最新抗生素类药物分析PPT文档

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1、第一节第一节 概述概述抗生素的定义抗生素的定义 抗生素是细菌、放线菌和真抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，对各种菌等微生物的代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。作用。抗生素的来源抗生素的来源1. 1. 生物合成（发酵）生物合成（发酵） 2. 2. 化学合成或半合成化学合成或半合成抗生素质量的复杂性抗生素质量的复杂性 产品稳定性差产品稳定性差 分子结构大多不稳分子结构大多不稳 定，降解后疗效下定，降解后疗效下降、失效或增加毒降、失效或增加毒副作用副作用发酵过程不易控制发酵过程不易控制易受污染易受污染生产工艺复杂生产工艺复杂发酵液中杂质发酵液中

2、杂质 无机盐、脂肪、各种蛋白质、无机盐、脂肪、各种蛋白质、各种降解产物、色素、热原、各种降解产物、色素、热原、毒性物质毒性物质 增加增加 异常毒性、细菌内毒素、异常毒性、细菌内毒素、热原、降压物质、无菌热原、降压物质、无菌 检查检查含量测定方法含量测定方法（一）生物学方法（一）生物学方法测定抗生素抑菌或杀菌的能力测定抗生素抑菌或杀菌的能力优点优点1、与临床效果一致、与临床效果一致2、灵敏度高、灵敏度高3、干扰物质少、干扰物质少缺点缺点1、操作繁琐、操作繁琐2、培养时间长、培养时间长2、测定误差大、测定误差大（二）化学及物理化学方法（二）化学及物理化学方法以理化方法测定主药含量以理化方法测定主药

3、含量优点优点 1. 准确度高准确度高2. 简单、快速简单、快速1. 不一定代表生物效价不一定代表生物效价缺点缺点2. 易受杂质干扰易受杂质干扰分类分类（按结构与性质）：（按结构与性质）： 内酰胺类、氨基糖苷类、内酰胺类、氨基糖苷类、 四环素类、大环内酯类、四环素类、大环内酯类、 氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类 林可霉素类、其他抗生素类林可霉素类、其他抗生素类第二节第二节 内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 青霉素类青霉素类头孢菌素类头孢菌素类青霉素青霉素（青霉素（青霉素G、苄青霉素）、苄青霉素）氨苄西林氨苄西林（氨苄青霉素）（氨苄青霉素）阿莫西林阿莫西林（羟氨苄青霉素）（羟氨苄

4、青霉素）普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素头孢氨苄头孢氨苄头孢拉定头孢拉定头孢羟氨苄头孢羟氨苄头孢噻吩钠头孢噻吩钠酸性酸性结构与性质结构与性质一、一、NaNa与碱金属与碱金属(Na+、K+)成盐成盐 （一）羧基（一）羧基 易溶于水易溶于水 与有机碱与有机碱(普鲁卡因普鲁卡因)成盐成盐 难溶于水难溶于水普鲁卡因普鲁卡因青霉素青霉素（二）手性（二）手性C (5%头孢唑啉钠溶液头孢唑啉钠溶液 1824)头孢菌素类头孢菌素类 C6 C7青霉素类青霉素类 C3 C5 C6 旋光性旋光性 （三）共轭体系（三）共轭体系 头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系 青霉素类青霉素类 母核无明显母核无明显UV

5、 多数有苯环取代基多数有苯环取代基 UV青霉素钠青霉素钠UV7-20（四）（四）内酰胺环内酰胺环 水溶液水溶液 不稳定不稳定 干燥纯净干燥纯净 稳定稳定 不稳定不稳定性因素性因素四元环张力大四元环张力大 酰胺键易水解酰胺键易水解 （某些金属离子）（某些金属离子）（温度）（温度）某些氧化剂某些氧化剂例例青霉素的降解反应青霉素的降解反应青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑青霉噻唑酰基羟胺酸酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2二、二、K+、Na+反应反应（一）（一）鉴别鉴别 焰色焰色鲜黄色鲜黄

6、色 + 醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+ 焰色焰色紫色紫色 + 0.1%四苯硼钠四苯硼钠 + Ac白白 K+（二）呈色反应（二）呈色反应1. 羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应 -内酰胺类内酰胺类NaOH呈色呈色Fe3+/3H+H+Fe3+/3 （红、棕、褐）（红、棕、褐）2、 与与H2SO4 - HNO3反应反应头孢菌素类头孢菌素类3. 茚三酮茚三酮反应反应 - -氨基氨基-氨基、伯胺氨基、伯胺某些羟基胺类某些羟基胺类酮式酮式烯醇式烯醇式茚三酮茚三酮茚三酮茚三酮缩合缩合蓝紫色蓝紫色4. 双缩脲反应双缩脲反应-内酰胺类内酰胺类（开环分解）（开环分解）似肽键似肽键蓝紫色蓝紫色5. 与变色酸与变色酸-硫酸反

7、应硫酸反应活泼活泼“-CH2-”青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨苄西林氨苄西林（分解）（分解）变色酸变色酸显色显色150（缩合）（缩合）（缩合）（缩合）6. 与重氮苯磺酸反应与重氮苯磺酸反应（偶合）（偶合）酚羟基酚羟基头孢哌酮头孢哌酮（偶合）（偶合）7. 与铜盐反应与铜盐反应橄榄绿色橄榄绿色NaOH专属反应专属反应（三）沉淀反应（三）沉淀反应1. 遇酸遇酸在过量在过量HCl或或有机溶剂中溶解有机溶剂中溶解2. 有机胺盐反应有机胺盐反应（1）重氮化）重氮化 - 偶合反应偶合反应 重氮化重氮化-偶合反应偶合反应芳伯氨基芳伯氨基普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素（2）与三硝基苯酚反应）与三硝

8、基苯酚反应 二苄基乙二胺二苄基乙二胺mp三硝基苯酚三硝基苯酚光谱法光谱法（四）（四）1、 UV法法样品、分解产物样品、分解产物Cu2+头孢氨苄头孢氨苄 max = 262nm青霉素青霉素V钠钠 A280nm/A264nm = 1.301.50Cu2+pH3.8氯唑青霉素氯唑青霉素 341 0.682双氯青霉素双氯青霉素 342 0.653苯唑青霉素苯唑青霉素 339 1.328(nm)2、 IR法法-内酰胺环内酰胺环酰胺酰胺3、 NMR法法 利用不同结构的原子核在利用不同结构的原子核在D2O中有中有不同的不同的NMR光谱进行鉴别光谱进行鉴别JP以吸收峰频率对峰强度进行作图以吸收峰频率对峰强度进

9、行作图 主要研究原子核的磁化性质及其在主要研究原子核的磁化性质及其在外磁场中的运动规律外磁场中的运动规律硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素NMR谱谱7-08硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素NMR色谱法色谱法（五）（五）1、 TLC法法对照品对照法对照品对照法2、 HPLC法法 精密称取样品精密称取样品0.1009g，置，置250ml碘瓶中，碘瓶中，加水加水10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液，振摇使溶解，精密加溴滴定液(0.1mol/L)25.0ml，再加盐酸，再加盐酸5ml，立即密，立即密塞塞并振摇并振摇1分钟，在暗处静置分钟，在暗处静置15分钟后，注意分钟后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液微开瓶塞，加碘化钾试液

10、10ml，立即密塞，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.09863mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，消耗硫代硫酸钠滴定液续滴定至蓝色消失，消耗硫代硫酸钠滴定液(0.09863mol/L)13.80ml，并将滴定结果用空，并将滴定结果用空白试验校正，空白试验消耗硫代硫酸钠滴定白试验校正，空白试验消耗硫代硫酸钠滴定液（液（0.09863mol/L）21.64ml。每。每1ml溴滴定溴滴定液液(0.1mol/L)相当于相当于13.01mg的的C12H17N2NaO3。酸性酸性结构与性质结构与性质一、一

11、、NaNa与碱金属与碱金属(Na+、K+)成盐成盐 （一）羧基（一）羧基 易溶于水易溶于水 与有机碱与有机碱(普鲁卡因普鲁卡因)成盐成盐 难溶于水难溶于水普鲁卡因普鲁卡因青霉素青霉素（二）手性（二）手性C (5%头孢唑啉钠溶液头孢唑啉钠溶液 1824)头孢菌素类头孢菌素类 C6 C7青霉素类青霉素类 C3 C5 C6 旋光性旋光性 （三）共轭体系（三）共轭体系 头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系 青霉素类青霉素类 母核无明显母核无明显UV 多数有苯环取代基多数有苯环取代基 UV青霉素钠青霉素钠UV7-20（四）（四）内酰胺环内酰胺环 水溶液水溶液 不稳定不稳定 干燥纯净干燥纯净

12、 稳定稳定 不稳定不稳定性因素性因素四元环张力大四元环张力大 酰胺键易水解酰胺键易水解 （某些金属离子）（某些金属离子）（温度）（温度）某些氧化剂某些氧化剂例例青霉素的降解反应青霉素的降解反应青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑青霉噻唑酰基羟胺酸酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2(头孢噻吩钠水溶液头孢噻吩钠水溶液2524h失活失活8%)二、二、K+、Na+反应反应（一）（一）鉴别鉴别 焰色焰色鲜黄色鲜黄色 + 醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+ 焰色焰色紫色紫色 + 0.1%四苯硼钠四苯

13、硼钠 + Ac白白 K+（二）呈色反应（二）呈色反应1. 羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应 -内酰胺类内酰胺类NaOH呈色呈色Fe3+/3H+H+Fe3+/3 （红、棕、褐）（红、棕、褐）例：例：ChP(2000)头孢哌酮头孢哌酮鉴别鉴别 取本品取本品10mg，加水，加水2ml与盐与盐酸羟胺溶液酸羟胺溶液取取34.8%盐酸羟胺溶盐酸羟胺溶液液1份，醋酸钠份，醋酸钠-氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液1份，份，乙醇乙醇4份份3ml，振摇溶解后，放置，振摇溶解后，放置5min，加酸性硫酸铁铵试液，加酸性硫酸铁铵试液1ml，摇匀，显红棕色。摇匀，显红棕色。2、 与与H2SO4 - HNO3反应反应头孢菌素类头孢菌素类

14、3. 茚三酮茚三酮反应反应-氨基、伯胺氨基、伯胺某些羟基胺类某些羟基胺类酮式酮式烯醇式烯醇式茚三酮茚三酮茚三酮茚三酮缩合缩合蓝紫色蓝紫色4. 双缩脲反应双缩脲反应-内酰胺类内酰胺类（开环分解）（开环分解）似肽键似肽键蓝紫色蓝紫色5. 与变色酸与变色酸-硫酸反应硫酸反应活泼活泼“-CH2-”青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨苄西林氨苄西林（分解）（分解）变色酸变色酸显色显色150（缩合）（缩合）（缩合）（缩合）6. 与重氮苯磺酸反应与重氮苯磺酸反应（偶合）（偶合）酚羟基酚羟基头孢哌酮头孢哌酮（偶合）（偶合）7. 与铜盐反应与铜盐反应橄榄绿色橄榄绿色NaOH专属反应专属反应（三）沉淀反应（三）沉淀反应

15、1. 遇酸遇酸在过量在过量HCl或或有机溶剂中溶解有机溶剂中溶解2. 有机胺盐反应有机胺盐反应（1）重氮化）重氮化 - 偶合反应偶合反应 重氮化重氮化-偶合反应偶合反应芳伯氨基芳伯氨基普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素（2）与三硝基苯酚反应）与三硝基苯酚反应 二苄基乙二胺二苄基乙二胺mp三硝基苯酚三硝基苯酚光谱法光谱法（四）（四）1、UV法法样品、分解产物样品、分解产物头孢氨苄头孢氨苄 max = 262nm青霉素青霉素V钠钠 A280nm/A264nm = 1.301.50Cu2+Cu2+pH3.8氯唑青霉素氯唑青霉素 341 0.682双氯青霉素双氯青霉素 342 0.653苯唑

16、青霉素苯唑青霉素 339 1.328(nm)2、 IR法法-内酰胺环内酰胺环酰胺酰胺3、 NMR法法 利用不同结构的原子核在利用不同结构的原子核在D2O中有中有不同的不同的NMR光谱进行鉴别光谱进行鉴别JP 主要研究原子核的磁化性质及其在主要研究原子核的磁化性质及其在外磁场中的运动规律外磁场中的运动规律色谱法色谱法（五）（五）1、TLC法法对照品对照法对照品对照法2、HPLC法法三、三、 含量测定含量测定（水解）（水解）碘量法碘量法（一）（一）1. 原理原理水解产物水解产物定量过量定量过量剩余剩余-内酰胺类内酰胺类ChP反应分两步进行：反应分两步进行：1. 水解反应水解反应 (按化学计算量进行

17、按化学计算量进行)2. 氧氧化化-还还原原反反应应 (无无固固定定的的量量关关系系，受受温温度度、PH值值和和时时间间等等因因素素影影响响，应应严严格格控控制制反反应应条条件件并并采采用标准品平行对照测定用标准品平行对照测定)第一步第一步第二步第二步例例注射用普鲁卡因青霉素注射用普鲁卡因青霉素 含量测定含量测定 取装量差异项下的内容物，精密称取装量差异项下的内容物，精密称取约取约0.12g，置，置100ml量瓶中，加水使溶量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置碘瓶中，加置碘瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液1ml放置放置20分钟，再加分

18、钟，再加1mol/L盐酸溶液盐酸溶液1ml与醋酸与醋酸-醋酸钠缓冲液醋酸钠缓冲液(pH4.5)5ml，精密，精密加入碘滴定液加入碘滴定液(0.01mol/L)15ml，密塞，密塞，摇匀，在摇匀，在2025暗处放置暗处放置20分钟，用分钟，用硫代硫酸钠滴定液（硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定，）滴定，至近终点时加淀粉指示液，继续滴定并至近终点时加淀粉指示液，继续滴定并强力振摇，至蓝色消失；另精密量取供强力振摇，至蓝色消失；另精密量取供试品溶液试品溶液5ml，置碘瓶中，加醋酸，置碘瓶中，加醋酸-醋酸醋酸钠缓冲液（钠缓冲液（pH4.5）5ml，精密加入碘滴，精密加入碘滴定液（定液（0.01

19、mol/L）15ml，密塞，摇匀，密塞，摇匀，在暗处放置在暗处放置20分钟，用硫代硫酸钠滴定分钟，用硫代硫酸钠滴定液（液（0.01mol/L）滴定，作为空白。同时）滴定，作为空白。同时用青霉素钠对照品同法测定作对照，算用青霉素钠对照品同法测定作对照，算出供试品的含量。出供试品的含量。V样空样空V样样对照液对照液+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴+碱碱+酸酸+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴 V对空对空V对对2. 方法方法供试液供试液+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴+碱碱+酸酸+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴 空白试验空白试验A、消除样品已降解产物的干扰、消除样品已降解产物的干扰B、消除样品

20、中其他消耗碘的杂、消除样品中其他消耗碘的杂 质的干扰质的干扰C、消除碘挥发造成的误差、消除碘挥发造成的误差 以未经水解的样品作空白测定以未经水解的样品作空白测定空白空白样品样品I2Na2S2O3I-I2 采用标准品平行对照测定采用标准品平行对照测定A、可消除温度、可消除温度、pH、操作、环、操作、环 境等条件的影响境等条件的影响B、使本法测定结果与微生物检定、使本法测定结果与微生物检定 法一致法一致3. 条件条件（1）弱酸性）弱酸性 pH4.5碱碱 I2 IO3- + I-酸酸 普鲁卡因与碘在酸性条件普鲁卡因与碘在酸性条件 下会产生复盐沉淀下会产生复盐沉淀（2）温度）温度 2426温度温度38

21、 未水解的供试品亦消耗碘未水解的供试品亦消耗碘（3）水解时间）水解时间以水解以水解20分钟后的分钟后的耗碘量最大耗碘量最大（4）反应时间）反应时间反应反应20分钟后，分钟后，耗碘量随时间的耗碘量随时间的变化较小，可减小含量测定的误变化较小，可减小含量测定的误差。差。4. 特点特点（1）灵敏度高）灵敏度高样品样品 : 碘碘 = 1 : 8（2）反应条件、实验操作要求高）反应条件、实验操作要求高V对对、V对空对空V样样、V样空样空1份含量份含量加试剂次序、反应时间、滴定速度相同加试剂次序、反应时间、滴定速度相同4I28I-5. 计算计算原料原料汞量法汞量法（二）（二）1. 原理原理（水解）（水解）

22、青霉素族青霉素族ChP2. 方法方法醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液pH4.6滴定滴定水解水解pH4.6滴定滴定样样品品 以未经水解的样品作空白测定以未经水解的样品作空白测定例例青霉素钠青霉素钠 含量测定含量测定 取本品约取本品约50mg，精密称定，加水，精密称定，加水5ml溶解后，加溶解后，加1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液5ml，摇匀，放置，摇匀，放置15分钟，加分钟，加1mol/L硝酸溶硝酸溶液液5ml，醋酸盐缓冲液，醋酸盐缓冲液(pH4.6)20ml及水及水20ml，摇匀，照电位滴定法，摇匀，照电位滴定法(附录附录 A),用铂电极为指示电极，汞用铂电极为指示电极，汞-硫酸亚汞电极硫酸亚汞电

23、极为参比电极，在为参比电极，在3540，用硝酸汞滴，用硝酸汞滴定液定液(0.02mol/L)缓慢滴定，缓慢滴定，（控制滴定过程约为（控制滴定过程约为15分钟），不计第分钟），不计第一个等当点，计算第二个等当点时消耗一个等当点，计算第二个等当点时消耗滴定液的量。每滴定液的量。每1ml硝酸汞滴定液硝酸汞滴定液(0.02mol/L)相当于相当于7.128mg的总青霉素的总青霉素(按按C16H17N2NaO4S计算计算)。 另取本品约另取本品约0.5g，精密称定，加水，精密称定，加水与上述醋酸盐缓冲液各与上述醋酸盐缓冲液各25ml，振摇使完，振摇使完全溶解，在室温下，立即用硝酸汞滴定全溶解，在室温下，

24、立即用硝酸汞滴定液液(0.02mol/L)滴定，终点判断方法同上滴定，终点判断方法同上.每每1ml硝酸汞滴定液（硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相当）相当于于7.128mg的降解物（按的降解物（按C16H17N2NaO4S计算）。计算）。 总青霉素的百分含量与降解物的百总青霉素的百分含量与降解物的百分含量之差值即为青霉素的含量。分含量之差值即为青霉素的含量。3、 讨论讨论（1）以第二次滴定突跃为终点以第二次滴定突跃为终点 电位法指示终点电位法指示终点 （2）反应摩尔比反应摩尔比 1 : 1（3）空白试验空白试验 消除已降解产物干扰消除已降解产物干扰（4）优点优点 不需标准品不需标准品4、 计

25、算计算 精密称取含水量为精密称取含水量为0.5%的青霉素的青霉素钠钠0.0502g，按药典方法测定总青霉素含，按药典方法测定总青霉素含量时，用去硝酸汞滴定液量时，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)6.97ml。另精密称取上述样品。另精密称取上述样品0.5013g，按药典方法测定降解物含量时，用去硝按药典方法测定降解物含量时，用去硝酸汞滴定液酸汞滴定液(0.02009mol/L)1.33ml。以。以干干燥品计算，求样品中青霉素的含量。燥品计算，求样品中青霉素的含量。例例青霉素钠青霉素钠 含量测定含量测定酸碱滴定法酸碱滴定法（三）（三）1、 原理原理（钠盐）（钠盐）-内酰胺类内酰胺类Ch

26、P2、 方法方法中和中和中和中和例例苯唑西林钠苯唑西林钠 含量测定含量测定 取本品约取本品约0.5g，精密称定，加新沸，精密称定，加新沸过的并用过的并用0.01mol/L氢氧化钠溶液中和至氢氧化钠溶液中和至酚酞指示液刚显红色的水酚酞指示液刚显红色的水20ml，使溶解，使溶解,再用再用0.01mol/L氢氧化钠溶液中和后，精氢氧化钠溶液中和后，精密加氢氧化钠滴定液密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)25ml，摇匀，置水浴中加热摇匀，置水浴中加热20分钟，注意避免分钟，注意避免吸收空气中的二氧化碳，冷却后，加酚吸收空气中的二氧化碳，冷却后，加酚酞指示液酞指示液12滴，用盐酸滴定液滴，用盐酸滴定液

27、（0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空）滴定，并将滴定结果用空白试验校正。每白试验校正。每1ml的氢氧化钠滴定液的氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于相当于40.14mgC19H19N3O5S。3、讨论讨论（1）水解前先中和溶剂和样品水解前先中和溶剂和样品（2）加热时避免吸收加热时避免吸收CO2不能使酚酞变红不能使酚酞变红（3）空白试验校正空白试验校正(消除消除Na2CO3干扰干扰)（4）特点特点 简便快速简便快速 不适用于有残留酯的产品不适用于有残留酯的产品（水解）（水解）可见可见-紫外分光光度法紫外分光光度法（四）（四）1、 酸水解法（铜盐法）酸水解法（铜盐法）（1）原理）原理稳定

28、剂稳定剂JP青霉素族青霉素族（2）方法）方法（3）特点）特点实验条件随各药物稳定性不同而定实验条件随各药物稳定性不同而定标准品对照法标准品对照法（4 4）计算）计算2、 硫醇汞盐法硫醇汞盐法（1）原理）原理（咪唑）（咪唑）青霉素族青霉素族ChP咪唑咪唑（2）方法）方法对照品法对照品法计算计算pH 9例例氨苄西林钠氨苄西林钠 含量测定含量测定 取本品约取本品约60mg 置置100ml量瓶中，加量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置另一，置另一100ml量瓶中，加水稀释至量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，再精密量取刻度，摇匀，再精密量取5ml，置，置2

29、5ml量瓶中，加硼酸缓冲液量瓶中，加硼酸缓冲液2.5ml与醋酐的乙与醋酐的乙腈溶液（腈溶液（150）0.25ml，放置，放置5min后，后，加咪唑溶液至刻度，摇匀，置加咪唑溶液至刻度，摇匀，置60水浴水浴中，加热中，加热30min，取出冷却，照分光光，取出冷却，照分光光度法（附录度法（附录 A ），在），在325nm的波长的波长处测定吸收度；另取氨苄西林三水合处测定吸收度；另取氨苄西林三水合物标准品，按同法测定，计算，即得。物标准品，按同法测定，计算，即得。 （3）讨论）讨论a. 咪唑催化的水解产率高，硫咪唑催化的水解产率高，硫 醇汞盐稳定（醇汞盐稳定（3h）b. 侧链有侧链有-NH2时，需加

30、醋酐先时，需加醋酐先 将其乙酰化后才能发生上述将其乙酰化后才能发生上述 反应反应pH9（4）特点）特点A、简便快速、简便快速B、用标准品对照，重现性良、用标准品对照，重现性良 好，好，RSD1%3、 羟肟酸比色法羟肟酸比色法USP JPFe3+/3H+红色红色-内酰胺类内酰胺类NaOHHPLC法法（五）（五）ChP 头孢菌素类头孢菌素类内标法校正因子内标法校正因子外标法外标法特点特点 快速、高效、灵敏快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好专属性强、重现性好 一法多用（鉴别、检查、含测）一法多用（鉴别、检查、含测）哌拉西宁哌拉西宁 原料药原料药 含量测定含量测定色谱条件色谱条件 用十八烷基硅烷键合

31、硅胶为填充用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇剂；以甲醇0.2mol/L磷酸二氢钠磷酸二氢钠溶液溶液10氢氧化四乙基铵溶液氢氧化四乙基铵溶液水（水（400503547）用磷酸调）用磷酸调节节pH值至值至5.5为流动相。检测波长为流动相。检测波长为为254nm。第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素链霉素链霉素 双氢链霉素双氢链霉素新霉素新霉素 卡那霉素卡那霉素庆大霉素庆大霉素 巴龙霉素巴龙霉素链霉素链霉素链霉胍链霉胍 + 链霉糖链霉糖 + N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺 苷元苷元糖糖链霉双糖胺链霉双糖胺链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺链霉胍链霉胍链霉糖链

32、霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺庆大霉素庆大霉素 糖糖 苷元苷元绛红糖胺绛红糖胺 + 脱氧链霉胺脱氧链霉胺 + 加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺庆大霉素庆大霉素C复合物复合物 庆大霉素庆大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆大霉素庆大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素庆大霉素C1a R、R1、R2=H 庆大霉素庆大霉素C2a R=CH3 R1=

33、 R2=H 庆大霉素庆大霉素C2b R=R1=H R2=CH3一、一、结构与性质结构与性质多与硫酸成盐多与硫酸成盐链霉素链霉素 3个个庆大霉素庆大霉素 5个个碱性中心碱性中心碱性碱性（一）（一）水溶性水溶性溶解性溶解性（二）（二）链霉素链霉素 pH57.5庆大霉素庆大霉素 pH212 稳定稳定UV（三）（三）稳定性稳定性（四）（四）链霉素水解产物反应链霉素水解产物反应（五）（五）坂口反应坂口反应N-甲基葡萄甲基葡萄糖胺反应糖胺反应麦芽酚反应麦芽酚反应二、二、 鉴别鉴别 茚三酮反应茚三酮反应（一）（一）羟基胺结构羟基胺结构N-甲基葡萄糖胺反应甲基葡萄糖胺反应（二）（二）乙酰丙酮乙酰丙酮 OH-吡

34、咯衍生物吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+红色红色（Elson-Morgan反应）反应）(缩合缩合)红色红色对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+ 麦芽酚反应麦芽酚反应（三）（三） 链霉糖特有反应链霉糖特有反应H+分子重排分子重排紫红紫红麦芽酚麦芽酚链霉胍特有反应链霉胍特有反应（或或-萘酚萘酚）8-8-羟基喹啉羟基喹啉坂口反应坂口反应（四）（四） - -萘酚萘酚（四）（四）反应反应H+UV法法（五）（五）IR法法（六）（六）庆大霉素无庆大霉素无UV吸收吸收TLC法法（七）（七）三、三、 检查检查链霉素杂质链霉素杂质（一）（一）链霉素链霉素B（甘露糖链霉素）（甘露糖链霉素）2. 方法方

35、法 TLC中的对照品法中的对照品法3. （BP）1. 来源来源 反应中间体反应中间体对微生物的活性无明显差异对微生物的活性无明显差异毒副作用和耐药性不同毒副作用和耐药性不同发酵菌种不同发酵菌种不同工艺差别工艺差别C组分比例组分比例不一致不一致规定控制各组分的相对百分含量规定控制各组分的相对百分含量ChPUSPBPJP庆大霉素庆大霉素C组分的测定组分的测定（二）（二）max = 330nm衍生化原理衍生化原理 1.1.1-烷基硫代烷基硫代-2-烷基烷基异吲哚衍生物异吲哚衍生物RPHPLC方法方法 2.规定规定 C1 2550% C1a 1540% C2a +C2 2050%计算计算 3.峰面积归

36、一化法峰面积归一化法三、三、 含量测定含量测定链霉素、庆大霉素链霉素、庆大霉素微生物检定法微生物检定法 本法系利用抗生素在琼脂培养本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用量反应平行线原理基内的扩散作用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。，以测定供试品效价的一种方法。四、血清中庆大霉素的四、血清中庆大霉素的HPLC法法血浆样品的预处理血浆样品的预处理离子对色谱法的目的：离子对色谱法的目的： 除去氨基酸、肽、胺的干扰除去氨基酸、肽、胺的干扰选用选用OPA为荧光衍生化试剂

37、为荧光衍生化试剂采用柱后衍生化法采用柱后衍生化法 第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素ABCD123456789101112四环素四环素（TC）tetracycline金霉素金霉素 (CTC) chlortetracycline氯四环素氯四环素土霉素土霉素 (OTC) oxytetracycline氧四环素氧四环素多西环素多西环素 (DOTC) doxycycline脱氧土霉素脱氧土霉素美他环素美他环素（METC） metacycline一、一、 结构与性质结构与性质两性两性（一）（一）1. 与酸、碱均能成盐与酸、碱均能成盐2. 强酸或强碱中溶解度强酸或强碱中溶解度 酚羟基、烯醇型羟基酚

38、羟基、烯醇型羟基 弱酸性弱酸性二甲胺基二甲胺基 弱碱性弱碱性吸湿性吸湿性（二）（二）多含结晶水多含结晶水与金属离子生成有色配位化合物与金属离子生成有色配位化合物Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+ UV（三）（三）与金属离子络合与金属离子络合（四）（四）pH3 7.5 荧光荧光 不稳定性不稳定性（四）（四）1. 差向异构化差向异构化淡黄淡黄黑黑蓝色荧光蓝色荧光差向四环素差向四环素（土霉素、多西环素不易差向异构化）（土霉素、多西环素不易差向异构化）2.降解反应降解反应（1）酸性下降解酸性下降解max = 445nmmax = 435nm橙黄色橙黄色脱水四环素脱水四环素TCETCATCEATC（

39、2）碱性下降解碱性下降解（荧光）（荧光）二、二、 鉴别试验鉴别试验H2SO4反应反应（一）（一）FeCl3反应反应（二）（二）Cl-反应反应（三）（三）1mol/L盐酸盐酸-甲醇（甲醇（1100）0.01mg/mlUV法法（四）（四）荧光法荧光法（五）（五）UV绿色荧光绿色荧光H+UVTLC法法（六）（六）正相分配薄层正相分配薄层 色谱色谱IR法法（五）（五）EDTA 克服痕量金属造成的克服痕量金属造成的 拖尾现象拖尾现象三、三、 检查检查 4-差向四环素（差向四环素（ETC） 脱水四环素（脱水四环素（ATC） 差向脱水四环素（差向脱水四环素（EATC） 盐酸金霉素（盐酸金霉素（CTC） 有关

40、物质有关物质（一）（一）TLC法（法（1995版）版）HPLC法（法（2000版）版）标准品对照法标准品对照法盐酸四环素盐酸四环素四环素有关物质四环素有关物质TLC图图I. 供试液供试液( 5 mg/ml)II.ETCIII.( 0.2 mg/ml)III. ATCIV.( 0.025 mg/ml)IV. EATC ( 0.025 mg/ml)V.CTCVI. ( 0.1 mg/ml)VI. 混合液混合液40.50.52吸收度吸收度（二）（二）杂质吸收度杂质吸收度四、四、 含量测定含量测定ChP、USPHPLC法（外标法）法（外标法）系统适用性试验系统适用性试验 1. 防护柱防护柱2. 预试溶

41、液预试溶液 4-差向脱水四环素差向脱水四环素 四环素四环素3. RSD2.0%JP 比色法（标准曲线法）比色法（标准曲线法）标标样样原理原理1. 熟悉抗生素类药物分析的特点及其熟悉抗生素类药物分析的特点及其 常规检验项目。了解抗生素类药物常规检验项目。了解抗生素类药物 的分析现状，熟悉生物学法与物理的分析现状，熟悉生物学法与物理 化学法测定效价的原理及优缺点。化学法测定效价的原理及优缺点。2. 掌握掌握内酰胺类抗生素的结构、内酰胺类抗生素的结构、 性质、鉴别及含量测定。性质、鉴别及含量测定。第十一章第十一章 复习内容复习内容3. 掌握氨基糖苷类抗生素的结构、掌握氨基糖苷类抗生素的结构、性性 质

42、及鉴别，了解其检查及含量质及鉴别，了解其检查及含量测定测定4. 掌握四环素类抗生素的结构及性掌握四环素类抗生素的结构及性质，了解其鉴别、检查及含量测质，了解其鉴别、检查及含量测定定5. 了解抗生素类药物的质量考察方了解抗生素类药物的质量考察方法法99：89下列哪个药物会发生羟肟酸下列哪个药物会发生羟肟酸 铁反应铁反应 A. 青霉素青霉素 B. 庆大霉素庆大霉素 C. 红霉素红霉素 D. 链霉素链霉素 E. 维生素维生素C 99m：71中国药典中国药典(1995年版年版)测定头测定头 孢菌素类药物的含量时，多孢菌素类药物的含量时，多 数采用的方法是数采用的方法是 A. 微生物法微生物法 B. 碘

43、量法碘量法 C. 汞量法汞量法 D. 正相高效液相色谱法正相高效液相色谱法 E. 反相高效液相色谱法反相高效液相色谱法95：139属于属于 -内酰胺类的抗生素药内酰胺类的抗生素药 物有物有 A. 青霉素青霉素 B. 红霉素红霉素 C. 头孢菌素头孢菌素 D. 庆大霉素庆大霉素 E. 四环素四环素45能和茚三酮发生呈色反应的物质有能和茚三酮发生呈色反应的物质有 A链霉素链霉素 B庆大霉素庆大霉素 C土霉素土霉素 D氨基酸氨基酸 E苯巴比妥苯巴比妥96：135.青霉素类药物可用下面哪些青霉素类药物可用下面哪些 方法测定方法测定 A. 三氯化铁比色法三氯化铁比色法 B. 汞量法汞量法 C. 碘量法碘

44、量法 D. 硫醇汞盐法硫醇汞盐法 E. 酸性染料比色法酸性染料比色法110能发生重氮化一偶合反应的抗能发生重氮化一偶合反应的抗 生素类药物是生素类药物是 A. 青霉素青霉素 B. 庆大霉素庆大霉素 C. 苄星青霉素苄星青霉素 D. 盐酸四环素盐酸四环素 E. 普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素99：116120以下反应可适用的药物以下反应可适用的药物 A. 青霉素青霉素 B. 链霉素链霉素 C. 两者均能两者均能 D. 两者均不能两者均不能 116Kober反应反应 117. 羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应 118. 坂口反应坂口反应 119. N甲基葡萄糖胺反应甲基葡萄糖胺反应 120. 在酸性溶液中水

45、解在酸性溶液中水解DABBC98：126130 可以鉴别的药物是可以鉴别的药物是 A. 链霉素链霉素 B. 庆大霉素庆大霉素 C. 两者均可两者均可 D. 两者均不可两者均不可 126. 用用Kober反应反应 127. 用坂口反应用坂口反应 128. 用麦芽酚反应用麦芽酚反应 129. 用三氯化铁反应用三氯化铁反应 130. 用茚三酮反应用茚三酮反应DAADC问题问题4650 A. 茚三酮反应茚三酮反应 B. 麦芽酚反应麦芽酚反应 C. 坂口反应坂口反应 D. FeC13反应反应 E. 羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应 46头孢唑林钠头孢唑林钠 47金霉素金霉素 48链霉素链霉素 49庆大霉素庆大霉素 50青霉素青霉素EDEAABC（ ）青霉素分子能与碘定量反）青霉素分子能与碘定量反应，因此可以根据消耗的碘量计应，因此可以根据消耗的碘量计算青霉素的含量。算青霉素的含量。99m：90四环素在酸性条件下的降四环素在酸性条件下的降 解产物是解产物是 A. 差向四环素差向四环素 B. 脱水四环素脱水四环素 C. 异四环素异四环素 D. 去甲四环素去甲四环素 E. 去甲氧四环素去甲氧四环素