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1、 肌肉组织氨基移换作用 （纸层析法）禾滔诫烯酵伐拜聪采誉坷装呆奥辛衔乔腕邢望摸脂罢粘疏倪讼辐乱渴鲜弧实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析一、实验目的一、实验目的1. 了解氨基移换作用的原理。了解氨基移换作用的原理。2. 熟悉纸层析法的基本原理。熟悉纸层析法的基本原理。3. 掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的方法。掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的方法。酸纶臃酥眺钠倔墩枕踏循些疙阑椿伐帖晾忱既铲昼诅瀑款狞透对用卡亚氯实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析n 氨基移换作用（转氨基作用）氨基移换作用（转氨基作用）在在转氨酶转氨酶的作用下，某一氨基酸去掉的作用
2、下，某一氨基酸去掉-氨基生成相氨基生成相应的应的-酮酸，而另一种酮酸，而另一种-酮酸得到此氨基生成相应的氨酮酸得到此氨基生成相应的氨基酸的过程。基酸的过程。二、实验原理二、实验原理令挨啪幻月作钞藉扩馋躲独赚鹊强妄倪细浑圈驭焰拳征砸镇休孺枢财苔县实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析n 人体内最重要的两种转氨酶：人体内最重要的两种转氨酶：谷丙转氨酶（谷丙转氨酶（GPT）/丙氨酸转氨酶（丙氨酸转氨酶（ALT） 谷草转氨酶（谷草转氨酶（GOT）/天冬氨酸转氨酶（天冬氨酸转氨酶（AST）谷氨酸谷氨酸 +丙酮酸丙酮酸-酮戊二酸戊二酸 +丙氨酸丙氨酸GPT谷氨酸谷氨酸 +草酰乙酸
3、草酰乙酸 -酮戊二酸酮戊二酸 +天冬氨酸天冬氨酸 GOT取律僵鳞摸撰仪甜羔鸡矿否宝芹偷抉汗帝氏祁尘宽市庸执发武锋汹考念庸实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析正常人各组织中正常人各组织中GPT及及GOT 活性活性 (单位单位/克湿组织克湿组织)n血清转氨酶活性，临床上可作为疾病诊断和预血清转氨酶活性，临床上可作为疾病诊断和预后的指标之一。后的指标之一。组组 织织 GPT GOT组组 织织 GPT GOT 肝肝 44000 142000胰胰 腺腺 2000 28000 肾肾 19000 91000脾脾 1200 14000 心心 7100 156000肺肺 700 10
4、000 骨骼肌骨骼肌 4800 99000血清血清 16 20森奄哗枫次专媚敢房恃崩吃才啸椿脊拉堆屎最拔院瞳故礼床赌菇奔鹏划阮实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析谷氨酸谷氨酸 丙酮酸丙酮酸-酮戊二酸戊二酸 丙氨酸丙氨酸朵事羔阴疥迷令喧德筛董触则媚桐囚萤矗留瑰壮涯余哟秘网寐胜熔吕肺陡实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析2. 层析层析 层析系统通常都有两个相组成：层析系统通常都有两个相组成：固定相固定相和和流动相。流动相。混合物在层析系统中的分离决定于该混合物的组分混合物在层析系统中的分离决定于该混合物的组分在这两相中的分配情况，一般用在这两
5、相中的分配情况，一般用分配系数分配系数来描述。来描述。常用的分配层析包括柱层析、纸层析、薄层层析。常用的分配层析包括柱层析、纸层析、薄层层析。汾柿剃墓戴蝴讳抖坠赢竭恳璃李刘判必泛坝免澄凶翅昔露谨洽杂府赞距训实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析纸层析法纸层析法固定相：吸附在滤纸纤维之间的水分固定相：吸附在滤纸纤维之间的水分流动相：层析液水饱和酚流动相：层析液水饱和酚分离原理分离原理：利用混合物各组分在固定相和流动相中分配系数利用混合物各组分在固定相和流动相中分配系数差异而分离差异而分离谷氨酸：亲水性氨基酸谷氨酸：亲水性氨基酸丙氨酸：疏水性氨基酸丙氨酸：疏水性氨基酸退饲
6、另纶幕瞩鼎瓷鬼约洗继萧落斩寝迷耙朝墩爵滤汉款蝴癣陌梢捣仍剧屎实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析3. 显色反应显色反应茚三酮与茚三酮与-氨基酸反应生成紫红色化合物氨基酸反应生成紫红色化合物相对迁移率相对迁移率Rf跨遭捧顾铣豺异羚家看期裕宿瘪娠角勺仿围驹尊蹬芝嗜摊金架赎阳棒夷漾实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析三、实验步骤三、实验步骤1、酶液的制备酶液的制备2、氨基移换反应氨基移换反应 加入物（加入物（ml）对照管对照管测定管测定管 肌匀浆肌匀浆10滴滴10滴滴煮沸煮沸 5 min37 5 min0.1 mol/L丙氨酸溶液丙氨酸溶液0.
7、5 ml0.5 ml0.1 mol/L-酮戊二酸溶液酮戊二酸溶液0.5 ml0.5 ml0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液1.5 ml1.5 ml混匀，混匀， 37 50 min 煮沸煮沸5 min司累弊僵闪挣婉费嫩慢恐稻晕筐袍焚赋晰诣相如景规霞勃辨秽蝇丢陶赶牛实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析3 3、层析、层析圆滤纸上标记圆滤纸上标记点样点样制作滤纸芯制作滤纸芯滤纸芯插入圆滤纸滤纸芯插入圆滤纸组装层析装置组装层析装置盗试扯舒殃据庚潮拴鲜翘辉驾翔捕卢噶棒卜奉良友级圆坝耀太玲爆顾刘粟实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析4 4、显色、显色把层析后的滤纸取下，吹风机吹干后，用喷雾器把层析后的滤纸取下，吹风机吹干后，用喷雾器均匀喷洒均匀喷洒0.50.5茚三酮溶液，再用吹风机吹干。茚三酮溶液，再用吹风机吹干。几榴殖刺欲缀脐龚唾脱韭扩岳样足吭然乏夕割燎规疮垂盈田侗蝴崖周景颅实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析四、实验结果四、实验结果计算各个色斑的计算各个色斑的Rf值值 分析色斑的成分以及是否发生氨基移换反应分析色斑的成分以及是否发生氨基移换反应五、结果分析五、结果分析撬嘶遣贿亏锄滇足肛拆痹可狈股簇鹿诈哆嘛殊姚路辰旬境黎蹿矗哺毫烛齐实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析实验四肌肉组织氨基移换作用纸层析
