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1、 承德二 中课题课题1 1 菊花的组织培养菊花的组织培养 承德二 中右图为植物体细胞杂交过程示意图。据右图为植物体细胞杂交过程示意图。据图回答：图回答：（1 1）步骤）步骤是是 ，最，最常用的方法是常用的方法是 。（2 2）步骤）步骤一般常用的化学试剂是一般常用的化学试剂是 ，目的是，目的是 。 (3)(3)在利用杂种细胞培育成为杂种植在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中，运用的技术手段是株的过程中，运用的技术手段是 ，其中步骤，其中步骤相当于相当于 ，步骤，步骤相当于相当于 。 （4 4）植物体细胞杂交的目的是获得新）植物体细胞杂交的目的是获得新的杂种植株。使的杂种植株。使能够在新的能够在
2、新的植物体上有所表现，其根本原因是植物体上有所表现，其根本原因是。去掉细胞壁，分离原生质体去掉细胞壁，分离原生质体酶解法酶解法聚乙二醇（聚乙二醇（PEG）诱导植物原生质体融合诱导植物原生质体融合植物组织培养植物组织培养脱分化脱分化再分化再分化远缘杂交亲本远缘杂交亲本的遗传特征的遗传特征杂种植株获得双亲的遗传物质杂种植株获得双亲的遗传物质 承德二 中 （5 5）若远源杂交亲本）若远源杂交亲本A A和和B B都是二倍体，则都是二倍体，则杂种植株为杂种植株为倍体。倍体。（6 6）从理论上讲，杂种植株的育性）从理论上讲，杂种植株的育性。若运用传统有性杂交方法能否实现？若运用传统有性杂交方法能否实现？。
3、并说明现由并说明现由 。因此，这项研究对于培养作物新品种方面的重因此，这项研究对于培养作物新品种方面的重大意义在于大意义在于。 （7 7）利用植物体细胞杂交的方法培育作物新）利用植物体细胞杂交的方法培育作物新品种过程中，遗传物质的传递是否遵循孟德尔品种过程中，遗传物质的传递是否遵循孟德尔的遗传规律？为什么？的遗传规律？为什么？。 四四可育可育不能不能因为不同种生物之间存在生殖隔离因为不同种生物之间存在生殖隔离克服远缘杂交不亲和的障碍，大大克服远缘杂交不亲和的障碍，大大扩展了可用于杂交的亲本组合范围扩展了可用于杂交的亲本组合范围不遵循。因为在生物进行有性生殖的过程中，才遵循孟德尔的遗传不遵循。因
4、为在生物进行有性生殖的过程中，才遵循孟德尔的遗传规律，而植物体细胞杂交育种的过程不属于有性生殖规律，而植物体细胞杂交育种的过程不属于有性生殖 承德二 中学习目标学习目标熟悉植物组织培养的基本过程。熟悉植物组织培养的基本过程。理解细胞分化概念及脱分化，再分化。理解细胞分化概念及脱分化，再分化。课题重点与难点课题重点与难点课题重点：植物组织培养的基本过程。课题重点：植物组织培养的基本过程。课题难点：植物组织培养过程中使用课题难点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。细胞分化，脱分化，再的无菌技术。细胞分化，脱分化，再分化。分化。 承德二 中活动活动1：什么是细胞分化？什么是细胞分化？细胞分化的原因和
5、结果？细胞分化的原因和结果？愈伤组织是怎样形成的？有什么特点？愈伤组织是怎样形成的？有什么特点？脱分化、再分化？脱分化、再分化？组织培养的过程？组织培养的过程？以及组织培养的理论基础以及组织培养的理论基础？ 承德二 中一、细胞的分化与全能性1.1.细胞分化：细胞分化： 个体发育中，细胞在形态、结构和个体发育中，细胞在形态、结构和 生理功能上出现生理功能上出现稳定性稳定性差异的过程。差异的过程。特定时空下基因的选择性表达。特定时空下基因的选择性表达。形成各种组织器官。形成各种组织器官。结果：结果：原因：原因：定义：定义： 承德二 中脱分化（去分化）再分化愈伤组织愈伤组织是通过细胞分裂细胞分裂形成
6、的，其细胞排列疏松疏松而无规则而无规则，高度液泡化液泡化呈无定形无定形状态的薄壁薄壁细胞。 承德二 中2.植物组织培养的理论基础： 细胞全能性：具有某种生物全套细胞全能性：具有某种生物全套遗传信息遗传信息的任何一个活细胞，都具有发育成的任何一个活细胞，都具有发育成完整个完整个体体的能力，即每个生物细胞都具有的能力，即每个生物细胞都具有全能性全能性。 细胞全能性表达条件：细胞全能性表达条件： 离体离体 一定的营养物质、激素和其他外界条件一定的营养物质、激素和其他外界条件 承德二 中二、植物组织培养的基本过程二、植物组织培养的基本过程 承德二 中活动活动2：影响组织培养的因素？影响组织培养的因素？
7、菊花组织培养应注意的问题？菊花组织培养应注意的问题？ 承德二 中三、影响植物组织培养的因素：三、影响植物组织培养的因素： 不同植物的组织培养难度不同不同植物的组织培养难度不同 同一种植物的不同组织培养难度不同同一种植物的不同组织培养难度不同 大量元素：大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等1、外植体的选取、外植体的选取2、培养基的配制、培养基的配制(MS培养基培养基) 承
8、德二 中3、不同植物激素浓度，使用顺序和、不同植物激素浓度，使用顺序和使用量使用量使用顺序 实验结果 先生长素，后细胞分裂素 有利于分裂但不分化 先细胞分裂素，后生长素 细胞既分裂也分化 同时使用 分化频率提高 生长素细胞分裂素比值结果 比值高时 促根分化，抑芽形成 比值低时 促芽分化，抑根形成 比值适中 促进愈伤组织生长 承德二 中4、消毒、消毒在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境原因：在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境原因：5、pH、温度、光照温度、光照菊花：菊花： pH=5.8 温度控制在温度控制在1822 每日光照每日光照12h 承德二 中活动活动3：用自己的用自己的话把菊花
9、把菊花组织培养的操作流程培养的操作流程给描述出来描述出来?（提示：（提示：怎样配制怎样配制MS培养基培养基?外外植体消毒应如何进行植体消毒应如何进行?接种、培养、移栽时接种、培养、移栽时应注意什么问题应注意什么问题? ） 承德二 中制备制备MS固体固体培养基培养基外植体消毒外植体消毒 接种接种 培培 养养栽栽 培培四、实验操作四、实验操作 移移 栽栽冲洗冲洗酒精酒精无菌水冲洗无菌水冲洗氯化汞氯化汞无菌无菌水冲洗至少三次之上水冲洗至少三次之上 承德二 中 实验操作实验操作（一）制备（一）制备MS固体培养基固体培养基1、配置各种母液、配置各种母液2、配置培养基、配置培养基定容定容 调调PH培养基的
10、分装培养基的分装 3、灭菌、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌汽灭菌 承德二 中1、选材：、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒（二）外植体消毒2、消毒：、消毒：流水冲洗流水冲洗酒精酒精无菌水冲洗无菌水冲洗氯化汞氯化汞无菌水冲洗至少三次之上无菌水冲洗至少三次之上 承德二 中（三）接种（三）接种用用70的酒精喷雾使空气消毒，的酒精喷雾使空气消毒， 酒精或新洁酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟分钟1、接种室消毒、接种室消毒2、无菌操作要求、无菌操作要求操作要在酒精灯
11、火焰旁完成，每次使用器械后，操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。3、材料的切取和接种、材料的切取和接种 承德二 中4、接种注意事项、接种注意事项每接种一块外植体前，镊子需放入体积分每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为数为75的酒精溶液中消毒一次，然后在酒的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜34块，菊的茎
12、或叶块，菊的茎或叶68块，也不要太少，以充分块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件利用培养基中的营养成分和光照条件插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分基部插入培养基利于吸收水分和养分 承德二 中（四）培养（四）培养无菌箱中培养，定期消毒，无菌箱中培养，定期消毒，保持适宜的温度，光照保持适宜的温度，光照（五）移栽（五）移栽1、打开封口膜、打开封口膜2、清洗转移至消、清洗转移至消过毒的蛭石或珍过毒的蛭石或珍珠岩中珠岩中幼苗长壮后，移栽到土壤中幼苗长壮后，移栽到土壤中（六）栽培（六）栽培 承德二 中思思 考考 在
13、整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）灼烧）4、无菌箱中的培养；、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。 承德二 中总结植物组织培养过程总结植物组织培养过程:离离离离体体体体组组组组织织织织或或或或细细细细胞胞胞胞植植植植物物物物体体体体脱分化脱分化脱分化脱分化细胞分细胞分细胞分细胞分裂素裂素裂素裂素 生生生生
14、长素长素长素长素愈愈愈愈伤伤伤伤组组组组织织织织芽芽芽芽根根根根细胞分裂细胞分裂细胞分裂细胞分裂素素素素 生长素生长素生长素生长素细胞分裂细胞分裂细胞分裂细胞分裂素素素素 生长素生长素生长素生长素再分化再分化再分化再分化植物细胞培养植物细胞培养植物细胞培养植物细胞培养不需要光不需要光不需要光不需要光需要光需要光需要光需要光 承德二 中本课题内容小结菊花菊花组织组织培养培养基础知识基础知识实验操作实验操作植物体的组植物体的组织培养织培养影响组织培养影响组织培养的因素的因素细胞分化细胞分化细胞全能性细胞全能性组织培养过程组织培养过程营养营养激素激素环境条件环境条件MS固体培养基制备固体培养基制备外植体消毒外植体消毒接种接种培养培养移栽移栽栽培栽培
