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1、报告人：单吉浩SPESPE技术在畜禽产品残留技术在畜禽产品残留分析中的应用分析中的应用8/25/20241食品与农产品：残留分析要求食品与农产品：残留分析要求高选择性高选择性降低或消除基质干扰高灵敏度高灵敏度痕量物质可靠的结果：定量准确度和化合物确认可靠的结果：定量准确度和化合物确认重现性，稳定性和动态范围样品基质中低浓度目标物质的准确定量按照法规要求进行确认方法稳定性方法稳定性复杂样品基质，减少样品净化操作8/25/20242残留分析残留分析:样品前处理的重样品前处理的重要性要性 是影响实验成败的决定性步骤是影响实验成败的决定性步骤 占样品分析时间的比例最大(70-80%) 样品预处理所用时
2、间远多于色谱分离的时间 占分析消耗总成本的比重最大 消耗大量的溶剂及其它化学品 对分析结果的重现性及准确性影响最大的环节 影响实验结果好坏的最重要因素(回收率,%RSD）8/25/20243样品前处理的通用方法样品前处理的通用方法 高速离心取上清液高速离心取上清液 过滤、超滤过滤、超滤 选择性沉淀选择性沉淀 衍生反应衍生反应 液液-液萃取液萃取 固相提取固相提取(Solid Phase Extract, SPE)8/25/20244为什么要用为什么要用SPE?SPE? 样品浓缩样品浓缩 提高灵敏度提高灵敏度 样品净化样品净化 提高灵敏度提高灵敏度 延长系统不间断开机时间延长系统不间断开机时间
3、延长色谱柱寿命延长色谱柱寿命 比液液萃取更快比液液萃取更快, ,节省溶剂节省溶剂 可自动化批量处理可自动化批量处理 重现性好重现性好 8/25/20245不断革新的不断革新的SPE技术技术 1977 率先推出业界第一个硅胶基质固相提取技术的商品化产品：Sep-Pak 1996 推出第一个水浸润性聚合物基质SPE吸附剂(OasisHLB) 快速通用性反相SPE方法学 1997 用于OasisHLB的先进的新型方法学，可以获得更干净的本底(2D 优化方法学) 1999 推出混合机理吸附剂(OasisMCX 和MAX)，从而可以对碱性和酸性化合物进行高选择性和高灵敏度的提取 Oasis96 孔提取板
4、设计获得R&D 100 大奖8/25/20246不断革新的不断革新的SPE技术技术2002 2002 Waters Waters 最新革新SPESPE技术 首次使得洗脱体积低至25 L 25 L 无需挥发与重现配制，洗脱后直接进样即可 是小体积样品的理想提取工具 灵敏度可以提高25x25x 2004 2004 推出用于保留强碱( (如季铵盐) )和强酸( (如磺酸盐) )的WCXWCX和 WAX WAX 吸附剂8/25/20247SPE小柱的种类小柱的种类 根据吸附剂的划分根据吸附剂的划分 正相正相 Silica /Alumina(A, B , N) / Florisil/ NH2/ CN反相
5、反相 C18/tC18/C8/tC2/Porapak/RDX/NH2/CN离子交换离子交换 SCX、MCX、PCX、WCX、MAX8/25/20248传统传统(C18)SPE吸附剂的问题吸附剂的问题对极性化合物保留不足 药物（农药）及代谢产物难以同时提取对碱性化合物回收不足强硅羟基相互作用 碱性样品回收率低小柱跑干不吸附 操作过程需仔细控制回收率低，重现性差是其主问题。8/25/20249理想的样品处理方法理想的样品处理方法除去干扰物除去干扰物 在很宽的极性范围内，对酸性、碱性及中性化合在很宽的极性范围内，对酸性、碱性及中性化合物均有可重现的高回收率物均有可重现的高回收率 很容易实现自动化，对
6、大量样品进行高通量处理很容易实现自动化，对大量样品进行高通量处理 容易使用并且耐受性好容易使用并且耐受性好 快速并且最终的成本低快速并且最终的成本低8/25/202410PEP (Polymer enhanced polymer) ：极性提高了的共聚物：极性提高了的共聚物具有反相具有反相SPE的最佳性质的最佳性质pH：0-14，810m2/g亲水性单体：亲水” 使填料具有水可浸润性质 允许溶剂跑干而不会损失回收率和重现性“亲脂” 提供对分析物的反相保留能力8/25/202411C18与与PEP小柱相比小柱相比： 溶剂跑干对回收率的影响(普鲁卡因胺、 醋氨酚、 雷尼替 丁、 心得安、 多虑平)8
7、/25/202412C18与与PEP小柱相比：小柱相比： 溶剂跑干对回收率的影响溶剂跑干对回收率的影响8/25/202413PEPPEP可取代可取代C C1818 的优势的优势吸附容量更大吸附容量更大 是C18C18的3 3到1010倍，常用规格1mL/30mg1mL/30mg（C18C18：100mg100mg）操作更简便操作更简便 小柱干涸不影响回收率方法更通用方法更通用 适合性质各异的各种物质的提取8/25/202414PEPPEP可取代可取代C C1818 的优势的优势开发方法更容易开发方法更容易 聚合物基质，无硅醇基影响对极性物质的提取回收率更高对极性物质的提取回收率更高 药物( (
8、农药) )及代谢产物同时提高8/25/202415样品前处理：样品前处理： 适于适于HPLCHPLC分析的通用分析的通用SPESPE方法方法此通用方法适于多种样品基质的绝大多数被此通用方法适于多种样品基质的绝大多数被测物。测物。 当分析碱性化合物时，不要使用高有机含量当分析碱性化合物时，不要使用高有机含量的水溶液进行清洗，因为的水溶液进行清洗，因为PEP吸附剂中不含硅吸附剂中不含硅醇基。醇基。 首先使用通用方法提取。若需进一步降低干首先使用通用方法提取。若需进一步降低干扰，可使用优化方法扰，可使用优化方法8/25/202416样品前处理：样品前处理： 适于适于HPLC分析的通用分析的通用SPE
9、方法方法8/25/202417pH pH 与化合物反相保留8/25/202418血清中的四环素血清中的四环素8/25/202419血清中四环素的提取结果比较血清中四环素的提取结果比较 SPE SPE 化合物化合物 % %回收率回收率 %RSD %RSDPEP PEP 二甲胺四环素二甲胺四环素 94.8 1.4 94.8 1.4 四环素四环素 104 0.55 104 0.55C C18 18 二甲胺四环素二甲胺四环素 52.8 2.82 52.8 2.82 四环素四环素 68.4 2.44 68.4 2.44 6 6次实验结果：加标水平：次实验结果：加标水平：2.52.5g/mL 8/25/2
10、02420四环素类残留分析四环素类残留分析 （日本政府食品安全公告）20032003年月宣布有关来自中国的虾中的四环素年月宣布有关来自中国的虾中的四环素类药物监测（类药物监测（Tetracycline in the shrimp Tetracycline in the shrimp from Chinafrom China）如果为养殖虾，政府要求必须监测四环素类药物残留(mandatory)(mandatory)如果为非养殖虾，政府推荐监测残留(voluntary)(voluntary)需HPLCHPLC、荧光检测器法规更新：蔬菜和蜂蜜加工的食品必须监测残法规更新：蔬菜和蜂蜜加工的食品必须监测
11、残留留法规以前不要求检测农药残留，但因在加工食品和蜂蜜中发现了许多农药，故现在要求检测8/25/202421食用肉中的四环素食用肉中的四环素 8/25/202422牛奶中的四环素牛奶中的四环素 8/25/202423四环素四环素食品分析的结果食品分析的结果 化合物化合物 牛肉牛肉 猪肉猪肉 牛奶牛奶 牛奶牛奶 0.5 g/ g 0.5 g/ g 25 g/L 50 g/L4 0.5 g/ g 0.5 g/ g 25 g/L 50 g/L4 土霉素土霉素 96.2 (5.7) 103 (5.0) 70.7 (3.5) 67.7 (5.8) 96.2 (5.7) 103 (5.0) 70.7 (3
12、.5) 67.7 (5.8)四环素四环素 91.4 (5.5) 99.8 (6.1) 73.7 (7.3) 68.5 (5.1) 91.4 (5.5) 99.8 (6.1) 73.7 (7.3) 68.5 (5.1)金霉素金霉素 80.6 (6.8) 83.4 (6.1) 76.7 (2.9) 67.3 (1.8 80.6 (6.8) 83.4 (6.1) 76.7 (2.9) 67.3 (1.8）结果以结果以% % 回收率表示回收率表示, ,括号内数字为括号内数字为% RSD% RSD 8/25/202424反相离子交换双重机理吸附剂反相离子交换双重机理吸附剂 MCXMCX：阳离子交换：阳离
13、子交换反相吸附剂反相吸附剂 用于碱性物质提取MAXMAX：阴离子交换：阴离子交换反相吸附剂反相吸附剂 用于酸性物质提取用于酸性物质提取WCXWCX：弱阳离子交换：弱阳离子交换反相吸附剂反相吸附剂 用于强碱性物质 ( (如季铵盐类) )提取WAXWAX：弱阴离子交换：弱阴离子交换反相吸附剂反相吸附剂 用于强酸性物质提取 8/25/202425适合于碱性药物提取的适合于碱性药物提取的MCX 小柱小柱 8/25/202426双机理吸附剂：碱性化合物的保留双机理吸附剂：碱性化合物的保留 8/25/202427混合机理混合机理: :阳离子交换与反相的保留阳离子交换与反相的保留 8/25/202428MC
14、X SPE MCX SPE 通用方法通用方法 8/25/202429常见兽药残留的常见兽药残留的 SPE SPE 推荐方法推荐方法名称名称 规格规格克仑特罗克仑特罗 MCX/SCX/PCX MCX/SCX/PCX 沙丁胺醇沙丁胺醇 MCX/SCX/PCX MCX/SCX/PCX 磺胺磺胺 C18/PEP/ Alumina B C18/PEP/ Alumina B氯霉素氯霉素 C18/PEP/Silica C18/PEP/Silica氟喹诺酮氟喹诺酮 PEP/C18 PEP/C18硝基咪唑类药物硝基咪唑类药物 PEP/C18 PEP/C18己烯雌酚己烯雌酚 PEP/C18 PEP/C18四环素四
15、环素 PEP/C18 PEP/C18莱克多巴胺莱克多巴胺 Alumina A/ MCX Alumina A/ MCX 8/25/202430SPE在残留分析方面的成功实例在残留分析方面的成功实例 硝基咪唑类药物： J AOAC International, 2003, 86(3), 505-509 四环素: J chromatography A, 2003,987,227-233 动物组织中盐酸克伦特罗的SPE与GC/MS 分析液相色谱通讯，37，13-148/25/202431SPE在残留分析方面的成功实例在残留分析方面的成功实例莱克多巴胺：莱克多巴胺： Analytica chim, 20
16、03,483(1-2) P137-145 Analytica chim, 2003,483(1-2) P137-145 氯霉素：氯霉素： 动物源食品中氯霉素的液相色谱动物源食品中氯霉素的液相色谱- -质谱测定质谱测定, ,分析测分析测试学报，试学报，20022002，2121增刊，增刊，185-186 185-186 磺胺磺胺： 动物组织中磺胺类药物残留量检测方法动物组织中磺胺类药物残留量检测方法-HPLC-HPLC法法8/25/202432磺胺药物样品前处理SPE法 HLBHLB 鸡组织中磺胺类药物残留量检验方法高效液相色谱紫外检测法鸡组织中磺胺类药物残留量检验方法高效液相色谱紫外检测法 广
17、州出入境检验检疫局食品检验处广州出入境检验检疫局食品检验处 B(B(碱性氧化铝小柱碱性氧化铝小柱) ) 羊肉组织中七种磺胺残留的测定羊肉组织中七种磺胺残留的测定 WatersWaters液相色谱通讯液相色谱通讯3535期，期，20022002年年 动物源食品中磺胺类药物残留的检测方法高效液相色谱法动物源食品中磺胺类药物残留的检测方法高效液相色谱法 农业部号文农业部号文 C18 C18 高效液相色谱法测定肉类奶粉中四种磺胺药物残留量的方法研究高效液相色谱法测定肉类奶粉中四种磺胺药物残留量的方法研究 WatersWaters液相色谱通讯液相色谱通讯1515期，期，19901990年年 动物源食品中
18、磺胺二甲嘧啶残留检测方法高效液相色谱法动物源食品中磺胺二甲嘧啶残留检测方法高效液相色谱法 农业部号文；农业部号文；8/25/202433典型成功开发：典型成功开发：动物组织中磺胺药物的残留检测方法动物组织中磺胺药物的残留检测方法HPLCHPLC法法NY 5029-2001 NY 5029-2001 农业部农业部“无公害畜产品例行监无公害畜产品例行监测测”专用方法专用方法艾杰尔科技艾杰尔科技磺胺专用柱磺胺专用柱8/25/202434动物源食品中磺胺类药物残留检动物源食品中磺胺类药物残留检测方法测方法高效液相色谱法高效液相色谱法 简介简介 农业部畜禽产品质量监督检验测试中心农业部畜禽产品质量监督检
19、验测试中心8/25/202435主要内容主要内容一、适用范围一、适用范围 二、原理二、原理 三、试剂和材料三、试剂和材料四、仪器设备四、仪器设备 五、检验步骤五、检验步骤 8/25/2024361 1、适用范围、适用范围 本本方方法法用用于于测测定定动动物物可可食食性性组组织织中中磺磺胺胺间间甲甲氧氧嘧嘧啶啶（SMMSMM）、磺磺胺胺二二甲甲基基嘧嘧啶啶（SMSM2 2）、磺磺胺胺甲甲噁噁唑唑（SMZSMZ）、磺磺胺胺二二甲甲氧氧嘧嘧啶啶（SDMSDM）、磺磺胺胺喹喹噁噁啉啉（SQSQ）单单个个或或混混合合物物的残留量。的残留量。 8/25/2024372 2原理原理 组组织织经经乙乙腈腈提提
20、取取后后，其其上上清清液液加加入入正正己己烷烷进进行行液液液液分分配配，取取下下层层溶溶液液加加入入正正丙丙醇醇减减压压干干燥燥，残残留留物物用用乙乙腈腈溶溶解解，过过Sep-PakSep-Pak碱碱性性氧氧化化铝铝柱柱, , 洗洗脱脱，干干燥燥后后定容，用高效液相色谱仪进行检测。定容，用高效液相色谱仪进行检测。 8/25/2024383 3、试剂和材料、试剂和材料 除特别注明外，所用试剂均为分析纯；水为超纯水。 3.1 磺胺类药物标准品（SMM、SDM、SM2、SMZ和SQ），（Sigma公司，含量不少于98.9%）3.2 甲醇 色谱纯3.3 乙腈 色谱纯3.4 正已烷 3.5 正丙醇 3.
21、6 无水硫酸钠 8/25/2024393 3、试剂和材料、试剂和材料3.7 3.7 碱性氧化铝碱性氧化铝SPESPE柱（柱（6 6毫升，毫升，500500毫克）毫克）3.8 磺胺类药物标准储备液（1mg/mL） 分别精密称取上述磺胺类药物标准品各50mg，甲醇溶解并转移到50mL容量瓶，定容，摇匀。置-20以下冰箱中保存,有效期3个月。3.9 磺胺类药物标准工作液 取磺胺类药物标准储备液用流动相稀释成浓度为0.05,0.1,0.2,0.5,1.0，2.0g/mL的标准工作液。置2-8冰箱中保存，有效期1周。8/25/2024404 4、仪器设备、仪器设备 4.1 4.1 高效液相色谱仪（配紫外
22、检测器）高效液相色谱仪（配紫外检测器）4.2 4.2 离心机离心机4.13 4.13 固相萃取装置（配考克阀）固相萃取装置（配考克阀）4.4 4.4 分析天平分析天平 精度精度0.0001g 0.0001g 4.5 4.5 天平天平 精度精度0.01g0.01g4.6 4.6 旋转蒸发仪旋转蒸发仪4.7 4.7 振荡器振荡器4.8 4.8 匀浆机匀浆机4.9 4.9 涡动混合器涡动混合器4.10 4.10 分液漏斗分液漏斗 50mL 50mL4.11 4.11 梨形瓶梨形瓶 100mL 100mL4.12 4.12 离心管离心管 50mL 50mL4.13 4.13 微孔滤膜微孔滤膜 0.45
23、m 0.45m8/25/2024415 5 检验步骤检验步骤 5.1 5.1 试料的制备试料的制备5.1.1 5.1.1 取绞碎后的供试样品取绞碎后的供试样品, ,作为供试试料。作为供试试料。5.1.2 5.1.2 取绞碎后的空白样品取绞碎后的空白样品, ,作为空白试料（阴性对照）。作为空白试料（阴性对照）。5.1.3 5.1.3 取取绞绞碎碎后后的的空空白白样样品品5g5g, ,添添加加5 5g/mLg/mL的的工工作作液液0.10.1mLmL，作为空白添加试料（阳性对照）。，作为空白添加试料（阳性对照）。8/25/2024425 5 检验步骤检验步骤5.2提取和纯化5.2.1 组织样品5.
24、00g5g无水硫酸钠+ 25mL乙腈均质振荡10min以3000r/min的速度离心5min重复两次并两次的上清液加入正己烷30mL振荡10min离心5min取下层液体于100 mL梨形瓶中。8/25/2024435 5 检验步骤检验步骤5.2.15.2.1（续）（续） 加正丙醇加正丙醇5mL5mL，5050下减压干燥至干，残下减压干燥至干，残留物用留物用95%95%乙腈乙腈3ml3ml溶解，溶解，过氧化铝过氧化铝B B柱。用柱。用5mL5mL乙腈乙腈- -水（水（95+595+5）过柱，不收集，再用）过柱，不收集，再用10mL 10mL 乙乙腈腈- -水（水（70+3070+30）洗脱。）洗
25、脱。 洗脱液中加入洗脱液中加入5mL5mL正丙醇，正丙醇，5050下减压干下减压干燥至干，残留物用燥至干，残留物用2.0mL2.0mL流动相溶解，流动相溶解，溶液用溶液用滤膜过滤，作为试样溶液，供高效液相色谱分滤膜过滤，作为试样溶液，供高效液相色谱分析。析。8/25/2024445 5 检验步骤检验步骤5.3 5.3 色谱条件色谱条件5.3.1 5.3.1 色色谱谱柱柱：C C1818柱柱，2502504.6mm4.6mm（i.d.i.d.），粒粒径径5m5m，或相当者；，或相当者；5.3.2 5.3.2 流动相：乙腈流动相：乙腈- -甲醇甲醇- -水水- -乙酸乙酸(2+2+9+0.2)(2
26、+2+9+0.2)；5.3.3 5.3.3 流速：流速：1mL1mLminmin；5.3.4 5.3.4 检测波长：检测波长：270nm270nm；5.3.5 5.3.5 进样量：进样量：20L20L。8/25/2024455 5 检验步骤检验步骤5.5 5.5 测定法测定法 5.5.1 5.5.1 取取试试样样溶溶液液和和0.05g/mL0.05g/mL的的对对照照溶溶液液，作作单单点点校校准准，以以峰峰面面积积计计算算。对对照照溶溶液液及及试试样样溶溶液液中中磺磺胺胺类类药药物物的的响响应应值值均均应应在在仪仪器器检检测测的的线线性性范范围围之之内内，试试样样溶溶液液测测定定过过程程中中应
27、应参参插插注注入入对对照照溶溶液液，以便准确定量。以便准确定量。5.5.2 5.5.2 试剂空白试验试剂空白试验除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。5.5.3 5.5.3 结果计算和表述结果计算和表述按下式计算供试组织中磺胺类药物的残留量：按下式计算供试组织中磺胺类药物的残留量： X Xi i=(C=(CS SVA)/(AVA)/(AS Sm)m)8/25/2024465 5 检验步骤检验步骤5.6 5.6 结果判定结果判定5.6.1 5.6.1 线性范围线性范围 在在0.02g/mL0.02g/mL1.0g/mL1.0g/mL范
28、范围围考考察察线线性性，计计算算回回归归方方程程，其其相相关关系数系数0.9950.995。5.6.25.6.2准确度准确度本方法在本方法在100g/kg100g/kg添加浓度水平上的回收率范围为添加浓度水平上的回收率范围为50%50%110%110%。5.6.3 5.6.3 允许相对偏差允许相对偏差允许相对偏差允许相对偏差26%26%。8/25/202447SPESPE在盐酸克仑特罗（瘦肉精）在盐酸克仑特罗（瘦肉精）残留检测中的应用残留检测中的应用样品前处理：SPE法参见：中华人民共和国农业部行业标准：饲料中盐酸克仑特罗的测定参见：中华人民共和国国家标准：动物组织中盐酸克仑特罗的测定8/25
29、/202448SPESPE在盐酸克仑特罗（瘦肉精）在盐酸克仑特罗（瘦肉精）残留检测中的应用残留检测中的应用中华人民共和国农业行业标准中华人民共和国农业行业标准NY /T 468 2005 动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱-质谱法质谱法NY/XQ 421-2003“动物尿液中盐酸克伦特罗（瘦肉精）残留的检测动物尿液中盐酸克伦特罗（瘦肉精）残留的检测 气相色气相色谱谱-质谱（质谱（GC-MS）方法）方法” 起草单位：农业部畜禽产品质量监督检验测试中心起草单位：农业部畜禽产品质量监督检验测试中心8/25/202449动物组织中盐酸克伦特罗的测定动物组织中盐酸克
30、伦特罗的测定气相色谱气相色谱- -质谱法质谱法 原理原理对样品在碱化的条件下用乙酸乙酯提取，合并提取液后，利用盐酸克伦特罗易溶于酸性溶液的特点，用稀盐酸反萃取，萃取的样液pH调至5.2后用SCX固相萃取小柱净化，分离的药物残留经过双三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA）衍生后用带有质量选择检测器的气相色谱仪测定。8/25/202450动物组织中盐酸克伦特罗的测定动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱气相色谱-质谱法质谱法 提取提取 (50.05)g动物肝组织加入15mL乙酸乙酯加入3mL10.0%碳酸钠溶液均质离心2min上层有机溶剂在残渣中再次提取后并合加入5mL0.10mol/L的盐酸离心2mi
31、n重复萃取合并下层溶液2.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH至5.2。 8/25/202451动物组织中盐酸克伦特罗的测定动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱气相色谱-质谱法质谱法净化净化 SCX小柱5mL 甲醇5 mL水5 mL 30 mmol/L盐酸活化萃取液上样5 mL水5 mL甲醇淋洗柱子抽干SCX小柱5 mL 4 %氨化甲醇溶液洗脱。衍生化衍生化 在50水浴氮气吹干100L 甲苯100L BSTFA80衍生lh冷却加入0.3mL甲苯气相色谱-质谱分析。8/25/202452动物组织中盐酸克伦特罗的测定动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱气相色谱-质谱法质谱法GC/MSGC/MS测定参数
32、设定测定参数设定色谱柱：HP-5MS 5%苯基甲基聚硅氧烷，30m0.25mm（内径），0.25m（膜厚）；进样口：220；进样方式：不分流；进样体积：1L；柱温：70（保持0.6min）, 以25/min升温至200（保持6min），以25/min升温至280（保持5min）；载气：氦气，流速：0.9mL/min（恒流）；GC/MS 传输线温度：280；溶剂延迟：8min；EM电压：高于调谐电压200V；离子源(EI)温度：200；四极杆温度：160；选择离子监测:(m/z)86，212，262，277 8/25/202453动物尿液中盐酸克伦特罗的测定动物尿液中盐酸克伦特罗的测定气相色谱气
33、相色谱-质谱法质谱法净化净化 依次用甲醇5mL、水5mL和30mmol/L盐酸5mL润洗固相萃取小柱，将上述备用液过柱，依次用水5mL、甲醇5mL淋洗，真空抽干，用4%氨化甲醇5mL洗脱SCX小柱，收集洗脱液于具塞玻璃试管中，50下氮气吹干。在样液过柱和洗脱过程中流速控制在1mL/min左右。8/25/202454残留分析残留分析SPE前处理应用前处理应用小结小结 以常规方法为起点以常规方法为起点 如需要，根据样品性质与基质进行方如需要，根据样品性质与基质进行方法优化法优化 对于碱性或酸性组分采用双机理吸附对于碱性或酸性组分采用双机理吸附剂剂 8/25/202455SPE小柱的典型应用实例小柱
34、的典型应用实例 磺胺：Sep-Pak Al2O3(B), 12cc/2g, WAT054260 Sep-Pak Al2O3(B), 12cc/2g, WAT054260 动物源食品中磺胺类药物残留物检测方法HPLC HPLC 金霉素：Sep-Pak C18Sep-Pak C18或者tC18 tC18 金霉素残留的HPLCHPLC测定 伊维菌素：Sep-Pak C18Sep-Pak C18或者tC18 tC18 伊维菌素残留的HPLCHPLC测定法 8/25/202456SPE小柱的典型应用实例小柱的典型应用实例 恩诺沙星，环丙沙星：Sep-Pak tC18(Sep-Pak tC18(含碳量16
35、%) 16%) 动物性食品中恩诺沙星和环丙沙星残留物检测方法HPLC HPLC 噁喹酸，氟甲喹：Sep-Pak tC18(Sep-Pak tC18(含碳量16%) 16%) 动物性食品中噁喹酸和氟甲喹残留物检测方法HPLCHPLC8/25/202457国家科技攻关计划课题国家科技攻关计划课题畜禽产品质量安全关键控制技术系列标准研究 ( (课题编号：课题编号： 2002BA906A75 ) 2002BA906A75 ) 农业部畜禽产品质量监督检验测试中心农业部畜禽产品质量监督检验测试中心 8/25/202458国家科技攻关计划子课题国家科技攻关计划子课题三种兽药使用规范验证三种兽药使用规范验证和
36、四种兽药残留检测方法研究和四种兽药残留检测方法研究 ( (子课题编号：子课题编号： 2002BA906A37-01 ) 2002BA906A37-01 ) 农业部畜禽产品质量监督检验测试中心农业部畜禽产品质量监督检验测试中心 20052005年年1111月月1010日日 8/25/2024592020种兽药残留检测方法的技术要点种兽药残留检测方法的技术要点2 22.1 2.1 猪组织中已烯雌酚、已烷雌酚、已二烯雌酚残留检测方法猪组织中已烯雌酚、已烷雌酚、已二烯雌酚残留检测方法研究（气相色谱研究（气相色谱- -质谱法）质谱法） 在碱化的条件下用在碱化的条件下用乙酸乙酯提取乙酸乙酯提取猪组织样品中
37、己烯雌酚、已二烯雌酚和猪组织样品中己烯雌酚、已二烯雌酚和已烷雌酚残留，然后通过已烷雌酚残留，然后通过碳酸钠溶液和硅胶柱对洗脱物质进行净化碳酸钠溶液和硅胶柱对洗脱物质进行净化处理。处理。净化后的样品平均分两份进行吹干后净化后的样品平均分两份进行吹干后衍生，衍生，BSTFABSTFA衍生衍生后进行气相色谱后进行气相色谱质谱分析。质谱分析。 检测限检测限:0.25 :0.25 g/kg -0.5g/kg -0.5 g/kgg/kg；回收率；回收率:60.9%:60.9%85.6%85.6% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 8/25/20246022.1
38、 猪组织中已烯雌酚、已烷雌酚、已二烯猪组织中已烯雌酚、已烷雌酚、已二烯雌酚残留检测方法研究（气相色谱雌酚残留检测方法研究（气相色谱-质谱质谱法）法）已二烯雌酚标准溶液经衍生化后已二烯雌酚标准溶液经衍生化后选择离子模式下的总离子流图选择离子模式下的总离子流图猪肝添加样品总离子流图猪肝添加样品总离子流图(已二烯已二烯雌酚添加浓度为雌酚添加浓度为4g/kg)8/25/2024612.2 2.2 猪组织中雌二醇残留检测方法研猪组织中雌二醇残留检测方法研究（液相色谱究（液相色谱- -质谱法）质谱法） 试样匀浆后试样匀浆后, ,加入加入氘代雌二醇内标氘代雌二醇内标, ,经经正己烷脱脂正己烷脱脂, ,经经H
39、LBHLB柱、硅胶柱、氨基柱净化后，于液质联用仪柱、硅胶柱、氨基柱净化后，于液质联用仪上进行测定。上进行测定。同位素内标定量。同位素内标定量。 检测限检测限:1 :1 g/kgg/kg；回收率；回收率:97.1%:97.1%106.1%106.1% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 8/25/2024622.2 猪组织中雌二醇残留检测方法研究猪组织中雌二醇残留检测方法研究（液相色谱（液相色谱-质谱法）质谱法）猪肝添加雌二醇色谱图猪肝添加雌二醇色谱图(从上至下添加浓度依次为从上至下添加浓度依次为 0g/kg, 5g/kg, 2g/kg, 1g/kg)
40、 8/25/2024632.3 2.3 猪尿液中丙酸睾酮残留检测方法猪尿液中丙酸睾酮残留检测方法（液相色谱（液相色谱- -质谱法）质谱法） 猪尿样品经猪尿样品经固相萃取小柱净化后，供液相色谱固相萃取小柱净化后，供液相色谱- -质谱仪质谱仪测定。测定。 丙酸睾酮检测限丙酸睾酮检测限: 1.0 : 1.0 g/kgg/kg 丙酸睾酮回收率丙酸睾酮回收率: 62.2%: 62.2%73.5%73.5% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 丙酸睾酮标准溶液质谱图丙酸睾酮标准溶液质谱图 空白猪尿中添加空白猪尿中添加50g/L50g/L的丙酸睾酮标准的丙酸睾酮标
41、准溶液后的溶液后的SIRSIR色谱图色谱图 8/25/2024642.52.5猪组织及猪尿中克伦特罗、沙丁胺猪组织及猪尿中克伦特罗、沙丁胺醇残留检测方法（气相色谱醇残留检测方法（气相色谱- -质谱法）质谱法） 试样用试样用高氯酸高氯酸溶液匀浆、超声加热提取，用溶液匀浆、超声加热提取，用异丙醇异丙醇+ +乙乙酸乙酯酸乙酯(40+60)(40+60)萃取，有机相浓缩，经萃取，有机相浓缩，经弱阳离子交换柱进弱阳离子交换柱进行分离行分离，用，用乙醇乙醇+ +浓氨水浓氨水(98+2)(98+2)溶液洗脱，洗脱液浓缩，溶液洗脱，洗脱液浓缩，经经N,ON,O双三甲基硅烷三氟乙酰胺双三甲基硅烷三氟乙酰胺( (
42、BSTFA)BSTFA)衍生衍生后于气质联用后于气质联用仪上进行测定。外标法定量。仪上进行测定。外标法定量。 检测限检测限:1 :1 g/kgg/kg；回收率；回收率:60.37%:60.37%93.86%93.86% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 8/25/2024652.5 猪组织及猪尿中克伦特罗、沙丁胺猪组织及猪尿中克伦特罗、沙丁胺醇残留检测方法（气相色谱醇残留检测方法（气相色谱-质谱法）质谱法）猪肝加标样色谱图猪肝加标样色谱图 (2 (2 g/kg)g/kg)8/25/2024662.6 2.6 猪组织及猪尿中莱克多巴胺残猪组织及猪尿中
43、莱克多巴胺残留检测方法（气相色谱留检测方法（气相色谱- -质谱法）质谱法） 样品经过样品经过高氯酸高氯酸水解提取，用水解提取，用乙酸乙酯和异丙醇（乙酸乙酯和异丙醇（4 4：6 6）再次提取后过再次提取后过SCXSCX阳离子小柱阳离子小柱净化，用合适的溶剂净化，用合适的溶剂选择洗脱后选择洗脱后, , 氮气吹干，供高效液相色谱定量（质谱检氮气吹干，供高效液相色谱定量（质谱检测器）测定。外标法定量。测器）测定。外标法定量。 检测限检测限:1 :1 g/kgg/kg；回收率；回收率:66.47%:66.47%86.21%86.21% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20
44、%20% 8/25/2024672.6 猪组织及猪尿中莱克多巴胺残留检猪组织及猪尿中莱克多巴胺残留检测方法（气相色谱测方法（气相色谱-质谱法）质谱法）300 300 g/Lg/L标准溶液质谱图标准溶液质谱图 肉添加肉添加1010 g/kgg/kg质谱质谱图图8/25/2024682.7 2.7 猪组织中氯霉素残留检测方法猪组织中氯霉素残留检测方法（液相色谱（液相色谱- -质谱法）质谱法） 样品经过样品经过乙腈乙腈- -水（水（1+11+1）溶液溶液、乙酸乙酯、乙酸乙酯重复提取，重复提取，用用正己烷正己烷除去样品中的脂肪等杂质，除去样品中的脂肪等杂质，C C1818固相萃取柱固相萃取柱进一进一步
45、净化，步净化，N N2 2气吹干后供高效液相色谱定量（质谱检测器）气吹干后供高效液相色谱定量（质谱检测器）测定。外标法定量。测定。外标法定量。 检测限检测限:0.1 :0.1 g/kgg/kg；回收率；回收率:67.4%:67.4%87.0%87.0% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 1 1 g/Lg/L标准溶液图标准溶液图肉添加肉添加1 1 g/kgg/kg图图8/25/2024692.7 猪组织中氯霉素残留检测方法（液猪组织中氯霉素残留检测方法（液相色谱相色谱-质谱法）质谱法）8/25/2024702.8 2.8 猪组织中粘杆菌素残留检测方法
46、猪组织中粘杆菌素残留检测方法（液相色谱法）（液相色谱法） 待测动物组织中残留的粘杆菌素经待测动物组织中残留的粘杆菌素经三氯乙酸三氯乙酸- -甲醇甲醇溶液提取，溶液提取，C C1818固相萃取柱固相萃取柱净化后，与净化后，与荧光衍生化荧光衍生化试剂反应，用高效液相色谱（荧光试剂反应，用高效液相色谱（荧光检测器）进行检测，外标法定量。检测器）进行检测，外标法定量。 检测限检测限:75 :75 g/kgg/kg；定量限；定量限:150 :150 g/kg, g/kg, 回收率回收率:80.1%:80.1%108.5%108.5% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20%
47、 20% a a：空白样品图：空白样品图 b b：添加：添加0.05g/g0.05g/g粘杆菌素样品图粘杆菌素样品图8/25/2024712.9 2.9 猪组织中磺胺类药物残留检测方法猪组织中磺胺类药物残留检测方法（液相色谱法）（液相色谱法） 组织样品经组织样品经乙腈乙腈提取后，在上清液中加入提取后，在上清液中加入正己烷正己烷进行液液分配，进行液液分配，取下层溶液加入取下层溶液加入正丙醇正丙醇减压干燥，残留物用减压干燥，残留物用乙酸乙酯乙酸乙酯溶解，过溶解，过氨基鍵氨基鍵合小柱合小柱, , 以乙酸乙醇溶液洗脱，氮气吹干后用流动相溶解，定容后用以乙酸乙醇溶液洗脱，氮气吹干后用流动相溶解，定容后用
48、高效液相色谱仪进行检测。高效液相色谱仪进行检测。 检测限检测限:3:35 5 g/kgg/kg；回收率；回收率:65.1%:65.1%92.1%92.1% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 8/25/2024722.9 猪组织中磺胺类药物残留检测方猪组织中磺胺类药物残留检测方法（液相色谱法）法（液相色谱法）磺胺类药物标准品色谱图磺胺类药物标准品色谱图猪肝添加磺胺类药物色谱图猪肝添加磺胺类药物色谱图8/25/2024732.10 2.10 猪组织中乙酰甲喹残留检测方法猪组织中乙酰甲喹残留检测方法（液相色谱法）（液相色谱法） 动物组织匀浆用动物组织匀浆
49、用双蒸水、三氯乙酸双蒸水、三氯乙酸提取，经提取，经C C1818固相小柱固相小柱净化，净化，80%80%甲醇甲醇洗脱，收集洗脱液，作为试样溶液供高效液相色谱（配紫洗脱，收集洗脱液，作为试样溶液供高效液相色谱（配紫外检测器）分析，外标法定量外检测器）分析，外标法定量 检测限检测限:50 :50 g/kg g/kg 回收率回收率:60.1%:60.1%83.1%83.1% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 空白猪肉组织试样色谱图空白猪肉组织试样色谱图 猪肉试样中添加乙酰甲喹色谱图猪肉试样中添加乙酰甲喹色谱图 8/25/2024742.11 2.11 动
50、物组织（猪、鸡）中硝基咪唑类药物动物组织（猪、鸡）中硝基咪唑类药物多残留检测方法（液相色谱多残留检测方法（液相色谱- -质谱法）质谱法） 待测动物组织中残留的硝基咪唑类药物用待测动物组织中残留的硝基咪唑类药物用乙酸乙酯乙酸乙酯提取，液提取，液/ /液萃液萃取分离取分离, ,固相萃取柱净化固相萃取柱净化后，通过高效液相色谱后，通过高效液相色谱/ /质谱联用的质谱联用的大气压化学大气压化学电离正离子电离正离子检测检测（APCI+APCI+）方式方式, ,进行选择离子进行选择离子 (SIR) (SIR)检测，外标法定量，检测，外标法定量，实现了三种硝基咪唑类化合物的多残留确证。实现了三种硝基咪唑类化
51、合物的多残留确证。 检测限检测限:0.5-1.0 :0.5-1.0 g/kgg/kg；回收率；回收率:55.31%:55.31%88.66%88.66% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 猪肝加标样选择离子检测色谱图猪肝加标样选择离子检测色谱图. (a) 洛硝哒唑洛硝哒唑(M/Z= 201, 2.0g/kg); (b) 甲硝唑甲硝唑（M/Z =172, 1.0g/kg）; (c) 地美硝唑（地美硝唑（M/Z= 142, 1.0g/kg） 8/25/2024752.12 2.12 动物（羊、猪）组织中伊维菌素类药动物（羊、猪）组织中伊维菌素类药物多残
52、留检测方法（液相色谱法）物多残留检测方法（液相色谱法） 待待测测动动物物组组织织中中残残留留的的伊伊维维菌菌素素类类药药物物经经乙乙腈腈提提取取，碱碱性性氧氧化化铝铝固固相相萃萃取取柱柱净净化化后后，与与荧荧光光衍衍生生化化试试剂剂反反应应，用用高高效效液液相相色色谱谱（荧荧光光检检测测器器）, ,进进行行检检测测，外外标标法法定定量量，实实现现了了三三种种阿阿维维菌菌素素类类药药物物的的多多残留分析。残留分析。 检测限检测限:1.0 :1.0 g/kgg/kg；回收率；回收率:63.5%:63.5%90.3%90.3% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20%
53、20% 鸡肉空白样品色谱图鸡肉空白样品色谱图 鸡肉加标样色谱图鸡肉加标样色谱图( (依次为阿维菌素、依次为阿维菌素、多拉菌素和依维菌素多拉菌素和依维菌素 50g/kg) 50g/kg) 8/25/2024762.13 2.13 动物组织中氟苯尼考残留检测方法（液动物组织中氟苯尼考残留检测方法（液相色谱法）相色谱法） 动动物物组组织织匀匀浆浆用用乙乙腈腈提提取取，经经C18C18固固相相小小柱柱净净化化，60%60%甲甲醇醇洗洗脱脱，N N2 2吹吹干干，残残渣渣用用流流动动相相溶溶解解，过过膜膜，作作为为试试样样溶溶液液供供高高效效液液相相色色谱谱（配配紫紫外检测器）分析，外标法定量。外检测器
54、）分析，外标法定量。 检测限检测限: 10 : 10 g/kgg/kg；定量限为；定量限为20 20 g/kgg/kg 回收率回收率: 60.5%: 60.5%103.0% 103.0% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 空白猪肉组织试样色谱图空白猪肉组织试样色谱图 猪肉试样中添加氟苯尼考色谱图猪肉试样中添加氟苯尼考色谱图 8/25/2024772.15 2.15 鸡组织中甲基盐霉素残留检测方法鸡组织中甲基盐霉素残留检测方法（液相色谱法）（液相色谱法） 组织样品经组织样品经异辛烷异辛烷提取后，上清液用提取后，上清液用硅胶柱硅胶柱净化分离，用净化分离
55、，用甲醇甲醇洗脱，洗脱，洗脱液浓缩后用洗脱液浓缩后用甲醇甲醇/ /水水溶解。以甲醇溶解。以甲醇/ /冰乙酸冰乙酸/ /水作为流动相、水作为流动相、香草醛香草醛为衍生剂为衍生剂，用高效液相色谱柱后衍生化法测定。，用高效液相色谱柱后衍生化法测定。 检测限检测限:7 :7 g/kgg/kg；回收率；回收率:76.4%:76.4%93.1%93.1% 批内变异系数批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 鸡肾空白色谱图鸡肾空白色谱图鸡肾添加甲基盐霉素色谱图鸡肾添加甲基盐霉素色谱图8/25/2024782.16 2.16 鸡组织中地克珠利、尼卡巴嗪多残留鸡组织中地克珠利、尼卡巴
56、嗪多残留检测方法（液相色谱法）检测方法（液相色谱法） 鸡鸡组组织织匀匀浆浆用用乙乙腈腈（脂脂肪肪用用90%90%乙乙腈腈）提提取取，经经碱碱性性氧氧化化铝铝固固相相小小柱柱净净化化，回回收收液液减减压压蒸蒸干干，残残渣渣用用流流动动相相溶溶解解，高高速速离离心心，作作为为试试样样溶液供高效液相色谱（配紫外检测器）分析，外标法定量。溶液供高效液相色谱（配紫外检测器）分析，外标法定量。地克珠利检测限地克珠利检测限: 250 : 250 g/kg, g/kg, 定量限定量限:500:500 g/kgg/kg；尼卡巴嗪检测限尼卡巴嗪检测限:100 :100 g/kg, g/kg, 定量限定量限:200
57、:200 g/kg;g/kg;回收率回收率:70.0%:70.0%97.6% 97.6% ；批内变异系数；批内变异系数15%15%，批间变异系数，批间变异系数20% 20% 空白鸡肉组织试样色谱图空白鸡肉组织试样色谱图 鸡肌肉试样中添加地克珠利鸡肌肉试样中添加地克珠利(250g/kg(250g/kg） 、尼克巴嗪（、尼克巴嗪（100g/kg100g/kg）色谱图）色谱图 8/25/202479 休休药0h0h盐霉素残留霉素残留检测值远低于低于 “ “农业部第部第235235号公告号公告”所所规定定鸡组织肌肉、脂肪、肝肌肉、脂肪、肝脏中中盐霉素最高残留限量；霉素最高残留限量；休药休药48h48h后，肉鸡后，肉鸡组织中盐霉素检测不出组织中盐霉素检测不出。验证试验结果表明，符合验证试验结果表明，符合“农业部第农业部第278278号号”公告对该类药物休药期的规定。公告对该类药物休药期的规定。8/25/202480 各各试试验验组组肉肉鸡鸡不不同同组组织织中中的的环环丙丙沙沙星星消消除除速速度度较较快快，残残留留迅迅速速降降到到国国家家规规定定的的最最高高残残留留限限量量以以下下，符符合合“农农业业部部第第278278号号公公告告” ” 对该药物在肉鸡中的休药期规定。对该药物在肉鸡中的休药期规定。8/25/2024818/25/2024828/25/2024838/25/202484
