鼠细胞的融合，以及动物细胞融合后还有什么用途呢？这就是今天我们这节课学习的内容。灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）（细胞膜具有一定的流动性）生物法：生物法： 灭活的病毒灭活的病毒（丧失感染性、保留抗原结构）（丧失感染性、保留抗原结构）过程：2 2 2 2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程动植物细胞在结构上有何区别？这
2、与它们杂交或融合过程有什么影响？有什么影响？3 3 3 3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、振动、电激等物理方法；离心、振动、电激等物理方法；离心、振动、电激等物理方法；离心、振动、电激等物理方法；PEGPEGPEGPEG等化学方法等化学方法等化学方法等化学方法动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。和再生出细胞壁。、植物体细胞杂交最终得到的是完整的
3、植物个体，动物细胞融合、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？后能形成杂种动物个体吗？后能形成杂种动物个体吗？后能形成杂种动物个体吗？讨论不能，只能得到杂交细胞不能，只能得到杂交细胞不能，只能得到杂交细胞不能，只能得到杂交细胞4 4 4 4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？
4、能，还可以利用灭活的病毒（生物方法）进行诱导能，还可以利用灭活的病毒（生物方法）进行诱导、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？讨论相同，都是细胞膜的流动性相同，都是细胞膜的流动性6 6 6 6、为什么要用灭活的病毒？、为什么要用灭活的病毒？、为什么要用灭活的病毒？、为什么要用灭活的病毒？病毒一般对生物体是有伤害的。病毒一般对生物体是有伤害的。病毒一般对生物体是有伤害的。病毒一般对生物体是有伤害的。7 7 7 7、动物细胞融合有什么意义？、动物细胞融合有什么意义？、动物细胞融合有什么意义？、动物细胞融合有什么意义？突破了有性杂交方
5、法的局限，使远源杂交成为可能。突破了有性杂交方法的局限，使远源杂交成为可能。仙台病毒仙台病毒仙台病毒仙台病毒物理或物理或物理或物理或化学方法化学方法化学方法化学方法丧失感染活性丧失感染活性丧失感染活性丧失感染活性保留融合活性保留融合活性保留融合活性保留融合活性意义及用途打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；广泛应用多个学科领域；广泛应用多个学科领域；重要用途：重要用途：制备单克隆抗体制备单克隆抗体。6.植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合过程过程原理原理细胞融合细胞
6、融合的过程的过程诱导方法诱导方法用途用途细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞的全能性细胞膜的流动性细胞膜的流动性去除去除细胞壁细胞壁后诱后诱导原生质体融合导原生质体融合使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合物理、化学方法物理、化学方法物理、化学、物理、化学、生物方法生物方法获得杂种植株获得杂种植株制备单克隆抗体制备单克隆抗体细胞融合，细胞融合，植物组织培养植物组织培养细胞融合细胞融合1 1 抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？2 2 抗体是如何产生的？抗体是如何产生的？二、单克隆抗体二、单克隆抗体？3 传统的抗体的生产方法及缺陷传统的抗体的生产方法及缺陷是什么
7、？是什么？产量低、纯度低；产量低、纯度低；而且制备抗体特异性差。而且制备抗体特异性差。4 4 B B淋巴细胞与抗体的关系淋巴细胞与抗体的关系B B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生特异性抗体。淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生特异性抗体。动物在免疫反应过程中，体内产生特异性抗体种类可动物在免疫反应过程中，体内产生特异性抗体种类可 达百万种以上，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。达百万种以上，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。但每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。但每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。. .在体外，一个淋巴细胞是不可能无限增殖的。在体外，一个淋巴细胞是不可能无限增殖的。（一）
8、、（一）、单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念 由单个由单个B B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 （二）、（二）、单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备1 1、设计方案、设计方案：创始人：米尔斯坦创始人：米尔斯坦创始人：米尔斯坦创始人：米尔斯坦一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖杂种细胞杂种细胞动物细胞培养技术动
9、物细胞培养技术动物细胞融合动物细胞融合单克隆单克隆抗体抗体既能产生特异性抗既能产生特异性抗体，又能大量繁殖体，又能大量繁殖1 1、设计方案、设计方案：动物细胞动物细胞融合技术融合技术B 、BB 、B瘤瘤 、瘤瘤、瘤瘤 、瘤、瘤只有杂种细只有杂种细胞才能活胞才能活动物细胞培养动物细胞培养2.2.单克隆抗体制备单克隆抗体制备过程过程获得产生相应抗获得产生相应抗体的体的B淋巴细胞淋巴细胞思考：思考： 对小鼠做何处理？对小鼠做何处理？ 细胞融合后，培养液中共有几种细胞？有几种融细胞融合后，培养液中共有几种细胞？有几种融合细胞？合细胞？杂交瘤细胞的特点：既能在体外大量杂交瘤细胞的特点：既能在体外大量 ，
10、又，又能产生能产生 。产生抗体的杂交瘤细胞如何筛选出来的？产生抗体的杂交瘤细胞如何筛选出来的？注射特定的抗原蛋白注射特定的抗原蛋白五种（五种（B B淋巴细胞、骨髓瘤细胞、淋巴细胞、骨髓瘤细胞、B-BB-B、骨骨、杂交、骨骨、杂交瘤细胞）其中三种融合细胞。瘤细胞）其中三种融合细胞。 繁殖繁殖特异性抗体特异性抗体抑制骨髓瘤细胞的抑制骨髓瘤细胞的DNADNA复制。复制。与常规抗体相比，单克隆抗体特异性强，灵敏与常规抗体相比，单克隆抗体特异性强，灵敏度高，产量高，优越性十分明显。度高，产量高，优越性十分明显。应用：应用：特点：特点：可用于作为诊断试剂：有准确，高效，快速的优点可用于作为诊断试剂：有准确
11、，高效，快速的优点可用于疾病治疗可用于疾病治疗可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的“生物导弹生物导弹”）“生物导弹生物导弹”抗癌细胞的单克隆抗体抗癌细胞的单克隆抗体+ +放射性同位素放射性同位素+ +化学药化学药物或细胞毒素物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞位置，。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。）原位杀死癌细胞。）（三）单克隆抗体的单克隆抗体的应用应用两个过程两个过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒灭活
12、病毒一个新细胞一个新细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个优势一个优势单克隆抗体特异单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势性强、灵敏度高的优势小结1 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A、在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比
13、较、在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）中，正确的是（）A A结果是相同的结果是相同的B B杂种细胞的形成过程基本相同杂种细胞的形成过程基本相同C C操作过程中酶的作用相同操作过程中酶的作用相同D D诱导融合的手段相同诱导融合的手段相同3 3、单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是、单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是-（ ）A.A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗体的B B淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 B.B.由小鼠一个由小鼠一个B B淋巴细胞诱导融合而成淋巴细胞诱导融合而成 C.C.由小鼠一个由小鼠一个B B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合
14、而成 D.D.由小鼠一个由小鼠一个B B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D4 4、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B B淋巴细胞淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） 淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞BB淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞 A A B B C C D D C 下图为某同学根据杂交瘤技术的
15、方法，设计的生产破伤下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案风杆菌的实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1 1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_3、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_ 5、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其中培养两个阶段，其中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株
16、。制备单克隆抗体制备单克隆抗体B细胞细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代50B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：据图回答：（1 1）该方案能达到预期效果吗？）该方案能达到预期效果吗？。原因是原因是 。（2 2）图中）图中为为过程，常用过程，常用_ _ 作为诱导剂。该细胞继承了作为诱导剂。该细胞继承了 ，因此不仅能分泌，因此不仅能分泌 ，还有，还有_ _ 本领。本领。（3 3）该方案的目的是）该方案的目的是 。不能不能 没有将抗原注入小鼠体内，无法获得没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的产生单一抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞. .细胞融合细胞融合 灭活病毒灭活病毒 双亲细胞的遗传物质双亲细胞的遗传物质 特异性抗体特异性抗体 在体外培养条件下大量增殖在体外培养条件下大量增殖 制备单克隆抗体制备单克隆抗体 练习
