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1、革兰染色法革兰染色法革兰染色法革兰染色法实验目的实验目的掌握革兰染色的操作技术及油镜的使用。实验原理实验原理1、细菌细胞壁结构的不同。G+菌肽聚糖层数多，结构致密，不易脱色。2、G菌等电点较低，在碱性染料中带较多负电荷，与碱性染料（结晶紫）结合力牢固，不易脱色。3、G菌中核糖核酸镁盐与媒染剂（卢戈碘液）结合力牢固，已着色的细菌不易脱色。革兰阳性菌细胞壁膜磷壁酸壁磷壁酸革兰阴性菌细胞壁Why did G+ bacteria and G- bacteria appear difference by Gram satin ?Carbolfuchsin革兰染色法意义革兰染色法意义 鉴别细菌 选择药物
2、研究细菌致病性材料与器材材料与器材菌种：菌种： 大肠杆菌，金黄色葡萄球菌 革兰氏染色液：革兰氏染色液： 结晶紫，卢戈碘液，95%乙醇，稀释石碳酸复红接种环、载玻片、酒精灯、显微镜。接种环、载玻片、酒精灯、显微镜。实验方法实验方法1、制片：、制片：n 涂片：涂片：取1环生理盐水置载玻片，取少许细菌在生理盐水里研磨成1cm直径的菌膜；n 干燥：干燥：室温自然干燥或酒精灯烘干；n 固定固定：将载玻片在外焰上快速过4次。2、染色：、染色：n 初染：结晶紫初染：结晶紫-染覆盖菌膜区，1 min，水洗；n 媒染：卢戈碘液媒染：卢戈碘液-覆盖菌膜区，1 min，水洗；n 脱色：脱色：95%酒精酒精-覆盖菌膜区，10 s ，甩干，水洗；n 复染：稀释石炭酸复红复染：稀释石炭酸复红-覆盖菌膜区，30 s，水洗； n 干燥：玻片放滤纸间以吸干玻片水分；n 镜检：菌膜区加香柏油香柏油，油镜油镜检。实验结果实验结果观察细菌的形态，颜色，判断阴阳性，排列方式等Gram positive Gram negative 实验完成后：实验完成后：1.玻片扔到消毒缸内2.还显微镜前，油镜用石油醚擦干净3.洗手后离开教室 注意事项注意事项n无菌操作n涂片不宜多n烘干时不能靠近火焰，以免菌体变形n火焰固定温度要适宜n注意控制好脱色程度n酒精灯用完药及时关闭n接种环烧灼要彻底，避免污染
