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1、 聚酰胺的使用方法 刘丽敏 2006.10.21产品介绍o质量指标:分子量:1400017000比表面:510m2/goPH值: 67o产品价格:3060目 180元/KG60100目 240元/KG100目以上 300元/KG o溶解度:溶于浓盐酸,甲酸,微溶于醋酸,苯酚等溶剂,不溶于水,甲醇,乙醇,丙酮,乙醚,氯仿和苯等常用有机溶剂,对碱较稳定,对酸的稳定性较差,尤其是无机酸,在温度高时更敏感。吸附原理o聚酰胺是由酰胺键聚合形成的高分子化合物。其酰胺基可与羟基酚类,酸类,醌类,硝基等化合物以氢键形成结合而被吸附 ,其脂肪长链可作为分配层析的载体。聚酰胺在含水系统中层析时,聚酰胺作为非极性固
2、定相,其层析行为反向柱层析;在非水溶剂系统时,聚酰胺作为分配层析的载体,其层析行为为正向柱层析。应用范围o聚酰胺特别适应于多元酚类化合物的分离,如黄酮、醌类、酚酸、含羰基化合物、羧基化合物等。 例如:葛根素中提取葛根黄酮、茶叶提取茶多酚、 人参中提取人参皂苷、银杏叶中提取银杏黄酮、甘 草中提取甘草皂苷、甜叶菊中提取甜菊苷、发酵液中提取维生素和抗生素等成份 o对鞣质吸附强,用于将植物粗提物中的鞣质除去。前处理o新买的聚酰胺新买的聚酰胺 取聚酰胺以90-95%乙醇浸泡,不断搅拌,除去气泡后装入柱中。用3-4倍体积的90-95%乙醇洗脱,洗至洗脱液透明并在蒸干后无残渣(或极少残渣)。再依次用2-2.
3、5倍体积5%NaOH水溶液、1倍体积的蒸馏水、2-2.5倍体积的10%醋酸水溶液洗脱,最后用蒸馏水洗脱至pH中性,备用。前处理o用过的聚酰胺用过的聚酰胺 一般用5%NaOH水溶液洗脱,洗至NaOH水溶液颜色极淡为止。有时因某些鞣质与聚酰胺又不可逆吸附,用NaOH水溶液很难洗脱,可用5%NaOH在柱中浸泡,每天将柱中的NaOH水溶液放出一次,并加入新的5%NaOH水溶液,这样浸泡一周后,鞣质可基本洗脱完。然后用蒸馏水洗脱至pH8-9,再用2倍量的10%醋酸水溶液洗脱,最后蒸馏水洗脱至pH中性,重复使用。聚酰胺吸附法的操作o1、装柱:一般将颗粒状聚酰胺混悬于水中,使其充分膨胀,然后装柱,让聚酰胺自
4、由沉降;当用非极性溶剂系统时候,则用组分中低级性的溶剂装柱。o2、稀释适当浓度上样:一般每100ml聚酰胺上样1.5-2.5g,样品先用洗脱溶剂溶解,浓度为20%-30%。水溶性化合物直接上样;若提取物水溶性不好,则用挥发性有机溶媒溶解、拌适量聚酰胺、挥干或减压蒸干、干法装入柱顶。o3、水洗:先用水洗脱。聚酰胺吸附法的操作o4、醇洗:在水中递增乙醇浓度至浓乙醇溶液,或氯仿、氯仿-甲醇,递增甲醇至纯甲醇洗脱。若仍有物质未被洗脱,可用稀氨水或稀甲酰胺溶液洗脱,分段收集。o5、找到最佳吸附比:先小量试验找到最佳吸附比。o6、放大:根据小试及最佳吸附比进行放大试验。o7、聚酰胺的回收:使用过的聚酰胺一
5、般用5%氢氧化钠溶液洗涤,然后水洗,再用10%醋酸液洗,然后用蒸馏水洗至中性,即可。黄酮类化合物的分离 对于分离黄酮类化合物来说,聚酰胺是较理想的吸附剂。其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中的羟基数目与位置。一般有以下规律:1、苷元相同,连接糖越多,吸附力越大,流出越慢。2、母核上增加羟基,洗脱速度相应减缓。3、对位、间位酚羟基使吸附能力 邻位酚羟基。4、不同类型的黄酮的流出顺序一般是:异黄酮 二氢黄酮醇黄酮 黄酮醇。5、分子中芳香核、共轭双键多者则吸附力强,晚出柱。6、若形成分子内氢键则吸附力减弱。聚酰胺柱层析的溶剂洗脱系统 o含水系统洗脱能力:碱液甲醇水o溶剂洗脱能力与溶剂极性相关可使化
6、合物得到较好的分离。o选择系统时,可以将样品加入上述溶剂系统中,观察样品在聚酰胺薄膜的层析行为,然后确定溶剂系统。 含水溶剂系统非水溶剂系统甲醇-水(4:1)乙醇-水(2:1)甲醇-乙酸-水(90:5:5 )氯仿-甲醇(94:6)苯-甲醇(3:1/7:3)聚酰胺薄膜色谱常用的溶剂系统 黄酮体苷元 黄酮体苷氯仿-甲醇(94:6/96:4)氯仿-甲醇-丁酮(12:2:1)苯-甲醇-丁酮(90:6:4/84:8:8)氯仿-甲醇-甲酸(60:38:2)氯仿-甲醇-吡啶(70:22:8)氯仿-甲醇-甲酸(60:38:2)甲醇-醋酸-水(90:5:5)甲酸-水(4:1);乙醇(4:1)丙酮-水(1:1);
7、异丙醇-水(3:2)30-60%醋酸;氯仿-甲醇-丁酮(64:25;10)乙酸乙酯-95%乙醇(6:4)氯仿-甲醇(7:3);正丁醇-乙醇-水(1:4:5)聚酰胺薄膜色谱常用的溶剂系统酚类丙酮-水(1:1)苯-甲醇-醋酸(45:8:4) ;环己烷-醋酸(93:7) ;10%醋酸醌类丙酮-水(1:1) ;正己烷-苯-醋酸(45:8:4) ;石油醚-苯-醋酸(10:10:5)糖类丙酮-水(1:1)苯-甲醇-醋酸(45:8:4) ;环己烷-醋酸(93:7) ;10%醋酸氨基酸衍生物苯-乙醇(8:2/9:1);50%醋酸;甲酸-水(1.5:100/1:1)乙酸乙酯-甲醇-醋酸(20:1:1);0.05
8、mol/L磷酸钠-乙醇(3:1)聚酰胺薄膜色谱常用的溶剂系统生物碱环己烷-乙酸乙酯-正丙醇-二甲基胺(30:2.5:0.9:0.1) ; 水-乙醇-二甲基胺(88:12:0.1)甾体、萜类己烷-丙酮(4:1);氯仿-丙酮(4:1)甾体苷甲醇-水-甲酸(60:35:5);乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸(50:20:25:5)聚酰胺与大孔树脂的区别o吸附原理不同:大孔树脂是物理吸附原理;聚酰胺是化学吸附原理,氢键吸附,用于酚类、黄酮类、醌类成分的分离。 o大孔树脂的分离效果没有聚酰胺好。若是粗粉可以用大孔树脂进行分段,聚酰胺可用于黄酮类成分的细分或纯化。o聚酰胺树脂可以使用其干柱层析功能,在分离黄酮的过
9、程中作用也是很大的,而大孔树脂则没有此功能。聚酰胺与大孔树脂的区别o聚酰胺树脂可以首先用聚酰胺薄膜展开系统,而大孔树脂没有薄层o树脂进行新药研发,其新药若用大孔树脂制备,必须有打孔的残留检查,而聚酰胺目前还没有正式的文件要检查其残留o聚酰胺上样时,其样品中的鞣质会对主子产生死吸附,大孔出现这种现象很少o大孔的可选择类型比聚酰胺多,而且还增加了许多键合类型,如ASD型,其键合了酰胺键,增加了其选择性。聚酰胺的不足及解决方案聚酰胺柱层析的不足:o比如机械强度不大,o粒度不均匀,分离时流速较慢o一些小分子杂质混入的问题 采用的解决方案有:o1.装柱前先过筛o2.装柱时用5%甲醇或10%盐酸预先除去小分子杂质o3.与硅藻土混合制粒以增加机械强度。