《第一章样品前处理-支撑液液萃取和蛋白质沉淀》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第一章样品前处理-支撑液液萃取和蛋白质沉淀（24页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第一章第一章 样品前处理方法样品前处理方法专题介专题介绍三：支撑液液萃取、绍三：支撑液液萃取、 蛋白质沉淀蛋白质沉淀 一、支撑液液萃取一、支撑液液萃取l lSolid-supported liquid liquid extraction (SLE)l l以传统液液萃取原理为基础，结合固相萃取 支撑体易于相分离的特点，以一种吸附性高、惰性好、比表面积大的多孔填料为介质，从而实现快速和高通量样品制备；硅藻土-SLE The process of sample analysis by SLE and HPLCl lFirst reported in 1997 by Johnson and co-wo
2、rkersFirst reported in 1997 by Johnson and co-workersl lSLE has many advantages compared with LLESLE has many advantages compared with LLESimple operationSimple operationNo emulsificationNo emulsificationHigh recovery rateHigh recovery rate硅藻土-SLE Investigation of packing and filled methodInvestigat
3、ion of packing and filled method Characterization of packing Characterization of packing (A) Inert packing treated by high temperature burning and acid cleaning and (B) Detail view of the inert packingABSLE样品前处理方法l l惰性材料：种类、颗粒、装填量等；l l萃取剂种类、体积；l l萃取后处理；SLE 应用（1）：l l蔬菜、果汁中苯并咪唑类农药残留的检测：蔬菜、果汁中苯并咪唑类农药残留
4、的检测：水蜜桃水蜜桃多菌灵多菌灵SLE 应用（2）：l l血清中中性药物醋酸地塞米松的萃取SLE 应用（2）：l l血清中碱性药物马来酸氯苯那敏的萃取SLE 应用（2）：l l血清中酸性药物吲哚美辛的萃取SLE 应用（2）：l l鸡肉、蜂蜜、牛奶中硝基呋喃类代谢物的分析：鸡肉、蜂蜜、牛奶中硝基呋喃类代谢物的分析：l l呋喃唑酮代谢物（呋喃唑酮代谢物（AOZAOZ）、呋喃它酮代谢物（）、呋喃它酮代谢物（AMAMD DZ Z）、）、呋喃妥因代谢物（呋喃妥因代谢物（AHDAHD）、呋喃西林代谢物（）、呋喃西林代谢物（SEMSEM）SLE应用（3）：白酒中塑化剂的分析化合物化合物化合物化合物t t t
5、 tR R R R（minminminmin）S1S1S1S1（% % % %）S2S2S2S2（% % % %）化合物化合物化合物化合物t t t tR R R R（minmin）S S S S1 1（%）S S S S2 2（%）邻苯二甲酸二甲酯邻苯二甲酸二甲酯邻苯二甲酸二甲酯邻苯二甲酸二甲酯8.8.3 3139.139.4 4122.122.1 1邻苯二甲酸二己酯邻苯二甲酸二己酯邻苯二甲酸二己酯邻苯二甲酸二己酯15.15.6 687.587.562.62.3 3邻苯二甲酸二乙酯邻苯二甲酸二乙酯邻苯二甲酸二乙酯邻苯二甲酸二乙酯9.19.1121.121.2 2138.138.3 3邻苯二甲
6、酸丁基苄邻苯二甲酸丁基苄邻苯二甲酸丁基苄邻苯二甲酸丁基苄基酯基酯基酯基酯15.715.7129.129.4 49 96 6. .0 0邻苯二甲酸二异丁酯邻苯二甲酸二异丁酯邻苯二甲酸二异丁酯邻苯二甲酸二异丁酯10.910.9171.171.8 8159.159.6 6邻苯二甲酸二邻苯二甲酸二邻苯二甲酸二邻苯二甲酸二(2-(2-丁丁丁丁氧基氧基氧基氧基) )乙酯乙酯乙酯乙酯17.17.2 2164.3164.3125.4125.4邻苯二甲酸二丁酯邻苯二甲酸二丁酯邻苯二甲酸二丁酯邻苯二甲酸二丁酯11.611.6176.176.4 413138 8. .0 0邻苯二甲酸二环己邻苯二甲酸二环己邻苯二甲酸
7、二环己邻苯二甲酸二环己酯酯酯酯17.817.8111.1111.186.386.3邻苯二甲酸二邻苯二甲酸二邻苯二甲酸二邻苯二甲酸二(2-(2-甲氧基甲氧基甲氧基甲氧基) )乙酯乙酯乙酯乙酯1 12 2. .0 0131.131.0 099.99.5 5邻苯二甲酸二邻苯二甲酸二邻苯二甲酸二邻苯二甲酸二(2-(2-乙乙乙乙基基基基) )己酯己酯己酯己酯18.18.1 1105.9105.989.689.6邻苯二甲酸二邻苯二甲酸二邻苯二甲酸二邻苯二甲酸二(4-(4-甲基甲基甲基甲基-2-2-戊基戊基戊基戊基) )酯酯酯酯12.712.797.97.8 883.983.9邻苯二甲酸二苯酯邻苯二甲酸二苯
8、酯邻苯二甲酸二苯酯邻苯二甲酸二苯酯18.218.2170.170.6 6117.117.7 7邻苯二甲酸二邻苯二甲酸二邻苯二甲酸二邻苯二甲酸二(2-(2-乙氧基乙氧基乙氧基乙氧基) )乙酯乙酯乙酯乙酯13.13.1 1130.8130.8102.7102.7邻苯二甲酸二正辛邻苯二甲酸二正辛邻苯二甲酸二正辛邻苯二甲酸二正辛酯酯酯酯20.20.5 5123.8123.899.99.9 9邻苯二甲酸二戊酯邻苯二甲酸二戊酯邻苯二甲酸二戊酯邻苯二甲酸二戊酯13.413.4105.105.8 866.66.3 3邻苯二甲酸二壬酯邻苯二甲酸二壬酯邻苯二甲酸二壬酯邻苯二甲酸二壬酯23.02323.023121
9、.121.1 197.97.9 9邻苯二甲酸丁酯邻苯二甲酸丁酯填料填料填料填料回收率（回收率（回收率（回收率（%）C18C18100.40100.40PS-DVBPS-DVB123.53123.53SLESLE158.37158.37二、蛋白质沉淀二、蛋白质沉淀l lProtein precipitation tube，PPTl l蛋白质沉淀的原理是沉淀剂与蛋白质的一部蛋白质沉淀的原理是沉淀剂与蛋白质的一部分直接或间接的相互作用，从而使蛋白质聚分直接或间接的相互作用，从而使蛋白质聚集沉淀。集沉淀。l l生物样品中小分子物质的分析生物样品中小分子物质的分析l l减少生物样品中的蛋白质的含量减少生
10、物样品中的蛋白质的含量减少生物样品中的蛋白质的含量减少生物样品中的蛋白质的含量l l蛋白质标记物的分析蛋白质标记物的分析l l将不同的蛋白质分开将不同的蛋白质分开将不同的蛋白质分开将不同的蛋白质分开l l将蛋白质溶液进行浓缩将蛋白质溶液进行浓缩将蛋白质溶液进行浓缩将蛋白质溶液进行浓缩生物化学生物化学l l热聚集热聚集l l盐析盐析l l酸变性法酸变性法使生物样品中所有蛋白质整体变性使生物样品中所有蛋白质整体变性蛋白质沉淀的一般步骤蛋白质沉淀的一般步骤溶剂的加入溶剂的加入如内标物、反应物、如内标物、反应物、2-52-5倍样品体积的有机溶剂；倍样品体积的有机溶剂；震荡震荡增加蛋白质变性沉淀的速度，
11、也可以将震荡后的增加蛋白质变性沉淀的速度，也可以将震荡后的样品液进行冷冻从而增加蛋白质祛除的效率；样品液进行冷冻从而增加蛋白质祛除的效率；离心或者过滤除沉淀离心或者过滤除沉淀过滤法效率与离心法相当或者更优于离心法，且过滤法效率与离心法相当或者更优于离心法，且过滤法更易于实现自动化过滤法更易于实现自动化 PPT was introduced in 2000 by 3M Company. Compared to traditional centrifugation method the advantages of PPT are as follows: Simple Easy Fast High
12、Throughput (HTP)快速蛋白质沉淀快速蛋白质沉淀 The process of protein sample analysis by single PPT and HPLC高通量蛋白质沉淀高通量蛋白质沉淀High throughput device 血清中头孢氨苄的分析Recovery of the Cephalexin in Fetal calf serum with different precipitatorsPPT vs Centrifugation methodRecovery of the Cephalexin in BSA with different methods血清中马来酸氯苯那敏C (g/mL)C (g/mL)The recovery The recovery (%)(%)RSD% RSD% (intra-day, n=6)(intra-day, n=6)RSD%RSD% (inter-day, n=6) (inter-day, n=6)8.528.52110.45110.4521.3521.35102.34102.341.081.081.711.7134.1634.1696.7796.77Recovery rates, intra-day and inter-day RSD of the Maleate Chlorphenamine
