深圳九新药业深圳九新药业有限公司清洁验证清洁验证徐影徐影 2024年8月26日 讲座内容ß清洁验证目的ß法规要求ß什么要求清洁验证ß了解清洁过程ß方案内容ß标准ß样本类型ß测试方法类型与问题八月 26, 20242 清洁验证目的ß提供文件依据证明清洁程序能够有效地将产品残留和清提供文件依据证明清洁程序能够有效地将产品残留和清洁剂残留去除到不会危害到病人安全的水平洁剂残留去除到不会危害到病人安全的水平 3 法规要求ß中国新版GMP:ß第八十四条 应当按照详细规定的操作规程清洁生产设备 生产设备清洁的操作规程应当规定具体而完整的清洁方法、清洁用设备或工具、清洁剂的名称和配制方法、去除前一批次标识的方法、保护已清洁设备在使用前免受污染的方法、已清洁设备最长的保存时限、使用前检查设备清洁状况的方法，使操作者能 以 可 重 现 的 、 有 效 的 方 式 对 各 类 设 备 进 行 清 洁 如需拆装设备，还应当规定设备拆装的顺序和方法；如需对设备消毒或灭菌，还应当规定消毒或灭菌的具体方法、消毒剂的名称和配制方法必要时，还应当规定设备生产结束至清洁前所允许的最长间隔时限八月 26, 20244 法规要求ß第一百四十三条 清洁方法应当经过验证，证实其清洁的效果，以有效防止污染和交叉污染。
清洁验证应当综合考虑设备使用情况、所使用的清洁剂和消毒剂、取样方法和位置以及相应的取样回收率、残留物的性质和限度、残留物检验方法的灵敏度等因素八月 26, 20245 欧盟法规ß清洁验证ß12.70 清洁程序通常应当经过验证一般来说,清洁验证应当针对那些如果污染或偶然带入异物对原料药质量产生最大威胁情况或工艺步骤例如,在早期的产中,设备清洁程序可能不需验证,在此遗留物可以在后续的精制过程中除去ß12.71 清洁程序的验证应当反映出设备实际使用的模式如果有不同的原料药或中间体在同一设备中制造,并且用相同的方式对设备进行清洁,应当选用一种具有代表性的中间体或原料药来进行清洁验证这种选择应当跟据溶解性以及不同的清洁难度,药效,毒性和稳定性计算出残留限度来进行八月 26, 20246 ß12.72 清洁验证方案中应当对所要清洁的设备,程序,物料,可接受的清洁水平,监测和控制的参数,以及分析方法进行描述该方案同样应当阐明得到样品的类型,以及如何进行取样和标识ß12.73 取样应当包括擦拭法,冲洗法或其他可用的方法(即,直接萃取),如果可能,同时检测可溶解或不可溶解的残留所使用的取样方法应当能够定量测量清洁后在设备表面残留水平。
在由于设备的设计和/或工艺限制(即,软管的内表面,导管,小口反应器或处理毒性物料,以及小的复杂,如微粉机和微型流化床),产品接触表面不容易接触的时候,设备擦拭取样可能不切实际八月 26, 20247 ß12.74 所使用的分析方法应当经过验证,具有检测残留物或污染物的灵敏性每一种分析方法的检测限度应当具有足够的灵敏度来检测已经制订的残留或污染接受水平应当制订该方法的回收率水平残留限度应当具有实用性,可操作性,可证实性,以及最有害的残留限度可以制订在已知的原料药或其最有害成份的药理学,毒理学,或生理学活性基础上ß12.75 对于需要降低原料药中的的总微生物数或内毒素的工艺,或担心此类污染的其它工艺(如,用于生产无菌产品的非无菌原料药),设备清洁/消毒的研究应当着眼于微生物和内毒素污染八月 26, 20248 ß12.76 进行验证后,应当在适当的间隔对清洁程序进行监测,以便保证这些程序在日常生产中有效如果可行,应当用分析检验和目测检查来监测设备的清洁程度允许以目测的方法测定用其他取样和/或分析方法不能测定的小区域大致的污染程度ß12.8 分析方法验证ß12.80 分析方法应当经过验证,除非所采用的是相关药典或其它公认参照的标准方法。
八月 26, 20249 FDA的要求Ø 在FDA的GMP211.67章节中规定了设备清洁验证的要求：u 建立书面标准操作程序（SOP），其中必须详细规定设难关备各部件的清洗过程；u 必须建立书面的清洗方法验证通则；u 清洗方法验证通则应规定执行验证的负责人、批准验证工作的负责人、验证标准（合格标准）、再验证的时间；u 对各生产系统或设备部件进行清洗验证之前，应制定专一特定的书面验证计划，其中应规定取样规程、分析方法（包括分析方法的灵敏度） FDA的要求u按上述验证计划进行验证工作，记录验证结果u 做出最终的验证报告，报告应由有关管理人员批准，并说明该清洗方法是否有效 八月 26, 202412什么需要验证一般来说只有对设备与产品接触的表面进行清洁的程序需要进行验证对于产物可能转移到的非接触部件，如密封，法兰，搅拌轴，烘箱的风扇，加热装置等，应给予考虑一般来说在连续批次生产的情况下，无需在每一批次完成后进行清洁但是清洁间隔与方法应该被确立 PICS JUL 2004 八月 26, 202413什么需要验证: FDA“当清洁只用于同一产品的不同批次生产中（或在原料生产中同一中间体的不同批）时，公司只需要满足设备的“看的见的清洁”即可。
这种批次间清洁工艺无需验证.”FDA 清洁工艺的验证 1993年7月 清洁验证的失败案例ß1992年，FDA对一家进口原料厂发出警告，该厂使用同一台设备生产甾体及非甾体类物质，FDA认为清洁验证不当，只对前一种产品残留做了验证，但用TLC法对后一产品淋洗水检测发现了副产物及降解物的证据八月 26, 202414 监管要求最终的目标ß降低交叉污染的风险ß使得产品受污染报废的可能性最小ß患者的负面效应可能性最小ß降低产品投诉的发生率ß降低卫生部门或其他机构检查不合格的风险ß延长设备的使用寿命八月 26, 202415 化学污染化学污染 ，如活性成分、产品、清洁剂残留，如活性成分、产品、清洁剂残留污染类别16 物理污染，如机械杂质、外来异物物理污染，如机械杂质、外来异物污染类别17 ß微生物污染微生物污染Ø特别注意那些具有促生长和含有大量水分的物料特别注意那些具有促生长和含有大量水分的物料污染类别18 19污染控制厂房：温湿度、流型、换气次数及微生物监测厂房：温湿度、流型、换气次数及微生物监测 设备：设计和材质的可清洁性、规定的清洁和维修规程设备：设计和材质的可清洁性、规定的清洁和维修规程•人员：更衣、清洁和人流人员：更衣、清洁和人流•物料和废物流向物料和废物流向 20清洁等级不同产品的批次之间不同产品的批次之间Ø Product residue 产品残留产品残留Ø Cleaning agents residue, if applicable 清洁剂残留（如适用）清洁剂残留（如适用） 同一产品的批次之间同一产品的批次之间Ø Cleaning agents residue, if applicable 清洁剂残留（如适用）清洁剂残留（如适用）Ø Degradants 降解物降解物 清洗方法ß手工清洗*由操作人员用檫洗或用高压软管进行的清洗ß自动清洗*由自动控制对容器及管道进行高压冲洗直至干燥的清洗ß半自动清洗*结合以上两者的清洗过程八月 26, 202421 清洁需注意的要点清洁速率同流速的关系清洁速率流速～～层流湍流湍流公式：NRe=ρVD/μ其中：V：流速D：特征距离（管子/管道直径）ρ ：流体密度μ ：动态流体粘度管子或管道：如果NRe≤2000如果NRe≥4000层流湍流 清洁需注意的要点Ø 湍流的清洁速率大大大于层流的清洁速率；Ø盲管和垂直管道中的清洁液的速率要大于湍流所需的速率，通常要求大于1.52米/秒（5英寸/秒）；Ø在设备设计时需要考虑盲管的清洁问题，通常要求L/D<2.0Ø 喷淋球的覆盖率检查；溶液分布在喷淋球上部的25%-30%区域ØCIP清洗中避免设备底部的积水；Ø有效、可靠和反复的清洁要求湍流。
24时间限度时间限度•生产完成至清洁开始生产完成至清洁开始•清洁完成至干燥开始清洁完成至干燥开始• 同一产品的生产周期中批次之间的清洁频次同一产品的生产周期中批次之间的清洁频次• 对未用的、已清洁的设备进行额外清洁对未用的、已清洁的设备进行额外清洁 清洁规程的制定Ø 制定SOP是清洁验证的先决条件；Ø通常参照设备的说明书制定详细的规程，规定每一台设备的清洁程序，保证每个操作人员都能以可重复的方式对其清洗，并获得相同的清洁效果 ß清洁规程应考虑以下因素：清洁规程应考虑以下因素：Ø设备的设计，如材质、可拆卸程度、难清洗的位置等设备的设计，如材质、可拆卸程度、难清洗的位置等26清洁规程 清洁规程应考虑以下因素：清洁规程应考虑以下因素：Ø生产工艺：待去除残留物的特性（如油性、脂肪性、水溶性等）生产工艺：待去除残留物的特性（如油性、脂肪性、水溶性等）27清洁规程 l制造产品的类型和数目l产品处方/材料的特性l评价清洁过程的潜在问题 ß清洁规程应考虑以下因素：清洁规程应考虑以下因素：Ø操作人员：人工清洗或清洗操作人员：人工清洗或清洗29清洁规程 ß物料和工具物料和工具Ø物料和工具的控制物料和工具的控制Ø清洁剂的选择清洁剂的选择ß变更控制规程应对任何的清洗物料和清洗工具的改变进行评估变更控制规程应对任何的清洗物料和清洗工具的改变进行评估30清洁规程 SOP 内容• 准备程序• 文档记录程序•••••拆卸程序清洁程序完成程序检查程序干燥程序• 打包/覆盖/储藏程序• 清洁后文档记录程序• 设备清洁失效程序• 使用前检查程序•准备空间，工具与清洁剂•状态标签，检查单，清洁与使用记录•••••Exploded diagrams or digital photos或数码照片Step-Wise, Tools, TACT, Measures工具，篮筐，推车的清洁方法与工具，检查部位环境/控制•材料，处理，部位•再次标签，清洁与使用记录•Dating Requirements, 再清洁要求•失效验证，包裹/封盖的完整性第4模块 – SOP制定第28页 清洁验证程序ß包括以下内容包括以下内容:Ø策略策略Ø可接受的残留限度可接受的残留限度Ø 计划及执行计划及执行32 清洁验证策略ß包括以下步骤进行选择：包括以下步骤进行选择：Ø 最坏条件产品最坏条件产品Ø 最坏条件设备最坏条件设备Ø 定义污染限度的科学依据定义污染限度的科学依据Ø 取样方法取样方法Ø 分析方法分析方法33 最坏条件产品--目标化合物选择一般药品都由活性成分和辅料组成。
对于接触多个产品的共同设备，所有这些残留物都是必须清洁干净的，在清洁验证中不必为所有残留物都制定限度标准并一一检测通常清洁的过程是个溶解的过程从各组分中确定最难清洁（溶解）的物质，以此作为参照物质相对于辅料，人们最更关注活性成分的残留，因为它可能直接影响下批产品的质量、疗效和安全性 Ø 毒性Ø在清洗时的溶解度Ø已知难于清洗，如对设备表面材质有一定附着力Ø包含色料、芳香剂或矫味剂的产品Ø设备的生产量（生产频率高的产品相应的清洗频率也高）Ø清洗过程中如果使用清洗剂，则其残留物也应视为标记物最坏条件产品的选择 36最坏条件产品的选择ß基于以下条件：基于以下条件：Ø Pharmacological activity 药理药理Ø Solubility 溶解性溶解性Ø Concentration 浓度浓度Ø Analytical detection 分析检测限度分析检测限度根据产品的相似性进行分组，如活性成分相同但规格不同，或根据产品的相似性进行分组，如活性成分相同但规格不同，或活性成分相同但辅料不同活性成分相同但辅料不同 ß类似的毒性类似的毒性ß类似的处方类似的处方ß在清洗溶剂中的溶解特性在清洗溶剂中的溶解特性ß类似的管理方法和危险水平类似的管理方法和危险水平ß产品在类似的设备上进行生产并采用相同的清洁程序产品在类似的设备上进行生产并采用相同的清洁程序 目标化合物选择产品名称毒 性溶解性已知的清洗问题颜色香味与味道产 量A10ug/cm3易溶无无10%B40ug/cm3溶解无无20%C50ug/cm3溶解无无50%D50ug/cm3微溶有有20% 目标化合物选择依据Ø 从活性成分的毒性来讲，A的毒性最大，其他依次为B，C，DØ 从溶解性方面来讲，D产品属于微溶Ø除产品D外，其他均没有已知的清洗问题Ø除产品D外，其他产品均没有颜色及气味的问题Ø基于上核定帅，产品A与产品D确定为清洗验证的标记产品 39最坏条件设备的选择ß 如果设备具备以下条件，可进行分组：如果设备具备以下条件，可进行分组：p完全相同，可互换，并采用相同的清洁规程完全相同，可互换，并采用相同的清洁规程Ø多个活性成分共同接触Ø某个产品/活性成分单独使用Ø哪些设备是包括在清洁验证中的，哪些设备是不包括在清洁验证中的p操操作作原原理理相相同同，，清清洁洁规规程程相相同同，，可可是是产产品品的的接接触触表表面面积积不不同同（（产品接触面积以计算残留限度的接受标准。
），但可互换，但可互换Ø产品接触的设备----直接接触产品的设备，例如：溶液罐、储存桶对于产品接触设备的无效清洁可能造成产品间的交叉污染； Ø非产品接触的设备----在生产工艺中涉及，但没有和产品直接接触的设备，例如：封闭设备的外表面对于非产品接触设备的无效清洁一般不会造成产品间的交叉污染；Ø非直接或偶然接触产品的设备---在生产工艺中涉及，没有和产品直接接触，但有可能污染产品的设备，例如：冷冻干燥仪或盘式干燥仪的内表面、机械监护装置的内部，还有某些情况下地面、墙面和天花板对于非直接产品接触设备的无效清洁，有可能造成产品间的交叉污染Ø通常清洁验证包括产品接触的设备，不包括非产品接触的设备，非直接产品接触的设备是否包括在内依实际情况而定一次性单用途设备（如硅胶管）可不包括在清洁验证中 八月 26, 202441难清洗位置 残余物标准: PICS“在后续产品的日最大剂量中，任何其他产品不得超过其正常有效剂量0.1%的”“任何产品中其他产品不得超过10ppm” ISPE-CCPIE CHINA CONFERENCE 2009残余物标准: PICS“.在完成清洁程序后，设备不得有任何肉眼可见残余物。
对于特定的致敏成分，青霉素，头孢菌素或强效类固醇激素与细胞毒药物，其限定值应低于目前最佳分析方法的检测值”“实践中，这标志着这些产品是由特定的专门工厂生产的” 残余物标准: FDA“FDA并非试图为决定清洁程序的验证设立接受标准或方法业届代表在文献或讲座内提出了某些限定值，包括分析检测水平如10ppm”“生物学活性水平，如正常治疗剂量的1/1000”“感官感知水平，如无肉眼可见残余物 ”FDA 清洁工艺验证检查指南 1993 年7月 45定义污染限度的科学依据选择ß基于以下数据：基于以下数据：Ø毒理学数据毒理学数据Ø药理剂量药理剂量Ø绝对限度绝对限度Ø污染物浓度的污染物浓度的log减少度减少度 污染限度和接受标准Ø （1）目测洁净，干燥&无嗅限度在每个清洗验证的方案中都必须包括该接受限度；在每次清洗完成后都必须进行检查并对检查结果进行记录目测检查时应包括地面、墙面和天花板等；应该作为清洗验证接受限度的第一个接受标准Ø注意：在进行无嗅检查时考虑到产品的安全问题 限度和接受标准 Ø（2）化学残留可接受限度浓度限度：十万分之一（10ppm）在下一产品中的残留物数量级别应不超过十万分之一（10ppm）最高允许十万分之一残留源于食品法规，食品法规允许某一有害物质作为食物链存于动物和家禽中存在的水平。
计算接受残留限度需考虑的要素影响因素最小日治疗剂量/毒性溶解度批量最大日治疗剂量接触产品的面界难清洗位置取样面界回收率清洗前产品√√清洗后产品√√设备√√取样方法√√清洗剂√√ 八月 26, 202449 八月 26, 202450 八月 26, 202451 ß参考资料：当代结构药物全集（上）ßThe Complete Works of Contemporary Structure-based Drug (1st Volume)ß 半数致死量数据来自化学品安全技术说明书（MSDS）数据库八月 26, 202452 Ø 设备表面积的确定：1、应测定每个设备的产品接触面积，以计算残留限度的接受标准；2、产品接触面积测定的准确度应具有实际意义，不必绝对地精确可将复杂设备转化成基本几何图形以便于计算和测量；3、测量的原始记录和计算将作为原始数据进行保存 附录1 产品列表八月 26, 202454编号编号产品产品水溶解度水溶解度MTDD(mg)LDSD(mg)LD50 (g/kg)最小批量最小批量Min.Batch Size (kg)大鼠小鼠1ASlightly soluble40006000>20>200.52BFreely soluble22501000010>100.53CFreely soluble10004000>10>100.254DFreely soluble50040003.84.70.55EFreely soluble2000120004.263.840.756FFreely soluble20006000>20>2017GFreely soluble100060002.763.900.5 八月 26, 202455选择MTDD的最小值，以及批量与LDSD比值的最小值选择LD50的最小值，以及批量与LDSD比值的最小值选择最小的批量值 ß最终选择：0.16八月 26, 202456 清洁剂的限定值• 清洁剂的组分不应该具有治疗作用• 为了确定清洁剂的安全性，各家公司经常采用唯一可知的清洁力活力的指标-LD50• LD50 根据动物模型的不同 (e.g., 大鼠, 几内亚猪,小鼠等) 以及给药方法的不同 (e.g., 口服, 外用,静脉注射, i.p., 皮下等）• 由于我们希望保证残余量对于使用下一剂药物的患者是安全的，我们不能直接引用LD50的数据。
• 因而大部分公司首先计算ADI（可接受的每日摄入）或NOEL（无观察效应水平）这两个值• NOEL或ADI公式的形式与药理学特性限定值的形式相同 清洁剂的限定值NOEL，根据大鼠口服给药的LD50得出的典型公式为：NOEL = LD50 mg/kg x (5.6 x 10-4) x 70 kg转换因子与安全因子将大鼠口服的 LD50 转换为人体的NOEL注意: 安全因子可以防范: 个体反应差异, 因剂量 / 应答曲线变异而可能造成的最坏情况，以及使得未观察到的效应被外显出来平均成人体重 注意: 可能更安全的方法是采用儿童体重或不考虑，尽管前文所述的安全因子被更多认为已经可以弥补这一问题Ref: Doursan and Stara, J. Regulatory Toxicology and Pharmacology , 3, 224-238, 1983.Other Refs: D.W. Layton, et al., J. Regulatory Toxicology and Pharmacology , 7, 96 1987.Doursan, Toxicology , Vol. 1, No. 1, pp. 35-48, 1986.Doursan, Toxicology and Industrial Health , Vol. 4, No. 4, pp. 23-33, 1985. 清洁剂的限定值采用NOEL的全部公式为：Resultx Rinse or Diluent VolumeSurface Areax Recovery (decimal)LD50 mg/kg x (5.6 x 10-4) x 70 kg x BatchNP1xSizexDoseNPSFopt>Sampled• 大部分公司仍执行1/1000的安全因子；就像基于治疗剂量的公式一样，尽管计算出的值是“可接受”的，这并不意味着你希望下一名患者摄入该剂量。
• 采用的安全因子的数值经常会由公司慎重决定，并且取决于生产环境的危险因素，可能受到污染的产品的风险以及残留物的性质第6模块 – 限定值第 34页 Ø清洁剂残留可接受限度清洁剂残留的可接受标准一般对最终淋洗水取样分析清洁剂和溶剂的总残留，瞬息的分析方法如下：•TOC（总有机碳）≤10×10-6• 紫外分光光度法吸光度≤0.05，波长范围210-360nm限度和接受标准 八月 26, 202461Ø 微生物残留可接受标准 清洗的微生物验证应该和清洗的化学验证同步进行；棉签擦拭法：洗出液取样或压痕法采样；淋洗液法：取定量的淋洗液过滤后，取滤膜培养 应该考虑何种微生物残余物，何时考虑?如果您的最终产品，根据产品规格，需要限制生物负荷与内毒素，清洁验证则必须包括这两项• 生物负荷包括细菌，酵母菌与霉菌它们可以在水系统与环境中出现，可能由原材料，设备与人员产生• 内毒素是一种脂多糖，见于葛兰氏阴性细菌的细胞膜；当细菌死亡时释放，进入血液循环时会引起患者发热第6模块 – 限定值第 36页 微生物与内毒素污染的特征是什么?• 生物负荷是由活体生物造成的，内毒素由活体系统产生，所以致热源负荷与生物负荷水平主要取决于环境条件• 设备是干燥，覆盖并密闭的吗?• 环境是否为无菌环境或至少清洁生产区域以减少活体/非活体微粒水平，并对温度与相对湿度进行控制？（对于生产与清洁设备储存都适用）• 环境条件由于四季更替会产生多大的变化？• 就像环境监测一样，生物负荷与致热源评估不是一次性行为• 推荐做法是，应该对生物与内毒素负荷水平进行监测，设定警报与行动值，并且在每一次超过限定值后进行适当的纠正行动。
第6模块 – 限定值第 37页 微生物与内毒素污染的预防• 可以采用某些方法以减少残余物，方法包括：去除法（如冲洗，擦洗）与杀灭/灭活法（如化学处理，干热）• 杀灭微生物污染可能造成内毒素污染的可能性，除非杀灭方法同时也是一种去内毒素工艺（如干热）• 清洁与消毒不能在一个步骤中完成：• 残余物会影响化学制剂的穿透• 冲洗，例如常用的清洁后冲洗可能引入额外的生物负荷• 用于消毒的制剂往往是弱清洁剂，而清洁剂又不适于用于残余物消毒第模块 – 限定值第 38页 65取样方法的选择 有以下所知的三种取样方法：有以下所知的三种取样方法：ØSwabbing Method 棉签擦拭法棉签擦拭法ØRinse Sampling Method 冲淋取样法冲淋取样法ØPlacebo method 模拟法模拟法 66棉签擦拭法ß优点：优点：Ø 直接对表面污染进行评估直接对表面污染进行评估Ø能将不溶物或难溶物从设备表面实际去除能将不溶物或难溶物从设备表面实际去除Ø在在最最后后数数据据评评价价中中能能够够包包括括可可接接触触但但难难于于清清洗洗部部位的数据位的数据 67棉签擦拭法 缺点：缺点：Ø不易在大型设备上实施不易在大型设备上实施Ø从小面积获得的结果外推至设备的整个产品接触表面从小面积获得的结果外推至设备的整个产品接触表面Ø 不易对难接近的区域进行取样不易对难接近的区域进行取样 68棉签擦拭法ß需考虑以下因素：需考虑以下因素：ØSwab characterization, e.g. absorption capacity and interference 棉签特性，如溶剂吸收能力、干扰性棉签特性，如溶剂吸收能力、干扰性ØSwab recovery, e.g. ≥ 70% 棉签回收率，如棉签回收率，如≥ 70%ØSampling locations and number of samples 取样位置和取样数量取样位置和取样数量ØSample surface area, e.g. 25 – 100cm2 取样面积，如取样面积，如25 ~100cm2ØSwabbing technique, e.g. direction and numbers of strokes 取样方法，如擦拭方向和次数取样方法，如擦拭方向和次数ØSaturation and extraction solvents 浸湿和萃取溶剂浸湿和萃取溶剂 69冲淋取样法ßAdvantages: 优点：优点：Ø Ease of sampling 易于取样易于取样Ø Evaluation of entire product contact surface 对整个产品接触表面进行评价对整个产品接触表面进行评价Ø Evaluation of inaccessible equipments or ones that cannot be easily or routinely disassembled 可可对对难难以以接接近近、、不不易易拆拆卸卸或或日日常常生生产产中中不不拆拆卸卸的设备进行评价的设备进行评价 70ßDisadvantages: 缺点：缺点：Ø No physical removal of contaminant 不会实际去除污染物不会实际去除污染物Ø Rinsing solvent may not reach inaccessible parts 冲淋溶剂或许达不到一些难以触及的部件冲淋溶剂或许达不到一些难以触及的部件Ø Use of organic solvents for water insoluble materials 对一些不溶于水的物质使用有机溶剂进行溶解对一些不溶于水的物质使用有机溶剂进行溶解冲淋取样法 71模拟法ß设设备备清清洁洁干干燥燥后后，，在在该该设设备备内内进进行行模模拟拟物物料料处处理理，，然然后后取取一一部部份进行测试份进行测试ßDiscouraged vigorously by regulatory authorities due to：： 法规部门强力不推荐使用此法，原因如下：法规部门强力不推荐使用此法，原因如下：ØNo means to ensure residues are uniformly distributed throughout the equipment 无人能确保残留均匀地遗留在设备整个表面无人能确保残留均匀地遗留在设备整个表面ØResidue of larger particle size not uniformly dispersed in placebo 较大颗粒的残留不能均匀地分散到模拟物料中较大颗粒的残留不能均匀地分散到模拟物料中 72分析方法的选择ßBasic requirements: 具备以下基本要求：具备以下基本要求：ØAppropriate sensitivity to the calculated limit 适宜的灵敏度，可检测到计算出的限度适宜的灵敏度，可检测到计算出的限度ØPractical and rapid, as much as possible use instrumentation existing in company 实用、快速，尽量使用公司现有的仪器实用、快速，尽量使用公司现有的仪器ØBe validated in accordance with ICH, USP, EP and Chinese Pharmacopoeia requirements 按照按照ICH、美国药典、欧洲药典和中国药典进行了验证、美国药典、欧洲药典和中国药典进行了验证ØInclude a recovery study to challenge sampling and testing method 应包括回收率测试，该测试对取样方法和测试方法进行了挑战应包括回收率测试，该测试对取样方法和测试方法进行了挑战 73分析方法的选择ßSpecific Methods: 特定法：特定法：ØChromatographic method – Highly specific, sensitive and quantitative (e.g. LC/MS, GC/MS, HPLC) 色色谱谱法法：：具具有有高高专专属属性性、、高高灵灵敏敏度度，，并并且且可可定定量量（（如如液液质质联联用仪、气质联用仪、液相色谱仪）用仪、气质联用仪、液相色谱仪）ØThin layer chromatography (TLC) – Highly specific, moderately sensitive, semiquantitative 薄层色谱法：具有高专属性、适度的灵敏性，可半定量薄层色谱法：具有高专属性、适度的灵敏性，可半定量ØSpecific ion meter – Quantitative, only be used if active ingredient alone posses a specific ion 特特定定离离子子计计：：可可定定量量，，但但只只有有当当活活性性成成分分本本身身拥拥有有一一个个特特定定离子时才能采用离子时才能采用 74分析方法的选择ßNonspecific Methods: 非特定法：非特定法：ØSpectrophotometric method in visible, infrared or UV ranges 分光光度法（可见区、红外区或紫外区）分光光度法（可见区、红外区或紫外区）ØTotal organic carbon (TOC) 总有机碳总有机碳ØOther methods, e.g. pH, conductivity 其他方法，如酸度、电导率其他方法，如酸度、电导率 75分析方法的验证ßShould demonstrate the followings: 应证实以下要素：应证实以下要素：Ø Accuracy (recovery) and range 准确度（回收率）和范围准确度（回收率）和范围Ø Precision 精确度精确度Ø Linearity 线性线性 Ø Selectivity选择性选择性 Ø Detection limit 检测限度检测限度Ø Quantitation limit 定量限度定量限度Ø Stability of standard and sample solution 标准溶液和样品溶液的稳定性标准溶液和样品溶液的稳定性 分析方法的验证Ø 通常清洁分析方法验证包括取样方法验证和检验方法验证Ø棉签取样方法的验证：•取样过程需经过验证，通过回收率试验验证取样过程的回收率和重现性。
通常取样回收率和检验方法回收率结合进行，总回收率一般（企业可以根据实际情况确定）不低于70%，多次取样回收率的相对标准偏差应不大于20%；•棉签取样过程的验证实际上是对取样棉签、溶剂的选择、取样人员操作、残留物转移到取样棉签、样品溶出（萃取）过程的全面考察 棉签取样方法的验证（续）Ø 验证方法如下：•1）准备一块与设备表面材质相同的板材，如平整光洁的316L不锈钢板；•2）在钢板上划出100㎜×100㎜的区域；•3）将5倍限度量的待检测物溶液，定量装入校验的微量注射器；•4）将其溶液尽量均匀地涂布在100㎜×100㎜的区域内；•5）自然干燥或用电吹风温和地吹干不锈钢板；•6）用选定的擦拭溶剂润湿擦拭棉签，按下图所示进行擦拭取样；•7）重复以上规程3次； 棉签取样方法的验证（续）• 8）将擦拭棉签分别放入棉签管中，加入预定溶剂5ml，超声；•9）用经验证的检验方法检验，计算回收率和回收率的RSD•下图为棉签擦拭取样方法：第一步第二步 八月 26, 202479 淋洗液取样方法的验证Ø 通常淋洗法限度检查不需做回收率验证：定量检查应做回收率验证，可以利用淋洗溶剂冲洗已知量（在限度附近）的分析物确定回收率，回收率通常应不低于95%；Ø淋洗的取样方法为根据淋洗水流经设备的线路，选择淋洗线路相对最下游的一个或几个排水口为取样口。
分别按照微生物检验样品和化学检验品的取样规程收集清洁程序最后一步淋洗即将结束时的水样；Ø淋洗法样品可对冲洗液直接检测，也可对冲洗液做稀释后检测；无论直接检测还是稀释检测都应在接到样品后首先将样品同空白溶剂做视觉检查，确定是否有颜色差异和异物存在；如果有述现象发生，可直接判定样品不合格 取样方法和取样点的确认Ø （2）取样点的确认Ø通常可能擦拭设备的全部表面，因此，应该选择设备的最差区域作为取样点这些区域应在清洁难度和残留水平方面代表着对清洁规程最大程度的挑战，例如：料斗的底部、桨拌桨叶底部和阀门的周围Ø如果进行微生物取样，取样计划应包括微生物的可能最差区域，例如：较难靠近的地方以及可收集水的排水区域微生物和化学取样应在不同区域进行，测试方案中应包括设备及其取样点的描述或图表 分析方法的验证Ø 通常清洗分析方法分为限度检查和定量检查，不同的检查方法验证的参数也不相同Ø（1）回收率•回收率的分析方法验证已在取样方法的验证中详细描述，不在此赘述Ø（2）精密度•精密度系指在规定的条件下，从同一个均匀样品中，经多次取样测定所得结果之间的接近程度通常用相对标准偏差（RSD）来表示定量检查的RSD应不大于10%。
•淋洗法和棉签法用于限度检查通常不需要做精密度实验 分析方法的验证Ø （3）线性/范围•线性系指在设计的范围内，测定结果与试样中被测物浓度呈正比关系的程度•范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间•定量检查应至少测试5个浓度范围并且包含清洁的最低限和最高限度，线性的相关系数应不低于0.98%；浓度范围应达到残留物限度的50%-150%•淋洗法和棉签法用于限度检查时不需做线性/范围验证 分析方法的验证Ø （4）检测限和定量限•检测限系指在确定的试验条件下，试样中被测物能被检测出的最小量；定量限系指在确定的试验条件下，试样中被测物能被准确测定的最小量，其测定结果应具有一定准确度和精密度•淋洗法和棉签法用于限度检查只需做检测限实验•通常检测限是指信噪比为3：1时被分析物的浓度，定量限是指信噪比为10：1时被分析物的浓度 分析方法的验证Ø （5）专属性•专属性系指在其他成分（如：杂质、降解产物、相似物等）存在下，分析方法能准确测出被测物的特性•评价空白溶剂、分析系统、棉签本身是否有干扰•通常采用的验证方法为：进针空白溶剂评价溶剂干扰、进样量为0评价系统干扰、进针棉签浸泡的溶剂评价棉签干扰。
Ø（6）样品溶液稳定性•通常样品室温或5℃冰箱冷藏放置24-72小时，测定结果应不低于原值的90% 分析方法的验证Ø （7）系统适用性•定量检查测定时，应制备2份对照品，对照品一致性检查应为不超过5%；对照品的RSD不应超过10%Ø（8）限度检查时溶液的进样顺序•限度检查测定时测定顺序依次为空白溶剂、样品、对照品•下面是限度检查和定量检查时所需验证的参数： 限度检查和定量检查时所需验证的参数 限度检查法定量检查法专属性√√精密度×√线性/范围×√回收率√√检测限和定量限检测限验证定量限验证样品溶液的稳定性√√系统适应性√（1份标准品）√（2份标准品）检查方法参数 88计划及执行•一般来说，以下部门参与清洁验证：一般来说，以下部门参与清洁验证：Ø Production 生产部生产部Ø Engineering 工程部工程部Ø Research & Development 研发人员研发人员 Ø Validation 验证人员验证人员Ø Quality Control 质量控制质量控制Ø Quality Assurance 质量保证质量保证 89计划及执行•应编写一个综合的清洁验证主计划，其至少包括以下内容：应编写一个综合的清洁验证主计划，其至少包括以下内容：Ø Purpose 目的目的 Ø Overview of site/facility/area 厂房厂房/设施设施/区域的概括描述区域的概括描述Ø Overview of manufacturing processes 生产工艺概括描述生产工艺概括描述Ø Overview of cleaning methods 清洁方法的概括描述清洁方法的概括描述Ø Responsibilities of various departments 各部门的职责各部门的职责Ø Cleaning validation policy 清洁验证的策略清洁验证的策略 90计划及执行•清洁验证主计划应至少包括以下内容（续）：清洁验证主计划应至少包括以下内容（续）：Ø List of equipments and products 设备和产品明显表设备和产品明显表Ø Product and equipment group, if applicable 产品和设备组（如适用）产品和设备组（如适用）Ø Worst-case product and equipment, if applicable 最坏条件产品和设备（如适用）最坏条件产品和设备（如适用）Ø Calculation of contamination limit 污染限度计算污染限度计算Ø Execution planning 执行计划执行计划 91计划及执行•应应对对需需要要验验证证的的每每个个设设备备编编写写一一个个清清洁洁验验证证方方案案，，主主要要内内容容如如下：下：Ø Purpose and scope 目的和范围目的和范围Ø Responsibility 责任责任Ø Equipment description 设备描述设备描述Ø Cleaning procedure 清洁程序清洁程序。
1、生产结束至开始清洁的最长时间（也称待清洁设备保留时间）；2、已清洁设备用于下次生产前的最长存放时间（也称洁净保留时间）；3、连续生产最长时间 92计划及执行•清洁验证方案的主要内容如下（续）：清洁验证方案的主要内容如下（续）：Ø Sampling procedure and location diagram 取样程序和取样位置示意图取样程序和取样位置示意图Ø Analytical test procedure and method validation 分析测试方法和方法验证分析测试方法和方法验证Ø Acceptance cleaning limit 接受的清洁限度接受的清洁限度Ø Acceptance criteria for validation 接受的验证标准接受的验证标准 ß编编写写一一份份清清洁洁验验证证总总结结报报告告该该报报告告详详细细描描述述了了清清洁洁验验证证的的背背景景以以及及对对所所得得数数据据进进行行评评估估如如需需要要，，报报告告也也会会声明再验证的要求，如间隔时间声明再验证的要求，如间隔时间/变更控制等。
变更控制等93计划及执行 94监测和验证状态维持ß对对于于全全自自动动、、设设计计优优良良并并经经过过正正确确验验证证的的在线清清洗洗系系统统而而言言，，不不需需进进行行监监测测清清洁洁程程序序的的重重现现性性可可通通过过系系统统的的正正确确运运行行和和每每次次操操作后对运行参数的确认而得到保证作后对运行参数的确认而得到保证 对对于于人人工工清清洁洁操操作作，，需需要要进进行行阶阶段段性性监监测测来来保保证证清清洁洁程程序序的的重重现性和有效性现性和有效性 95监测和验证状态维持ß变更控制程序控制着以下变化，以此确保清洁程序的有效性：变更控制程序控制着以下变化，以此确保清洁程序的有效性：ØProduct 产品产品qIntroduction of a new product 引进一新产品引进一新产品qDeletion of a product 废除一产品废除一产品qAny changes on existing product, e.g. formulation, strength, batch size 现有产品的变化，如配方、规格、批量现有产品的变化，如配方、规格、批量ØEquipment 设备设备qIntroduction of a new equipment 引进一新设备引进一新设备qChange to another equipment 改至另一设备改至另一设备qAny changes on equipment, e.g. design, MOC, product contact area 设备的任何变化，如设计、材质、产品接触面积设备的任何变化，如设计、材质、产品接触面积 96监测和验证状态维持ß变更控制程序控制着以下变化，以此确保清洁程序的有效性（续）：变更控制程序控制着以下变化，以此确保清洁程序的有效性（续）：ØCleaning procedure 清洁程序清洁程序qAddition of a step 增加一步骤增加一步骤qDeletion of a step 删除一步骤删除一步骤qAny changes on cleaning parameters, e.g. time, temp., pressure, volume of solvent 清洁参数的任何变化，如时间、温度、压力、溶剂使用量清洁参数的任何变化，如时间、温度、压力、溶剂使用量qChange in cleaning agent 清洁剂变化清洁剂变化ØCleaning validation method 清洁验证方法清洁验证方法qChange in sampling method 取样方法改变取样方法改变qChange in testing method 测试方法改变测试方法改变 97清洁验证的特别议题ß必必须须对对清清洁洁程程序序进进行行评评价价和和验验证证，，以以证证明明该该清清洁洁程程序序不不仅仅能能够够有有效效地地将将活活性性成成分分污污染染物物从从设设备备产产品品接接触触表表面面去去除除，，并并且且能能够够有有效效地地去去除微生物。
除微生物ßSampling method: 取样方法：取样方法：ØSurface sampling 表面取样表面取样qContact Plate 接触盘接触盘qSwab 棉签棉签ØRinse sampling 冲淋取样冲淋取样 98清洁验证流程Residue Identification 决定残留决定残留Cleaning Method Determination 决定清决定清洁方法方法Cleaning Procedure Development 编写清写清洁程序程序Limit Determination 决定清洁限度决定清洁限度Validate Sampling and Test Method 验证取样验证取样/测试方法测试方法Determine Sampling Location/Volume 决定取样位置决定取样位置/取样量取样量Preparation of CV Master Plan 清洁验证主计划编写清洁验证主计划编写Protocol Preparation / Execution 方案编写方案编写/执行执行Summary Report 总结报告总结报告 99Thank You谢谢谢谢Questions?问题？问题？ 。