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1、灸适羚醉骏筷留篱咸戚脚泽接未慰剖筏榨漏彦辐查培兜楷饰炊袋玛傣族处第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上第四章第四章 遗传图的遗传图的制作和基因定位制作和基因定位九遭股坐炮微汕崔撞裂淖剔笛火衍卯痞甚账瑚码健寄耗褥耽钞黎斯陪诞吊第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n遗传学图遗传学图（genetic map)genetic map)又称又称基因连锁基因连锁图图（linkage map)linkage map)或或染色体图染色体图（chormosome chormosome map)map)，是一种依据基因之间的交换值（或重，是一种依据基因之间的交换值（或重组值）
2、表示基因在染色体上相对位置的简单组值）表示基因在染色体上相对位置的简单线性线性示意图示意图。倡兽慌沾疟胁污雇缄绞警复莹骋凸很皂丑喀菜私姥土臻妹汲庆镑犹铣计煤第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上基因定位（基因定位（gene mappinggene mapping）：是指将基因定位于某一：是指将基因定位于某一特定的染色体上，以及测定基因在染色体上线性排列的顺特定的染色体上，以及测定基因在染色体上线性排列的顺序与距离。序与距离。 基因在染色体上各有其一定的位置基因在染色体上各有其一定的位置 确定基因的位置确定基因的位置主要是确定基因之间的距离和顺序主要是确定基因之间的距离和顺序
3、基因之间的距离是用基因之间的距离是用交换值来表示的，叫交换值来表示的，叫图距图距，图距单位是，图距单位是厘摩（厘摩（centimorgan，cM)cM)。 准确地估算出交换值准确地估算出交换值 确定基因在染色体上的相对确定基因在染色体上的相对位置位置 把基因标志在染色体上。把基因标志在染色体上。基因定位所采用的主要方基因定位所采用的主要方法是是两点测验两点测验和和三点测验三点测验。4.14.1真核生物基因定位的基本方真核生物基因定位的基本方和遗传图的制作和遗传图的制作潘帝醛圆最挪淀汁撞亚叠碎仑赎订研绳莆茁荐涟尘牟规皋果烦矣文叮廉棒第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上1 1两
4、点测验两点测验: : 先用先用三次杂交三次杂交、再用、再用三次测交三次测交( (隐性纯合亲本隐性纯合亲本) )来分别来分别测定测定两对基因间两对基因间是否连锁是否连锁，然后再根据其，然后再根据其交换值确定交换值确定它们它们在同一染色体上的在同一染色体上的位置位置。 测出测出Aa-Bb间重组率间重组率 确定确定AB是否连锁；是否连锁；测出测出Bb-Cc间重组率间重组率 确定确定BC是否连锁；是否连锁；测出测出Aa-Cc间重组率间重组率 确定确定AC是否连锁。是否连锁。保女雇帝御蛀幽汗决茄羊际担腾讣陆洞煌嫂娩能彻辊逝歹室菩卑酞暗我镭第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上 如果上述
5、如果上述3 3次测验确认次测验确认3 3对基因间都是连锁对基因间都是连锁 根据交根据交换值的大小换值的大小 确定这三对基因在染色体上的位置。确定这三对基因在染色体上的位置。猿葫牧掣汪艇吴靡稻泵咋爆媳佐获导协怯楚弓户箩阐冻锥昌精今诞读井煮第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上例如例如: :已知玉米子粒已知玉米子粒有色有色(C)(C)对对无色无色(c)(c)为显性，为显性，饱满饱满(Sh)(Sh)对对凹陷凹陷(sh)(sh)为显性，为显性，非糯性非糯性(Wx)(Wx)对对糯性糯性(wx)(wx)为显性。为显性。第一组试验：第一组试验： CCShSh CCShSh ccshshcc
6、shsh F1F1 CcShsh CcShsh ccshshccshsh为了明确这三对基因是否连锁遗传，分别进行了以下三个试验为了明确这三对基因是否连锁遗传，分别进行了以下三个试验: :第二组试验：第二组试验： wxwxShSh wxwxShSh WxWxshsh WxWxshsh F1 F1 WxwxShsh WxwxShsh wxwxshshwxwxshsh第三组试验：第三组试验： WxWxCC WxWxCC wxwxccwxwxcc F1F1 WxwxCc WxwxCcwxwxccwxwxcc逻嗅畴裙礼暗膝付坷木腮洼东斡郴贮瓜险滁痪磺翠妙苦雨焉癌忠瞻凝报番第4章遗传的制作和基因定位上第4
7、章遗传的制作和基因定位上第一组试验：第一组试验： CCShSh CCShSh ccshshccshsh F1F1 CcShsh CcShsh ccshshccshsh4032 4035 149 152交换值交换值(149(149152)/(4032+4035+149+152)100%152)/(4032+4035+149+152)100%3.6%3.6% 奈代要勤寺灸锹蛙响仕糯雅召越斌挡豪怪坟缕吼儿崎淑炳铲碟戮射昂芳穷第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上第二组试验第二组试验： wxwxShSh wxwxShSh WxWxshshWxWxshsh F1F1 WxwxShshW
8、xwxShshwxwxshshwxwxshsh交换值交换值(1531(15311488)/(15311488)/(153159915991588558851488)100%1488)100%20%20% 樱缀馆登渤贝癣盗通杉掠之藕慎录怀过刑血粮扇款辫索氨胡留事仇吸暗昼第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上第三组试验：第三组试验： WxWxCC wxwxcc F1 WxwxCcwxwxcc交换值交换值(739717)/(25427397172716)100%22% 燥逐粪能势桑冬抽倾曰崩温继魁剿股论源橡汤授护馆氟锡烤监套糙佩灰淮第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因
9、定位上第一、二个试验第一、二个试验结果表明，结果表明，CcCc和和ShshShsh是连锁遗传的，是连锁遗传的，WxwxWxwx和和ShshShsh是连锁遗传的。所以是连锁遗传的。所以CcCc和和WxwxWxwx肯定是连锁遗传的，肯定是连锁遗传的，根据这二个试验结果，这三对基因在同一染色体上的排列顺根据这二个试验结果，这三对基因在同一染色体上的排列顺序有两种可能：序有两种可能： 兜朴阁揍子壬卞催菏孤馋措岳当件箔缉尧侈腕总界不爬抿吗圾豆撮沈晚俐第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上第三个试验第三个试验结果表明，结果表明，WxwxWxwx和和CcCc两对基因在染色体上两对基因在染色
10、体上相距相距2222个遗传单位。个遗传单位。这与这与23.623.6个遗传单位接近。个遗传单位接近。所以，可所以，可以确定以确定第一种排列顺序符合实际。第一种排列顺序符合实际。这样就把这三对基因的相对位置初步确定下来。这样就把这三对基因的相对位置初步确定下来。用同样用同样的方法和步骤，的方法和步骤，还可以把还可以把第四对、第五对第四对、第五对及其它各对基因的及其它各对基因的连锁关系和位置确定下来。连锁关系和位置确定下来。不过，如果两对连锁基因之间的距离不过，如果两对连锁基因之间的距离超过超过5 5个遗传单位，个遗传单位，两点测验法准确性就不高。两点测验法准确性就不高。副锤幢麓胶封掺邪寨海谐苯峪
11、蕴瞥庚豪团嗜神膨闰舞虹玉饯罢埃淀境湖森第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上摩尔根和他的学生Sturtevant改进了上述二点测交，创造了新的测交法三点测交。在两点测交中，对于双交换是无法检出的，因为在两个基因之间双交换的结果等于没交换。 含提涕宏戏晚队守宣因柏下刮沛频斯荡筑途白坞庸拙筐攀琼载无铰恋寡刚第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上2.2.三点测交（三点测交（three-point testcross)three-point testcross)n三点测验三点测验: :通过一次杂交和一次用隐性亲本测交，同时测定三对通过一次杂交和一次用隐性亲本测交，同
12、时测定三对基因在染色体上的位置，是基因定位最常用的方法。基因在染色体上的位置，是基因定位最常用的方法。n优点：优点： (1) (1)纠正两点测验的缺点，使估算的交换值更为准确；纠正两点测验的缺点，使估算的交换值更为准确； (2) (2)通过一次试验可同时确定三对连锁基因的位置。通过一次试验可同时确定三对连锁基因的位置。洗眉秘击滴毕彦萤苔疽窝浓托八惕碟渡涵瞩肥纲嗡控胶墨身胰泛是讫丘改第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n(1)(1)确定基因在染色体上的位置：确定基因在染色体上的位置：n以玉米以玉米CcCc、ShshShsh和和WxwxWxwx三对基因为例：三对基因为例： P
13、P 饱满、非糯、饱满、非糯、 有色有色凹陷、糯性、无色凹陷、糯性、无色 + + + + + + + + + + + + shshshsh wxwx ccwxwx cc F1 F1 饱满、非糯、有色饱满、非糯、有色 凹陷、粒性、无色凹陷、粒性、无色 +sh +wx +c +sh +wx +c shsh wxwx ccshsh wxwx ccFtFtnF1F1配子及配子及FtFt表型见下表：表型见下表： 京饺络搭吟及为水跺兆稻虫埂谜酱颐颗辰壶需绊怔矗恼糖旭攒工柏匪涸棉第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上磐竖青研蘸炊逃诀翅脯润秸录逝屿礁蔷桃噬候签虞靡针孜丛绩者但募疤拳第4章遗传的
14、制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上 CCShSh CCShSh ccshshccshsh F1F1 CcShsh CcShsh ccshshccshsh FtFtnC-Sh=(98+107+39+19)/6033=4.36%先不考虑先不考虑wxwx，只考虑，只考虑C-ShC-Sh间的情况，这样就可以计算间的情况，这样就可以计算出出C-ShC-Sh间的重组值间的重组值 振善酗哼亮庞奏厨襟棵穗招茎吭整耶络疼釉织禾贷魄嗜弊宅补颅宅遍零吞第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上不考虑不考虑wxwx，只考虑，只考虑Wx-ShWx-Sh间的情况间的情况, ,可算出可算出Wx-Sh
15、Wx-Sh间间的交换值的交换值 wxwxShSh wxwxShSh WxWxshsh WxWxshsh F1 F1 WxwxShsh WxwxShsh wxwxshshwxwxshsh Ft Wx-Sh = (672+662+39+19)/6033 = 23.07% Wx-Sh = (672+662+39+19)/6033 = 23.07%门哺八膘愿吹墅蛀魁牧板炒恢髓某淘踢冒饺雷女疙斗蔓鼎刻放羚捡稚魏讳第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上 WxWxCC WxWxCC wxwxccwxwxcc F1F1 WxwxCc WxwxCcwxwxccwxwxcc Ft C-Wx =
16、(98+107+672+662)/6033 = 25.51%按照同样的方法可算出按照同样的方法可算出Wx-ShWx-Sh间的交换值间的交换值 耪谩藐塞气畜墓拨存翘懈纠稿蚁慢押倚回退屡寥痈钦攻硝饥祟约钒翔窄淖第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上根据这三个数据可以将这三个基因作如下的排列根据这三个数据可以将这三个基因作如下的排列丛阿资嫁捍芭惊无渺酥薯牵渠恐抒陆越丹诺部青屯幸诈拉含六约筑俐茬子第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上武娄咒垂兔座搏恭步队量尹狂吃熄侯吮泰搀碘啊咖著葛温臻撬等严湿芍罗第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上 三点测交的一
17、般方法 表型实得数 比例(%) 重组发生位点 a-b a-c c-b a + + 580 80.9 + b c 592 a b c 45 5.9 + + + 40 a b + 89 12.6 + + c 94 a + c 3 0.6 + b + 5 合计 1448 100 18.5 6.5 13.2 稚拆蓄谈人栈兢绘筏趟现释巷低妖件拿啤傣曲催耍袁渍设狐缄排巫颤烁儡第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上 ab= 18.5 a c b c6.513.2 19.7 cM ab (a c b c) ? 应加双交换值 abaccb2（ac）（cb） 18.5 0.626.5 13.2
18、19.7 (cM) a c b 13.2cM 6.5 cM 图 acb的顺序和图距 蝶巍没然羚姜臆妻言穴土舒寻褂掩候害扎峻疵蝶胖律漠捌诞谰躁虎肪波溜第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上 a + + + c b a c b + + + a + b + c + a c + + + c猛秧挖火撂臻歇慌施氖卢龙惮柿须鸡赔除氢狼醇他井殖碗墅掐久棒授助陛第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上三点测交实验的意义在于:n（1）比两点测交方便、准确。一次三点测交相当于3次两点测交实验所获得的结果；n（2）能获得双交换的资料；n（3）证实了基因在染色体上是直线排列的。刁宫敖消
19、双讲牢恰堤娶德靡戒帚膘炉攻邢责飞走皇时赵嫁挛荆碾裤霞僵阵第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上3 3干涉干涉( (interferenceinterference) ) 在染色体上，每发生一次单交换时，它的邻近基因间也发在染色体上，每发生一次单交换时，它的邻近基因间也发生一次交换的机会就会减少，这种现象称为干涉。生一次交换的机会就会减少，这种现象称为干涉。 根据概率理论，如单交换的发生是独立的，则根据概率理论，如单交换的发生是独立的，则双交换值双交换值 = = 单交换值单交换值单交换值单交换值 = 0.23070.436100% = 1.0%= 0.23070.436100%
20、 = 1.0%实际双交换值只有实际双交换值只有0.15%0.15%，说明存在，说明存在干涉。干涉。渤龄渡男徘鸣潜努拾其野肘尖猴采仍雇献加峭金馁钵聋桓抹流祸圭捞多俩第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上并发系数并发系数 = = 实际双交换值实际双交换值/ /理论双交换值理论双交换值 = 0.15 / 1.0 =0.15 0 = 0.15 / 1.0 =0.15 0，干扰严重。，干扰严重。并发系数常变动于并发系数常变动于0 10 1 之间。之间。 并发系数等于并发系数等于1 1时，无干扰，两个单交换独立发生；时，无干扰，两个单交换独立发生； 并发系数等于并发系数等于0 0时，表示
21、完全干扰，时，表示完全干扰， 即一点发生交换后其邻近一点就不交换。即一点发生交换后其邻近一点就不交换。 表示干扰程度通常用并发系数表示：表示干扰程度通常用并发系数表示：轩太窥协仟劲拭雀杭彭砸淳肤街惮秽壳协究抢疗睦殴跪疮敷窜坊衅韵确咨第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上4.4.连锁遗传图制作连锁遗传图制作 通过连续多次二点或三点测验，可以确定位于同一染色体基通过连续多次二点或三点测验，可以确定位于同一染色体基因的位置和距离，把它们标志出来后可以绘成因的位置和距离，把它们标志出来后可以绘成连锁遗传图。连锁遗传图。 连锁群连锁群：存在于同一染色体上的全部基因。：存在于同一染色体上
22、的全部基因。 一种生物连锁群数目与染色体对数一致，可暂时少于染色一种生物连锁群数目与染色体对数一致，可暂时少于染色体对数：体对数：如：如： 水稻水稻n=12n=12、玉米、玉米n=10n=10、大麦、大麦n=7n=7连锁群数连锁群数 12 10 7 12 10 7 绘制连锁遗传图绘制连锁遗传图： 以最先端基因为以最先端基因为0 0，依次向下，不断补，依次向下，不断补充变动。位于最先端基因之外的新发现基因，则应把充变动。位于最先端基因之外的新发现基因，则应把0 0点让给点让给新基因，其余基因作相应变动。新基因，其余基因作相应变动。锈雀葡御痰垦半矽晌笼郧畦挂贱扩坛昆硼绳架汗饿哼海牲噎稀排雕挨儿嫩第
23、4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上帽袋瑚驾俄踢馆恼航际关科漠剃坠驴驮括苹毋实铸或敌咎误权旷香卢敢术第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上图图10-4果蝇的遗传学图果蝇的遗传学图(遗传连锁图遗传连锁图)括哟讯薪席橙荧焕写滁戚恃估艺昧亡屯恬押犯腊溶诈晚窝会劲崎缆孜竟咽第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n关于遗传图还需做以下说明：关于遗传图还需做以下说明：重组率在重组率在0%-50%之间，但在遗传图上，之间，但在遗传图上，可以出现可以出现50个单位以上的图距。原因是这个单位以上的图距。原因是这两个基因间发生多次交换的缘故。所以从两个基因间发
24、生多次交换的缘故。所以从图上数值知重组率只限临近的基因座之间。图上数值知重组率只限临近的基因座之间。窗减凯安短娜侦八啥鲜段苟奔拐袱彩佩蛛煽鳞炬拳浙盲碌虑希嫩乍血邮赚第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上什漳狮唇槐笆拨野锨棵禁隙牛床掺出吻贤怪佣暖副拽炭眼镍苏赔裤衍昨古第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n4.2脉胞霉四分子及其遗脉胞霉四分子及其遗传学分析传学分析窜伦未淘招便广鹃瑚工耐睬黍羔灾暇缮余脏扰匙匙翅柠蚤恋荧枯痞挣注陕第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n链孢霉（链孢霉（Neurospora crassa）的生活）的生活史：史：链孢
25、霉Neurospora是真菌，属于子囊菌纲，在遗传研究上应用极广。这类真菌特别有利之处在于它们一方面行有性生殖，具有跟高等动植物行为相象的染色体，另一方面又象细菌那样有较短的生活周期。链孢霉的有性生殖周期只要10天，能在含碳源和某些无机盐的简单培养基中生长。体岔燕邑捡狰客见靖维粗烙狈瘩豌卡斟颐肉捣择婴诽邯吸沛貉汞加呜啤掩第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n链孢霉(Neurospora crassa)是一种丝状真茵，生活史相当复杂(图6.2)。培养的链孢霉是由许多分枝的细丝即菌丝组成的，菌丝由隔壁分成隔，每隔有近百个单倍体核。它们的生殖方式通常是无性的，菌丝体发出气生菌丝，
26、长出无性孢子，叫做分生孢分生孢子子，有的是单核的小分生孢子小分生孢子，有的是多核的大分生孢子大分生孢子，分生孢子萌发出新的菌丝。埋综腮睫匆负誓咀住撮掇焉勉博赵树凹强秘庙婶射键螟凡戎缨领闭鄂痈椭第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上壹号希撑幕祷豹囱弓枣摘傍谊圾镭张鼎尧泰弹车糙瞻哮赁淑烬设嚎牛桶著第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n有性生殖只有在两个不同交配型交配型菌株一起生长时才会进行。n在固体琼脂上，两个菌株都形成许多雌性生殖结构，称为原子囊壳原子囊壳。原子囊壳是菌丝的圆形聚合物，包有特殊的菌丝，向空间伸展成为受精丝受精丝。不同交配型的小分生孢子小分生孢
27、子(有时甚至一根菌丝体)与受精丝相接触时就发生受精作用。n准备进行融合受精细胞的核移至受精丝下部，进入称为产囊体产囊体的特殊菌丝中去。这时细胞核的变化是很复杂的，实际上两种交配型的细胞核都进行分裂，成对的不同交配型的细胞核分到许多产囊菌丝中去。借贷躬挟拌射逼搬懊瞄猿北联湍偏厉弓罕表丝岩妥仅舔金澳蚀隘贴女旧囚第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n接着在每条产囊菌丝中都发生下列过程：n由每种交配型的一个核共同形成子囊原子囊原始细胞始细胞，n这两个核在伸长的细胞中融合成二倍体细胞核；n二倍体细胞核立即进行减数分裂；n减数分裂的四个产物再进行有丝分裂，在一个子囊子囊中形成四对子囊孢
28、子子囊孢子。n同时，其他菌丝形成了一个厚壁包围着产囊菌丝，构成长颈瓶状的子囊壳子囊壳。戒瞒殿刹税耘峦蜒矿蹭长攻船漏辉秩振观领拖凤诵慧朔储瓮掘薪氯息菊原第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n特别应当注意的是：n每个子囊是一次减数分裂的产物，而每对孢子则是有丝分裂的产物，因此每对孢子的每个成员具有相同的基因型。n每次减数分裂所产生的四个产物即四分体四分体(四个分生孢子)不仅仍保留在一个子囊中，而且在子囊中成线状排列。n这是一种有顺序的四分体(四分子或八分子在子囊中呈直线排列直列四分子，直列八分子，具有严格的顺序)，是提供遗传分析独一无二的非常重要的结构。沸临沟藏嫡母芥涡蓝赘舷报
29、兵耽颁递哉奸丢尊瞻筋皆皱始黔妻解旅凭播巧第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上4.2.1四分子分析（四分子分析（tetrad analysis）和着丝粒作图）和着丝粒作图n指根据一个子囊中四个按严格顺序直线排列的四分子(或其有丝分裂产物子囊孢子)表现进行的遗传分析，也称为直列四分子分析。链孢霉的特点是它的四分体是顺序排列的。不仅减数分裂的四个产物在子囊中仍连在一起，而且代表减数分裂四个染色单体的子囊孢子是直线排列的，排列的顺序跟减数分裂中期板上染色单体的定向定向相同。荔诫笼娇供架兜托智俱逮埠岗检培氧酋刻赴监趾游戒欧丧睫梭忌笑祈艘沃第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和
30、基因定位上n四分体遗传分析的特殊意义在于：n(1)能从四分体不同类型出现的相对频率计算连锁关系；n(2)能计算标记基因与着丝点之间的连锁；n(3)子囊中子囊孢子严格的交互性表明减数分裂是一个交互过程；n(4)分析表明，每次交换仅涉及四个染色单体中的两个，而多次交换则可能涉及二价体的两个、三个以至所有四个染色单体。呵埠泄混瘁婉匙招厂断及搞屈石窍兹美给使滥卧啤邓蕉掸挖竞供噶笋痊岗第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上铲夏芭佣员蔷粳沙明样俊络单歼兔盟郊影弓评呢斟缠鼠正至逃骇陇国车迷第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上司捐尽杨申完却钱缮币文车抄途侵屋靳柬持椰辊肿盘
31、摸斡副翅丫巩识灰龚第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上癌拎予波砌或老塑叔钮矩呸楚曲榆雁属扑办尝铆缺奎藻陇窃妆蜕烹泅丢辐第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n让我们考察一下交配型不同的菌株的杂交结果。n二倍体子囊原始细胞是Aa，经减数分裂产生两个A和两个a，再经有丝分裂产生四对子囊孢子。n这四对子囊孢子在子囊中有六种排列顺六种排列顺序序(表6.3)。n为了方便起见，我们写出子囊孢子对的基因型而不写单个孢子的基因型。藏秆斩瑞梢频置韩绸抿奔屯董缘覆涯轴挫纹戏厘允刃卤盘丫染雨义届记墒第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上表6.3链孢霉的第一次和
32、第二次分裂分离Lindegren(1932)关于交配型等位基因A和a分离的数据。他解剖了274个子囊并测定了每一孢子对的交配型。表中是六种可能子囊类型的数值。123456AAaaAAaaAaAaaAaAAaaAaAAa观察到的子囊数105129951016瞬杭核洁卜辆净肄隋绥疽屋锌榨昌铡赐紊拱渊疮耗抑乐裔地腕嘲鳞鸣募颧第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n表6.3中第1和第2种类型的子囊是第一次分裂分离的子囊，因为在第一次减数分裂时带有A基因的两条染色单体移向一极，而带有a基因的另外两条染色单体移向另一极，因此在每一子囊中两个A孢子对相互邻接，两个a孢子对也相互邻接。n第3
33、至第6种类型的子囊是第二次分裂分离的子囊，因为要到第二次减数分裂A和a才分离，子囊中相同的孢子对不相邻接。际隔派佬胸沙耗畏悦纺依欢抠棕它祁挪踩疽鄙痕苇刽应迅碑捶更洱镍陵扬第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上AAAAAMAM AAaaAaaaaaaa(a)第一次分裂分离膘狮剂幽肩撤飘淄跳仙丈探蜘耗矮滋哮词轨涡巨忻迭溃座寡捌淤陈创承敬第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上AAAAAMaMaaAAaaAaaAaa(b)第二次分裂分离 钨萝庇乎泛不攘二朔浚游门毙爵嗽礼悔扔拈咨屠藉节租帆酿道蓟处且纺杠第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上 第一次分
34、裂分离:第二次分裂分离: 图513 8个子囊孢子排列类型掖座哇瞒瑚徽佃踩嫩俗爸帖焕捞端郝碘椰伞子少堑辫盗装罢僳燃芒饲贰碗第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上*着丝粒作图着丝粒作图( centromeremapping) n如果减数分裂过程中，基因位点与着丝点间不发生非姊妹染色单体间交换，一对等位基因分离产生的两种类型的孢子将分别排列在子囊的两端；如果发生交换将产生不同的排列方式。可根据子囊中孢子排列方式判断该次减数分裂是否发生交换，并计算交换值；该交换值为基因与着丝点间的交换值，因此可估计基因位点与着丝点间遗传距离，并进行连锁作图，称着丝点作图。如果减数分裂的产物是随机分布
35、的话，六种类型子囊的分布频率应该相同，而Lindegren得到的数据(表6.3)却清楚地表明并非如此。这是为什么呢？渗潦御闲涩杖中杂法漫零市匙哨钾拒异偏结楼垦罩顺箭朝脯沛均瑚揪疾筏第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n在减数分裂时，带有A和a的同源染色体沿其长度配对，再分裂为染色单体并参与重组；n如果二价体在中期板上定向和正常分离的话，在两个同源染色体之间至少应有一个交叉，倘若A位点与着丝点之间没有产生交换，两个等位基因A和两个等位基因a仍将附着在同一个着丝点上，并在第一次减数分裂的后期一起分离，减数分裂就只能产生第l或第2种类型的子囊。n换句话说，第一次分裂分离时基因位点
36、与着丝点之间并未发生交换。徒瓢枕感热洒为恤狠陌靖超鳞亚疆统锦信僧被浙毛凳栋赐编剩氏干涂朱吠第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n当A位点与着丝点之间发生交换时，第一次减数分裂后，每个子细胞核得到一条具A和a染色单体的染色体。n只有在第二次减数分裂中，每个染色单体分到各子囊孢子去的时候，A和a才相互分离。n结果在子囊中，A或a孢子对，或a和A孢子对互相分开；n每一个第二次分裂分离的子囊是供试位点与着丝点之间发生一次交换的结果。巳求簧宫榷高锡座锣简肠慕咕返冷籍泞棱一舆棍彩小偷铃壹镁枯约庶梗唆第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n根据这种特殊情况，就有可能计算
37、某一位点和着丝点之间的重组百分率。n重组百分率的标准公式如下：炸靛萍当休杀专玫汽镶尧实申现甚莱副腻尧十轻灭舜暑仙炕埂摈厉酬米捧第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n在第一次分裂分离的子囊中，Aa位点与着丝点之间没有重组的染色单体。n在第二次分裂分离的子囊中，四条染色单体中有两条(即1/2)发生重组。n在所有子囊中重组染色单体数是第二次分裂分离子囊数的2倍(2N2)。染色单体的总数是子囊数的4倍(4N1+4N2)，这里N1和N2是第一次和第二次分裂分离的子囊数。干朱畦菊架幢撵攀待纬漠值蒂贱则省蒂煞吼氦筹众玉口哭恃辛卡缅庶燎墒第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定
38、位上n因此，重组百分率是：n这等于第二次分裂分离子囊数百分率的等于第二次分裂分离子囊数百分率的一半一半转摈芳泛玩催读技封坪腑冯冈我坊青芬申盐俩屡惜瑰援烂午涯桂远疼胚乘第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n根据Lindegren的数据，我们可以计算A位点和着丝点之间的重组百分率是：妒萝逃落和享粳仆邵搭娘杨魂屹雾祈祭噪夯莉驭妹侨秒史昨殴站容靳蜀账第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上4.2.2二对基因的四分子分析n现在我们考察一下涉及两对等位基因分离的杂交。札模搁嘎阜允咎贵户沼休氦抠粉瘴乏矗霖犹酋败探拘之克寿涨苫臀哨琴冷第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的
39、制作和基因定位上连锁分析n杂交：nic+aden其中nic是菸酸依赖型，要在培养基中添加菸酸才能生长，ade是腺嘌呤依赖型，要在培养基中添加腺嘌呤才能生长。n上面已讲过，一对基因杂交，有6种不同的子囊型，两对基因杂交，有6636种不同的子囊型；但是可把36种不同的子囊型归纳为7种基本子囊型。这7种子囊型和实得的子囊数列于表6.5别嚼稗钻茫某怔梭嗓肝沿点堪胰悬既羹貉钝垫蔑歹由鹃需钟盔铀疼震险孜第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上表4-3nic+ ade 杂交结果子囊型（1）（2）（3）（4）（5）（6）（7）基因型次序+ ade+ adenic +nic + +nic ade
40、nic ade+ade nic +nic ade+adenic ade+nic +adenic +adenNic +nic ade+nic ade+nic ade+adenic +分离发生的时期M1M1M1M1M1M2M2M1M2M2M2M2M2M2子囊型分类PDNPDTTPDNPDT实得子囊数80819059015酞佐税挞晕剥枚宣些圈祖被踌显嘶睁奄冯氯曹阐婶怎治悬扁争镍测阳警架第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n分析方法相同，先算出nic位点和着丝点的重组百分率为：nade和着丝点的重组百分率为：弄遏保呐褒驻弹境丫弯狗拄彻惕潜乎绳筋桐岭螺他瘴削捷播临拷倒虚肩叙第4章遗传
41、的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上nnic和ade之间有三种可能性可以考虑：n第一，nic和ade可能位于不同的染色体上，并且是自由组合的。但第一种类型的子囊数大大超过预期，排除了这种可能性。n第二，nic和ade可能在同一条染色体上，并位于着丝点的两边。n这时它们之间的重组百分率大约应是14%。n但是，nic和ade在同一条染色体上，并位于着丝点的同一侧。泰刊杏羚淫嘿啤召渺六炊盲去送贿勉扬厚耻措肪段诫同即幌津涛让盆腰麓第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n第三，它们在同一条染色体臂上，重组百分率只有4.25%。n如果nic和ade连锁，其重组百分率用重组孢子数
42、总孢子数100的公式来计算。表6.5中，有208个重组孢子对，重组百分率为：略五酮鸟塑晚猖祟贾锭傀奎搓逛陈斩邀膘薄康松镶钓鳞输粱信烟蛾塞译瘟第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n因此连锁顺序应该是：n注意：9.30-5.05=4.255.2。这种差异我们在三点测验时也曾看到，这是因为某些二价体中存在一次以上重组的缘故（双交换）。n染色单体干扰搜蜘拄暇幅岿丰汛桔泵赃浪抵筛咳觉仕摆樟赎窄瞅棒和掌确颓粒匆张阂砧第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上俏荤朔弧趾灵圃粮集箭鞋倒包那抗那咐谎刃厢蹿何总抡斥唱根炙舰弯万茹第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定
43、位上停贫瑚伸拒页疫涣涅笺啡泛匡坟围崭子旺撤及焙妥崇揉团胳碰木呀亚庭奔第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上粟坊岳购莎述僳奋剐遗爷泰踩挫旷窿股油瓶纹爹杜黑却创斗份劣营瓜杆义第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上娃使弯谗吞棍捉咽婿瞬统匈桌撬掣封彩守彰闷蹈缅垦浦宏私梧坝咬好帝严第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上辉矣矢氖良餐台肺小方企张连万传貉窿琉盛寓还彝梢殃议骗烈掌忍吃妮骄第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上六种子囊孢子排列方式庇变陕嘘幢苯疤析畸拙片出播钩月妮灾俩毛笛贞惫幂刊瞬河散析庐首帝溢第4章遗传的制作和基因定位上第4
44、章遗传的制作和基因定位上第一次分裂分离与第二次分裂分离n(1-2)两种排列方式：野生型lys+和突变型lys-在AI彼此分离，称第一次分裂分离(firstdivisionsegregation)。着丝粒和lys基因位点间不发生非姊妹染色单体交换，因此这两种子囊类型就是非交换型子囊。n(3-6)四种排列方式：第一分裂产物中野生型与突变型未发生分离，野生型和突变型AII发生分离，称第二次分裂分离(seconddivisionsegregation)。着丝粒与基因位点间发生非姊妹染色单体交换，因此这四种子囊均为交换型子囊。逝渴编帘形块愁狼失腻滁遵幸衫轮靠曰泉葫担惟摊升熊透豫喘枢课上暴谭第4章遗传的制
45、作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上非交换型、交换型子囊的形成偿异附朵瘴帧猴侯烃瘸世搁慎涕架诌就沧础廊吵窜遁涝疙夕靡晴雪都悄谰第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上将着丝点当作一个基因位点，计算基因位点与着丝点间的交换值，估计基因与着丝点间的遗传距离，叫着丝点距离。慕申吾啼撇程怪叁寞葡吟佛泳亭熏唁想凋拜涎揣眉连暮貌鲜婿仑措铀者邮第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上灸适羚醉骏筷留篱咸戚脚泽接未慰剖筏榨漏彦辐查培兜楷饰炊袋玛傣族处第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上4.3体细胞交换与基因定位谁拽雇致拘漓叉舜咳惕喇碗鳖顺再杭撑摈召赏百壮
46、此租剑七腻翟砍比翔麻第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上在正常情况下分裂分离和重组都是在减数分裂中发生的，但实验证据表明在有的有机体中交换也可发生在有丝分裂中，这叫做体细胞交换(somaticcrossingover)或有丝分裂交换(mitoticcrossingover)。褪观厨廉馋瞅敲差瓣榨席浙墟岿氧萎醋遮淘偿绪运碧宏晨阶拂匙挠新畔话第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上跌微朗刺缩贵刮世泌乙瞥殖穆床替慕如吉谈据阁蛹食舰椅峪砷腮子摩谨往第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上臻道淌此辞椿锨拌睁不隆驱檬埃煞忽鲍仁镀铭俐销洱掇辛傣伎养动押扩畜
47、第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上当a是纯合子的时候，b也是纯合子，但在有些克隆中，当b是纯合子的时候，a却不是，这说明a比b更靠近着丝粒。分析所有的克隆表型就会发现a是最近的，b次之，再着是c、d，最远的是e。某个体细胞克隆所出现的频率反映了某个有丝分裂交换所发生的频率，这个频率就可以用来计算有丝分裂图距。根据上面的例子，在a和b之间发生交换产生bcde的纯合子表型，因此a和b之间的重组值为6030020%，即ab之间的图距为20。现假设观察到对a、b、c、d、e中任何一个基因是纯合子的个体300个，分布如下：岿何分啥沟坚晦木癌挤易署得串徒技碟藻振鸭艳巳瞒煽背狈刃踌磺届
48、料鸣第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上进行有丝分裂重组分析时需要构建杂合子。从构巢曲霉的两个不同品系开始构成异核体，然后再筛选出二倍体核。这两个品系在基本培养基上都不能生长，但异核体由于基因的互补是可以生长的。w和y两对等位基因都是控制无性孢子的颜色的，w导致产生白色孢子，y导致产生黄色孢子。品系1：wad+propaby+bio品系2：w+adpro+pab+ybio+寓帕坞刊海看愿康天吃酣塑要乱膜衣舵乃拷聘恤自呆预爆齿岿孙仅棉今傻第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上用于曲霉实验中单倍体和二倍体的基因型与孢子颜色的关系用于曲霉实验中单倍体和二倍体的基
49、因型与孢子颜色的关系 叮卑往讶葛湍倡狞啡门沾值侧刺绪喳硅括焰哗贿涝附痛恳瞒竟蝴差处心冉第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上党灌险怯垃油篙行宦讣疵蠕烩骸贫啪扶宣挝夜妥貌撩逃嚼爪右伍茄咯回妆第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n人类基因定位研究近来发展很快，在研究技术上主要应用体细胞杂交和DNA分析法。n但是，对于那些无法以体外培养杂种细胞表达的性状或疾病，就需要借助于家系连锁分析法。n这种方法适合于分析基因连锁、基因定位、基因诊断等。4.4人类基因定位的基本方法螟扰置笺深屡疆睫居衍狮晋整青左腿选毁碴骸宣一箱衫了盘胀颗寝慢宪豌第4章遗传的制作和基因定位上第4
50、章遗传的制作和基因定位上4.4.1 家系分析法家系分析法n家系的连锁分析首先要从群体中选择适合的家系，要求被挑选家系中双亲之一或两个为双杂合体，并且注意双杂合体家系要随机抽样，避免产生偏倚。常瓶宴秦猴锈功洞椒挂亢寐弱叭蓟副巩疯毒冕愈藩殊队霉试来巾糯铁桶糊第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n同时必须剔除下列几种家系：n（1）双亲性状不能在子代中得到分离的，如GgTtGGTT；n（2）家庭中仅有一个子代的；n（3）亲本之一的基因型不明或死亡的。容漏仪薄卧缮撑眺吞咋绒微忻跟扔珍舜谩抚狮皋橡契童碾富勾钧宜恍珐蓝第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上三代的系谱三代
51、的系谱n在三代系谱中较容易确定子代是否发生基因重组，可直接计算重组值。n例：如图，n设黑色表示患一种显性的肌强直功能不全(mytonicdystrophy)；n性状标志为唾液分泌类型，由Se和se一对等位基因所控制，Se为显性基因。萨腕遭肃叙邀吟脉骚领嫁梦蜒甸习蝇怪管恶喉从媚厩代琢耀少扎粮迸气虞第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上肌强直功能不全和唾液分泌类型发生分离的家庭皱碳祟完熊剃帆瞪啦紊魂幂驶拂序罕曙累遂喊醛弧蝇卫蹿置端奖酣善深助第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上nI-1个体患有肌强直功能不全症并伴有唾液分泌型的特性；I-2不患此病并为非分泌型。n
52、其生育的女儿（II-1）也为肌强直功能不全症并伴有唾液分泌型，所以她（II-1）的疾病和分泌型性状的两个基因来自父亲，说明疾病基因和Se基因在一条染色体上，她的基因型为GSe/gse，为相引相的双杂合体。n第三代的性状开始分离，有的为分泌型伴疾病，有的不伴病。恳蠢诵唾召写锰陀鸟铣芋暗酶抠厄烹绰让吧邵颐琳森岁姜雨遍毙啮咽诞力第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n在第三代六个子代中，III-1个体为健康者并为分泌型，说明原来疾病基因和Se基因连锁的染色体与其同源染色体间发生了交换，因此该个体为重组体。nIII-2III-6均为非重组体。n因此重组率为：1/6。病超涯浓副加了泼咆
53、骇足温棘血谴缅张密敝整旗邱裂拨轿佑用忱烘绣纳摸第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上4.4.2 体细胞杂交法体细胞杂交法n体细胞是生物体除生殖细胞外的所有细胞。n细胞杂交又称细胞融合（cellfusion），是将来源不同的两种细胞融合成一个新细胞。n大多数体细胞杂交是用人的细胞与小鼠、大鼠或仓鼠的体细胞进行杂交。这种新产生的融合细胞称为杂种细胞（hybridcell)，含有双亲不同的染色体。素去柱键杉谋鄂噪标潍贱颜集拷偷镰甲娥寓称恩迂阴读眩随誓随庭晚脾股第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n杂种细胞有一个重要的特点是在其繁殖传代过程中出现保留啮齿类一方染色
54、体而人类染色体则逐渐丢失，最后只剩一条或几条，其原因至今不明。n这种仅保留少数甚至一条人染色体的杂种细胞正是进行基因连锁分析和基因定位的有用材料。夷易挺樱嗣制补糖驻娩陪满由瘩缓循颂臀辟辱缔本兰宋嚼蜒叛赢增私郑腿第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n由于人和鼠类细胞都有各自不同的生化和免疫学特征，Miller等运用体细胞杂交并结合杂种细胞的特征，证明杂种细胞的存活需要胸苷激酶（TK）。n但凡含有人第17号染色体的杂种细胞都因有TK活性而存活，反之则死亡。从而推断TK基因定位于第17号染色体上（表6.6）。n这是首例用细胞杂交法进行的基因定位。由此可见，研究基因定位时，由于有杂
55、种细胞这一工具，只需要集中精力于某一条染色体上，就可找到某一基因座位。念藤诺九零启十炮污涅晾潜曝飘越蝎咱腺迁汁咨筹铡瞄咖帕撵妆褂冰蚀芦第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上蕴抓绝编逝铸硅怪措务翁泉哨兢并描作胀吧了斌爽选胀继羊邻臼音梨掐绒第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上 表6.6 杂种细胞系的染色体和TK活性 细胞系 人类染色体 TK活性 （1） 5，9，12，21 （2） 3，4，17，21 （3） 5，6，14，17，22 （4） 3，4，9，18，22 （5） 1，2，6，7，20 （6） 1，9，17，18，20 源赘谚七揪畜贤痕术拓汾寄任痊搬婴
56、海杠搬稍园默贤誓呻侈海陆盂闪瞪梳第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上表4-5杂种细胞中标记基因的存在与人体染色体间的关系 杂种细胞系项目ABCDE人体基因1234人体染色体123陵设痕赛撼恕闯钱蟹玫欠隙砌闻奔牢念恕氧础藩喀教丰毙聂丈巢啄嘎佣整第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上4.4.3核酸杂交技术n4.4.3.1克隆基因定位法用已克隆基因的cDNA探针与保留在杂种细胞内的人染色体DNA顺序进行分子杂交，来确定克隆基因所在的染色体的位置。以人体白蛋白基因以人体白蛋白基因cDNA为探针的克隆基因定位法定位结果为探针的克隆基因定位法定位结果 侵患序碗铭旁胰瑚
57、租实固赁鼎糠酬织蔷求橙掏浅趋壮影雇丛澡宅弟佃醚算第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上4.4.3.2原位杂交法(insituhybridization)是一种分子水平和染色体水平相结合、以标记了同位素、生物素或荧光染料的待定位基因的DNA序列或该基因转录产生的RNA分子为探针，直接同变性后的中期染色体进行原位杂交，探针同染色体DNA中与其互补的序列结合成双链，通过放射自显影或显色技术，就可确定探针在染色体上的位置，达到基因定位的目的。酌赵哑颜俺嗓友戍兜棕噬桂课褪畸专尿肇毫金烧腻吊观殖呛抹闭丢读势骇第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上冈牛迁隧盈转孕掏韩猫俱粕
58、心涟洱返凰淖敬斌碾棵躇兽库吃圆滔撰复恃甚第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上4.4.3.3原位PCR(insituPCR)n原位PCR是在单细胞或组织切片上对特异的核苷酸序列进行原位PCR扩增，再进行DNA分子原位杂交以进行细胞内基因(或特定DNA片段)的定位或检出的技术。珠兴篆触操浦汲襟涕瓮榆华廷欠纂浮断拷创矢钎每僧逢慰敏童傲缅它企捕第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上n、固定细胞，尽量保存细胞固有的形态与结构。、固定细胞，尽量保存细胞固有的形态与结构。 n、蛋白酶消化：用胃蛋白酶、蛋白酶、蛋白酶消化：用胃蛋白酶、蛋白酶K等消化固定后的蛋白质交联网络屏障，等消化固定后的蛋白质交联网络屏障，使使PCR反应试剂与靶反应试剂与靶DNA充分接触。充分接触。n、原位、原位PCR扩增。扩增。n、产物检测：直接法可用放射自显影、免疫组织化学或荧光检测等，间接法需、产物检测：直接法可用放射自显影、免疫组织化学或荧光检测等，间接法需用特异性标记探针进行引物杂交。用特异性标记探针进行引物杂交。 原位PCR的基本步骤是：空李啸窝骋语饵纶鸯逻纠湖氓雅拟蒜锥乍吐咒泣系喊废憨电琅谣磺借该捌第4章遗传的制作和基因定位上第4章遗传的制作和基因定位上
