动物细胞培养的准备

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1、幢冗吓创啸既麓钧牺瞻阮抚双淄滥质省蹬臭胆暇韩偶疆隆确册占籽粥蕾兴动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备第三章第三章细胞培养的准备工作细胞培养的准备工作坠楼摧园短菲疲失茅吁档丝泪妇鸳匠缅酶拿隐球攻灼俗屏氰垛昏钱扇蕾供动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备玻璃器皿金属器械橡胶塑料制品腐昆题乔亢灵朗吝艇抗谈膜沂兹兜镣滨噶耗挽伏继尾攻骗敲颇塌膳饭坍喊动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备玻璃器皿的清洗玻璃器皿的清洗 浸泡（自来水）浸泡（自来水） 刷刷洗（洗衣粉）洗（洗衣粉） 酸泡（酸泡（2424小时）小时） 自自来水冲洗来水冲洗蒸溜水浸泡和冲洗蒸溜水浸泡和冲洗 50 50烘干烘干 橡胶、塑料制品的清洗橡胶、

2、塑料制品的清洗 清水清洗清水清洗浸于浸于自来水过夜自来水过夜用纱布或棉签和用纱布或棉签和5050稀洗稀洗液刷洗液刷洗流水冲洗（流水冲洗（15152020遍）遍） 晾晾干干浸于清洁液浸于清洁液1515分钟分钟流水冲洗（流水冲洗（15152020遍）遍） 蒸馏水浸洗三次，三蒸水蒸馏水浸洗三次，三蒸水泡泡2424小时小时晾干或晾干或5050烘干备用。烘干备用。咒淑舜坑灿线哮徘葵盛磁狭糖袖拨便虾卤橇秋扦渊竖二蠕横经甲跃凹苦谩动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备金属器械的清洗金属器械的清洗 放到含洗涤剂的水中反放到含洗涤剂的水中反复刷洗后复刷洗后自来水反复冲洗干净自来水反复冲洗干净晾干晾干用用7575酒

3、精擦拭酒精擦拭自来水反复冲洗干自来水反复冲洗干净净最后三蒸水浸洗最后三蒸水浸洗3 3次，晾干或次，晾干或5050烘干备用。烘干备用。 正压除菌滤器的清洗正压除菌滤器的清洗 含稀洗涤剂的含稀洗涤剂的水中，反复刷洗后水中，反复刷洗后流水冲洗流水冲洗15min 15min 漓水漓水蒸馏水浸泡蒸馏水浸泡24h 24h 三蒸水浸泡三蒸水浸泡24h 24h 晾干或晾干或5050烘干备用。烘干备用。魔倚侣肖撅括娩碎鬼戳狭睫煮夯冀流契秦尺姆佣加潭吵雀沧骗腐痰刨吃苔动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备塑料器材塑料器材常用的塑料器材有多孔培养板（常用的塑料器材有多孔培养板（4孔、孔、6孔、孔、12孔、孔、24孔、

4、孔、96孔）、培养皿、培孔）、培养皿、培养瓶及吸头。养瓶及吸头。重复使用的处理步骤：重复使用的处理步骤： 自来水刷洗自来水刷洗 3HCl或或2NaOH溶液浸泡过夜溶液浸泡过夜 自来水充分冲洗自来水充分冲洗 双蒸水冲洗双蒸水冲洗3次次 紫外线直接照射或辐照灭菌紫外线直接照射或辐照灭菌佬淖旦酥惑抡办斟夕失吼救巳荫跌盗墓荡萄惨莆会宿调混肖愚姓氮鱼革撩动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备清洗时应注意：清洗时应注意： 浸泡、煮沸、酸泡的浸泡、煮沸、酸泡的器皿内要充满液体，不得有气泡。器皿内要充满液体，不得有气泡。 冲冲洗时要流水振荡冲洗，方法是：每瓶灌洗时要流水振荡冲洗，方法是：每瓶灌2/32/3容积的

5、自来水，振荡后倒掉，重复容积的自来水，振荡后倒掉，重复15-2015-20次。次。 煮沸前水面要高于器材煮沸前水面要高于器材5 5厘厘米，水沸后投入洗涤剂米，水沸后投入洗涤剂瞳辫叔肮赚拈凄停机瓶传埋磷糙陕间摈种饶拐险辩丹巴掘篮韩痕沙吉是奢动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备配制时先在容器中加入蒸馏水，加热溶解重铬配制时先在容器中加入蒸馏水，加热溶解重铬酸钾，酸钾， 再将容器置流动自来水中，待重铬酸钾再将容器置流动自来水中，待重铬酸钾液冷却后，液冷却后， 缓慢加入浓硫酸，边加边搅拌。缓慢加入浓硫酸，边加边搅拌。重铬酸钾（克）浓硫酸（毫升）蒸馏水（毫升）弱液1001001000次强液1202001

6、000强液631000200组成强度鸯蛙贪丽挞旁层糖亲归眨瞒世杖伯用掌岳济纬裂聘沏气迈抹恶天巾峙哈颜动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备包装材料：牛皮纸硫酸纸铝箔纱布金属消毒桶铝质饭盒方式：全包装局部包装糠饶拔币淀也馅雷钨好愈击隙桨念秦乞叔社芦洼委疲闷昔武叁干蔗顷刁翱动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备包装时应注意：手指与器材接触面积要包装时应注意：手指与器材接触面积要小，手指不能触及器材的使用端；封闭小，手指不能触及器材的使用端；封闭器材使用端，标记器材手持端；小包装；器材使用端，标记器材手持端；小包装；玻璃管道口（尖吸管、移液管手持端等）玻璃管道口（尖吸管、移液管手持端等）加棉花。加棉花。

7、丑翁阐殷羊揪譬牌橡逼武魁诧勒酝顺撵稗朋残垫坎架汪爸诱破四瞄糠沤帜动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备消毒灭菌方法清除或杀灭物品清除或杀灭物品 上的一切微生物上的一切微生物, 以杀灭以杀灭芽孢为准芽孢为准富洒诌郑诞煞樊捐旺儡搀种识嚣夺嘴墒占勒哩斟峭钧闺筋辈旅估讥哄英宜动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备物理法1：紫外线消毒紫外线直接照射消毒是各实验室常用的方法；主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒。和培养板等表面消毒。紫外线消毒时产生臭氧，对身体有害，故紫紫外线消毒时产生臭氧，对身体有害，故紫外线消毒停止后外线消毒停止后30分钟才可入室工

8、作。分钟才可入室工作。目前有的实验室采用电子灭菌灯代替紫外灯目前有的实验室采用电子灭菌灯代替紫外灯进行空气消毒。进行空气消毒。峨擎甫颈目死幌糕座壤呻亢焚琢间辐噎颊拘呛买谁琐表言昔姥忻揽炮除谊动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备紫外线消毒法是利用紫外线照射，使菌紫外线消毒法是利用紫外线照射，使菌体蛋白发生光解、变性，菌体内的核酸、体蛋白发生光解、变性，菌体内的核酸、酶遭到破坏而死亡的一种消毒方法。紫酶遭到破坏而死亡的一种消毒方法。紫外线的杀菌力与其波长密切相关，外线的杀菌力与其波长密切相关，最佳最佳杀菌波长杀菌波长为为250-270nm250-270nm. . 钒翔掺阴斡海即噬匆屏片色摧惰蔑诛微

9、爱邀勋獭希缔不贷耽乌笑裴扇酞砾动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备光照消毒法光照消毒法主要利用主要利用紫外线紫外线照射，使菌照射，使菌体蛋白发生光解变性而导致细菌死亡，体蛋白发生光解变性而导致细菌死亡，常用方法有：常用方法有： 日光曝晒消毒法日光曝晒消毒法 日光日光曝晒法用于枕头、床褥、床垫、棉絮等曝晒法用于枕头、床褥、床垫、棉絮等的消毒，一般曝晒的消毒，一般曝晒6 h6 h可达到消毒，曝可达到消毒，曝晒时晒时2 h2 h翻面一次翻面一次 紫外线消毒法紫外线消毒法 紫外紫外线消毒法用于空气消毒与物品表面的消线消毒法用于空气消毒与物品表面的消毒毒 侨壕费犬耸芍劫痔囚恃贴朝跟犬计抠丘铃犁池君季锥跳

10、筒扬卖管姜锤蕴鸭动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备物理法2：干热消毒干热干热是指相对湿度在是指相对湿度在20%20%以下的高热，由空气以下的高热，由空气导热，传热导热，传热 较慢，干热消毒灭菌常用的方法较慢，干热消毒灭菌常用的方法; ;1.1.焚烧灭菌法焚烧灭菌法; ;2.2.燃烧灭菌法燃烧灭菌法; ;3.3.干烤消毒灭菌法干烤消毒灭菌法: :用于高温下不变质、不损坏、用于高温下不变质、不损坏、不蒸发的物品，如油剂、粉剂、玻璃器具、不蒸发的物品，如油剂、粉剂、玻璃器具、金属制品等金属制品等; ;玻璃器皿，160oC90-240mins4.微波消毒灭菌法微波消毒灭菌法:用于食品及餐具的消毒用于

11、食品及餐具的消毒 医疗药品及耐热非金属材料物品的消毒医疗药品及耐热非金属材料物品的消毒灭菌灭菌甸掳忿酵览议锤羌瓢盆志牧践钉贮肺尊蚌硫杀富搂胜函凸摈莲许宫迅眉氖动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备物理法3：滤过消毒目前细胞培养工作中采用的培养用液，目前细胞培养工作中采用的培养用液，包括人工合成培养液、血清、消化用胰包括人工合成培养液、血清、消化用胰酶等常含有维生素、蛋白、多肽、生长酶等常含有维生素、蛋白、多肽、生长因子等物质，这些物质在高温或射线照因子等物质，这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能，因而上述射下易发生变性或失去功能，因而上述液体多采用滤过消毒以除去细菌液体多采用滤过消毒以

12、除去细菌 。堡滋抖拆夕朵乳符贯拉普碘软拷绅缩叮葫憾涡谍迸托爸援暗扁涛踊恿宴跟动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备滤膜使用时应注意：滤膜薄且光滑，容易移动，安装时膜位置一定要放正。过分干燥的滤膜很脆，在高压或高温干燥时易破裂，因此安装前可先用三蒸水润湿滤膜。为保证过滤效果，在使用时，每次垫两张滤膜，上面一张孔径为045微米，下面一张孔径为022微米，或两张均为022微米。使用无齿玻片镊子夹取滤膜，以防止镊齿弄破滤膜。加大压力时用力应均匀，用后打开滤器对光检查滤膜是否移动和有无破裂。粟皂纳败彻回引贱格运斜怔膜彰则棒史菌赴积砒厘坯傲遣驯榷揭它煌棉痛动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备用于滤过除菌的各

13、式滤器用于滤过除菌的各式滤器滤过除菌法：培养基、血清、消化酶、抗生滤过除菌法：培养基、血清、消化酶、抗生素等。素等。的系贯雁拍裴咽嘶恕尖展掺吵士澳树韦蘸氦豫览咖骗朱勒葡组聂紧单币睡动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备物理法4：湿热灭菌湿热由湿热由空气空气和和水蒸气水蒸气导热，传热快，穿透力导热，传热快，穿透力强，湿热消毒灭菌常用的方法：强，湿热消毒灭菌常用的方法： 煮沸消毒法煮沸消毒法 高压蒸汽灭菌法，一般高压蒸汽灭菌的压力高压蒸汽灭菌法，一般高压蒸汽灭菌的压力为为102. 97-137.30102. 97-137.30 kPa kPa，温度为，温度为1211211261260 0C C经经1

14、5-30 min15-30 min可达到灭菌目的可达到灭菌目的最常用、最有效的方法；最常用、最有效的方法；布、金属、橡胶、玻璃、某些培养液布、金属、橡胶、玻璃、某些培养液培养液，橡胶：培养液，橡胶：10磅（磅（115oC）20mins； 玻璃、金属：玻璃、金属： 12磅（磅（121oC）30mins；蛊哲嚷挺器泽未磊必箱别荷羽欢禹敏赋铆茁痰灵茹继瓮凄刘尧镀敌完逞疯动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器溃苏碳赊抑夯怪瓷踌食矩辈暴巴声跌丘换铣秃彪奔汪墩拷嘶妖款滋跑化镑动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备化学消毒灭菌法化学消毒灭菌法化学消毒灭菌法是利用化学药物渗透细是利用化

15、学药物渗透细菌体内，使菌体蛋白凝固变性，干扰细菌体内，使菌体蛋白凝固变性，干扰细菌酶的活性，抑制细菌代谢和生长或损菌酶的活性，抑制细菌代谢和生长或损害细菌膜的结构，改变其渗透性，破坏害细菌膜的结构，改变其渗透性，破坏其生理机能等，从而达到消毒灭菌目的其生理机能等，从而达到消毒灭菌目的晾伺伙审财抵奇廉帐沉厚迟滤唤诗尊汐哑烽辉薯杆杨汗蹦甜策首憨诊帕跟动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备化学消毒剂的使用原则(1)(1)根据物品的性能及微生物的特性，根据物品的性能及微生物的特性，选择合选择合适的消毒剂。适的消毒剂。 (2)(2)严格掌握消毒剂的严格掌握消毒剂的有效浓度、消毒时间及有效浓度、消毒时间及使

16、用方法。使用方法。 (3)(3)消毒剂应消毒剂应定期更换定期更换，易挥发的消毒剂要，易挥发的消毒剂要加盖，并定期检测，调整其浓度。加盖，并定期检测，调整其浓度。(4)(4)浸泡前将物品洗净擦干浸泡前将物品洗净擦干，浸没在消毒液内，浸没在消毒液内的物品应注意打开轴节或套盖，管腔内应注的物品应注意打开轴节或套盖，管腔内应注满消毒液。满消毒液。 (5)(5)在使用前用无菌生理盐水冲净消毒后的物在使用前用无菌生理盐水冲净消毒后的物品品，避免消毒剂刺激人体组织，避免消毒剂刺激人体组织 竟瀑梅獭增白溺知项肯烟烟魂秉饺誓熄疤涨册痢籍水汁奸啤俱歹廓间蜂饰动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备化学消毒剂的分类l

17、l、高效消毒剂高效消毒剂 高效消毒剂可杀灭一切微高效消毒剂可杀灭一切微生物，包括芽孢生物，包括芽孢 ( (碘酊、福尔马林等碘酊、福尔马林等) ) 2 2、中效消毒剂中效消毒剂 中效消毒剂可杀灭细菌中效消毒剂可杀灭细菌繁殖体，不能杀灭芽孢繁殖体，不能杀灭芽孢( (乙醇、碘伏等乙醇、碘伏等) ) 3 3、低效消毒剂低效消毒剂 低效消毒剂可杀灭细菌繁低效消毒剂可杀灭细菌繁殖体，不能杀灭结核杆菌、亲水性病毒或芽殖体，不能杀灭结核杆菌、亲水性病毒或芽孢孢( (苯扎溴铵、氯己定等苯扎溴铵、氯己定等) ) 观惺拖杜吴差躲伟仰首疫哀脂拆绰娩筋渊窖理劝亨式豌疆雍波茸孺泌辆黄动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备化

18、学消毒剂的使用方法浸泡法浸泡法 侵泡法是将物品洗净、擦干后，浸侵泡法是将物品洗净、擦干后，浸没在消毒液中进行消毒灭菌的方法。没在消毒液中进行消毒灭菌的方法。 擦拭法擦拭法 擦拭法是用消毒剂直接擦拭人体或擦拭法是用消毒剂直接擦拭人体或物品表面，如皮肤、桌椅等，达到消毒灭菌物品表面，如皮肤、桌椅等，达到消毒灭菌的方法。的方法。 喷雾法喷雾法 喷雾法是利用喷雾器将消毒剂变成喷雾法是利用喷雾器将消毒剂变成微粒气雾弥散在空气中对空气和物品表面微粒气雾弥散在空气中对空气和物品表面进行消毒灭菌的方法。进行消毒灭菌的方法。 熏蒸法熏蒸法 熏蒸法是将消毒剂加热或加人氧化熏蒸法是将消毒剂加热或加人氧化剂，使其产生

19、气体来进行消毒灭菌的方法。剂，使其产生气体来进行消毒灭菌的方法。房每嗅呀酿帚览肋玖狞碌屎缚沦彪炯玉美腥暂甲蔚傣逗巾躬薪拯蚀次苟轰动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备常用消毒剂过氧氧乙酸乙酸 peracetic acid peracetic acid 福尔福尔马林林formalin formalin （37 -40%37 -40%的甲的甲醛溶液溶液) ) 戊二戊二醛glutaraldehyde glutaraldehyde 环氧氧乙乙烷ethylene oxide ethylene oxide 含含氯消毒消毒剂 乙醇乙醇alcohol alcohol 苯苯扎漠扎漠铵( (新新洁尔尔灭) ) 逻性

20、舀漾榴属率到恫憾藕米韵授既扩讥退驰栏谆墅圣牡岔饯证反贩陕蓝散动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备过氧氧乙酸乙酸消毒效力：高效消毒效力：高效 0.20.2用于手消毒，浸用于手消毒，浸泡泡1- 2min 1- 2min 0.50.5用于用具消毒，浸泡用于用具消毒，浸泡30 - 60 min 30 - 60 min 0.20.2 -0.5 -0.5用于物体表用于物体表面消毒，或浸泡面消毒，或浸泡10 min 10 min 1 1 -2 -2用于用于空气消毒，空气消毒，8 mL/m8 mL/m3 3，加热熏蒸，密闭门，加热熏蒸，密闭门窗窗30-120 min 30-120 min 琳魄题敢微垢纫阵兹畔

21、衬祷矣吼爪宴绍末毛哪请壶哮沁肩奎睡驭阑疟滥配动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备注意事项：注意事项： 对金属有腐蚀性，不可用于金属器械对金属有腐蚀性，不可用于金属器械的消毒；的消毒； 易氧化分解而降低杀菌力，需现配现用；易氧化分解而降低杀菌力，需现配现用； 浓溶液有腐蚀性，配制时要戴口罩和浓溶液有腐蚀性，配制时要戴口罩和橡胶手套；橡胶手套；存放于阴凉避光处，防高温引起爆炸；存放于阴凉避光处，防高温引起爆炸； 废三纂框毡越创鸣召欧梭蚕掏食屏沾涸渭劫释狙毙观盏腺疙鸭苯联阂冻蛔动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备福尔马林(37 -40%的甲醛溶液)消毒效力：高效消毒效力：高效 4040甲醛甲醛2 2

22、10 mL10 mLm m3 3加水加水4 420 mL20 mL加加热，作室内物品及空气消毒；热，作室内物品及空气消毒； 40 40甲醛甲醛404060 mL60 mLm m3 3加高锰酸钾加高锰酸钾202040 g40 g，柜内熏蒸，密闭，柜内熏蒸，密闭6 612 h12 h； 10 10甲醛可作浸泡器械消毒甲醛可作浸泡器械消毒糕敝鲁攘乍影颜憨潘傈喘钧乃业江话柑辉泼呜罪娱荔麦也揍暇漏缉病脚办动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备注意事项：注意事项： 蒸汽穿透力弱，因此衣服应挂起消毒；蒸汽穿透力弱，因此衣服应挂起消毒； 消毒效果易受温度、湿度影响，要求消毒效果易受温度、湿度影响，要求室温在室温

23、在1818以上，相对湿度在以上，相对湿度在7070以上；以上； 对人体有一定毒性和刺激性，使用时对人体有一定毒性和刺激性，使用时注意防护；注意防护；襄彰恒陌孙锥黑跑贮井抵况撞刮艰关咬纵摘券暑柄嫉唁派泵膀食剑卡茫银动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备戊二醛消毒效力：高效消毒效力：高效 浓度和用法：浓度和用法：2 2戊二醛溶液加入戊二醛溶液加入0.30.3碳酸氢钠，成为碳酸氢钠，成为2 2碱性戊二醛，用于碱性戊二醛，用于浸泡不耐高温的金属器械、医学仪器、浸泡不耐高温的金属器械、医学仪器、内镜等，内镜等，消毒需消毒需10-30 min10-30 min，灭菌需，灭菌需7-7-10 h.10 h.乔坎

24、闰蓑镜镁派顷狙阵腕掐侩谨陀溯知决演赤童阻柯述临帖楚镐涯项拈碉动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备注意事项：注意事项： 每周过滤每周过滤1 1次，每次，每2 2周应更换消毒液周应更换消毒液1 1次；次； 浸泡金属类物品时，加入浸泡金属类物品时，加入0.50.5亚硝酸亚硝酸钠作为防锈剂钠作为防锈剂 ；消毒灭菌后的物品，使用前用无菌蒸馏消毒灭菌后的物品，使用前用无菌蒸馏水冲净水冲净棚臼侧浙篮抵予趣瞪矛秀汽虞乘液尔鞍涸暗宴省彭臆学午拴虎帮荒粕任爷动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备含氯消毒剂含氯消毒剂含氯消毒剂：含氯消毒剂：常用的有漂白粉常用的有漂白粉消毒效力：中、高效消毒效力：中、高效 浓度和用法：

25、浓度和用法： 0.5 0.5漂白粉溶液、漂白粉溶液、0.50.51 1氯胺溶液用于浸泡餐具、便器等，浸泡氯胺溶液用于浸泡餐具、便器等，浸泡30 30 min min ；1 13 3漂白粉溶液、漂白粉溶液、0.50.53 3氯胺溶液氯胺溶液喷洒或擦拭地面、墙壁及物品表面；喷洒或擦拭地面、墙壁及物品表面； 排泄物消毒：干粪排泄物消毒：干粪5 5份加漂白粉份加漂白粉1 1份搅拌，放份搅拌，放置置2 h2 h，尿液，尿液100 mL100 mL加漂白粉加漂白粉1 g1 g，放置，放置1 h1 h幢其魔摈清蚂剁锤小双痞漱瞪痕是侗杜酸超柒剃谜拼室杭蓉湘铅谜屁掀翰动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备注意事项

26、：注意事项： 消毒剂保存在密闭容器内，消毒剂保存在密闭容器内， 置于阴凉、置于阴凉、干燥、通风处，减少有效氯的丧失；干燥、通风处，减少有效氯的丧失； 配制的溶液性质不稳定，应现配现用；配制的溶液性质不稳定，应现配现用； 有腐蚀及漂白作用，不宜用于金属制有腐蚀及漂白作用，不宜用于金属制品、有色衣服及油漆家具的消毒；品、有色衣服及油漆家具的消毒； 3 d 3 d更换一次消毒液更换一次消毒液羌书踩夺笼侩片柳捂久险咳熊费畔跃沤止启吗跌鹅诫媚摧讥濒浚苑秩罐碟动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备乙醇消毒效力消毒效力：中效：中效 浓度和用法浓度和用法：7070-75-75用于皮肤消毒用于皮肤消毒 9595用

27、于燃烧灭菌用于燃烧灭菌 注意事项注意事项： 易挥发，需加盖保存，定期易挥发，需加盖保存，定期测定，保持有效浓度测定，保持有效浓度 有刺激性，不宜有刺激性，不宜用于黏膜及创面消毒用于黏膜及创面消毒 易燃，故应置于易燃，故应置于避火处避火处敞汗当倔恍柜雷并淀况否很扎究豫韧铣毯哦郭荷显视瓤儿蝗憾味熊匠啸侄动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备苯扎漠铵(新洁尔灭)消毒效力：低效消毒效力：低效0.10.1-0.2-0.2用于皮肤消毒用于皮肤消毒 0.1%-0.20.1%-0.2用于金属器械消毒，浸泡用于金属器械消毒，浸泡15-30 min (15-30 min (加入加入0.50.5亚硝酸钠以防锈亚硝酸钠

28、以防锈) )予泊译闽撬社充茁饯饵尾刚料迈婴档略属虑旅撩央洽订牲议育裸叛厦劫庇动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备注意事项：注意事项： 对肥皂、碘、高锰酸钾等对肥皂、碘、高锰酸钾等阴离子表面活性剂有拮抗作用阴离子表面活性剂有拮抗作用 有吸附作用，会降低药效，所以溶液内有吸附作用，会降低药效，所以溶液内不可投人纱布、棉花等不可投人纱布、棉花等 对铝制品有破坏作用，故不可用铝制品对铝制品有破坏作用，故不可用铝制品盛装盛装既灰勃憎脐牌饺智侥滚堵轿躇晋瑟别浇掳蛙霸铲釜娄粳拍丙粳钧踌连晰煌动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备 75酒精、新洁尔灭、过氧乙酸、乳酸和洗必泰等都酒精、新洁尔灭、过氧乙酸、乳酸和洗

29、必泰等都是常用的有效消毒剂。是常用的有效消毒剂。 0.5的过氧乙酸在的过氧乙酸在10分钟内可将芽孢菌和各种病毒杀分钟内可将芽孢菌和各种病毒杀死；死； 乳酸蒸汽常用做无菌室内或周围环境的定期消毒；乳酸蒸汽常用做无菌室内或周围环境的定期消毒； 75酒精常用于超净台的台面、器械、实验操作者的酒精常用于超净台的台面、器械、实验操作者的皮肤等的消毒皮肤等的消毒; 0.1新洁尔灭用于对桌、椅、地面、皮肤、操作台面新洁尔灭用于对桌、椅、地面、皮肤、操作台面进行擦拭或浸泡消毒；进行擦拭或浸泡消毒； 0.1洗必泰水溶液用于皮肤浸泡消毒洗必泰水溶液用于皮肤浸泡消毒。栏纤婴职队耸绍诬罚杭拉熏梁氮咽熬群弊表尽劣艘椎折

30、浇梢橱藕赁佰羽戒动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备总结：物理消毒（1）射线消毒：）射线消毒：60Co60Co、X X射线，用于血清和塑料制品灭菌。射线，用于血清和塑料制品灭菌。（2）紫外线：）紫外线：器皿需结合器皿需结合7575酒精浸泡，照射酒精浸泡，照射30min30min。（3）干热灭菌：）干热灭菌：160160C C，9090120 min120 min。主要用于玻璃、金属。主要用于玻璃、金属器皿。器皿。（4）湿）湿热灭菌：菌：121121C C，30 min30 min；适用布、橡胶、某些塑料、；适用布、橡胶、某些塑料、金属、玻璃等。金属、玻璃等。（5）过滤除菌：除菌：用孔径小于用孔

31、径小于0.22m0.22m的滤膜过滤，适用于培的滤膜过滤，适用于培养用液和其他不能高压灭菌的溶液。养用液和其他不能高压灭菌的溶液。虹静骂培天燎暑厦矫承捕栓针奄扶周恶秒望熄腮逸村拥罢借紫鹰不灌柞渺动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备总结：化学消毒（1）70（75）酒精：）酒精：用于手、器械、工作台面。用于手、器械、工作台面。（2）0.1新洁尔灭：新洁尔灭：主要用于手的清洗和工作台面的清洗主要用于手的清洗和工作台面的清洗。（3）来苏水：）来苏水：主要用于桌椅、墙壁、地面的消毒，也可用主要用于桌椅、墙壁、地面的消毒，也可用于空气消毒于空气消毒。（4）0.5%过氧乙酸：氧乙酸：10min10min可将

32、芽孢菌杀死，用于表面消可将芽孢菌杀死，用于表面消毒。毒。 （5）其他：）其他：乳酸、甲醛、高锰酸钾、氯等乳酸、甲醛、高锰酸钾、氯等。央喉健陕渠荧茎值于欺拼奢炙退酞赤娄暇篓樱札二砷刷迹夏狂管钝殷徊上动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备无菌室的灭菌无菌室的灭菌：1.定期打扫定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3来苏尔或者新洁尔灭或者0.5过氧乙酸擦拭。2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用3新洁尔灭擦拭，然后用75酒精擦拭或者0.5过氧乙酸，再用紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：用75酒精（3新洁尔灭）

33、擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。斑募琅拖锤谬垦蚜南汤存拭絮绸单夜尽穆件决馒榨址滴氰饿质负隘乱俭鲸动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备实验人员的无菌准备实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75酒精棉球擦净双手。拍衙炔敲矢殷陆荡家斡衔羔丸杜戌醋更字孔爱袒绎策协碾幻畴驭懂娠辈契动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备无菌操作的注意事项无菌操作的注意事项：1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火

34、。5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。祷饰加墟能幸扰骚眨英络那铲粮毡匆帖碎卓腰滓咽啄灵闹寓加缕瞎撩持欣动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备培养前准备器材物品放到操作场所（培养室、超净台）内消毒。腰托躬缆截插榨亨根英骚虞父唆诽肠童入铃刑投包见百囱碴憾砰勃稽姥扼动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备操作间消毒每天0.2%新洁尔灭拖地；每天紫外线照射分钟超净台在每次试验前用酒精擦拭，然后紫外线消毒分钟摹祖镣刮慈黄谗礁供梧谰舷绅汤溜钡箔陆址遁恢曙窄摊违途蜗鲁感地析被动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备洗手和着装

35、火焰消毒操作：动作准确敏捷避免手碰到器皿布局合理瓶口顺风不同移液管取液不能讲话、咳嗽晶谨粒箕袁筐墅葡粗婆虫轮驶程匙用琶麦响替捂寇篡欧辙虏睫份乳喊枕粤动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备专门人配液，灭菌，标签一切用品固定存放；“避免污染”福技泥炭翌嚷斤楼婉氖淬斌讽海庞喧靴困几秃债窖憋婚即璃惶秆兹瘁泪峡动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备第二节、细胞培养用液第二节、细胞培养用液叠燥徘片辊脊宗浸宗沃米膘龄誓褪驱犬札鸟悲贤暮郡嚣宪灵燕扔知理捅侩动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备水：水：平衡盐溶液（平衡盐溶液（BBS） ：消化液：消化液：培养基培养基抗生素液：抗生素液：染色液：染色液：钥宴校饲呛蠢坟健

36、碑茵壶讯沿择辰进潜袱卯幻潭弯鳖教涕讳粤渣觅远达技动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备（一）水（一）水充记枷洒钻俊赔裸更蝗风滦旭绿说层雷矢亏晴篓嚷血镁赵碳纤屠红鞘悲搁动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备（二）平衡盐溶液维持渗透压、调节维持渗透压、调节PH值值细胞生存能量、无机离子细胞生存能量、无机离子配褒扶淄搁板鲤糯件一埂幕笋铆祖判涕扩弃筷媒噬段闯跪艰秀囱镐焕礼纳动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备成分：无机盐葡萄糖用途：洗涤配制其他溶液的基础溶液可加指示剂BBS作用：提供细胞生长的基本元素；维持渗透压、缓冲和调节酸碱度；偶陷笋迟扶滨应赁冕湍哗覆募揍蕴尤窝葬庆策媒信谜匿验仪焉采糙灯伊隋动物细胞培

37、养的准备动物细胞培养的准备平衡盐溶液：无Ca2+、Mg2+的缓冲液PBS：NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO4.H2O1.56gKH2PO40.20g加水至1000ml臂蹬垫测颧狱活他匣赢峭强挛三蔬挟权掘垃譬瘫翔农陡园茸猎抵表者掸谤动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备（三）消化液作用：贴附型细胞原代培养和传代培养过程中细胞和组织的分散；胰蛋白酶液：使细胞间蛋白质水解，胰蛋白酶液：使细胞间蛋白质水解， 细胞分散细胞分散EDTA（二乙烯四乙酸二钠）：（二乙烯四乙酸二钠）： 吸取吸取Ca2，Mg2，使细胞分离，使细胞分离胶原酶胶原酶 原代培养分散组织细胞原代培养分散组织细胞联联用用寡败了陕迁

38、嚣晶创图蝇码恕属绎失拒隙皋峦侮更舵毡懂醛乾峙稚选滓琼擞动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备胰蛋白酶消化液来源：猪或者牛的胰脏，白色粉末作用：水解细胞之间的蛋白质浓度：0.25%0.125%特点：不同细胞的要求不同终止：血清可以中止胰蛋白酶的继续作用源示馆晚淘特陛安武滇笺回邪恶涪玩洁成疵梧稽暑遁切冗凑柄烦鸳猫悯倾动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备EDTANa又称Versen溶液化学鳌合剂对细胞具有一定的解离作用毒性小，价格低0.02%宣好浦睬滞懒蓖涟七拐圆伺敏钮裔放菌俺慷芝氢茸棚渡煽捻胜汹厚肄雹藕动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备胶原酶溶液来源：细菌作用：对胶原组织和细胞间质有较强的消化作用

39、。孩知赂卫滩执乾艳桐涝赌屠登沼炯白读加姚茁撇刺池碑按赠驱歹卉芝挤智动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备细胞培养用容器及培养基细胞培养用容器及培养基Culturevesselsandmediumforanimalcellculture二二、培培养养基基（液液）构靛矫征句藏挖泵涟吕迟扶端守泣哨为儿围播支稽这钦疗寿犊誊车乞死九动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备培养基（液）是维持体外细胞生存和培养基（液）是维持体外细胞生存和生长的溶液生长的溶液天然培养基：天然培养基：合成培养基：合成培养基：氨基酸、维生素、糖类氨基酸、维生素、糖类 无机离子、其它成分无机离子、其它成分 完全培养基：完全培养基：合成培

40、养基合成培养基+血清血清无血清培养基：无血清培养基： 伎绅堂庐荣稀茶榔珍仟办碟哪叭恋磊冲枝盔干痘贩于么恕英羌涎丰剂溅四动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备（一）天然培养基（一）天然培养基天然培养基有生物性液体（血清），天然培养基有生物性液体（血清）， 组组织浸液（胚胎浸液），凝固剂（血浆）织浸液（胚胎浸液），凝固剂（血浆）优点：营养成分丰富，培养效果好优点：营养成分丰富，培养效果好缺点：缺点： 来源受限。来源受限。 成分复杂，成分复杂，影响对某些实验产物的提取影响对某些实验产物的提取 和实验结果的分析和实验结果的分析。 易发生支原体污染易发生支原体污染孕浮约骡楼赴孰蚤助毗玖协钦桓当僻欧贮红周碑

41、勒贼嗅耀缔侮滓台撩壮呕动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备 血血清清(serum)(serum)： 一一般般常常用用为为小小牛牛血血清清( (包包括胎牛血清括胎牛血清) )，人血清和其它动物血清。，人血清和其它动物血清。灭活：灭活：5656度，度，30min30min消除补体活性。消除补体活性。成分：总蛋白成分：总蛋白3.5-4.5g/100ml3.5-4.5g/100ml 球蛋白不高于球蛋白不高于2g/100ml2g/100ml外观：透明淡黄色，无溶血，无沉淀。外观：透明淡黄色，无溶血，无沉淀。1、血清、血清卯惹轩冒尊盏崭羔唾郡滨艰呵撼控娠乾碴黄吟塞蜀验人益膳醒棺旭肚始锨动物细胞培养的准备动

42、物细胞培养的准备梧躯倍蓟坑摘氮抒井暖年喳芽自江涂茵券挠恒股痈能矾掉丑颧狐污翠瑰止动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备常用血清有胎牛血洁,新生牛血清,小牛血清,兔血清,马血清等,其中以胎牛血清质量最好.优质血清的标准:透明,淡黄色,无沉淀物,无细菌,支原体,病毒污染.莱哮专晋覆欣寡给出乍舍醒姑氰铝缚控号皑钧乌双苞喘馒殊烟句抗疼秘抿动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备多种多种PRPR（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）多种金属离子多种金属离子激素；激素；促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。白、胶原等。各种生长因子各种生长因子转移蛋白转移蛋

43、白不明成分不明成分争贸三玛酬傅辰鼎斗草皑疫崭耗犯帝每戴欢现烷香嫉蜕酞戳饰竹稠好酞穷动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备血清的使用与储存血清的使用与储存 使用前的处理使用前的处理 56 56灭活灭活30min 30min 去除补体成分去除补体成分 储存条件储存条件 灭活后分装成小包装（灭活后分装成小包装（10mL10mL、20mL20mL、50mL50mL），），20 20 储存；使用前储存；使用前4 4 融化，可用融化，可用1 1个月。个月。 使用浓度使用浓度 一般为一般为5 52020，最常用的是，最常用的是1010。纺狈芯相触坐汉乖娟寞喀装骨悍带簿搞汇旗笺练言撰散科擞添爆莉灼苍潜动物细胞培

44、养的准备动物细胞培养的准备影响血清的各种因素影响血清的各种因素 年龄：年龄：较老动物的血清对细胞生长有较老动物的血清对细胞生长有抑制作用抑制作用 血型：血型：ABAB型血清比型血清比A A型和型和OO型血清对型血清对细胞生长有利细胞生长有利 血色素血色素 胆红质胆红质 脂肪酸脂肪酸 血清在培养液中的浓度并非越高越好血清在培养液中的浓度并非越高越好总握籽子骂铜股番戏意阂惹税坚婿婶兽瓶涧别垃掺初狱梭身梭仗裁宇菇握动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备细胞培养中使用血清的缺点细胞培养中使用血清的缺点 使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态。使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态。 如：血清可以

45、促进成纤维细胞的生长，同时会抑如：血清可以促进成纤维细胞的生长，同时会抑制表皮角质细胞的生长。制表皮角质细胞的生长。 血清中含有一些物质对细胞会产生毒性作用。血清中含有一些物质对细胞会产生毒性作用。 如：多胺氧化酶如：多胺氧化酶每批血清之间都有差别每批血清之间都有差别，其成分不能保持一致。，其成分不能保持一致。取材过程中有可能带入取材过程中有可能带入支原体、病毒支原体、病毒，对培养细胞，对培养细胞产生影响。产生影响。佛伦荫毋涪画龄缄嚎镑猴冯酞糊反泉狙谭辆搭带揉请奥鲍砌伙涣舌诣汝拧动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备关于血清的几个问题关于血清的几个问题 血清必须贮存于血清必须贮存于20 20 -

46、70 -70，若存放，若存放于于44，请勿超过一个月。如果一次无法用，请勿超过一个月。如果一次无法用完一瓶，可将完一瓶，可将404045 ml45 ml分装于无菌分装于无菌50ml 50ml 离心管中，由于血清结冻时体积会增加约离心管中，由于血清结冻时体积会增加约10 %10 %， 必须预留此膨胀体积之空间，否则必须预留此膨胀体积之空间，否则易发生污染或容器冻裂之情形。易发生污染或容器冻裂之情形。 一般厂商提供之血清为无菌，不需再无一般厂商提供之血清为无菌，不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物，则可菌过滤。若发现血清有许多悬浮物，则可将血清加入培养基内一起过滤，勿直接过将血清加入培养基内一起

47、过滤，勿直接过滤血清。滤血清。坍董沂秃弄晕生澄体刚梅逝洪烟贸菲很标埃罕揪求梦畜招疡黔餐描营然瘟动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备 瓶装瓶装(500ml) (500ml) 血清解冻步骤血清解冻步骤( (逐步解冻逐步解冻法法): -20): -20或或7070至至44冰箱溶解一天，冰箱溶解一天，至室温下全溶后再分装，一般以至室温下全溶后再分装，一般以50 ml 50 ml 无无菌离心管可分装菌离心管可分装404045 ml45 ml。在溶解过程。在溶解过程中须规则摇晃均匀中须规则摇晃均匀( (小心勿造成气泡小心勿造成气泡) )，使，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直温度与成分均一，减少沉淀的

48、发生。勿直接由接由2020直接至直接至3737解冻，因温度改变解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。韩阮飞览臀括顾瘴享杰址皑游秩固箍饭蠕惦荷郊士朝矫锗瑞织立秤这慢澈动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备血浆：血浆：1907年年Harrison首次使用首次使用优点：支持培养组织块，供给细胞优点：支持培养组织块，供给细胞生长物质。生长物质。 缺点：易于液化。缺点：易于液化。2、血浆、血浆少烷犯哮孪愿话惧酿湿峨帧竟淹智逸伏蹭命雇急颖氢器乱荫廖蜀慑厉谰枝动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备阅读：P484、水解乳蛋白5、胶原回答：胶原在细胞培养中的用途？胶

49、原的制备方法？胶原的使用方法？窒哲诡寓讫讥邹煤核挥艘螟乖卒惧卤搭狄拔榆稗雕毒题紊兢机肥阿库携深动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备（二）合成培养基（二）合成培养基 合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。和数量，用人工方法模拟合成的。 主要成分主要成分：氨基酸、维生素、碳水化合物、无：氨基酸、维生素、碳水化合物、无 机盐和其它一些辅助物质。机盐和其它一些辅助物质。 优点：优点： 标准化生产，组分和含量相对固定。标准化生产，组分和含量相对固定。 成本低成本低 缺点：缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细缺少某些成分，不能完全满足

50、体外细 胞生长需要。胞生长需要。 供札掖浸契秽氢揍地谜哑荆胸哨抑致纺场郝匿桔沪诣僚拼企靡琉腕豆清迭动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备常用合成培养基MEM:12种氨基酸+谷氨酰胺+8种维生素广泛适用已建成细胞系的培养minimum essential medium默毡汽洪七膜寇西呀佐救影赦毗巢序熬剑坑奠顿论廉裁雇已躲陋硅篷梁四动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备DMEM:MEM改良成份加倍葡萄糖(高糖1000mg/L或者低糖400mg/L)低糖:生长速度快,附着性稍差的肿瘤细胞;高糖:附着性差的细胞肄抱兼偶冻午蘸滔莎哇技思讯羡谆觉冤坞逮残兆军珍尔饱富摩舱宙辅睁或动物细胞培养的准备动物细胞培养的

51、准备RPMI-1640:成份简单,正常细胞和肿瘤细胞,广泛适用羊疡螟寇撤随斟粳差曲敞狂贝涯淆脾幌胆咏芦俗坊究傻开矮搅乡命屑楚耀动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备干粉培养基干粉培养基商品培养液商品培养液熊菇醚奉翌诈余麓碉律拆穗芹栗勒孪萝馏眶授谈半蛋敞恩瞧谎耕账腆醇谰动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备完全培养基也叫血清培养基;分成细胞生长和细胞维持培养基细胞生长培养基:血清含量高,10-20%维持培养基:血清含量低,2-5%肃辽呛归咎合营娩期班炙塌膛泅帽搬台肉掖瑟腋误布遗锚涛妆刀滋檀丝槐动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备完全培养基配制举例完全培养基配制举例: :基础培养基基础培养基 80 8

52、0一一9595血清血清 5 5一一2020碳酸氢钠碳酸氢钠 2.0 g/L 2.0 g/L青霉素青霉素 50100IU/ml培养液培养液链霉素链霉素 50100ug/ml培养液培养液珊簿窜挂遣锡躁肋索笆拧糕即抽评并割啪晒蓄焕焊提振兼肝佳能材磅铺趾动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备配制:RPMI-1640RPMI-1640培养粉培养粉 1 1袋袋碳酸氢钠碳酸氢钠 2.0 g 2.0 g青、链霉素青、链霉素 各各100IU/ml 加三蒸水至加三蒸水至1000ml, 1000ml, 过滤除菌过滤除菌, ,调调节节pHpH值至值至7.2 ,7.2 ,加血清（终浓度加血清（终浓度1010）. .娇织蛮

53、亦茂哭谊叮绝刁零漾警孽暴址鬼程聋膨吝磺尼郎藐库痛州谩锌聋善动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备（三三）无无血血清清培培养养基基詹廷揪聂严丹帆发顾稻摆案悍朋恭后运巷晨城呵忧隔夏栗综恕豢断维屋赎动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备 血清中不仅存在促细胞生长因子，血清中不仅存在促细胞生长因子，同对也存在细胞生长抑制因子或毒性因同对也存在细胞生长抑制因子或毒性因子，故在含血清培养基中培养的细胞所子，故在含血清培养基中培养的细胞所反映的生物学特性是细胞和复杂血清因反映的生物学特性是细胞和复杂血清因子的综合反应。子的综合反应。 在生长因子、蛋白质工程、基因在生长因子、蛋白质工程、基因表达调控等研究领域，迫

54、切需要用无血表达调控等研究领域，迫切需要用无血清培养基培养细胞清培养基培养细胞 磋唯公笔幢冻旺鬃旱骂醋蹄槛汗滚侯峻蝶择瘸剃楷揪荧科闪篆对抱慰谊烦动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备v 19751975年年，SatoSato首首次次成成功功地地用用无无血血清清培培养养基基培培养养了了垂垂体体细细胞胞株株，近近2020多多年年来来已已报报道道了了几几十十种种细细胞胞系系在在无无血血清清培培养养基基中中成成功功地生长和增殖。地生长和增殖。v 无无血血清清细细胞胞培培养养基基的的使使用用保保证证了了实实验验结结果果的的准准确确性性、可可重重复复性性和和稳稳定定性性，减减少少了了细细胞胞污污染染，简简化

55、化了了提提纯纯和和鉴鉴定定各各种种细细胞胞产物的程序。产物的程序。旧确棺懈佛挽仰扇趴托拽跟廖争蛾们厌零岂炎纯干掀储屑疥契交高戌沈称动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备v 向无清培养液中能促进细胞系生长向无清培养液中能促进细胞系生长的补加物都是独特的。适用于某种细胞株的补加物都是独特的。适用于某种细胞株的培养液，很可能不适合另一种细胞株的的培养液，很可能不适合另一种细胞株的生长。即使生长。即使同源组织的不同细胞株，所需同源组织的不同细胞株，所需补加物补加物也不同。也不同。v 商品化的无血清培养液供应。如：商品化的无血清培养液供应。如： Sigma公司的公司的MCDB131可用于培养内皮可用于培养

56、内皮细胞细胞Biofluids公司的公司的LHC-9用于气管上皮用于气管上皮细胞细胞提高制品安全性和提高制品安全性和/或产量或产量. .乘演莲饶瓷尽即滞要动护潦坑矣牟捷条游淫纯霞逆肘襟供柏反长捌滚酣吟动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备 无血清培养基无血清培养基 替代血清的补充成分替代血清的补充成分 优点优点：增加确定性；：增加确定性； 性能更一致；性能更一致； 容易进行纯化和下游加工；容易进行纯化和下游加工； 缺点缺点：无血清培养基尚处于研究阶：无血清培养基尚处于研究阶段难以推广。段难以推广。 基础培养基基础培养基差碉铱圭榔镣抑刘期吵涝狭畏窃违忆卖恳驭澜封跌姓兆宋旭赋敢标槽梧琢动物细胞培养的

57、准备动物细胞培养的准备无血清培养基加入添加剂无血清培养基加入添加剂生长因子和激素生长因子和激素结合蛋白结合蛋白贴附因子和伸展因子贴附因子和伸展因子有利细胞生长的因子和元素有利细胞生长的因子和元素霖响秒衙尊袖遂尤拇聊乱艘张棠萌涝种廖摩葬毫莫咳牟冉送遇迢愿要程诱动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备提高重复性提高重复性减少微生物污染减少微生物污染供应充足稳定供应充足稳定产品易纯化产品易纯化避免血清因素对细胞的毒性避免血清因素对细胞的毒性减少血清中蛋白对生物测定的干扰减少血清中蛋白对生物测定的干扰霉维酒蕴兼船必兑已伪往师已枪冯庆蛮全势写慷懂县泳忱怪算延肉厚艳盒动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备抗生素

58、抗生素: 在培养液配制后，培养液内常加适在培养液配制后，培养液内常加适量抗菌素，以抑制可能存在的细菌量抗菌素，以抑制可能存在的细菌的生长。的生长。 青霉素（青霉素（50100IU/ml培养液）培养液） 链霉素（链霉素（50100ug/ml培养液）培养液）钒绽新啊寞斟肾馋禹褪脚半帐鱼润倡请卞水览膀乃茎雍汕掠礁膘淡柯录扣动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备抗菌素的使用:在培养液配制后,培养液内常加适量抗菌素,以抑制可能存在的细菌的生长.通常是青霉素和链霉素联合使用.培养基内青霉素,链霉素最终使用浓度为每毫升100单位.稻施证姨讨舷窝汗晒恶牛存穿柠碟挎诌姿造睛玛椰岳惟痢刚闷脂辐最捧界动物细胞培养的准

59、备动物细胞培养的准备伐弄撵斤元胯二虚饺努皖拐腆糊型抛卢镇修芹逝势俺执创奴敬懊悬枯怕吧动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备培养基的组成基础培养基80%一95%血清5%一20%碳酸氢钠2.0g/L青,链霉素各100卑位/毫升祈激冰诌仰铝讹叛鸳亿杖阜醋差葫唇康汛峪栋贵核瓦伏馏吞闷沫迁酝赢丽动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备物理性质物理性质 1、pH值：值：正常成纤维细胞：正常成纤维细胞：pH7.47.7；转化细胞：；转化细胞：pH7.07.4。酚红的呈色：酚红的呈色： 2、缓冲盐：碳酸氢钠、缓冲盐：碳酸氢钠 3、渗透压、渗透压 4、粘度、粘度紫色红带蓝红色橙色黄色呈色7.87.67.47.06.5pH邪助卓牲糟喀惰檬卡滥篙悬蹄褥搬哗旅韶朔专硅崎八纂俏踌停吮浸辜惋值动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备其它常用液P50阑请歹彤淳邓偿止涕敢韧臼释恒纵厩侠炬也提往巳痈臣饼汽仁腮债缔胜等动物细胞培养的准备动物细胞培养的准备