细菌内毒素检查法凝胶法

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1、细菌内毒素检查凝胶法 细菌内毒素检查法细菌内毒素检查法 凝胶法 方法分类 浊度法 光度法 显色基质法 重现性好方法特性 能定量 能控制药物的增强/抑制干扰 操作简便。节省时间原理：原理：利用鲎血液中的变性细胞，利用鲎血液中的变性细胞，经裂解液和机械方式促使经裂解液和机械方式促使细胞破裂而提取到的一种细胞破裂而提取到的一种细胞溶解物，能与极微量细胞溶解物，能与极微量的细菌内毒素形成特异凝的细菌内毒素形成特异凝胶反响，反响的速度和凝胶反响，反响的速度和凝胶的巩固程度与内毒素浓胶的巩固程度与内毒素浓度有关度有关.细菌内毒素检测之凝胶法实验程序1、试验准备：试剂、仪器及用具2、内毒素限值确实定3、确定

2、最大有效稀释倍数4、凝胶限度试验5、结果判定要求1、以最终产品为检测必要浓度超过2、检测样品PH应在68之间，不符应调整1、试验准备：试剂、仪器及用具仪器与器具 电热恒温水浴锅、定时钟、去热源枪头和小玻璃瓶、移液枪、试管架、剪刀、锡箔纸。试剂 细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检查用水、鲎试剂。2、内毒素限值确实定 L=K/M 式中L为供试品的细菌内毒素限值，一般以EU/ml、EU/mg或EU/U表示；K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/kgh表示；M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，以ml/kgh、mg/kgh或U/kgh表示。一般由供试品提供者直接提供内毒素限值如10

3、00EU。3、确定最大有效稀释倍数MVD： MVD=cL/ 式中L为供试品的细菌内毒素限值；c为供试品溶液的浓度；为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度(EU/ml)。3、鲎试剂灵敏度复核按下表制备溶液A、B、C，使用稀释倍数为MVD的供试品溶液来制备溶液A，按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。 B C A A鲎试剂200ul100ul100ul100ul标准品100ul供试品100ul100ul6、结果判定将制备好的试剂用锡箔纸包裹好后放入电热恒温水浴锅中， 37恒温水浴60min后观察结果保证玻璃瓶中溶液处于水面以下，并防止水进入瓶中。假设阴性对照溶液B为阴性，阳性对照溶液C为阳性，试验有效。假设溶液

4、A的两个平行管均为阴性，判定供试品符合规定；假设溶液A的两个平行管均为阳性，判定供试品不符合规定。假设溶液A的两个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试，复试时，溶液A需做4支平行管，假设所有平行管均为阴性，判定供试品符合规定；否那么判定供试品不符合规定 操作本卷须知试验前准备：1、玻璃器具应标准化，便于除热原、计量准确、清洗操作方便。2、用于内毒素检测的稀释试管最好用玻璃试管；塑料用具只能为一次性且保证无内毒素。实验环境：最好在洁净室或洁净工作台内进行，保证环境温度、湿度及通风稳定。实验人员：戴干净手套和口罩。实验过程：1、内毒素工作标准品应严格按要求低温保存；工作标准品开封后尽快使用且应一次性用完，不再保存。2、每一步稀释液所用的移液器不能反复、交叉使用。3、鲎试剂复溶时应将检查用水顺着瓶壁参加，防止产生气泡。4、操作时间的长短。环境温度变化都会影响实验结果，故操作应尽量熟练、快速。5、恒温器的温度变化应1，鲎试剂与样品混匀后应立即移入水浴槽，严格控制保温时间在602min，保温期间不得移动试管架，桌面保持平稳，周围不能有振颤因素。结果判断：恒温结束后，取出试管或反响瓶缓缓倒转180，不从管壁脱落为阳性，不能保持完整即使有局部脱落者也判为阴性。