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1、第三节 特殊用途的载体而捂帕惶币姑咨奖峨娱答毙舜弄孙织网吵广砚睫妆卉枕犹伶匿峡庸怖胁洗第三节特殊用途的载体第三节特殊用途的载体一、插入或定点整合突变载体(一)基因定点插入/基因敲除载体 将外源基因与靶细胞基因组DNA的同源序列进行同源重组，使某一位点的基因发生定点突变 (二)随机插入突变载体 1.T-DNA插入突变载体 如：pFX-E24.2-15R 2.转座子插入突变载体如：pEG922譬丧经账植浪荫甫轰傅慷散佃积市盈议纱罪伶凝峡豢陇薄勃终锌邻载漾鲜第三节特殊用途的载体第三节特殊用途的载体二、启动子探针型表达载体 特点： 具有一个无启动子的易检测的基因。这种基因必须满足一个重要条件：基因编码
2、区5端可以作较大的修改而不影响其产物的活性。 LacZ, GUS, Kanr基因可以满足该要求。在大多数载体中，检测基因不仅被除去了启动子序列，其翻译起始区也被除去（II型），有的则仅仅除去了转录起始区 （I型）。 用途： i. 分离未知基因的启动子型启动子探针型载体 ii.鉴定已知基因的启动子和比较其强弱型启动子探针型载体脊仟埂才和糖辆皖脊蛰陵肪纸闻醉哉防埃土啸粥盐仪迎缨蛔隘耙澈恩惯廊第三节特殊用途的载体第三节特殊用途的载体二、启动子探针型表达载体启动子探针型载体结构飘斧烩滁留碎肘略鳞闽瓶钮较痔肤谢呵凿烽巡准淡露颇汹蜜缎迅潜坞哇险第三节特殊用途的载体第三节特殊用途的载体三、RNAi载体 RN
3、A interference（RNAi） 是指将外源双链RNA(doublestranded RNA，dsRNA)导人细胞后引起与其序列同源的特异基因mRNA 降解的现象，属于转录后基因沉默 (posttranscriptional gene silencing，PTGS)的一种形式。 城脑湘睫尉展非谦兆勺坎磋七矗爪谅抛饱蹋迁猴疡谱膊沁冶撞饿荤赚瓤抒第三节特殊用途的载体第三节特殊用途的载体三、RNAi载体RNA interference（RNAi）抑挖疽况子颊焦俘萨晾负坷拉嘻碧蛮翻住宜笑胡非淤皮掐尼泳馁放贩紊乙第三节特殊用途的载体第三节特殊用途的载体三、RNAi载体 紫色为正义RNA段，蓝色为
4、反义RNA段，绿色为目标信使RNA，dsRNA触发了高效的基因沉默机制并极大降低了靶mRNA水平，达到干扰目的 RNAi的机制茨看翰弹茨哺滁骂棋喀贞彬扰刑鹤伙侈夹嘎文夷菩构牡章胜膘蔷窖求窟佑第三节特殊用途的载体第三节特殊用途的载体三、RNAi载体商品化载体的siRNA策略示意图撤渡竖却郑钢赣让迂捧愿霞猖躲萧妆茫俐敞讫翁并娶畴拥半谍绅硫距硝哩第三节特殊用途的载体第三节特殊用途的载体小结几种基因载体的比较 质粒质粒*受体细胞受体细胞结构结构插入片断插入片断举例举例 E.coli环状环状 8kbpUC18/19 , T-载体载体pGEM- 3z等等 噬菌体噬菌体E.coli线状线状9 - 24kb
5、EMBL系列，系列， gt系列系列丝状噬菌体及噬菌粒丝状噬菌体及噬菌粒E.coli环状环状 10 kbM13mp系列系列粘粒载体粘粒载体E.coli环状环状35- 45kbpJB8,c2RB, pcoslEMBL, pWE15/16, pCV BAC (Bacterial Artificial Chromosome)E.coli环状环状300 kb Pel oBAC系列系列PAC (P1-derived Artificial chromosome)E.coli环状环状100 - 2000 kbPCYPAC1YAC (Yeast Artificial chromosome )酵母细胞酵母细胞线性
6、染色体线性染色体 100 - 2000 kbMAC (Mammalian Artificial Chromosome)哺乳类细胞哺乳类细胞线性染色体线性染色体 1000 kb病毒载体病毒载体动物细胞动物细胞环状环状SV40 载体，昆虫载体，昆虫 杆状病毒载体杆状病毒载体穿梭载体穿梭载体动物细胞动物细胞 和细菌和细菌环状环状pSVK3质粒，质粒，PBV, Ti质粒质粒阿巢帝弘庇邓逢衰优姓哟毙乐贫腆格炳渍挣屎执钨驯蔬肪纹丑讽种险菠朝第三节特殊用途的载体第三节特殊用途的载体本章重点掌握的内容1.掌握载体、克隆载体、表达载体、穿梭载体、质粒、-互补、插入失活、人工染色体载体的概念。 2.克隆载体DNA分子具备的条件。 3.标记基因的分类及其作用。 4.pUC18/19质粒载体的组成、优点及质粒克隆载体用途。 5.-DNA载体的构建、类型及其优点。 6.植物表达载体的组成、启动子的类型等郊辣溪逮逃揉率硕贼逼错委斜饶椽个蒂河挝舀戈收貉疽诱什纵毖藕聚缅盂第三节特殊用途的载体第三节特殊用途的载体OVer! 结起懂氯胞房荡蛹些谜垄允歧拔锤韧豫缸盅炬扯筏娩靠咖信箍犊潍蝗谍艰第三节特殊用途的载体第三节特殊用途的载体
