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1、酵母菌数量的测定酵母菌数量的测定显微镜直接计数法：使用血球计数板等计显微镜直接计数法：使用血球计数板等计菌器进行酵母菌的计数。菌器进行酵母菌的计数。优点：直观、快速、优点：直观、快速、操作简单。操作简单。缺点：所测得的结缺点：所测得的结果是果是死菌体与活菌死菌体与活菌体体的总和。的总和。12取样前需取样前需摇匀摇匀向计数室添加样品向计数室加样品时，向计数室添加样品向计数室加样品时，先先将计数室盖上盖玻片将计数室盖上盖玻片，用无菌细滴管沿盖，用无菌细滴管沿盖玻片边缘滴入少量菌液，菌液自行沿边缘玻片边缘滴入少量菌液，菌液自行沿边缘缝隙渗入计数室。计数室要充满菌液，不缝隙渗入计数室。计数室要充满菌液
2、，不能存有气泡。能存有气泡。取样与滴加培养液取样与滴加培养液3稀稀 释释小方格内酵母菌数量过多，难以计数，就小方格内酵母菌数量过多，难以计数，就要对菌液进行适当稀释后再计数。一般样要对菌液进行适当稀释后再计数。一般样品稀释后适宜范围是品稀释后适宜范围是少于少于 10 10 个菌体个菌体/ /每小每小格格。根据需稀释的倍数，精确算出应加入。根据需稀释的倍数，精确算出应加入的无菌水量，的无菌水量，如如lmL lmL 菌液欲稀释菌液欲稀释100 100 倍，则需倍，则需向向lmL lmL 菌菌液中加入液中加入99mL 99mL 无菌水无菌水，而不是加入，而不是加入100mL 100mL 无菌水。无菌
3、水。4计计 数数 对于压在小方格界线上的酵母菌应取对于压在小方格界线上的酵母菌应取相邻两相邻两边及顶角边及顶角计数。计数。5以一个大方格有以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为，菌液稀释倍数为B，那么，那么，一个大方格中的总菌数：一个大方格中的总菌数： (6)怎样进行酵母菌的计数怎样进行酵母菌的计数?6染染 色色 美蓝是无毒性染料，碱性条件下，用美蓝是无毒性染料，碱性条件下，用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还胞的新陈代
4、谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此，色的还原型，因此，具有还原能力的酵母具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。 78如果将染液直接滴在血球计数板上，菌液浓度改如果将染液直接滴在血球计数板上，菌液浓度改变，无法对实验结果精确计算。变，无法对实验结果精确计算。正确的做法应是另外制作装片，通过染色对活菌正确的做法应是另外制作装片
5、，通过染色对活菌和死菌加以区分，算出两者比例，进一步换算出和死菌加以区分，算出两者比例，进一步换算出总菌体数中的活菌数。总菌体数中的活菌数。9第第 7 7 天天死亡死亡10(1)在不同温度（以及通氧、通在不同温度（以及通氧、通CO2等）条等）条件下酵母菌种群数量增长的情况如何？件下酵母菌种群数量增长的情况如何？(2)不同培养液（如加糖和不加糖）中酵母不同培养液（如加糖和不加糖）中酵母菌种群数量增长的情况如何？菌种群数量增长的情况如何？进一步探究：试管编号试管编号培养液培养液/mL无菌水无菌水/mL酵母菌母液酵母菌母液/mL温度温度/A100.128B100.15C100.12811试管编试管编
6、号号培养液培养液/mL无菌水无菌水/mL酵母菌母液酵母菌母液/mL温度温度/A100.128B100.15C100.128为什么第为什么第3天后天后A组培养液中酵母菌数目减缓组培养液中酵母菌数目减缓甚至不增加？甚至不增加？C12血球计数板的清洗血球计数板的清洗 血球计数板使用结束后，应用清水浸泡、血球计数板使用结束后，应用清水浸泡、冲洗，冲洗，不能用刷子等硬物洗刷不能用刷子等硬物洗刷，自然晾干，自然晾干或吹风机吹干后，或吹风机吹干后，镜检每个小格中是否存镜检每个小格中是否存有污物、残菌有污物、残菌，如不清洁，需重新清洗直，如不清洁，需重新清洗直至洁净。至洁净。13无菌操作无菌操作 要防止杂菌污染给实验结果带来影响。要防止杂菌污染给实验结果带来影响。每次抽样检测用到的蒸馏水、玻璃器皿、每次抽样检测用到的蒸馏水、玻璃器皿、滴管等要事先经无菌化处理，血球计数板、滴管等要事先经无菌化处理，血球计数板、载玻片、盖玻片等必需保持洁净。载玻片、盖玻片等必需保持洁净。 每次取样观察要规范，实验用过的器材每次取样观察要规范，实验用过的器材要清洗干净，需灭菌的器具则一定要灭菌。要清洗干净，需灭菌的器具则一定要灭菌。14
