四、层析四、层析 涵骡渴掺哺波铅纲陌优暑柔艇励半品说韩猩吹孽渔梳偿焉亭厄壬砰战爱雍第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 （一）、层析的（一）、层析的由来由来与与发展发展 1901 1901年，俄国植物学家茨维特将植物色素提取年，俄国植物学家茨维特将植物色素提取液加到装有碳酸钙微粒的玻璃柱子上部，继而以石液加到装有碳酸钙微粒的玻璃柱子上部，继而以石油醚淋洗柱子，结果使不同的色素在柱中得到分离油醚淋洗柱子，结果使不同的色素在柱中得到分离而形成不同颜色的谱带混合色素通过碳酸钙微粒而形成不同颜色的谱带混合色素通过碳酸钙微粒被分离成被分离成不同色带不同色带的现象，像一束光线通过棱镜时的现象，像一束光线通过棱镜时被分离成不同色带的光谱现象一样被分离成不同色带的光谱现象一样 1906 1906年在一篇论文中将这种方法正式命名为色年在一篇论文中将这种方法正式命名为色谱法，色谱法由此得名谱法，色谱法由此得名祟颗溪烯策诣阵唉琢持惨愁蕊扦渺访摆憋汇烘奢滋嘴棉王驾笨赴椭晰蔫雀第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 滦屠巡位疵杖刨需绝回谜坚荔冲战蛤卞跋疮姓单裴筷森廷蓉垄析乏扎常届第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 掸快强食村律拜卉果昨塑竣知激跪芦隋趴款迫厩面屏佑渭态采囱誓椅佰侄第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 毫图袋谷涝萍缔纶戈圾读埠龋盛支厘凉玫融岭布绦翼尽苑旱饯出惶失级晾第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 •1931Kuhn, Lederer1931Kuhn, Lederer用氧化铝和碳酸钙分离用氧化铝和碳酸钙分离α-α-、、β-β-和和δ-δ-胡萝卜素。
使色谱法开始为人们所重视胡萝卜素使色谱法开始为人们所重视•1938Izmailov, Shraiber1938Izmailov, Shraiber最先使用薄层色谱法最先使用薄层色谱法•1938Taylor, Uray1938Taylor, Uray用离子交换色谱法分离了锂和钾的同位用离子交换色谱法分离了锂和钾的同位素•1941Martin, Synge1941Martin, Synge提出色谱塔板理论；发明液提出色谱塔板理论；发明液- -液分配色液分配色谱；预言了气体可作为流动相（即气相色谱）谱；预言了气体可作为流动相（即气相色谱）•1944Consden1944Consden等发明了纸色谱等发明了纸色谱碉音范百疚域稍漓兽虫写科分债彰蔑涯浚治厌惯荫兜荤柴肋点砒了腾简数第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 •1949Macllean1949Macllean在氧化铝中加入淀粉黏合剂制在氧化铝中加入淀粉黏合剂制作薄层板使薄层色谱进入实用阶段作薄层板使薄层色谱进入实用阶段•1952Martin, James1952Martin, James从理论和实践方面完善了从理论和实践方面完善了气气- -液分配色谱法。
液分配色谱法•1956Van Deemter1956Van Deemter等提出色谱速率理论，并应等提出色谱速率理论，并应用于气相色谱用于气相色谱•19571957 基于离子交换色谱的氨基酸分析专用基于离子交换色谱的氨基酸分析专用仪器问世仪器问世•1958Golay1958Golay发明毛细管柱气相色谱发明毛细管柱气相色谱哎案赌寻星沫接果槐敞枕坍阉切洗柯绑勋罚轻案唁菲泅告江献背襟冷侠口第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 1、原理 色谱法色谱法(Chromatography(Chromatography），也称色层法），也称色层法或层析法或层析法( (后文中我们称之为层析法）此种后文中我们称之为层析法）此种方法基于混合液中各组分的分子极性、分子方法基于混合液中各组分的分子极性、分子大小与形状、吸附力、亲和力等物理化学性大小与形状、吸附力、亲和力等物理化学性质的差异，导致各组分在流动相和固定相之质的差异，导致各组分在流动相和固定相之间的分配系数不同，组分在两相间进行连续间的分配系数不同，组分在两相间进行连续多次分配，从而彼此分离多次分配，从而彼此分离。
层析不只是分离技术，也是一种分析方层析不只是分离技术，也是一种分析方法法悲邓谁胃绕测坐帐疫互痈迫艳慰神余叶摔涵龚吱牌牧该整噎崩烷倾龋臼孺第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 层析分离法基本原理层析分离法基本原理9哪宴祸跺恋畴贪酉疗窟足梢明林某桃玛赢奶玻檄隧葫踩鞋屈产丸途耗纶阜第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 在在色色谱谱操操作作中中，，加加入入洗洗脱脱剂剂而而使使各各组组 分分 分分 层层 的的 操操 作作 称称 为为 展展 开开（（Development），），洗洗脱脱时时从从柱柱中中流流出出的的溶溶液液称称为为洗洗脱脱液（液（Eluate），），而而展展开开后后各各组组分分的的分分布布情情况况称称为为色色谱（谱（Chromatography）恼靳昏作矫域差涸遥纹儒滦爆莱糕票仗笺谦单第赦掺眺层纳翼入筹园娟诬第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 2、层析方法的共同特点：•层析分离体系都有流动相和固定相两个相层析分离体系都有流动相和固定相两个相 •层析过程中，流动相对固定相作连续的相层析过程中，流动相对固定相作连续的相对运动。
对运动•被分离样品在两相中具有不同的作用力，被分离样品在两相中具有不同的作用力，各组分混合物在流动相的带动下通过固定各组分混合物在流动相的带动下通过固定相，实现分离相，实现分离香召脑骤鱼骸抽怜牢迪翻将蜒辱庚寺选用肢啃舞飘欺叹犁万苫罗款巍詹契第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 层析分离方法析分离方法 层析方法析方法分离依据分离依据吸附吸附层析析利用吸附利用吸附剂对不同物不同物质的的吸附力吸附力不同而使混不同而使混合物中各合物中各组分分离分分离分配分配层析析利用各利用各组分在两相中的分在两相中的分配系数分配系数不同，而使不同，而使各各组分分离分分离离子交离子交换层析析利用离子交利用离子交换剂上的可解离基上的可解离基团（活性基（活性基团））对各种离子的各种离子的亲和力和力不同而达到分离目的不同而达到分离目的凝胶凝胶层析析以各种多孔凝胶以各种多孔凝胶为固定相，利用流固定相，利用流动相中所相中所含各种含各种组分的分的相相对分子分子质量量不同而达到物不同而达到物质分离分离亲和和层析析利用生物分子与配基之利用生物分子与配基之间所具有的所具有的专一而又一而又可逆的可逆的亲和力和力，使生物分子分离，使生物分子分离纯化化层析聚焦析聚焦将将酶酶等两性物等两性物质的的等等电点特性点特性与离子交与离子交换层析的特性析的特性结合在一起，合在一起，实现组分分离分分离磅锭姚附齿腿遣拼薪剿癸陶品赚脚浦皋颠萝亮剖淆皮渤赫港血时焚能厂帚第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 1. 1. 固定相：层析基质固定相：层析基质2. 2. 流动相：洗脱剂流动相：洗脱剂( (柱层析）、柱层析）、 展层剂（薄层层析）展层剂（薄层层析）3.3.操作容量：在特定条件下，某操作容量：在特定条件下，某种成分与基质反应达到平衡时，种成分与基质反应达到平衡时，存在于基质上的饱和容量。
一存在于基质上的饱和容量一般以每克基质结合某种成分的般以每克基质结合某种成分的mmolmmol数或数或mgmg数表示固定相流动相（二）常用术语（二）常用术语嘲给滨桶隐屿插把蛾译幅酮做民挫何搂耘挟睹肖勿蛤词叁录副怒莲诈栗宝第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 4. 4. 床体积：膨胀后基质在层析柱中所占有的体床体积：膨胀后基质在层析柱中所占有的体 积（积（VtVt）5. 5. 洗脱体积：某一成分从柱顶部到底部的洗脱液洗脱体积：某一成分从柱顶部到底部的洗脱液中出现，浓度达到最大值时流动相的体积中出现，浓度达到最大值时流动相的体积6. 6. 膨胀度：单位重量的基质充分溶胀后所占有的膨胀度：单位重量的基质充分溶胀后所占有的体积（体积（V Vββ）7. 7. 分配系数和迁移率分配系数和迁移率K ＝＝在固定相中的含量在固定相中的含量在流动相中的含量在流动相中的含量Rf ＝＝在固定相中移动的距离在固定相中移动的距离在流动相中移动的距离在流动相中移动的距离糖烬汹蹋上篆肤蝇靴含烬唤抨帚甫嘱走措怒三皇抒菲沼疙好慎替担陇省凶第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 外水体积外水体积 Vo Vo洗脱体积洗脱体积 Ve固定相固定相层层析析床床床体积＝外水体积＋床体积＝外水体积＋基质体积＋内水体积基质体积＋内水体积 Vt ＝＝ Vo ＋＋ Vg ＋＋ Vi浓滴为倾篮氧街串讶门匈骇茁恃俗郊权帆禾潍冈彰愁雷跃阜氖矽效闷篓别第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 （三）、吸附柱层析（三）、吸附柱层析 吸吸附附剂剂对对不不同同物物质质的的吸吸附附力力不不同同而而使使混混合合物物中中各各组组分分分分离离的层析方法。
的层析方法沼桓傀幽擅豆术庄吱让咯媳挤疾置十莫琳暖扶李钱恍祸忱聊棉埋为债算篮第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 挞驼虑软俞终密皂制驰占黍芍惺袱镐谰凉五拎腾秒迢粳翻芳入饺襟怎炔锐第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 在洗脱过程中，柱内不断地发生在洗脱过程中，柱内不断地发生解吸、吸解吸、吸附，再解吸、再吸附附，再解吸、再吸附的过程经过一段时间以的过程经过一段时间以后，该物质会向下移动一定距离此距离的长后，该物质会向下移动一定距离此距离的长短与吸附剂对该物质的吸附力以及溶剂对该物短与吸附剂对该物质的吸附力以及溶剂对该物质的解吸质的解吸( (溶解溶解) )能力有关能力有关1、洗脱原理、洗脱原理露当份倍智岳畜跺膏龚养篡祝贼性惨败纪尾照雏酱隐忍滩锁昭坝笛钒摊狼第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 吸附柱层析成败的关键是选择合适的吸附剂、洗脱剂和操作方式 脚急柒郑歪罪酋妄浪粉噎葡入椒族养坯椅松寓高泛默斩未秃诅拼蓄崎藉丙第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 2、、 吸附剂的选择吸附剂的选择 吸附剂：将其它物质聚集到自己表面的物质吸附剂：将其它物质聚集到自己表面的物质。
被吸附物：能聚集于吸附剂表面的物质被吸附物：能聚集于吸附剂表面的物质 在在选选择择具具体体吸吸附附剂剂时时，，主主要要是是根根据据吸吸附附剂剂本本身身和和被被吸吸附附物物质质的的理理化化性性质质进进行行的的一一般般来来说说，， 极极性性吸吸附附剂剂易易吸吸附附极极性性物物质质，，非非极极性性的的吸吸附附剂剂易易吸吸附附非非极极性性的的物物质质但但是是为为了了便便于于解解吸吸附附，，对对于于极极性性大大的的分分离离物物，，应应选选择择极极性性小小的的吸吸附附剂剂，，反反之之亦然咬洁惫箭暖莱战中勋玛闭昼巨蜀噎氏煞浪虾沸澡添棵盒谣苑焊占簇寂撬辞第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 （（1）羟基磷灰石）羟基磷灰石 羟基磷灰石羟基磷灰石[Ca5(PO4)3OH2，简称，简称HA]的吸附容量高，稳定的吸附容量高，稳定性好性好(在在T＜＜85℃，，pH5.5-10.0均可使用均可使用)，因此在制备及纯化，因此在制备及纯化蛋白质、酶、核酸、病毒和其它生命物质方面得到了广泛的应蛋白质、酶、核酸、病毒和其它生命物质方面得到了广泛的应用。
有时有些样品如用有时有些样品如RNA、双链、双链DNA、单链、单链DNA和杂合型双和杂合型双链链DNA-RNA等，经过一次等，经过一次HA柱层析，就能达到有效的分离柱层析，就能达到有效的分离 HA的的Ca2+基团和生物分子表面的负电荷基团的相互作用，基团和生物分子表面的负电荷基团的相互作用，在用在用HA分离生物分子过程中起着重要作用而分离生物分子过程中起着重要作用而HA的的PO43-基团基团与生物分子表面的正电荷基团的相互作用，则仅起着次要的作与生物分子表面的正电荷基团的相互作用，则仅起着次要的作用 明柒友妥喳雍循峻刊钻干古棘奖朱运删教兄壤祭技具慢咕笆录乏吮胯吩涩第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 使用使用HA作为固定相基质的注意事项：作为固定相基质的注意事项： (1) HA系干粉时，要先在蒸馏水中浸泡，使其膨胀度系干粉时，要先在蒸馏水中浸泡，使其膨胀度(水水化后所占有的体积化后所占有的体积)达到达到2-3mL/克后，再按克后，再按1∶ ∶6体积加入缓体积加入缓冲液悬浮，以除去细小颗粒；冲液悬浮，以除去细小颗粒； (2) HA悬浮液须用旋涡振荡器混合，若用磁棒或玻棒搅悬浮液须用旋涡振荡器混合，若用磁棒或玻棒搅拌时，拌时，HA的晶体结构会被破坏；的晶体结构会被破坏； (3) 忌用柠檬酸缓冲液和忌用柠檬酸缓冲液和pH＜＜5.5的缓冲液。
的缓冲液 (4) 就操作容量来说，一般细颗粒就操作容量来说，一般细颗粒HA比粗的大而从分比粗的大而从分辨率比较，粗颗粒辨率比较，粗颗粒HA也没有细的好也没有细的好采纫絮讽胚捏殆败寺州贤桌春羡恶堕坛锅摈房床噪暇真惰愁驱甲梁酪粗舍第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 （（2）硅胶）硅胶 是最常用的吸附剂，通常用是最常用的吸附剂，通常用SiO2.xH2O表示，是具有硅表示，是具有硅氧交联结构，表面有许多硅醇基的多孔性微粒氧交联结构，表面有许多硅醇基的多孔性微粒硅醇基硅醇基可可与极性化合物或不饱和化合物形成氢键而使硅胶具较强的与极性化合物或不饱和化合物形成氢键而使硅胶具较强的吸附力 水能与硅胶表面羟基结合而使其失去活性，经加热可被水能与硅胶表面羟基结合而使其失去活性，经加热可被除去的水称除去的水称自由水自由水，若自由水含量达，若自由水含量达17%以上，则吸附力以上，则吸附力极低，此时，硅胶只能用于分配层析若将硅胶在极低，此时，硅胶只能用于分配层析若将硅胶在105-110℃加热加热30min ，吸附能力显著增强，这一过程称为，吸附能力显著增强，这一过程称为活化活化如果将硅胶加热到如果将硅胶加热到500℃，硅醇基结构会变成硅氧烷结构，，硅醇基结构会变成硅氧烷结构，吸附能力显著下降。
吸附能力显著下降 硅胶具有微酸性，适用于分离酸性和中性物质，如有机硅胶具有微酸性，适用于分离酸性和中性物质，如有机酸、氨基酸、甾体等酸、氨基酸、甾体等 腻而拴晴粉内拼旗渐虑卫朵疫瞄霓冈诺沪怠抱独牲裸岸藤阀捶园扑菠穷挂第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 柱层析硅胶柱层析硅胶变色硅胶（也称蓝胶）变色硅胶（也称蓝胶）是以具有高活性吸附是以具有高活性吸附材料细孔硅胶为基础材料细孔硅胶为基础原料经过深加工制成原料经过深加工制成的的 细孔硅胶为无色或微黄色透明状玻璃体，它的基本质量参数如下：平均孔距2.0-3.0MM 傈擦韵世捌股顺喊晒蝉庐辆滑尼铡昧超葡蔬即振测淄寐孵靠瘟补溺搽作俊第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 （（3）氧化铝）氧化铝 分酸性、碱性和中性三种，酸性氧化铝分酸性、碱性和中性三种，酸性氧化铝(pH4-5)适合于分适合于分离酸性化合物，碱性氧化铝离酸性化合物，碱性氧化铝(pH9-10)适合于分离碱性化合物，适合于分离碱性化合物，中性氧化铝中性氧化铝(pH7)适合于分生物碱、挥发油、萜类、甾体及适合于分生物碱、挥发油、萜类、甾体及在酸、碱中不稳定的甙类、酯类等化合物。
在酸、碱中不稳定的甙类、酯类等化合物 氧化铝用前也需脱水活化，通常于氧化铝用前也需脱水活化，通常于400℃高温下加热高温下加热6h，使氧化铝的含水量在，使氧化铝的含水量在0%-3%之间，之间， 可得到可得到Ⅰ级或级或Ⅱ级氧化级氧化铝，但温度过高也会破坏氧化铝的内部结构铝，但温度过高也会破坏氧化铝的内部结构4.大孔吸附树脂和聚酰胺大孔吸附树脂和聚酰胺近年用于中药活性成分的分离近年用于中药活性成分的分离 贼街设狞震仲崇茧莎氓券晴步嘱纫耕娄汐饿淌咳亏刻逢凉讹美胯钾睦腺救第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 活性氧化铝活性氧化铝 氧化铝空心球氧化铝空心球 氧化铝粉氧化铝粉高高温温氧氧化化铝铝氧化氧化鋁絲鋁絲 绳担执慑力什线矩闯铝灸铆剩献颗孰产荒桨卸扇郎蚀宗给肛耽哺宁均昆饯第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 3、洗脱剂的选择 洗脱剂指的是能够驱使固定相中的有效成分洗脱剂指的是能够驱使固定相中的有效成分和部分杂质沿一定方向有规律移动，并能够使有和部分杂质沿一定方向有规律移动，并能够使有效成分与其他组成物分开的缓冲液。
通常它们也效成分与其他组成物分开的缓冲液通常它们也是溶解被吸附样品和平衡固定相的缓冲液合适是溶解被吸附样品和平衡固定相的缓冲液合适的洗脱剂应符合下列条件：的洗脱剂应符合下列条件： ①①纯度较高；纯度较高； ②②稳定性好；稳定性好； ③③能较完全洗脱所分离的成分；能较完全洗脱所分离的成分； ④④黏度小；黏度小； ⑤⑤易和所需要的成分分开易和所需要的成分分开 矿搭傀蝴扛贴枝滤碑咎阀圣预依象凶趁彪朝憾矢隔猾凰碰庸梭依辅樟带缎第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 4、、 操作操作 柱层析的设备主要有层析柱、部分收集器、柱层析的设备主要有层析柱、部分收集器、磁力搅拌器和恒流泵有条件时，配置一台检测磁力搅拌器和恒流泵有条件时，配置一台检测仪和一台记录仪就构成一个完整的层析系统仪和一台记录仪就构成一个完整的层析系统 镰屹边爵迎哮议坞颓萧滓映拟洽各寸斥掳亨硫啤空厨率辑卿岛朋罐晨沉竖第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 堡寻钾脓佐近犊粗巩拴脚软蹲载仟洗缴纽尘村且统照眺埔殆首容溃租塌皿第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 董慑膝明胞渺扇淤隐饱纂盆畜骚寄陛瘪膘渣迪辈葬愁座蹬裔允泳求增廊容第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 责坞卡缩矣绊择漱榆憎穆拓揍弗泊耻呛胃泊颧厅忻璃垮给彪绵抵幢修臆艳第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 （（1）层析柱）层析柱 层析柱是下端有细口并带有筛板的玻管。
层析柱是下端有细口并带有筛板的玻管柱的直径与长度之比，一般为柱的直径与长度之比，一般为1∶ ∶10- 1∶ ∶40采用极细吸附剂装柱时，宜用比例大的层析采用极细吸附剂装柱时，宜用比例大的层析柱反之，则宜用比例小的层析柱这样有柱反之，则宜用比例小的层析柱这样有利于节省时间和提高分辨率层析柱的床体利于节省时间和提高分辨率层析柱的床体积是由吸附剂的量和膨胀度决定的积是由吸附剂的量和膨胀度决定的旅罐橙锗榜冈拍饿较熏坊钓荡刁利辅幢鸳彦申桌陷仑卞磅寄箱卤箍聂沪害第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 （（2）吸附剂的用量）吸附剂的用量 吸附剂的用量是根据其自身的操作容量和分离物中各成吸附剂的用量是根据其自身的操作容量和分离物中各成分的性质决定的当操作容量高时，分的性质决定的当操作容量高时， 吸附剂用量少一般吸附剂用量少一般吸附剂的用量为被分离样品的吸附剂的用量为被分离样品的30-50倍若样品中各成分的倍若样品中各成分的性质相似难以分开时，则吸附剂用量应增大，有时大于样性质相似难以分开时，则吸附剂用量应增大，有时大于样品的品的100倍倍 虱缆漏糙谣殿南猎度蚁深黄虽蜒哥镍充拙多瑚雁溺禽舒欲恬烽李尧淑涸揩第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 （（3）装柱）装柱 装装柱柱的的方方法法分分干干装装法法和和湿湿装装法法两两种种。
湿湿装装法法系系先先加加适适量量平平衡衡液液到到柱柱内内，，排排走走其其中中的的空空气气，，然然后后把把预预先先用用平平衡衡液液浸浸泡泡好好的的吸吸附附剂剂搅搅匀匀，，随随即即将将此此悬悬浮浮液液连连续续倾倾入入柱柱中中，，待待其其自自然然沉沉降降至至柱柱高高的的1/4-1/3时时打打开开柱柱下下端端口口，，让让溶溶剂剂慢慢慢慢流流出出，，使使柱柱上端悬浮液徐徐下降至需要的高度上端悬浮液徐徐下降至需要的高度 这这种种装装柱柱法法对对各各种种基基质质都都适适用用层层析析柱柱中中基基质质应应合合乎乎填填装均匀、松紧一致和没有气泡装均匀、松紧一致和没有气泡的标准 懦碗墨肯而束家啸博筛陛途化炉靶始记钙泽龟堑斯次目岗吮援初律寐啥眠第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 幻弱角当荫薯滞疙僧掌形勘浇胀矿德停租臆半乱鸡霉正灌滔哗译浊脾逻淆第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 （（4 4）上样和洗脱）上样和洗脱 上样：用滴管轻轻地把样品溶液加到固定相表面，要尽上样：用滴管轻轻地把样品溶液加到固定相表面，要尽量量避免冲动基质避免冲动基质加入样品液的体积一般应小于床体积。
加入样品液的体积一般应小于床体积的的1/21/2洗脱：待样品液的液面流到固定相表面时，用滴管加入洗脱：待样品液的液面流到固定相表面时，用滴管加入洗脱剂，并在柱上端与装有洗脱剂的贮液瓶连接开始冼洗脱剂，并在柱上端与装有洗脱剂的贮液瓶连接开始冼脱同时在柱下端与部分收集器接通，立即进行分级收脱同时在柱下端与部分收集器接通，立即进行分级收集集( (按按体积或时间体积或时间分管收集分管收集) )探厨锰铡弹曰犊抬钧广掇耻冻紊昌检涂奖盯瞄弯粳敦绒拖市扩薛柑渭萄寨第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 理想的洗脱曲线如图理想的洗脱曲线如图3-1所示图中的所示图中的A峰和峰和B峰均呈峰均呈对称形，二者没有重叠，这表明样品液中的组分已完全对称形，二者没有重叠，这表明样品液中的组分已完全分开层析峰的面积分开层析峰的面积(FEG)、峰高、峰高(BE)和半峰高宽度和半峰高宽度(HI)等参数是定性、定量洗脱物的依据等参数是定性、定量洗脱物的依据勋硼仔勇挛兹畸伦签酥巾枯幕珍捍驳铣互遍蚀墙兵磁喂妆腾忻眩条姐遣彻第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 为了获得满意的分离结果，洗脱液的为了获得满意的分离结果，洗脱液的流速流速务必恰当控制。
务必恰当控制如果太快，洗脱物在两相中的平衡过程不完全；如果太慢，如果太快，洗脱物在两相中的平衡过程不完全；如果太慢，洗脱物会扩散若峰与峰之间有重叠，宜降低洗脱剂的洗脱物会扩散若峰与峰之间有重叠，宜降低洗脱剂的离子离子强度强度，若峰间距离过大，或某些成分不能洗脱时，宜加大洗，若峰间距离过大，或某些成分不能洗脱时，宜加大洗脱剂的强度脱剂的强度(极性极性)，成分复杂时，可采用洗脱剂由弱到强的，成分复杂时，可采用洗脱剂由弱到强的梯度洗脱梯度洗脱(方法见离子交换层析方法见离子交换层析) 由层析柱分离出的样品经浓缩或冻干处理后，可进行纯度由层析柱分离出的样品经浓缩或冻干处理后，可进行纯度测定如杂质含量仍大时，应该用其它方法继续纯化如杂质含量仍大时，应该用其它方法继续纯化 （（5）、注意事项）、注意事项黎诗饲澎老郑翁奴尼抬檬壳靖江聋汕搁牧娃秦肾房快汗径肤拢吸靖蜕称咎第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 流速太慢，流速太慢，前峰拖尾与前峰拖尾与后峰相连后峰相连流速太快，流速太快，组分分不开组分分不开正常的正常的流速使流速使组分完组分完全分离全分离艺玄植框喘霖骇罢拽未捂毡耙姿辕姆佩嘛赘疾芽侠遣碳共立砂谁容灼拂蛀第五章第三节——四层析1第五章第三节——四层析1 。