《血清学反应》PPT课件

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1、第九章第九章 血清学反应血清学反应 一一 血清学反应的概念及一般特点血清学反应的概念及一般特点 抗原及相应抗体在体内或体外均能发生特抗原及相应抗体在体内或体外均能发生特异性结合，在体外结合能发生可见免疫反应。异性结合，在体外结合能发生可见免疫反应。由于抗体主要存在于血清中，故称为由于抗体主要存在于血清中，故称为血清学反血清学反应应。 血清学反应根据抗原性质、反应条件、参与血清学反应根据抗原性质、反应条件、参与反应物质，则表现出反应有多种多样。其反应反应物质，则表现出反应有多种多样。其反应的一般特点是：的一般特点是： 第一节第一节 概概 述述8/27/20248/27/20242 2（一）特异性

2、和交叉性（一）特异性和交叉性 血清学反应具有高度血清学反应具有高度特异性特异性。抗原只能与。抗原只能与相应抗体结合，而不能与其他抗体相结合。相应抗体结合，而不能与其他抗体相结合。 生物体的组成是复杂的，包含有多种抗原生物体的组成是复杂的，包含有多种抗原成分，在进化过程中形成不同的种类，有各成分，在进化过程中形成不同的种类，有各不相同的特异性抗原，在亲缘种系中往往含不相同的特异性抗原，在亲缘种系中往往含有部分相同的抗原成分，能引起有部分相同的抗原成分，能引起交叉反应交叉反应。8/27/20248/27/20243 3 （二）结合的可逆性（二）结合的可逆性 抗抗原原抗抗体体结结合合是是分分子子表表

3、面面结结合合，这这一一结结合合受受理理化化因因素素的的影影响响，当当温温度度超超过过6060C C或或pHpH降降至至3 3以以下下时时，则则抗抗原原抗抗体体复复合合物物又又重重新新离离群群。离离群群后后的的抗抗原原、抗抗体体，其其理理化化性性质质、免免疫活性保留。疫活性保留。8/27/20248/27/20244 4 （三）最适比与带现象（三）最适比与带现象 抗原与抗体结合，其比例适当时才可出现可见抗原与抗体结合，其比例适当时才可出现可见反应。比例最适合，出现反应最快，反应产物反应。比例最适合，出现反应最快，反应产物愈多。愈多。 如果抗原或抗体过多，抗体和抗原结合点的如果抗原或抗体过多，抗体

4、和抗原结合点的聚合一开始时即达到饱和，形成小的复合物则聚合一开始时即达到饱和，形成小的复合物则不能继续与相邻抗原、抗体结合，不出现可见不能继续与相邻抗原、抗体结合，不出现可见反应，谓之区带现象或带现象。为了避免血清反应，谓之区带现象或带现象。为了避免血清学反应的带现象，需要将抗原或抗体作适当的学反应的带现象，需要将抗原或抗体作适当的稀释。稀释。8/27/20248/27/20245 5 8/27/20248/27/20246 6n n比例不适合不能完成第二步反应 带现象 8/27/20248/27/20247 7 （四）反应的阶段性（四）反应的阶段性 抗原与抗体进行结合，可分为两个阶段：抗原与

5、抗体进行结合，可分为两个阶段： 第第一一阶阶段段为为抗抗原原与与抗抗体体的的特特异异性性结结合合阶阶段段，反反应应快快，几几秒秒钟钟至至几几分分钟钟即即完完成成，但但无无可可见见反应；反应； 第第二二阶阶段段为为抗抗原原与与抗抗体体的的反反应应可可见见阶阶段段，表表现现为为凝凝集集、沉沉淀淀、补补体体结结合合等等，反反应应进进行行较较慢慢，需需几几分分钟钟或或更更久久。第第二二阶阶段段受受电电解解质质、温温度度、pHpH值值等等影影响响。两两个个阶阶段段在在反反应应进进行行中中无严格界限。无严格界限。8/27/20248/27/20248 8 （五）影响反应的因素（五）影响反应的因素1. 1.

6、电解质电解质 血清学反应须在适当浓度的电解质参与下，血清学反应须在适当浓度的电解质参与下，才出现可见反应。在凝集、沉淀反应操作时，才出现可见反应。在凝集、沉淀反应操作时，一般用生理盐水或一般用生理盐水或8%10%8%10%高渗盐水作稀高渗盐水作稀释，才出现较强反应。释，才出现较强反应。 8/27/20248/27/20249 92.2.温度温度 温温度度升升高高，可可增增加加抗抗原原与与抗抗体体分分子子运运动动而而碰碰撞撞接接触触，加加速速反反应应的的出出现现，故故通通常常将将抗抗原原抗抗体体混混合合后后，放放置置3737C C温温箱箱或或水水浴浴箱箱中中，保保持持一一定定时时间间，促促进进反

7、反应应。温温度度高高，加加速速反反应应；温温度度低低，反反应应时时间间延延长长，但但反反应应结结合合充充分分，故故在在补补体体结结合反应、免疫吸附实验中，采用低温放置过夜。合反应、免疫吸附实验中，采用低温放置过夜。8/27/20248/27/202410103.3.酸碱度酸碱度 血清学反应通常用血清学反应通常用pH6pH68 8，过酸或过碱都，过酸或过碱都可使复合物离群，可使复合物离群，pHpH值在等电点时，可引值在等电点时，可引起非特异凝集。起非特异凝集。8/27/20248/27/20241111二二 血清学反应的类型血清学反应的类型 沉淀、凝集、琼脂扩散、中和、补体沉淀、凝集、琼脂扩散、

8、中和、补体结合和免疫吸附试验等。结合和免疫吸附试验等。 8/27/20248/27/20241212三三 血清学反应的应用方式和目的血清学反应的应用方式和目的 抗原抗体反应是特异性的，在应用时必须抗原抗体反应是特异性的，在应用时必须有一个是已知的，通过反应来鉴定另一个未有一个是已知的，通过反应来鉴定另一个未知的。例如鉴定某一病原微生物时，多用已知的。例如鉴定某一病原微生物时，多用已知抗体。诊断传染病时，对慢性病可用已知知抗体。诊断传染病时，对慢性病可用已知的抗原检测未知的特异性抗体；诊断急性病的抗原检测未知的特异性抗体；诊断急性病则用已知的抗体检测未知的抗原（病原），则用已知的抗体检测未知的抗

9、原（病原），如炭疽病等。如炭疽病等。8/27/20248/27/20241313 （一）抗原与抗体的快速检测（一）抗原与抗体的快速检测 在诊断传染病、寄生虫病、变态反应、肿在诊断传染病、寄生虫病、变态反应、肿瘤、自身免疫疾病时，均已广泛应用血清学瘤、自身免疫疾病时，均已广泛应用血清学方法检查抗体或抗原（细菌、病毒）的存在，方法检查抗体或抗原（细菌、病毒）的存在，作为诊断疾病的手段。现已应用的间接血凝作为诊断疾病的手段。现已应用的间接血凝技术、对流电泳、标记抗体技术，均能快速、技术、对流电泳、标记抗体技术，均能快速、简便的确诊抗原或抗体。简便的确诊抗原或抗体。8/27/20248/27/2024

10、1414 （二）生物活性物质的超微定量（二）生物活性物质的超微定量 应应用用酶酶联联免免疫疫吸吸附附实实验验、放放射射免免疫疫等等技技术术，抗抗原原抗抗体体检检测测的的敏敏感感度度均均大大为为提提高高，已已达达到到能能精精确确测测出出PgPg的的水水平平，其其敏敏感感度度已已大大大大超超过过了了常常规规的的化化学学分分析析。此此类类技技术术已已应应用用于于测测定定动动物物体体内内的的激激素素、维维生生素素、药药物物及及其其他他病病理理过程中的微量产物。过程中的微量产物。 8/27/20248/27/20241515（三三）抗抗原原或或抗抗体体在在细细胞胞与与亚亚细细胞胞水水平平的的定定位位 用

11、用用用荧荧荧荧光光光光抗抗抗抗体体体体、酶酶酶酶标标标标抗抗抗抗体体体体技技技技术术术术，可可可可以以以以检检检检测测测测病病病病毒毒毒毒或或或或细细细细菌菌菌菌在在在在动动动动物物物物各各各各种种种种组组组组织织织织细细细细胞胞胞胞中中中中的的的的分分分分布布布布。应应应应用用用用免免免免疫疫疫疫酶酶酶酶组组组组化化化化法法法法及及及及铁铁铁铁蛋蛋蛋蛋白白白白标标标标记记记记技技技技术术术术进进进进行行行行免免免免疫疫疫疫电电电电镜镜镜镜观观观观察察察察，可可可可以以以以测测测测定定定定病病病病毒毒毒毒在在在在亚亚亚亚细细细细胞胞胞胞水水水水平平平平的的的的定定定定位位位位，也也也也可可可可

12、测测测测定定定定淋淋淋淋巴巴巴巴细细细细胞胞胞胞表表表表面面面面免免免免疫疫疫疫球球球球蛋蛋蛋蛋白白白白及及及及抗抗抗抗体体体体的的的的产产产产生生生生情情情情况况况况。据据据据此此此此可可可可分分分分析传染病发生的机制及对免疫机理的探讨。析传染病发生的机制及对免疫机理的探讨。析传染病发生的机制及对免疫机理的探讨。析传染病发生的机制及对免疫机理的探讨。 8/27/20248/27/20241616 （四）微生物的鉴定与分析（四）微生物的鉴定与分析 应应用用交交叉叉凝凝集集实实验验、凝凝集集吸吸收收实实验验、沉沉淀淀实实验验等等血血清清学学实实验验，进进行行微微生生物物的的鉴鉴定定及及区区别别微

13、微生生物物的的血血清清型型，从从而而确确定定微微生生物物的的类类型型及及其其亲亲缘缘关关系系。还还可可应应用用琼琼脂脂扩扩散散实实验验、免免疫疫电电泳泳等等技技术术，对对微微生物的抗原组分进行分析。生物的抗原组分进行分析。8/27/20248/27/20241717（五）血型鉴定（五）血型鉴定 用细胞直接凝集实验、血凝抑制实验、用细胞直接凝集实验、血凝抑制实验、溶血实验等技术，可作血型鉴定、亲子溶血实验等技术，可作血型鉴定、亲子关系的确定、新生儿和出生幼畜溶血病关系的确定、新生儿和出生幼畜溶血病的诊断。的诊断。8/27/20248/27/20241818第二节第二节 沉淀试验沉淀试验 可可可可

14、溶溶溶溶性性性性抗抗抗抗原原原原与与与与相相相相应应应应抗抗抗抗体体体体结结结结合合合合，在在在在适适适适量量量量电电电电解解解解质质质质存存存存在在在在下下下下，形形形形成成成成肉肉肉肉眼眼眼眼可可可可见见见见的的的的絮絮絮絮状状状状白白白白色色色色沉沉沉沉淀淀淀淀，称称称称之之之之为为为为沉沉沉沉淀淀淀淀试试试试验（验（验（验（PrecipitationreactionPrecipitationreactionPrecipitationreactionPrecipitationreaction test test test test）。）。）。）。 可溶性抗原可溶性抗原可溶性抗原可溶性抗原

15、 + + + +免疫血清免疫血清免疫血清免疫血清 出现沉淀现象出现沉淀现象出现沉淀现象出现沉淀现象 ( ( ( (血清蛋白、病毒血清蛋白、病毒血清蛋白、病毒血清蛋白、病毒) ) ) ) （抗体）（抗体）（抗体）（抗体） 比例适合比例适合比例适合比例适合 沉淀原沉淀原沉淀原沉淀原 沉淀素沉淀素沉淀素沉淀素 比例不适合比例不适合比例不适合比例不适合 不出现沉淀现象不出现沉淀现象不出现沉淀现象不出现沉淀现象 0.85%NaCl0.85%NaCl8/27/20248/27/20241919 一一 液相沉淀试验液相沉淀试验 1 1 1 1环状沉淀试验环状沉淀试验环状沉淀试验环状沉淀试验 原理：试管内，下

16、层沉淀素与上层原理：试管内，下层沉淀素与上层原理：试管内，下层沉淀素与上层原理：试管内，下层沉淀素与上层 沉淀原在液界面应形成白色沉淀环。沉淀原在液界面应形成白色沉淀环。沉淀原在液界面应形成白色沉淀环。沉淀原在液界面应形成白色沉淀环。 用途：检测皮毛中的炭疽用途：检测皮毛中的炭疽用途：检测皮毛中的炭疽用途：检测皮毛中的炭疽 杆菌抗原（杆菌抗原（杆菌抗原（杆菌抗原（AscoliAscoliAscoliAscoli试验）试验）试验）试验） 2 2 2 2絮状沉淀试验絮状沉淀试验絮状沉淀试验絮状沉淀试验 抗原与抗体在试管内混合，在电解质的存在下抗抗原与抗体在试管内混合，在电解质的存在下抗抗原与抗体在

17、试管内混合，在电解质的存在下抗抗原与抗体在试管内混合，在电解质的存在下抗原抗体复合物可形成絮状凝聚物。此法多用于毒原抗体复合物可形成絮状凝聚物。此法多用于毒原抗体复合物可形成絮状凝聚物。此法多用于毒原抗体复合物可形成絮状凝聚物。此法多用于毒素和抗毒素测定。素和抗毒素测定。素和抗毒素测定。素和抗毒素测定。8/27/20248/27/20242020二二 琼脂扩散试验琼脂扩散试验 琼脂是一种含有硫酸基的多糖，加热溶解于水，琼脂是一种含有硫酸基的多糖，加热溶解于水，琼脂是一种含有硫酸基的多糖，加热溶解于水，琼脂是一种含有硫酸基的多糖，加热溶解于水，冷却后凝固成凝胶，琼脂凝胶是一种多孔结构，其冷却后凝

18、固成凝胶，琼脂凝胶是一种多孔结构，其冷却后凝固成凝胶，琼脂凝胶是一种多孔结构，其冷却后凝固成凝胶，琼脂凝胶是一种多孔结构，其孔径大小与琼脂含量有关，孔径大小与琼脂含量有关，孔径大小与琼脂含量有关，孔径大小与琼脂含量有关，1%1%1%1%琼脂凝胶孔径为琼脂凝胶孔径为琼脂凝胶孔径为琼脂凝胶孔径为85nm85nm85nm85nm，能使许多可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散。，能使许多可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散。，能使许多可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散。，能使许多可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散。当抗原与抗体在凝胶中的一定位置上相遇时，则两当抗原与抗体在凝胶中的一定位置上相遇时，则两当抗原与抗体在凝胶中的一定位

19、置上相遇时，则两当抗原与抗体在凝胶中的一定位置上相遇时，则两者结合形成沉淀线。沉淀线的位置与抗原、抗体颗者结合形成沉淀线。沉淀线的位置与抗原、抗体颗者结合形成沉淀线。沉淀线的位置与抗原、抗体颗者结合形成沉淀线。沉淀线的位置与抗原、抗体颗粒的大小、浓度，沉淀线的数目和所含抗原组分有粒的大小、浓度，沉淀线的数目和所含抗原组分有粒的大小、浓度，沉淀线的数目和所含抗原组分有粒的大小、浓度，沉淀线的数目和所含抗原组分有关。琼脂扩散可分为单扩散（抗原或抗体中一种成关。琼脂扩散可分为单扩散（抗原或抗体中一种成关。琼脂扩散可分为单扩散（抗原或抗体中一种成关。琼脂扩散可分为单扩散（抗原或抗体中一种成分扩散）和双

20、扩散。分扩散）和双扩散。分扩散）和双扩散。分扩散）和双扩散。 根据其扩散的方向可分为单向单扩、单向双扩、根据其扩散的方向可分为单向单扩、单向双扩、根据其扩散的方向可分为单向单扩、单向双扩、根据其扩散的方向可分为单向单扩、单向双扩、双向单扩、双向双扩，其中双向双扩应用最广。双向单扩、双向双扩，其中双向双扩应用最广。双向单扩、双向双扩，其中双向双扩应用最广。双向单扩、双向双扩，其中双向双扩应用最广。8/27/20248/27/202421211 1 单向单扩散单向单扩散 将将0.6%-1%0.6%-1%琼琼脂脂加加热热熔熔化化后后，加加入入定定量量经经预预热热的的稀稀释释抗抗血血清清，混混合合均均

21、匀匀后后，加加入入小小试试管管中中，待待凝凝固固后后加加入入0.5ml0.5ml抗抗原原于于其其上上，直直立立，置置于于3737C C中中，2-3h2-3h后后出出现现沉沉淀淀线线。由由于于抗抗原原的的扩扩散散，使使沉沉淀淀线线不不断断向向下下推推移移，而而最最初初形形成成的的沉沉淀淀带带随随抗抗原原的的扩扩散散而而向向下下推推移移，最最后后稳稳定定。沉沉淀淀带带距距抗抗原原愈愈近近，其其浓浓度度愈愈大大，可可作抗原浓度测定。作抗原浓度测定。8/27/20248/27/20242222 2 2 单向双扩散单向双扩散 基基本本作作法法同同上上，但但在在抗抗原原与与抗抗体体之之间间加加一一层层不不

22、含含抗抗体体的的盐盐水水琼琼脂脂，抗抗原原与与抗抗体体均均向向中中间间琼琼脂脂扩扩散散，形形成成沉沉淀淀带带。主主要用于抗原成分的分析。要用于抗原成分的分析。8/27/20248/27/202423233 3 双向单扩散双向单扩散 亦亦亦亦称称称称辐辐辐辐射射射射扩扩扩扩散散散散。在在在在平平平平皿皿皿皿或或或或玻玻玻玻板板板板上上上上进进进进行行行行。用用用用2%2%2%2%缓缓缓缓冲冲冲冲琼琼琼琼脂脂脂脂盐盐盐盐水水水水，加加加加热热热热融融融融化化化化，待待待待冷冷冷冷后后后后加加加加入入入入经经经经预预预预热热热热的的的的抗抗抗抗血血血血清清清清（用用用用1 1 1 1：5-105-1

23、05-105-10倍倍倍倍稀稀稀稀释释释释），混混混混合合合合后后后后倒倒倒倒入入入入平平平平皿皿皿皿或或或或玻玻玻玻板板板板上上上上，厚厚厚厚2-3mm2-3mm2-3mm2-3mm。凝凝凝凝固固固固后后后后在在在在凝凝凝凝胶胶胶胶板板板板上上上上打打打打孔孔孔孔，孔孔孔孔径径径径2-3mm2-3mm2-3mm2-3mm，孔孔孔孔内内内内滴滴滴滴加加加加抗抗抗抗原原原原液液液液，放放放放置置置置湿湿湿湿盒盒盒盒中中中中37373737 C C C C下下下下扩扩扩扩散散散散。抗抗抗抗原原原原在在在在孔孔孔孔内内内内向向向向四四四四周周周周扩扩扩扩散散散散，与与与与凝凝凝凝胶胶胶胶中中中中的的

24、的的抗抗抗抗体体体体接接接接触触触触，形形形形成成成成白白白白色色色色沉沉沉沉淀淀淀淀环环环环，白白白白环环环环的的的的大大大大小小小小随随随随抗抗抗抗原原原原的的的的浓浓浓浓度度度度而增大。此法在兽医临床上用于蛋白质定量实验。而增大。此法在兽医临床上用于蛋白质定量实验。而增大。此法在兽医临床上用于蛋白质定量实验。而增大。此法在兽医临床上用于蛋白质定量实验。8/27/20248/27/20242424 4 4双向琼脂扩散（琼扩）双向琼脂扩散（琼扩） 此法系采用此法系采用1%1%琼脂倒于平皿或玻片上，制琼脂倒于平皿或玻片上，制成凝胶板，可按需要打孔。将抗原、抗体分成凝胶板，可按需要打孔。将抗原、

25、抗体分别滴入孔内，放置湿盒中，在别滴入孔内，放置湿盒中，在3737C C湿箱中湿箱中24-72h24-72h后观察。在抗原与抗体孔间形成沉淀后观察。在抗原与抗体孔间形成沉淀带。每一种抗原成分出现一条沉淀带。带。每一种抗原成分出现一条沉淀带。8/27/20248/27/20242525结果判断：结果判断： 如两个相邻孔之间抗原相同，则沉淀带融如两个相邻孔之间抗原相同，则沉淀带融合；抗原则不同，则互相交叉；部分相同合；抗原则不同，则互相交叉；部分相同则部分融合，另外不同部分则交叉。则部分融合，另外不同部分则交叉。8/27/20248/27/20242626特点：特点：简便、敏感性低、耗时、应用最简

26、便、敏感性低、耗时、应用最广广用途：用途：常用于细菌、病毒的鉴定，抗血常用于细菌、病毒的鉴定，抗血清效价的测定，抗原组分的分析及传清效价的测定，抗原组分的分析及传染病的诊断等，如马传染性贫血病的染病的诊断等，如马传染性贫血病的诊断。诊断。8/27/20248/27/20242727 第三节第三节 凝集试验凝集试验 细细菌菌、红红细细胞胞等等颗颗粒粒状状态态的的抗抗原原与与相相应应的的抗抗体体结结合合后后，在在电电解解质质存存在在时时相相互互凝凝集集成成絮絮片片 状状 团团 块块 ， 这这 种种 试试 验验 称称 为为 凝凝 集集 试试 验验（AgglutiationAgglutiation t

27、est test）。）。 参参与与反反应应的的抗抗原原叫叫凝凝集集原原；参参与与反反应应的的抗抗体体称称为为凝凝集集素素，主主要要有有IgGIgG、IgMIgM。凝凝集集实实验验有直接凝集试验和间接凝集试验两种。有直接凝集试验和间接凝集试验两种。8/27/20248/27/20242828基本原理：基本原理： 生理盐水生理盐水颗粒性抗原颗粒性抗原 + + 相应抗血清相应抗血清 颗粒凝集颗粒凝集 ( (细菌、红细胞细菌、红细胞) ) 比例适合比例适合 凝集原凝集原 凝集素凝集素 过多过多 后带现象后带现象 （稀释血清）（稀释血清）8/27/20248/27/20242929一、直接凝集试验一、直

28、接凝集试验 颗粒性抗原与相应抗体在电解质的参与下，颗粒性抗原与相应抗体在电解质的参与下，直接结合，凝集成团的现象，称直接凝集试直接结合，凝集成团的现象，称直接凝集试验。按其操作方法可分为玻片发和试管法。验。按其操作方法可分为玻片发和试管法。8/27/20248/27/20243030 1 1玻片凝集试验玻片凝集试验 将已知的抗血清将已知的抗血清将已知的抗血清将已知的抗血清1-21-21-21-2滴，滴于清洁玻片上，取待检菌滴，滴于清洁玻片上，取待检菌滴，滴于清洁玻片上，取待检菌滴，滴于清洁玻片上，取待检菌液（抗原）加于其上，混合均匀，数分钟后可出现颗液（抗原）加于其上，混合均匀，数分钟后可出现

29、颗液（抗原）加于其上，混合均匀，数分钟后可出现颗液（抗原）加于其上，混合均匀，数分钟后可出现颗粒状或絮片状凝集，谓之阳性反应。粒状或絮片状凝集，谓之阳性反应。粒状或絮片状凝集，谓之阳性反应。粒状或絮片状凝集，谓之阳性反应。 特点特点特点特点：简单、快速简单、快速简单、快速简单、快速 用途用途用途用途：定性，细菌鉴定、血型鉴定。如用已知的沙定性，细菌鉴定、血型鉴定。如用已知的沙定性，细菌鉴定、血型鉴定。如用已知的沙定性，细菌鉴定、血型鉴定。如用已知的沙门氏菌血清，鉴定沙门氏杆菌的抗原组分以定型。此门氏菌血清，鉴定沙门氏杆菌的抗原组分以定型。此门氏菌血清，鉴定沙门氏杆菌的抗原组分以定型。此门氏菌血

30、清，鉴定沙门氏杆菌的抗原组分以定型。此法也用于畜禽传染病诊断，如用已知的鸡白痢有色平法也用于畜禽传染病诊断，如用已知的鸡白痢有色平法也用于畜禽传染病诊断，如用已知的鸡白痢有色平法也用于畜禽传染病诊断，如用已知的鸡白痢有色平板抗原，检查鸡血清中有无相应抗体，进行鸡白痢检板抗原，检查鸡血清中有无相应抗体，进行鸡白痢检板抗原，检查鸡血清中有无相应抗体，进行鸡白痢检板抗原，检查鸡血清中有无相应抗体，进行鸡白痢检疫疫疫疫8/27/20248/27/202431312 2试管凝集试验试管凝集试验 是是一一种种定定性性与与定定量量相相结结合合的的方方法法。试试验验时时用用一一列列试试管管，将将待待检检血血清

31、清用用0.5%0.5%石石炭炭酸酸生生理理盐盐水水作作1010倍倍递递进进稀稀释释，每每管管维维持持量量为为0.5ml0.5ml，一一管管不不加加血血清清作作对对照照。每每管管中中加加入入一一定定浓浓度度的的抗抗原原0.5ml0.5ml，混混合合均均匀匀，在在3737C C或或室室温温下下静静置置数数小小时时，观观察察液液体体的的亮亮度度及及沉沉淀淀物物，视视不不同同的的凝凝集集程程度度记记录录为为+（100%100%菌菌体体凝凝集集），+（75%75%凝集），凝集），+ +（25%25%凝集）。凝集）。 8/27/20248/27/20243232凡凡能能与与一一定定量量抗抗原原发发生生50

32、%50%凝凝集集（+）的的血血清清最最高高稀稀释释度度，为为血血清清的的凝凝集集价价或或效效价价（滴滴度度）。在在试试验验时时，必必须须建建立立阴阴性性、阳阳性血清对照管。性血清对照管。 特点：特点：准确、耗时准确、耗时 用用途途：诊诊断断布布氏氏杆杆菌菌病病，测测定定抗抗体体的的凝凝集集价价( (定量定量) )8/27/20248/27/20243333 二、间接凝集试验二、间接凝集试验 基本原理：基本原理： 可可溶溶性性抗抗原原+ +惰惰性性载载体体（聚聚苯苯乙乙烯烯乳乳胶胶微微粒粒、炭炭粒粒、绵绵羊羊红红细细胞胞等等） 抗抗原原致致敏敏载载体体 抗原致敏载体抗原致敏载体+ +相应免疫血清

33、相应免疫血清( (抗体抗体) ) 电解质电解质电解质电解质 被被动动载载体体凝凝集集( (间间接接乳乳胶胶凝凝集集、间间接接炭炭素素凝凝集、间接红细胞凝集等集、间接红细胞凝集等 ) )8/27/20248/27/20243434特点：特点：敏感敏感( (在微量反应板中进行试验在微量反应板中进行试验) )、快速。、快速。用用途途：用用已已知知抗抗原原致致敏敏的的载载体体可可检检测测血血清清中中的的特异抗体及其效价。特异抗体及其效价。 若若用用已已知知免免疫疫血血清清（AbAb）致致敏敏的的红红细细胞胞，则则可可检检测测病病毒毒等等可可溶溶性性抗抗原原称称为为反反向向间间接血凝试验。接血凝试验。

34、8/27/20248/27/20243535 8/27/20248/27/20243636（正向）间接凝集反应原理示意图 8/27/20248/27/20243737（反向）间接凝集反应原理示意图 8/27/20248/27/20243838间接凝集抑制反应原理示意图间接凝集抑制反应原理示意图A A：标本中含抗原：标本中含抗原 B B：标本中不含抗原：标本中不含抗原8/27/20248/27/20243939第四节第四节 与补体有关的试验与补体有关的试验 一、补体的性质一、补体的性质 补体是存在于正常动物血清中的一组蛋白质。补体是存在于正常动物血清中的一组蛋白质。补体是存在于正常动物血清中的一

35、组蛋白质。补体是存在于正常动物血清中的一组蛋白质。 补补补补体体体体没没没没有有有有特特特特异异异异性性性性，它它它它能能能能与与与与任任任任何何何何抗抗抗抗原原原原抗抗抗抗体体体体复复复复合合合合物物物物相相相相结合，但不能与游离的抗原或抗体相结合。结合，但不能与游离的抗原或抗体相结合。结合，但不能与游离的抗原或抗体相结合。结合，但不能与游离的抗原或抗体相结合。 补补补补体体体体与与与与抗抗抗抗原原原原抗抗抗抗体体体体的的的的复复复复合合合合物物物物结结结结合合合合后后后后，可可可可出出出出现现现现溶溶溶溶血血血血反反反反应应应应、溶溶溶溶菌菌菌菌反反反反应应应应、补补补补体体体体结结结结合

36、合合合反反反反应应应应、凝凝凝凝集集集集反反反反应应应应、免免免免疫疫疫疫黏黏黏黏膜膜膜膜试试试试验验验验等等等等。由由由由于于于于补补补补体体体体具具具具有有有有这这这这一一一一特特特特性性性性，故故故故常常常常用用用用其其其其来来来来检检检检验验验验抗抗抗抗原原原原或或或或抗抗抗抗体体体体是是是是否否否否发发发发生生生生特特特特异异异异性性性性结结结结合合合合，特特特特异异异异性性性性抗抗抗抗原原原原或或或或抗体是否存在。抗体是否存在。抗体是否存在。抗体是否存在。8/27/20248/27/20244040 二、溶解试验二、溶解试验1. 1.溶血试验溶血试验 红红细细胞胞与与相相应应的的抗

37、抗体体（溶溶血血素素）相相结结合合后后，在在补补体体的的参参与与下下，可可发发生生溶溶血血反反应应（直直接接溶溶血血反应），以作补体结合反应的指示系统。反应），以作补体结合反应的指示系统。 吸吸附附抗抗原原的的红红细细胞胞与与抗抗体体结结合合后后，在在补补体体存存在在下下可可以以引引起起溶溶血血反反应应，这这种种反反应应称称为为间间接接溶溶血血反反应应。间间接接溶溶血血反反应应只只能能用用新新鲜鲜红红细细胞胞，而而新鲜红细胞不易保存，限制了本法的应用。新鲜红细胞不易保存，限制了本法的应用。 8/27/20248/27/202441412.2.溶菌试验溶菌试验 某某些些细细菌菌（如如霍霍乱乱弧弧

38、菌菌）与与抗抗体体结结合合后后，如如有有补补体体存存在在，可可发发生生细细菌菌溶溶解解或或被被杀杀死死，这种反应称为溶菌反应或杀菌反应。这种反应称为溶菌反应或杀菌反应。 8/27/20248/27/20244242三补体参与的试验三补体参与的试验补体结合试验补体结合试验 补补体体结结合合试试验验是是应应用用可可溶溶性性抗抗原原与与相相应应抗抗体体结结合合, ,其其抗抗原原抗抗体体复复合合物物可可以以结结合合补补体体, ,但但这这一一反反应应肉肉眼眼看看不不到到, ,如如再再加加入入致致敏敏红红细细胞胞, ,即即可可根根据据是是否否出出现现溶溶血血反反应应判判断断反反应应系系统中是否存在相应的抗

39、原和抗体统中是否存在相应的抗原和抗体. .8/27/20248/27/202443431 1参参与与反反应应：抗抗原原抗抗体体反反应应系系统统、补补体体（豚豚鼠血清）、指示系统（绵羊红细胞、溶血素）。鼠血清）、指示系统（绵羊红细胞、溶血素）。2 2反应原理：反应原理：（如下图所示）。（如下图所示）。3 3特点：特点：敏感性特异性高。敏感性特异性高。 正正式式试试验验前前要要进进行行下下列列测测定定，操操作作较较繁繁（溶血素效价、补体效价、抗原效价）。（溶血素效价、补体效价、抗原效价）。4 4用用途途：用用于于牛牛肺肺疫疫、副副结结核核、布布氏氏杆杆菌菌病病、锥虫病、马传贫、鼻疽等的检疫。锥虫病

40、、马传贫、鼻疽等的检疫。8/27/20248/27/202444448/27/20248/27/20244545中和试验中和试验（病毒、毒素中和试验）（病毒、毒素中和试验）原理原理：病毒与抗血清中抗体特异结合后失去：病毒与抗血清中抗体特异结合后失去感染易感染易 感动物、鸡或鸡胚、细胞活性。感动物、鸡或鸡胚、细胞活性。例例例例1 1 1 1 NDV NDV NDV NDV 9 9 9 911d11d11d11d鸡胚鸡胚鸡胚鸡胚 2424242448h 48h 48h 48h 鸡胚死亡鸡胚死亡鸡胚死亡鸡胚死亡NDVNDVNDVNDV+ + + +抗血清抗血清抗血清抗血清 9 9 9 911d11d

41、11d11d鸡胚鸡胚鸡胚鸡胚 鸡胚不死亡鸡胚不死亡鸡胚不死亡鸡胚不死亡 第四节第四节 中和试验中和试验8/27/20248/27/20244646例例2 2 口蹄疫病毒口蹄疫病毒(FMDV) 4(FMDV) 47d7d乳鼠乳鼠 乳鼠乳鼠死亡死亡 FMDV+FMDV+抗血清抗血清 4 47d7d乳鼠乳鼠 乳鼠不死亡乳鼠不死亡 用途：用途：1. 1.用已知血清鉴定病毒用已知血清鉴定病毒诊断病毒病诊断病毒病2.2.用已知病毒检测血清抗体用已知病毒检测血清抗体诊断病毒感染，诊断病毒感染，测定病毒免疫血清效价（中和价）。测定病毒免疫血清效价（中和价）。8/27/20248/27/20244747第六节第

42、六节 免疫标记技术免疫标记技术 免免免免疫疫疫疫标标标标记记记记技技技技术术术术即即即即是是是是将将将将某某某某一一一一个个个个特特特特定定定定的的的的易易易易于于于于检检检检测测测测的的的的分分分分子子子子或或或或原原原原子子子子，联联联联结结结结在在在在抗抗抗抗体体体体或或或或抗抗抗抗原原原原上上上上，利利利利用用用用抗抗抗抗体体体体（或或或或抗抗抗抗原原原原）能能能能与与与与相相相相应应应应的的的的抗抗抗抗原原原原（或或或或抗抗抗抗体体体体）结结结结合合合合的的的的特特特特性性性性，从从从从而而而而检检检检测测测测抗抗抗抗原原原原或抗体的存在及所在部位（定位）。或抗体的存在及所在部位（定

43、位）。或抗体的存在及所在部位（定位）。或抗体的存在及所在部位（定位）。 免免免免疫疫疫疫标标标标记记记记技技技技术术术术是是是是近近近近年年年年来来来来研研研研究究究究血血血血清清清清学学学学反反反反应应应应的的的的一一一一项项项项新新新新技技技技术术术术。它它它它不不不不仅仅仅仅可可可可以以以以用用用用于于于于抗抗抗抗原原原原抗抗抗抗体体体体的的的的定定定定性性性性、定定定定量量量量，还还还还可可可可用用用用于于于于抗抗抗抗原原原原抗抗抗抗体体体体的的的的定定定定位位位位。由由由由于于于于其其其其反反反反应应应应的的的的特特特特异异异异性性性性敏敏敏敏感感感感性性性性高高高高，不不不不但但但

44、但在在在在诊诊诊诊断断断断疾疾疾疾病病病病时时时时广广广广为为为为应应应应用用用用，亦亦亦亦可可可可应应应应用用用用于于于于生生生生物物物物领领领领域域域域其其其其他他他他方方方方面。面。面。面。8/27/20248/27/202448481. 1.荧光标记抗体技术（免疫荧光技术）荧光标记抗体技术（免疫荧光技术） 免疫荧光技术是将荧光染料标记在抗体球蛋白分子免疫荧光技术是将荧光染料标记在抗体球蛋白分子免疫荧光技术是将荧光染料标记在抗体球蛋白分子免疫荧光技术是将荧光染料标记在抗体球蛋白分子上，制成荧光抗体。当荧光抗体与相应抗原结合时，上，制成荧光抗体。当荧光抗体与相应抗原结合时，上，制成荧光抗体

45、。当荧光抗体与相应抗原结合时，上，制成荧光抗体。当荧光抗体与相应抗原结合时，就形成带有荧光的抗原抗体复合物，在荧光显微镜下，就形成带有荧光的抗原抗体复合物，在荧光显微镜下，就形成带有荧光的抗原抗体复合物，在荧光显微镜下，就形成带有荧光的抗原抗体复合物，在荧光显微镜下，可观察到此复合物发出的荧光。可检测标本中某种抗可观察到此复合物发出的荧光。可检测标本中某种抗可观察到此复合物发出的荧光。可检测标本中某种抗可观察到此复合物发出的荧光。可检测标本中某种抗原的存在或抗原所在的部位（定位）。原的存在或抗原所在的部位（定位）。原的存在或抗原所在的部位（定位）。原的存在或抗原所在的部位（定位）。 原理：原理

46、：荧光素（荧光素（F F）+ + AbAb AbAbF(FITCF(FITC）) ) AbAbF F + Ag + Ag AgAg- - AbAbF F Ag- Ag- AbAbF F 用途：用途：用用用用AbAbAbAbF F F F检测抗原检测抗原检测抗原检测抗原 （定性、定位）（定性、定位）（定性、定位）（定性、定位） 特点：特点：敏感，需荧光显微镜敏感，需荧光显微镜敏感，需荧光显微镜敏感，需荧光显微镜紫外光紫外光紫外光紫外光8/27/20248/27/20244949方法：方法： 直接法直接法 F F 间接法间接法 F F F F Ag Ag Ag Ag AgAgAgAg比较：比较：比

47、较：比较： 检测一种抗原检测一种抗原检测一种抗原检测一种抗原 标记一种动物的免疫标记一种动物的免疫标记一种动物的免疫标记一种动物的免疫 就须标记特异就须标记特异就须标记特异就须标记特异 球蛋白球蛋白球蛋白球蛋白AbAbAbAbF F F F，就能，就能，就能，就能 的一种的一种的一种的一种AbAbAbAbF F F F 检测多种抗原检测多种抗原检测多种抗原检测多种抗原 较特异较特异较特异较特异 较敏感较敏感较敏感较敏感 8/27/20248/27/202450502.2.酶标记抗体技术（酶免疫测定技术）酶标记抗体技术（酶免疫测定技术）（1 1 1 1） 间接法间接法间接法间接法 （2 2 2

48、2）双抗体夹心法）双抗体夹心法）双抗体夹心法）双抗体夹心法原理：原理：原理：原理：用途用途用途用途：已知抗原、酶标：已知抗原、酶标：已知抗原、酶标：已知抗原、酶标 已知血清抗体、酶已知血清抗体、酶已知血清抗体、酶已知血清抗体、酶 抗体测血清抗体抗体测血清抗体抗体测血清抗体抗体测血清抗体 标抗体测抗原标抗体测抗原标抗体测抗原标抗体测抗原8/27/20248/27/202451513. 3. 放射免疫测定法放射免疫测定法原理：原理：Ag+AbAg+AbR R Ag- Ag-AbAbR R 或或 AgAgR R+Ab+Ab AgAgR R-Ab-Ab 用液相闪烁仪测用液相闪烁仪测R R放出的射线量放

49、出的射线量特点：特点：敏感性极高，需高级闪烁仪敏感性极高，需高级闪烁仪 同位素对人有放射性危害同位素对人有放射性危害用途：用途：用于药物、激素、酶、肿瘤抗原等测定用于药物、激素、酶、肿瘤抗原等测定8/27/20248/27/20245252四、其他免疫标记技术四、其他免疫标记技术（一）免疫电镜技术（一）免疫电镜技术（二）生物素（二）生物素- -亲和素标记技术亲和素标记技术（三）核酸探针技术（三）核酸探针技术 8/27/20248/27/20245353第七节第七节 葡萄球菌葡萄球菌A A蛋白及其应用蛋白及其应用 葡葡萄萄球球菌菌A A蛋蛋白白是是大大多多数数金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌细细胞胞

50、壁壁上上所所含含的的一一种种成成分分，具具有有多多种种生生物物学学特特性性，能能与与人人及及多多种种哺哺乳乳动动物物的的IgGIgG的的FcFc段段呈呈非非特特异异性性结结合合，结结合合后后仍仍保保持持其其抗抗体体活活性性。同同时时与与酶酶、荧光颜料偶联，因而应用于免疫领域。荧光颜料偶联，因而应用于免疫领域。 8/27/20248/27/20245454一、葡萄球菌一、葡萄球菌A A蛋白的主要特性蛋白的主要特性 葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌A A A A蛋蛋蛋蛋白白白白是是是是金金金金黄黄黄黄色色色色葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌细细细细胞胞胞胞壁壁壁壁上上上上的的的的一一一一种种种种成

51、成成成分分分分，存存存存在在在在于于于于细细细细菌菌菌菌表表表表面面面面，结结结结合合合合于于于于黏黏黏黏肽肽肽肽中中中中。对对对对热热热热稳稳稳稳定定定定，经经经经100100100100度度度度1h1h1h1h后仍保持与后仍保持与后仍保持与后仍保持与IgGIgGIgGIgG结合的活性。结合的活性。结合的活性。结合的活性。 葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌A A A A蛋蛋蛋蛋白白白白可可可可以以以以与与与与人人人人及及及及多多多多种种种种哺哺哺哺乳乳乳乳动动动动物物物物（如如如如猪猪猪猪、兔兔兔兔、小小小小白白白白鼠鼠鼠鼠）的的的的IgGIgGIgGIgG结结结结合合合合，并并并并在在在在

52、琼琼琼琼脂脂脂脂中中中中形形形形成成成成沉沉沉沉淀淀淀淀线线线线。这这这这种种种种结结结结合合合合是是是是一一一一种种种种假假假假免免免免疫疫疫疫反反反反应应应应，是是是是一一一一种种种种与与与与IgGIgGIgGIgG FcFcFcFc段段段段非非非非特特特特异异异异的的的的化化化化学学学学结结结结合合合合，结结结结合合合合后后后后能能能能激激激激活活活活补补补补体体体体，亦亦亦亦仍仍仍仍保保保保持持持持FabFabFabFab的的的的免疫活性。这一活性，已应用于免疫学领域中。免疫活性。这一活性，已应用于免疫学领域中。免疫活性。这一活性，已应用于免疫学领域中。免疫活性。这一活性，已应用于免疫

53、学领域中。8/27/20248/27/20245555二、二、 葡萄球菌葡萄球菌A A蛋白在免疫学上的应用蛋白在免疫学上的应用（一）协同凝集试验（一）协同凝集试验 细细细细胞胞胞胞壁壁壁壁上上上上葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌A A A A蛋蛋蛋蛋白白白白与与与与抗抗抗抗体体体体结结结结合合合合，被被被被覆覆覆覆着着着着特特特特异异异异性性性性抗抗抗抗体体体体的的的的金金金金黄黄黄黄色色色色葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌与与与与相相相相应应应应的的的的抗抗抗抗原原原原结结结结合合合合时时时时，就就就就可可可可使使使使互互互互相相相相联联联联结结结结引引引引起起起起协协协协同同同同凝凝凝凝集

54、集集集反反反反应应应应。这这这这种种种种方方方方法法法法应应应应用于多种细菌和某些病毒的快速诊断。用于多种细菌和某些病毒的快速诊断。用于多种细菌和某些病毒的快速诊断。用于多种细菌和某些病毒的快速诊断。 试试试试验验验验方方方方法法法法常常常常采采采采用用用用玻玻玻玻片片片片法法法法，也也也也可可可可采采采采用用用用试试试试管管管管凝凝凝凝集集集集法法法法，每每每每种种种种方方方方法法法法均均均均应应应应设设设设不不不不含含含含葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌A A A A蛋蛋蛋蛋白白白白的的的的阴阴阴阴性性性性菌菌菌菌液液液液对对对对照。照。照。照。8/27/20248/27/20245656（二）标记葡萄球菌（二）标记葡萄球菌A A蛋白技术蛋白技术 从富含葡萄球菌从富含葡萄球菌A A蛋白的菌株中，提取葡蛋白的菌株中，提取葡萄球菌萄球菌A A成分，用酶、荧光染料标记，代替成分，用酶、荧光染料标记，代替标记第二抗体，用于检测抗体或抗原。此法标记第二抗体，用于检测抗体或抗原。此法可避免制造第二抗体的麻烦，保存期长，因可避免制造第二抗体的麻烦，保存期长，因而广泛应用于实验室诊断中。而广泛应用于实验室诊断中。 endendendend8/27/20248/27/20245757