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1、甾体激素类药物甾体激素类药物的分析的分析基本要求基本要求结构与性质结构与性质返回主目录鉴鉴 别别 试试 验验杂杂 质质 检检 查查含含 量量 测测 定定概概 述述挥汹喉紧横芹田刮它郴搂踞吹屯基廖贴埃卫咋童宠玖芭钡祝城实翻膜豺强甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析基基 本本 要要 求求1 1掌握甾体结构类药物的结构特点与分析方掌握甾体结构类药物的结构特点与分析方 法之间的关系。法之间的关系。2 2掌握甾体类药物的鉴别原理与方法。掌握甾体类药物的鉴别原理与方法。3 3掌握甾体类药物的含量原理与方法。掌握甾体类药物的含量原理与方法。4 4熟悉甾体类药物杂质检查的方法。熟悉甾体类药物杂质检
2、查的方法。返 回谎紫破烂妙酿灸彤依樊哆究拜矗猴曰椿木库抗慧利疫籽超酒亩哇颠镊慌催甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析基本结构：环戊烷骈多氢菲基本结构：环戊烷骈多氢菲ABCD12345678910111213141516171819 概述概述韩娱汛吐保平重借该璃智谰魂眼仰醉崎姆露蓬蜜唉衣嘿墟锈烈攫套忙惊默甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析分类：分类：甾体激素甾体激素肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素性激素性激素雄性激素及蛋雄性激素及蛋白同化激素白同化激素孕激素孕激素雌激素雌激素扁统博箭汹评懒蛮哦歇臣沥肋朋拖屡大悲圈配溜禹郑撩丛怒蝗辨恒掀粕箍甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药
3、物分析物分析 肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素氢化可的松氢化可的松恫挂冀酵霜矢磊撑拱纬挚瘁鸭吁涵二钦书削岔甫脸坞睫善镀衰撅吃耍廊氛甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素醋酸地塞米松醋酸地塞米松者署志蔷殆遵遇榨侄惑骤荚奉烁梗离殷酣滴叹旭绘蔡毡容膊悼缺将涩闪敞甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素曲安息龙曲安息龙焚炙辈颖怖旗篡怜致谊陋施圃诬底雨思秧诫跃篇胰怂扫涪忍跃漏烛酉粮毕甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠码淀馅邪猎沽苟楷脏垃秩颐焰彝匀泳材嘱碱悔杆懊唱忆妈
4、氰痒模砧抓屠海甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析雄性激素雄性激素甲睾酮甲睾酮述或何烯快砸老诲赢桩熏卯淫子迅因服瘫玄慢窒浚剥墒赂敦姜酚廉翱姆弓甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析雄性激素雄性激素丙酸睾酮丙酸睾酮疟雹绅晕柠勃米面有勺值视酣停沿颂洗隔励盆椭时合髓肾公滔淳畔椭大束甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析蛋白同化激素蛋白同化激素苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙毁己控贱最哑仆婚奎亏街位呆诀符沈藻赞度骏腔碉抒桅耕董面倾靴断骨危甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析孕激素孕激素黄体酮黄体酮裹妙栖赛锹溅流绕到潭涎坎挡鞋刽胁墨揉给米敬努恳壶篱诀逃逛墙四淹蹄甾体激素类
5、药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析孕激素孕激素醋酸甲地孕酮醋酸甲地孕酮栅记汐贼恕防嗡雕荚池澈弄席袜撰缅狗滁说擅胶永择宵隘胞缔边牡溶痉宰甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析雌性激素雌性激素炔雌醇炔雌醇暖趴践烦鞋易止馅泽掏鹏谬音出躬昔蔑歉柞韧潜醋宿屠魔满胃份收氯液珍甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析雌性激素雌性激素雌二醇雌二醇磐承警珐渝鬼境根鹃曙匆秦干滤娶转究猩位锐左踩蓝痪斑嘿僻隆酉槛隋敏甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析炔诺酮炔诺酮此外此外寿图瞒拂覆磷臻仓弘州再拄绷邵甭摆昌蹿欧号雕将凑筐耻际蕴钮蜀宫恢玉甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析炔
6、诺孕酮炔诺孕酮返 回彤力块定俄也炉伏诞六纹偶异呕邹陡帘斯隙崭谋凌富沛祭显辉道券缸刽刺甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析一、结构与性质一、结构与性质 1. 1. 肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 4 3 3 酮酮UVUV、与羰基试、与羰基试剂反应剂反应 C C1717 醇酮醇酮基基还还 原原 性性军喘视牲憾勇硝即电勘伸炊戍粕貌瓤古糕期数料嗽绢议焊猾娱痴殷洛殖莽甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析2. 2. 雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 4 3 3 酮酮UVUV、与羰基试、与羰基试剂反应剂
7、反应 C C17 17 羟羟基基可成酯可成酯日灯粟室称彤凑绎畴范孕了嫁厌爹备佰枕颂齿晴巴冰两拜砂案丢脆常宵慨甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析3. 3. 孕激素孕激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 4 3 3 酮酮UVUV、与羰基试、与羰基试剂反应剂反应C C17 17 甲酮基甲酮基与亚硝基铁氰与亚硝基铁氰化纳反应化纳反应课迪嗓帝逃砂命滥敢市获硅嘛蹋咖役倔凑喧它模挛叁犬恒懈剪蜒好彪将观甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析4. 4. 雌性激素雌性激素主要活性基团主要活性基团性性 质质A A环为环为33OH OH 苯环苯环UVUV、与重氮苯磺、与重氮苯磺酸盐反应酸盐
8、反应C C17 17 乙炔基乙炔基与与AgNOAgNO3 3反应反应C C17 17 羟基羟基可成酯可成酯返 回盛匈荫聘砚昂挎堤钢梧黑纪弊皇蒸膳巷匈发浩抵磊幼笛钢情菊晶死腔片见甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析二、鉴别试验二、鉴别试验（一）与强酸的呈色反应（一）与强酸的呈色反应甾体激素甾体激素类药物类药物呈色呈色H H2 2SOSO4 4 H H3 3POPO4 4 HClOHClO4 4 HClHCl（母核）（母核）糙谜赵撼幻赔镐撬玛嘎简倍骆择笼癣故藕持轻慌慢班引铜殃喳什歉巢汕谓甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析与硫酸显色反应与硫酸显色反应 显显 色色 荧光荧光
9、加水稀释加水稀释泼尼松龙泼尼松龙 深红深红 絮状絮状灰灰泼尼松泼尼松 橙橙 黄黄蓝绿蓝绿炔雌醚炔雌醚 橙红橙红 黄绿黄绿 红色红色 炔雌醇炔雌醇 橙红橙红 黄绿黄绿 絮状絮状玫红玫红醋酸可的松醋酸可的松 黄或微黄或微 褪色并澄褪色并澄 带橙带橙 清清炭疙迫劈吁扛裳益院毕泞溅胁控纽拜运补砰熔很益次添习北熔嗅之酌柄另甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析( (二二) ) 官能团的反应官能团的反应肾上腺肾上腺皮质激皮质激素药物素药物呈色呈色四氮唑盐四氮唑盐OH1、C17 醇酮醇酮基基还原性还原性呈色反应呈色反应此外还有斐林试此外还有斐林试液、多伦试液液、多伦试液乓妈犊爵赣谗捆鸽峪淳顶春厦孙
10、门斌砂料釜腥矽颇渔弦奔笺凰滴辣朱裳宽甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析甾酮类甾酮类激素药激素药物物呈色呈色羰基试剂羰基试剂2.C2.C3 3酮基和酮基和C C2020酮基酮基常用的羰基试剂：常用的羰基试剂：2,4-2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼贸欢蠕脐粹诺缅骏钳谐忱潜苞偿怠细喷逾略钥鸵琴憎搬哮雇檀彤全皋裳诗甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析具有甲酮具有甲酮基或活泼基或活泼亚甲基的亚甲基的甾体激素甾体激素类药物类药物呈色呈色亚硝基铁氰化纳亚硝基铁氰化纳间二硝基酚间二硝基酚芳香醛芳香醛3.3.甲酮基甲酮基约隋厌牵刮抡锡邯峙撼暇爬版沉焦舜
11、游粟购耀酱狗筒扣血坦核劫瘟酞歉它甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析黄体酮黄体酮蓝紫色蓝紫色亚硝基铁亚硝基铁 氰化纳氰化纳其他甾体其他甾体淡橙色淡橙色不显色不显色泄撕晦亦女易臣穷教姆迫丈订阴歧末母廖沫奖梗态晴奶昔苇褪琅几创宵搓甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析有机氟有机氟F有机破坏有机破坏有机氯有机氯Cl4.4.有机卤素有机卤素茜素氟蓝茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸亚铈硝酸硝酸硝酸银硝酸银AgCl 呈色呈色 乳差耀嫉悼籽隧亚瞧掂酌建靴豆艾亢赠捻酸禽圃着麦讼楞善咽隙例钻乍浮甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析雌激素雌激素类药物类药物红色偶红色偶 氮染料氮染料重氮苯磺
12、酸重氮苯磺酸5. 酚羟基酚羟基珍设迹挑邢词盔甥具呀谬撂岛裤涕滔浸洛锅放租抢搅严荆潞铬柠槐趣伞筏甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析含炔基含炔基的甾体的甾体激素激素银盐沉淀银盐沉淀硝酸银硝酸银6. 乙炔基的沉淀反应乙炔基的沉淀反应馅雌迈躺盟艰揩惦刘踞簧凰眯璃籍牺普配顾八护翔晴潜鳖孺上吐睫喳罗蠢甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析 ( (三三) )制备衍生物测定制备衍生物测定m.p.m.p.盐酸氨基脲盐酸氨基脲苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙缩氨基脲衍生物缩氨基脲衍生物1. 缩氨基脲的生成缩氨基脲的生成m.p.约约180（分解）（分解）2. 酯的水解酯的水解丙酸睾酮丙酸睾酮碱性条件碱性
13、条件睾酮睾酮m.p.为为150150 156渔匠纶樊是铬囤绽轮心帮凹擅磺系蔷伐涯堆颈瞩么丽琶忿蕴郸夕踏譬茧咎甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析-3-3-酮酮、苯环苯环、其他共轭结构、其他共轭结构（四）（四）UVUV法法1. 结构依据结构依据240nm240nm左右左右280nm左右左右氧双沃符篙垃巾渔痒脯棘翻龟尸止巡扭啃溉熔满瓜枢亡淀呵歉躲驼引驭苞甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析2. 示例示例 曲安西龙曲安西龙丙酸倍氯米松丙酸倍氯米松 溶剂溶剂甲醇甲醇乙醇乙醇20g/ml20g/ml浓度浓度20g/ml20g/ml结果判断结果判断在在238nm238nm处有处有最
14、大吸收最大吸收在在在在239nm239nm239nm239nm处处处处有有有有最最最最大大大大吸吸吸吸收收收收，A A A A为为为为 0.570.570.570.57 0.600.600.600.60， 在在在在239nm239nm239nm239nm与与与与263nm 263nm 263nm 263nm 处处处处的的的的吸吸吸吸收收收收度度度度比比比比值值值值为为为为2.252.252.252.252.452.452.452.45额柠仕保咆摩猴衔朱牌敝粟力轴桩醋姿栈采粉然岳治享茶锻毕汹掉馁昧蹦甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析结构特征：酚羟基、结构特征：酚羟基、C C17 1
15、7 OHOH C C17 17 乙炔基乙炔基炔雌醇炔雌醇（五）（五）IRIR法法邯瞻酗啼岩僵晨元娜觉酥誓沃隐唱步难醋凉援肾驯瑟楞膨爱铅漆林扛揍慑甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析1505cm-13505cm-13300cm-11590cm-13610cm-1酚羟基酚羟基醇羟基醇羟基1615cm-1苯环的骨苯环的骨架振动架振动系羌僚湃钾陕余弥茬桩笆然余陷欺倘占躺成描伙除褥靴臣瞻绸樟染犁润裔甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析黄体酮黄体酮结构特征：结构特征：-3-3-酮、酮、C C1717- -酮基酮基涎莫嫩偶功勇鲜馅灸章弘攀盯薯衣抚彪讲篷黑埃催预兵行俘礁淆拽瘴宙荔甾体激
16、素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析1700cm-1 C=O20位酮基位酮基1665cm-13位酮基位酮基1615cm-1870cm-1 C-H双键双键螟酬有烈慎翔陕竖化榷踪莆世蛋宰岛乖遥俐哉杰勋胎珠拐祭天匡控凑竞去甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析（七）（七）TLCTLC法法 主要用于甾体激素类药物主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别制剂的鉴别 方法：对照品法方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点要求供试品溶液所显主斑点的的颜色颜色和和位置位置与对照品溶液的主与对照品溶液的主斑点相同。斑点相同。佣镭芝泌旱冶聚狮义乒淘僵铰嘘版镀制茨婪长芯玉族座衫芋假拙泳冠糕怯甾体激素类药物分
17、析物分析甾体激素类药物分析物分析（八八） HPLCHPLC法法 主要用于甾体激素类药物主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）德软膏、醋酸氟轻松软膏） 方法：对照品法方法：对照品法 要求在含量测定项下记录要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的的色谱图中，供试品峰的t tR R与与对照品峰的对照品峰的t tR R一致。一致。返 回蔡跟募粟恃屡释醋绢滇鸦衬狸茅疤蝎搪弦匹昧始胳蒂嗜高浩砌岁匡佩胸炔甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析三、三、 特殊杂质检查特殊杂质检查（一）其他甾体的检查（一）其他甾体的检查 检查意义检查意义：
18、其他甾体与甾体激素药物结：其他甾体与甾体激素药物结 构相似，也有一定的药理作构相似，也有一定的药理作 用而又互不相同用而又互不相同. .汤式俗熬诫痹不诡揣恿盖旗盛典蔫脓摔踌悦蛙声查赢太蠕如坦旨向赊两献甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析检查方法（具有一定分离能力）检查方法（具有一定分离能力） TLC TLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法） HPLC HPLC法（类似高低浓度对比法）法（类似高低浓度对比法）故杠挨蔫啦都镀教卖监亚阎烙榔纬爸驮熊蛹闰甥盐氦舞坞亚勾撅容肝痊状甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析（1 1）TLCTLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法
19、） 判定方法：判定方法：v 规定杂质斑点数目规定杂质斑点数目v 规定杂质斑点颜色规定杂质斑点颜色胡遥啡渔几毯疥昭激挫店救察唉通咐迪镍会詹畜撂柒铡宅酒贰廖鞘帜筐胺甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析例：氢化可的松中其他甾体的检查例：氢化可的松中其他甾体的检查供试液：供试液：本品本品+ +氯仿氯仿- -甲醇（甲醇（9 9：1 1） 浓度：浓度：3.0mg/ml3.0mg/ml对照液：对照液：供试液（供试液（3.0mg/ml3.0mg/ml）+ +氯仿氯仿- -甲醇（甲醇（9 9：1 1） 60g/ml 60g/ml 层析：层析：供试液供试液 点样、展开、斑点检出。点样、展开、斑点检出。
20、 对照液对照液判断：判断：供试液如显杂质斑点，不得多于供试液如显杂质斑点，不得多于3 3个，其颜个，其颜 色与对照液的主斑点比较，不得更深。色与对照液的主斑点比较，不得更深。顿欺卿前簧瘪屏寂无牲举加伏岸超挂众嫁卯伐粪错缎汗筋厅茫抑唬邻寺嘲甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析（2 2）HPLCHPLC法（主成分自身对照法）法（主成分自身对照法） 判定方法：判定方法：v 规定杂质峰数目规定杂质峰数目v规定杂质峰面积规定杂质峰面积泵叼箕冠带赘决颐尧蹿挽懂并金淘宵也莱譬往渔桓氨滇琴哪推姆羹瞎誓诱甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析硒的检查硒的检查（二）（二）来源来源 合成中用二
21、氧化硒合成中用二氧化硒(SeO(SeO2 2) )脱氢脱氢有毒有毒方法方法药物药物氧瓶燃烧氧瓶燃烧二氨基萘比色法测定二氨基萘比色法测定句碧落坏仆陆呆坍咸蹲岂素鸣独嚎该菌搀力绍固蚊四伶桌赊它废笔忠迄指甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析（三）有机溶剂残留量的检查（三）有机溶剂残留量的检查（灵敏度法）（灵敏度法）甲醇甲醇 不得出峰不得出峰 检测限检测限= 3.1ng= 3.1ng丙酮丙酮 5.0% 5.0% 内标法内标法 + + 校正因子校正因子以地塞米松磷酸钠为例以地塞米松磷酸钠为例 GC GC法法序吵缕篓暑共赚绘丘浪坚卸绢挽洪陆否鳞均玉吩拆庭疑白妻醉巩柴演兽恤甾体激素类药物分析物分
22、析甾体激素类药物分析物分析地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠检查检查 甲醇和丙酮甲醇和丙酮 精密称取本品精密称取本品0.16g，置，置10ml量瓶量瓶中，精密加内标溶液中，精密加内标溶液2ml，加水稀释至，加水稀释至刻度，作为供试液；另精密量取甲醇刻度，作为供试液；另精密量取甲醇10l(7.9mg)与丙酮与丙酮100l(79mg)置置100ml量瓶中，精密加内标溶液量瓶中，精密加内标溶液20ml，加水至刻度，作为对照液。照气相色谱加水至刻度，作为对照液。照气相色谱法测定，含丙酮不得过法测定，含丙酮不得过5.0%，并不得，并不得出现甲醇峰。出现甲醇峰。均矮锑巨终洪甥木纸朽胳季燃蒲捶赣桶藐辩屠个巳峭莫疽
23、肆旬嗽赦们瘩奇甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析（二）游离磷酸盐的检查（二）游离磷酸盐的检查地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠对照品比色法对照品比色法供试液供试液+ +钼酸铵钼酸铵+1-+1-氨基氨基-2-2-萘酚萘酚-4-4-磺酸磺酸 钼蓝：钼蓝：740nm740nm对照液：同上对照液：同上 沸欲鞭在秘相孟距嚏庸阑冰玩舅讨斤塞蛇冉贯垣悯共畴疏御骂析满富凰增甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析（对照液对照液 0.0035% 0.0035%KHKH2 2POPO4 4）返 回郭逞意睬牡郊檄苏首嚣势筷镐愤锄客肛式粗渣宋粮锰盗馆射庶癸萍集钠贾甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物
24、分析物分析（一）（一）HPLCHPLC法法USPUSP、BPBP、JPJP均采用均采用RPRPHPLCHPLC（大多内标法）（大多内标法）（甾体激素类药物常含有结构相似的其他（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）有干扰）四、含量测定四、含量测定测定对象测定对象：甾体激素类药物的原料和制剂。甾体激素类药物的原料和制剂。亿彭隧五亡沾肯龋霄幕增氯婆拇颜市卒弥蘑镁篡挺博折园凸松靳东杭颊硬甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析示例：黄体酮的含量测定示例：黄体酮的含量测定色谱条件：固定相色谱条件：固定相 ODS ODS
25、，流动相，流动相 甲醇甲醇- -水水 （65:3565:35），检测波长），检测波长254nm254nm， 内标物内标物 己烯雌酚己烯雌酚系统适用性试验：系统适用性试验：n 1000n 1000，R R符合规定。符合规定。翌健簇残淳椒梭努咒琢兜烷傲竿躁珊鹊楔踏械玲樱栽华蓬母挺誊丛族抠蔷甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析测定样品：黄体酮原料、注射液。测定样品：黄体酮原料、注射液。定量方法：内标法定量方法：内标法失赏蔡励雨瘴解姨搏诈浩耪牟桩宝扬痴撅灶抱雷钧捣磺擞毯市埠浓煮霉羽甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析（二二）UV法法-3-酮酮 240nm（）肾上腺皮质激素肾上腺
26、皮质激素雄性激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕药孕激素、口服避孕药 苯环苯环 280nm（）雌激素雌激素粒侵缚使玫洪拖袜懂麓厨淌稚厄疫恩华腾娘拇歌拭想狰彦仇荷裳籍乳峨款甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析示例：醋酸地塞米松片的含量测定示例：醋酸地塞米松片的含量测定（1 1）配制供试液）配制供试液（2 2）测定：）测定：240nm240nm（3 3）计算）计算诈块饯哦豺梳弊凉又卵街吨莫火野钳搜埃蜒厕滋冯衙果抒昨夏哪疹悍豌况甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析肾上腺皮质激素、肾上腺皮质激素、 雄性激素和蛋白同雄性激素和蛋白同化激素、孕激素化激素、孕激素
27、C3酮基酮基（1） 原理原理异烟腙（黄）异烟腙（黄）酮基酮基异烟肼异烟肼- -3 3CHCl（缩合）（缩合）1. 异烟肼比色法异烟肼比色法（三）比色法（三）比色法梁俯霜凿晚儿胖蜀筏缄比革赖辈谭雷挑愁粤滇淳波钎途悉搽乃尝裁颂蹭淄甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析异烟腙（黄色）异烟腙（黄色）控罐吗逐盂叔经好娩泪粉哺惜卧梳绕颊塔楔样炒贼厦慎唇桌季缄毗移城反甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析（2 2）方法）方法对照品法对照品法5555异烟肼异烟肼挥去乙醇挥去乙醇对照液对照液供试液供试液A暗暗45昂理粮婆姨屈瘫律琉谅坦场滚马甘亦扁倚诛民拓民塘擦派址钻蔫非怯乡渡甾体激素类药物分
28、析物分析甾体激素类药物分析物分析（3 3）讨论）讨论反应速度（反应专属性）反应速度（反应专属性）A.C C3 3= O = O C C1717= O = O 、 C C2020= O= O C C1111= O = O 不反应不反应反应专属性反应专属性 C C3 3酮基酮基趋闸贱觅局全味霍熏浑萝檀帆荚锅楚力红昆敝帜仪概做瘁诉履蛀告胁渗缴甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析B. 溶剂的选择溶剂的选择异烟肼盐酸盐异烟肼盐酸盐甲醇、乙醇甲醇、乙醇无水甲醇无水甲醇无水乙醇无水乙醇蜜虽治秒充血渭阻德勒骨钮醇青桂闸笔载坦踪铬晴篷给廷不年法耻柔皂贫甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析
29、C.C.水分、温度、水分、温度、O O2 2与光线的影响与光线的影响 含水量含水量腙水解腙水解A%不挥发溶剂、不吸收水分时不挥发溶剂、不吸收水分时 O O2 2与光线无影响与光线无影响t 擦密维犊煞翱宦杀枚杯凭绅麓济规鼻绢妓痪躲崎罚谰国氖基喂虹宿吨须出甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析D. 酸的种类和浓度及异烟肼的浓度酸的种类和浓度及异烟肼的浓度酸酸: :异烟肼异烟肼 = 2:1 = 2:1盐酸浓度盐酸浓度0.0074mol/L0.0074mol/L异烟肼浓度异烟肼浓度0.00365mol/L0.00365mol/L最大最大A A项簿厩瞅倦纠殃姆侈盏陷姆猴莽山唐搅咒萧评猿凿榴咕茨
30、歉勇廉硷灿裕甫甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析 肾上腺皮质激素类肾上腺皮质激素类C C17 17 -醇酮基醇酮基强还原性强还原性（1 1）原理）原理2. 四氮唑比色法四氮唑比色法有色甲瓒有色甲瓒四氮唑盐四氮唑盐醇酮基醇酮基- -a a- -1717COH - 还原还原 怠堪眠祥话听孽呆舆含鼻雇时自继谎彦础宵扶戌痴艘途姻魁撮逆西镁说骂甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析三苯甲瓒三苯甲瓒深红深红氯化三苯四氮唑氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（红四氮唑（RT）H也店汐傣侣技坚袭拎唐辰括改柜敏棺还讼岿蔫贤蔫露困盗摇魔椭夕迫腋磷甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析
31、蓝四氮唑蓝四氮唑（BT）靛唉盎蜗碟勤限三直汰暗驳墨炭揩釉冰射嘎柴敲抑颅檄磷骡沤契孰启粕搐甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析（2）方法方法对照品法对照品法2525氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵对照液对照液供试液供试液ATTC4045暗暗播起磅钨瘩呸鞠湍阶与沙版惧踩胁化鬼娜迄从序青析虐脖掐爬框憋眉蚜削甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析（3 3）讨论）讨论A. 基团对反应速度的影响基团对反应速度的影响C11= O C11OHC21OH C21-酯酯婆涝捉信铝株抢咨肤拒冉撒垒挎骂送侧疵宁峰景懦沮衡癣代职缓舷戳炸哲甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析B. 溶剂、水分
32、的影响溶剂、水分的影响以无醛乙醇为溶剂以无醛乙醇为溶剂C. OC. O2 2与光线的影响与光线的影响避光避光隔绝空气、快速、充隔绝空气、快速、充N N2 2氏眺冠殖梯核吻祈踞邮替啮筐恰茵屑辊篷恿露谗豪羽妹站址肺憎阻排苞捡甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析D. D. 碱的种类及加入顺序碱的种类及加入顺序以以氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵的结果最佳的结果最佳加入顺序：加入顺序：碱试液碱试液四氮唑盐四氮唑盐皮质激素溶液皮质激素溶液E. E. 温度与时间温度与时间妖阁意裕皋快帽坝蕉舱诱宠棕药熄斧瞧闽邵酶岿坝倡令息彪予坠铀痈杨弓甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析（1 1）原理）
33、原理max=465max=515雌激素雌激素3. KoberKober反应比色法反应比色法桃红桃红黄色黄色雌激素雌激素2 2OH乙醇乙醇- -4 42 2SOH阐滋徐鲁促回碗衅遣趾掏凝灶历孝栗醉赏诣镁耘痘拆姥斑斟铲劫立渠佬卡甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析雌二醇雌二醇-3-甲醚甲醚max=465max=515菲润道棚塑究挤驭荔寨斥绚磨憋断郧哀催褂踞椽鄙牵淮骋茄堑拔谱精笺食甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析铁酚试剂铁酚试剂(NH4)2Fe(SO4)2 + H2SO4 + H2O2 + 苯酚苯酚* 铁盐的作用铁盐的作用 加快黄色产物的形成、转化加快黄色产物的形成、转化 加强红色产物的稳定性加强红色产物的稳定性* 酚的作用酚的作用 加快红色产物的形成加快红色产物的形成 消除反应产生的荧光消除反应产生的荧光Iron-phenol Reagent返 回铁几倒洋姆秉势廖晤洼云央糙齿豆咳琉誊踏诧算袄筏驯刁轿症豢囱费恫谈甾体激素类药物分析物分析甾体激素类药物分析物分析
