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1、探究培养液中酵母菌数量的动态变化探究原理：酵母菌可以用液体培养基来培养。培养基中酵母探究原理：酵母菌可以用液体培养基来培养。培养基中酵母菌种群的增长情况与培养液中的成分、空间、菌种群的增长情况与培养液中的成分、空间、pH、温度等、温度等因素有关。我们可以根据培养液中的酵母菌数量和时间为坐因素有关。我们可以根据培养液中的酵母菌数量和时间为坐标轴做曲线，从而掌握酵母菌的种群数量变化情况。标轴做曲线，从而掌握酵母菌的种群数量变化情况。探究步骤：探究步骤：（1）将）将10 mL无菌马铃薯培养液或肉汤培养液加入试管中。无菌马铃薯培养液或肉汤培养液加入试管中。（2）将酵母菌接种入试管中的培养液。）将酵母菌
2、接种入试管中的培养液。（3）将试管放在）将试管放在25条件下培养。条件下培养。（4）每天取样计数、推导计算酵母菌数量：）每天取样计数、推导计算酵母菌数量：血球计数板血球计数板（2mm2mm方格，培养液厚）方格，培养液厚）（5）分析数据，画出曲线（）分析数据，画出曲线（7天），推测影响影响酵母菌种群天），推测影响影响酵母菌种群数量变化的因素。数量变化的因素。 (二二)酵母细胞数的测定操作方法酵母细胞数的测定操作方法1.血球计数板的构造血球计数板的构造 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个玻片制成的。玻片中有四条下凹
3、的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面个刻有一个方格网。方格网为两半，每半边上面个刻有一个方格网。方格网上刻有上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。这一大方格的长和为计数室，供微生物计数用。这一大方格的长和宽各为宽各为1mm，深度为，其体积为，深度为，其体积为mm3。 计计数数室室通通常常有有两两种种规规格格。一一种种是是大大方方格格内内分分为为16中中格格，每每一一中中格格又又分分为为25小小格格；另另一一种种是是大大方方格格内内分分为为25中中格格，
4、每每一一中中格格又又分分为为16小小格格。但但是是不不管管计计数数室室是是哪哪一一种种构构造造；它它们们都都有有一一个个共共同同的的特特点点，即即每每一一大大方方格格都都是由是由1625=2516=400个小方格组成，见图。个小方格组成，见图。2.血球计数板的使用血球计数板的使用(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数。用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数。(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有小方格内含有4-5个酵母细胞为宜，一般稀释个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即倍即可。可。 (3)将将血血球球计计数数板板用用擦擦镜镜纸
5、纸擦擦净净，在在中中央央的的计计数数室室上加盖专用的厚玻片。上加盖专用的厚玻片。(4)将将稀稀释释后后的的酵酵母母菌菌悬悬液液，用用吸吸管管吸吸取取一一滴滴置置于于盖盖玻玻片片的的边边缘缘，使使菌菌液液缓缓缓缓渗渗入入，多多余余的的菌菌液液用用吸吸水水纸纸吸吸取取，捎捎待待片片刻刻，使使酵酵母母菌菌全全部部沉沉降降到到血血球球计计数室内。数室内。(5)计数时，如果使用计数时，如果使用16格格25格规格的计数室，格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中个中格（即格（即100个小格）的酵母菌数。如果个小格）的酵母菌数。如果规格为规格为25格
6、格16格的计数板格的计数板，除了取其，除了取其4个对角方位外，还需个对角方位外，还需再数中央的一个中格再数中央的一个中格(即即80个小方格个小方格)的酵母菌数。的酵母菌数。 (6)当当遇遇到到位位于于大大格格线线上上的的酵酵母母菌菌，一一般般只只计计数数大大方方格格的的上上方方和和右右方方线线上上的的酵酵母母细细胞胞(或或只只计计数数下下方方和左方线上的酵母细胞和左方线上的酵母细胞)。(7)对每个样品计数三次，取其平均值，按下列公对每个样品计数三次，取其平均值，按下列公式计算每式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。菌液中所含的酵母菌个数。 3.计算公式计算公式(1)16格格25格的血球计数板计
7、算公式：格的血球计数板计算公式： 酵酵母母细细胞胞数数ml=100小小格格内内酵酵母母细细胞胞个数个数100400104稀释倍数稀释倍数(2)25格格x16格的血球计数板计算公式：格的血球计数板计算公式： 酵酵母母细细胞胞数数ml=80小小格格内内酵酵母母细细胞胞个个数数80400104稀释倍数稀释倍数4.血球计数板的清洁血球计数板的清洁 血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通
8、过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。 计算公式16格25格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=小格内酵母细胞个数/100400104稀释倍数25格x16格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=小格内酵母细胞个数/80400104稀释倍数方案设计：方案设计：一、提出问题一、提出问题 培养一种酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？也可以培养一种酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？也可以提出其他的探究问题，例如，在不同温度（以及通氧、通提出其他的探究问题，例如，在不同
9、温度（以及通氧、通CO2等）条件下酵母菌种群数量增长的情况如何？不同培养液（如等）条件下酵母菌种群数量增长的情况如何？不同培养液（如加糖和不加糖）中酵母菌种群数量增长的情况如何？等等。加糖和不加糖）中酵母菌种群数量增长的情况如何？等等。 二、猜想假设二、猜想假设 酵母菌种群的数量随时间呈酵母菌种群的数量随时间呈S型增长变化。型增长变化。三、设计实验三、设计实验 全班同学分成甲、乙、丙等若干实验组。全班同学分成甲、乙、丙等若干实验组。分别用等量分别用等量培养液，在相同适宜环境中培养等量酵母菌。培养液，在相同适宜环境中培养等量酵母菌。每天用血球计每天用血球计数板，采用数板，采用抽样检测的方法抽样检
10、测的方法计数一个小方格内的酵母菌数量并计数一个小方格内的酵母菌数量并作记录，连续作记录，连续7天。天。7天后，各组向全班汇报本小组天后，各组向全班汇报本小组7天的数天的数据，算出每一天数据的全班平均值，根据平均值画出酵母菌种据，算出每一天数据的全班平均值，根据平均值画出酵母菌种群数量的增长曲长。群数量的增长曲长。探究培养液中酵母菌数量的动态变化实验过程：实验过程：一、材料用具一、材料用具 探究所需要的菌种和无菌马铃薯培养液或肉汤培养液、试探究所需要的菌种和无菌马铃薯培养液或肉汤培养液、试管、血球计数板（方格）、滴管、显微镜等。管、血球计数板（方格）、滴管、显微镜等。二、方法步骤和记录二、方法步
11、骤和记录 1、取相同试管若干支，分别加入、取相同试管若干支，分别加入5ml肉汤培养液，塞上肉汤培养液，塞上棉塞。棉塞。 2、用高压锅进行高压蒸汽、用高压锅进行高压蒸汽 灭菌后冷却至室温，标记甲、灭菌后冷却至室温，标记甲、乙、丙等。乙、丙等。 3、将酵母菌母液分别加入试管各、将酵母菌母液分别加入试管各5ml，摇匀后用血球计，摇匀后用血球计数板计数起始酵母液个数，做好记录。数板计数起始酵母液个数，做好记录。 4、将各试管送进恒温箱，、将各试管送进恒温箱，25 下培养下培养7天。天。探究培养液中酵母菌数量的动态变化三、现象观察三、现象观察 每天同一时间，各组取出本组的试管，用血球计数板计数每天同一时
12、间，各组取出本组的试管，用血球计数板计数酵母菌个数，并作记录，连续观察酵母菌个数，并作记录，连续观察7 7天。天。菌数菌数 时间（2.5104个）个） （天）（天）组别起始起始1234567甲甲乙乙丙丙平均平均探究培养液中酵母菌数量的动态变化四、实验结论四、实验结论 1 1、根据表格平均值作出培养液中酵母菌种群数量、根据表格平均值作出培养液中酵母菌种群数量7 7天中天中的变化曲线。的变化曲线。2、培养液酵母菌种群数量随时间呈、培养液酵母菌种群数量随时间呈_型增长变化。型增长变化。探究培养液中酵母菌数量的动态变化注意事项：注意事项： 1 1、操作过程中要建立、操作过程中要建立“有菌有菌”的观念，
13、不能随意谈笑。的观念，不能随意谈笑。 2 2、 酵母菌计数方法：酵母菌计数方法：抽样检测法抽样检测法。先将盖玻片放在计数先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入。渗入。多余培养液用滤纸吸去。稍待片刻，待酵母菌细胞全多余培养液用滤纸吸去。稍待片刻，待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部，将计数板放在载物台的中央，计数一部沉降到计数室底部，将计数板放在载物台的中央，计数一个小方格内的酵母菌数量，再以此为根据，估算试管中的酵个小方格内的酵母菌数量，再以此为根据，估算试管中的酵母菌总数。母菌总数。 3 3、从试管中吸出培养
14、液进行计数时，应将试管振荡几次，、从试管中吸出培养液进行计数时，应将试管振荡几次，以便使酵母菌均匀分布，提高计数的代表性和准确性。以便使酵母菌均匀分布，提高计数的代表性和准确性。 4 4、对于压在小方格界线上的酵母菌应计数同侧相邻两边对于压在小方格界线上的酵母菌应计数同侧相邻两边上的菌体数，另两边不计数。上的菌体数，另两边不计数。 5 5、影响酵母菌种群数量的因素可能有养料、温度、影响酵母菌种群数量的因素可能有养料、温度、pHpH、空间及有害代谢废物等空间及有害代谢废物等 探究培养液中酵母菌数量的动态变化问题探究：问题探究： 1、如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当采取怎、如果一个小方格
15、内酵母菌过多，难以数清，应当采取怎样的措施？样的措施？ 2、本探究需要设置对照吗？如果需要，请讨论说明怎样设、本探究需要设置对照吗？如果需要，请讨论说明怎样设计；如不需要，请说明理由。计；如不需要，请说明理由。摇匀试管取摇匀试管取1ml酵母菌培养液稀释几倍后，再用血球计数酵母菌培养液稀释几倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以板计数，所得数值乘以“n2.5104”，即为，即为1ml酵母菌酵母菌原液中酵母菌个数。原液中酵母菌个数。 不需要。本实验目的旨在探究培养液中酵母菌在一定条件不需要。本实验目的旨在探究培养液中酵母菌在一定条件下的种群数量变化，只要分组重复实验，获得平均数值，下的种群数量变化，只要分组重复实验，获得平均数值，求得准确即可。求得准确即可。探究培养液中酵母菌数量的动态变化
