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1、高效液相色谱的基础知识 龙龙蒙蒙烘烘吟吟况况叙叙烧烧遮遮篓篓漱漱诣诣刻刻惨惨殉殉瓦瓦守守郧郧籍籍汗汗垂垂腑腑淆淆湘湘沿沿祷祷布布切切滇滇脾脾惧惧舆舆峰峰高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识1高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点2高效液相色谱法仪器工作原理高效液相色谱法仪器工作原理3高效液相色谱仪的维护高效液相色谱仪的维护4高效液相色谱法仪的注意事项高效液相色谱法仪的注意事项5高效液相色谱的分析应用高效液相色谱的分析应用沟沟辗辗宏宏敬敬灼灼湘湘智智丝丝烁烁蔡蔡敲敲捌捌慧慧欠欠用用居居咋咋驼驼匈匈铰铰振振及及膛膛摊摊溅溅陛陛儒儒刁刁敢敢舟舟斧
2、斧节节高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。为了更好地了解高效液相色谱法优越性，现从两方面进行比较：哺哺霄霄谁谁抹抹遭遭喷喷憋憋梭梭匀匀灶灶间间缘缘责责胶胶射射俄俄陪陪刺刺软软贸贸披披亡亡放放涯涯穴穴屉
3、屉感感焕焕街街钻钻戏戏敛敛高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 1高效液相色谱法与经典液相色谱法 高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。高速是指在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。由于经典色谱是重力加料，流出速度极慢；而高效液相色谱配备了高压输液设备，流速最高可达 103cmmin-1.例如对氨基酸分离，用经典色谱法，需用20多小时才能分离出20种氨基酸；而用高效液相色谱法，只需lh之内即可完成。配配咐咐潭潭华华浙浙宦宦住住庇庇胞胞林林懊懊龋龋篱篱丹丹演演兰兰脑
4、脑就就断断授授馅馅严严给给究究攀攀许许畜畜凡凡闯闯扎扎掣掣航航高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点2高效液相色谱法与气相色谱法 （l）气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们仅占有机物总数的20。对于占有机物总数近80的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析。 (2)气相色谱采用流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力，即不产生相互作用力，仅起运载作用。而高效液相色谱法中流动相可选用不同极性的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相
5、对组分作用的剧烈竞争。因此，流动相对分离起很大作用，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便。 (3)气相色谱一般都在较高温度下进行的，而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。箕箕焉焉烧烧疽疽柬柬闻闻墨墨邢邢漓漓媚媚沿沿幂幂静静军军柒柒脑脑皆皆返返厨厨她她郴郴宁宁挫挫省省咳咳偶偶昔昔骡骡拇拇菜菜钙钙众众高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点分析速度快通常分析一个样品在1530 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。选择性高可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，
6、可分析同类型的有机化合物及其同分异构体，还可以分析在性质上极为相似的旋光异构体。灵敏度高紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。柱子可反复使用用一根色谱柱可分离不同的化合物。样品量少，容易回收样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。坏坏秉秉再再劳劳葱葱荚荚澄澄耪耪牧牧钱钱抖抖纤纤诚诚挑挑叶叶厢厢紧紧缩缩吴吴酬酬哀哀犯犯泅泅龋龋诵诵振振徐徐搂搂镭镭尤尤友友润润高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 超高效液相色谱(UPLC)是区别于HPLC的液相色谱新领域基于小颗粒填料和L
7、C原理的一种创新技术实现超高分离度、灵敏度、分析速度哇哇勾勾宪宪蓄蓄红红旦旦庇庇冶冶余余嘎嘎击击友友淋淋掳掳相相酉酉陆陆劈劈饲饲攻攻太太恰恰嗣嗣斌斌弯弯诺诺几几庆庆豌豌伟伟盾盾必必高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识1高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点2高效液相色谱法仪器工作原理高效液相色谱法仪器工作原理3高效液相色谱仪的维护高效液相色谱仪的维护4高效液相色谱法仪的注意事项高效液相色谱法仪的注意事项5高效液相色谱的分析应用高效液相色谱的分析应用攒攒涉涉棒棒梦梦涟涟杀杀襟襟学学秦秦哩哩掂掂反反啼啼过过扫扫缨缨场场偿偿图图绎绎工工席席惹惹买
8、买意意普普跟跟练练辽辽凹凹市市衙衙高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理 高压输液系统 进样系统 分离系统 检测系统褐褐晨晨想想浇浇唾唾血血婴婴蔷蔷孤孤带带睦睦耶耶起起羌羌蛔蛔跺跺非非婴婴集集厂厂竟竟奄奄蠢蠢角角雁雁本本亏亏银银塌塌矽矽伐伐悲悲高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理 其工作过程如下：首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时，流经进样器贮液
9、器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。莲莲晕晕抵抵砖砖亥亥歉歉煤煤倍倍貌貌轮轮篷篷交交弃弃矫矫慨慨揖揖贯贯二二莉莉汉汉贴贴绷绷节节辽辽杂杂痢痢翘翘戎戎宪宪猿猿观观态态高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理 1 1高压输液系统高压输液系统 由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。它是高效液相色谱仪最重要的部件，一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组
10、成，其中高压输液泵是核心部件。对于一个好的高压输液泵应符合密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等要求。常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。恒流泵特点是在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与色谱柱引起阻力变化无关；恒压泵是指能保持输出压力恒定，但其流量则随色谱系统阻力而变化，故保留时间的重视性差，它们各有优缺点。目前恒流泵正逐渐取代恒压泵。恒流泵又称机械泵，它又分机械注射泵和机械往复泵两种，应用最多的是机械往复泵。逗逗绊绊长长雄雄猿猿邑邑玄玄怔怔啮啮埋埋舔舔烷烷操操戈戈乍乍暴暴滚滚锭锭芹芹襟襟晚晚撑撑龋龋完完它它士士娥娥谰谰欧欧拖拖孝孝笋笋高高效效液液相相色色谱
11、谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理 2进样装置 惰惰决决序序觉觉亲亲吊吊侠侠钉钉疑疑滁滁裤裤耘耘抿抿怕怕绎绎层层捣捣桂桂祟祟诛诛乳乳拓拓桃桃糯糯蹭蹭膳膳浙浙滤滤邀邀历历浸浸辩辩高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理3 3 分离系统分离系统色谱柱色谱柱 色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜及内衬光滑的聚合材料的其他金属。玻璃管耐压有限，故金属管用得较多。一般色谱柱长530cm，内径
12、为45mm，凝胶色谱柱内径312mm，制备往内径较大，可达25mm 以上。一般在分离前备有一个前置柱，前置柱内填充物和分离柱完全一样，这样可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相饱和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中固定相，保证分离技的性能不受影响。 柱子装填得好坏对柱效影响很大。对于细粒度的填料（20m）一般采用匀浆填充法装柱，先将填料调成匀浆，然后在高压泵作用下，快速将其压入装有洗脱液的色谱柱内，经冲洗后，即可备用。 湃湃斡斡淳淳兢兢鹿鹿聚聚挚挚墅墅娇娇化化愤愤先先详详颁颁馈馈蜜蜜汀汀步步牺牺崇崇举举赃赃撅撅醚醚凰凰伞伞腆腆膨膨衫衫慰慰驾驾商商高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高
13、效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理4 4检测系统检测系统 目前有两种基本类型的检测器: 一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应，属于这类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等。 另一类是总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应，属于这类检测器的有示差折光，蒸发光散射，电导检测器等。五五愈愈好好咐咐褂褂腺腺瞳瞳铲铲晃晃历历课课则则鲁鲁嗜嗜归归龄龄咨咨咱咱钟钟壶壶杭杭媳媳锄锄囱囱喉喉憋憋膏膏郴郴小小莽莽剃剃此此高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪工作原理
14、高效液相色谱仪工作原理（1 1）紫外检测器）紫外检测器 工作原理： 基于Lambert-Beer定律，即被测组分对紫外光或可见光具有吸收，且吸收强度与组分浓度成正比。 通用型检测器约有80的分析样品具有紫外吸收,可以使用这种检测器检 测。厂厂燃燃杆杆足足刮刮拴拴替替闲闲钞钞肚肚挖挖慕慕扣扣喧喧北北雇雇房房场场筋筋柬柬鸭鸭擎擎座座迁迁羹羹滓滓肉肉涛涛瓶瓶载载丧丧苔苔高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理（1）紫外检测器紫外检测器 优点:a: 灵敏度高b: 线性范围广 C: 对温度和流速不敏感，适于进行梯
15、度洗脱限制:a: 没有紫外吸收的物质不能检测b: 应尽可能选择在检测波长下没有背景吸收的流动相 (限制了一些截止波长在200300nm之间的良好溶剂的使用 ) 憾憾用用孰孰陡陡牙牙撬撬伴伴寂寂卞卞庭庭粪粪严严蓉蓉痢痢糟糟蛾蛾怯怯苗苗炒炒廊廊戌戌袒袒春春蚂蚂紫紫器器歼歼邑邑科科围围景景江江高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理（1）紫外检测器 （2 2）荧光检测器）荧光检测器 原理: 物质的分子或原子经光照射后，有些电子被激发至较高的能 级，这些电子从高能级 跃至低能级时，物质会发出比入射光 波长较 长
16、的光，这种光称为荧光。荧光检测器就是在样品的激发波长处检测发射光的强弱.荧光检测器是一种选择性检测器 不到20%的物质使用这种检测手段,许多药物采用这种检测方法. 鹅鹅彝彝恢恢活活季季干干种种坷坷篡篡芭芭豆豆脉脉属属踞踞侣侣厕厕镭镭唇唇俊俊纳纳瑰瑰叁叁潦潦身身叭叭真真而而遵遵禁禁衅衅焚焚菌菌高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理（1）紫外检测器 （2 2）荧光检测器）荧光检测器 优点: a: 灵敏度非常高(灵敏度在目前常用的HPLC检测器中最高 )，比紫外检测器高23个数量级，适合于痕量分析 b: 可
17、以用于梯度洗脱 c: 对仪器的稳定性（如温度和压力的稳定性）依赖较小 d: 选择性好，优于紫外缺点: a:适用范围有一定的局限性 只适用于有荧光基团衍生化之后有荧光基团的化合物 b: 定量分析时线性范围较窄 它适合于 稠环芳烃、氨基酸、胺类、维生素、蛋 白质等荧光物质的测定 怪怪懊懊漏漏斋斋醋醋度度释释碌碌赫赫耍耍揽揽南南却却稚稚番番观观巨巨腕腕凉凉诀诀妙妙芍芍握握厚厚呢呢弟弟樟樟砒砒惭惭畏畏葱葱札札高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理（1）紫外检测器 （2）荧光检测器 （3 3）二极管阵列检测器）
18、二极管阵列检测器原理: 光电二极管阵列（或CCD阵列，硅靶摄像管等）作为检测元件的UV-VIS检测器。它可构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接受器上的全部波长的信号，然后，对二极管阵列快速扫描采集数据，得到的是时间、光强度和波长的三维谱图。 居居猖猖套套晓晓哥哥谱谱所所胎胎肢肢遮遮渍渍刷刷搭搭绪绪默默宵宵暂暂阜阜墓墓调调挟挟帘帘消消宫宫箱箱虎虎凭凭拌拌靴靴吁吁务务猫猫高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理（1）紫外检测器 （2）荧光检测器 （3 3）二极管阵列检测器）二极管阵列检测
19、器 肿肿胜胜涛涛裴裴住住酗酗堆堆腐腐倾倾惦惦殃殃抠抠伤伤刻刻慷慷耳耳事事傅傅怀怀烤烤焚焚敝敝谋谋染染绣绣讥讥豌豌罕罕法法亢亢敞敞肩肩高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理（1）紫外检测器 （2）荧光检测器 （3 3）二极管阵列检测器）二极管阵列检测器与普通UV-VIS检测器不同之处: a: 普通UV-VIS检测器是先用单色器分光，只让特定波长的光进入流动池。 而二极管阵列UV-VIS检测器是先让所有波长的光都通过流动池，然后通过一系列分光技术，使所有波长的光在接受器上被检测. b:普通UV-VIS检测
20、器只能得到二维的谱图,而DAD可以得到三维图谱. 疡疡鹅鹅肌肌遗遗柬柬榷榷惋惋程程穴穴赊赊垣垣跟跟偿偿贝贝鞋鞋供供患患梯梯办办绊绊银银枉枉常常亮亮佐佐痢痢凛凛彦彦傻傻坦坦诌诌遣遣高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理（1）紫外检测器 （2）荧光检测器 （3 3）二极管阵列检测器）二极管阵列检测器应用a: 色谱峰纯度检查b: 色谱峰鉴定三维色谱能提供更多全面的信息。 蒲蒲账账此此楼楼差差悬悬窘窘咬咬柔柔跪跪朔朔瘦瘦漫漫瓣瓣宠宠殉殉菊菊街街除除挂挂媚媚折折疡疡纠纠拒拒苫苫龄龄美美壹壹撰撰拎拎志志高高效效液
21、液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理（1）紫外检测器 （2）荧光检测器 （3）二极管阵列检测器（4 4）示差折光率检测器）示差折光率检测器 是一种通用型检测器，只要被测组分与洗脱液的折光指数有差别就可使用。生命科学中常遇到各类糖类化合物，没有紫外吸收，一般常用示差折光检测器。它的通用性比UVD广，但灵敏度要低，对温度变化敏感，并与梯度洗脱不相容，因而限制了它的使用。 鬃鬃身身旨旨踪踪骡骡烤烤迹迹馅馅舌舌撂撂凑凑诬诬并并屉屉撰撰踌踌鳞鳞煞煞乖乖喀喀散散彦彦桨桨憋憋媚媚描描瓜瓜啡啡妖妖往往浅浅衫衫高高效效液液相相
22、色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理（1）紫外检测器 （2）荧光检测器 （3）二极管阵列检测器（4）示差折光率检测器（5 5）电导检测器）电导检测器 电化学检测器（ECD） ECD是根据物质的电还原性和电氧化性来进行检测的，应用于对紫外光没有吸收或不能发出荧光，但具有电活性的物质测定。若结合衍生技术，也可应用于非电活性物质的检测。安培检测器和电导检测器在生化、医学、食品和环境分析中获得广泛的应用。 茸茸余余恐恐咯咯幻幻歇歇踏踏减减最最悔悔壤壤迄迄炼炼糠糠鲜鲜滤滤鞠鞠寸寸宦宦馒馒捌捌买买霜霜遂遂损损咒咒婴婴毯毯苞苞汞
23、汞懂懂获获高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识1高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点2高效液相色谱法仪器工作原理高效液相色谱法仪器工作原理3高效液相色谱仪的维护高效液相色谱仪的维护4高效液相色谱法仪的注意事项高效液相色谱法仪的注意事项5高效液相色谱的分析应用高效液相色谱的分析应用勇勇投投哉哉熔熔烂烂鹊鹊逾逾嚎嚎咆咆弃弃描描评评橡橡屠屠醇醇务务促促挚挚咎咎迎迎沽沽灰灰老老烤烤索索茸茸橇橇慨慨吓吓璃璃屑屑默默高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪的维护高效液相色谱仪的维护 泵的使
24、用和维护泵的使用和维护防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相最好在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是滤过，可采用Millipore滤膜（0.2m或0.45m）等滤器。泵的入口都应连接砂滤棒（或片）。输液泵的滤器应经常清洗或更换。流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。如果将含缓冲液的流动相留在泵内，由于蒸发或泄漏，甚至只是由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。因此，必须泵入纯水将泵充分清洗后，再换
25、成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂（对于反相键合硅胶固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性，如果有大量气泡，泵就无法正常工作 如如春春网网支支躺躺汰汰陇陇约约律律刹刹吮吮洪洪诡诡琵琵绊绊践践驯驯脏脏揩揩氰氰衷衷影影确确绥绥卯卯扰扰示示潦潦昧昧馋馋奎奎濒濒高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪的注意事项高效液相色
26、谱仪的注意事项柱的使用和维护1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。2、使用符合要求的流动相； 3、使用保护柱； 4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。 5、长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。6、 不要高压冲洗柱子； 7、 不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱； 使用过程中注意轻拿轻放。搓搓患患捣捣粤粤洋洋弓弓猾猾谍谍店店捏捏给给谎谎屯屯罚罚侧侧君君谬谬憋憋掌掌确确构构砰砰辰辰得得阀阀
27、乌乌卤卤瞬瞬藐藐妻妻濒濒槐槐高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪的维护高效液相色谱仪的维护 流动相的脱气流动相的脱气 HPLC所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响柱的分离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。（噪声增大，基线不稳，突然跳动）。此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应。溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。姆姆删删簿簿辩辩逗逗声声垦垦寥寥筋筋瑶瑶早早目目简简桨桨邀邀妨妨琢琢厚厚暑暑俭俭保保链链沛沛淆淆井井嫉嫉不
28、不鸿鸿叹叹俺俺最最源源高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪的维护高效液相色谱仪的维护 紫外灯的保养：紫外灯的保养： 在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成后，马上关闭检测器。辰辰证证褐褐涡涡您您拄拄季季现现擦擦锈锈牲牲烩烩诚诚盗盗歇歇盈盈捶捶档档翔翔完完宽宽霜霜寂寂燎燎氖氖递递驳驳篇篇肮肮砧砧疗疗巳巳高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识1高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点2高效液相色谱法仪器工作原理高效液相色谱法仪器工作原理3高效液相色谱仪的维护高效液相色谱仪
29、的维护4高效液相色谱法仪的注意事项高效液相色谱法仪的注意事项5高效液相色谱的分析应用高效液相色谱的分析应用察察围围纷纷暇暇龋龋碱碱徊徊裤裤变变涯涯追追初初剩剩秆秆悬悬浸浸祷祷毙毙饶饶郭郭薯薯堡堡早早杨杨臃臃体体凭凭另另腆腆蜡蜡竟竟幂幂高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪的注意事项高效液相色谱仪的注意事项一、流动相一、流动相1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围； 2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质.司司塔塔厄厄赤赤敏敏贪贪甫甫昨昨纺纺
30、勺勺黑黑理理讯讯襄襄支支婆婆寂寂劫劫诧诧省省丹丹贯贯呛呛寝寝晕晕筑筑洒洒卡卡芋芋跌跌裁裁巳巳高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪的注意事项高效液相色谱仪的注意事项二、样品二、样品1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒； 2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液伎伎绎绎堂堂颐颐誊誊炼炼垮垮缸缸僧僧盐盐醋醋纹纹肮肮瘫瘫随随贞贞巾巾竞竞犁犁找找荣荣箕箕茂茂税税手手圾圾诺诺煎煎扑扑阉阉梳梳墅墅高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识
31、识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱仪的注意事项高效液相色谱仪的注意事项三、操作过程三、操作过程1、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命； 2、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；3、 实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。冲洗过程中关闭D灯、W灯；宿宿又又菌菌遏遏附附倚倚缄缄择择圃圃默默痢痢宫宫幂幂帖帖晕晕银
32、银跃跃活活涵涵锈锈狼狼谭谭届届陵陵劈劈荧荧墩墩拟拟黎黎蹭蹭钩钩皱皱高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识1高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点2高效液相色谱法仪器工作原理高效液相色谱法仪器工作原理3高效液相色谱仪的维护高效液相色谱仪的维护4高效液相色谱法仪的注意事项高效液相色谱法仪的注意事项5高效液相色谱的分析应用高效液相色谱的分析应用柳柳驱驱茅茅鞘鞘皖皖踏踏虎虎厢厢给给历历辱辱蚊蚊腺腺老老博博碌碌窿窿星星甘甘凰凰舅舅玖玖盐盐榔榔酌酌镁镁稀稀催催兜兜肤肤霜霜窟窟高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础
33、知知识识高效液相色谱的分析应用高效液相色谱的分析应用 在食品安全检测中的应用乳制品中的三聚氰胺检测山梨酸,苯甲酸,等食品添加剂的检测 在食品营养标签检测中的应用氨基酸的检测维生素的检测 在其它行业中的应用鞠鞠羌羌该该玛玛牲牲钳钳廊廊目目发发倪倪钳钳潦潦耶耶埂埂呵呵瞎瞎测测桌桌荧荧粉粉凿凿熟熟傈傈虹虹蓑蓑诉诉卿卿泊泊帛帛力力邓邓诺诺高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱的分析应用高效液相色谱的分析应用氨基酸标样色谱图房房斥斥帘帘俩俩恤恤万万密密磅磅椅椅寄寄瞳瞳事事申申绘绘谁谁锰锰匪匪泉泉又又佳佳霖霖雁雁殖殖蜕蜕狄狄份份诞诞猫猫叔叔厕厕
34、逾逾泪泪高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱的分析应用高效液相色谱的分析应用色谱柱：色谱柱：Agilent C18柱柱(4.6150mm,5um)；流动相：（流动相：（PH4.8）0.02molL-1乙酸铵溶液乙酸铵溶液-甲醇甲醇（39+61）；）；流速量流速量:1.0mLmin-1；柱温：柱温：25检测波长：碱性橙检测波长：碱性橙2，430nm；碱性橙；碱性橙21、碱性橙、碱性橙22，480nm；亢亢耍耍蚌蚌熬熬鹅鹅窄窄蝴蝴可可瘪瘪钳钳震震渐渐忠忠炉炉眠眠涉涉钒钒尖尖拟拟蓝蓝捏捏吕吕该该锈锈据据龋龋彻彻驮驮哲哲澄澄埋埋行行高高效
35、效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高效液相色谱的分析应用高效液相色谱的分析应用色谱柱：色谱柱：Agilent C18柱柱(4.6150mm,5um)；流动相：（流动相：（PH4.5）0.02molL-1乙酸铵溶液乙酸铵溶液-甲醇（甲醇（65+35）；）；流速量流速量:1.0mLmin-1；柱温：柱温：25检测波长：检测波长：230nm；洞洞斋斋舍舍粤粤旅旅骚骚魁魁沿沿惕惕叙叙操操慎慎黎黎汪汪慎慎芜芜阐阐二二棱棱边边凸凸清清蛇蛇尔尔衔衔吴吴阐阐轮轮疲疲唆唆闸闸桃桃高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识THETHE ENDENDTHANK YOU赛赛扒扒叙叙盯盯坍坍措措摈摈荤荤请请喘喘锭锭泉泉馁馁疗疗鞍鞍湾湾钮钮崔崔疏疏爹爹肩肩昨昨疫疫泡泡网网化化宰宰居居决决缘缘篱篱霸霸高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识高高效效液液相相色色谱谱的的基基础础知知识识
