Chapter 7 Cell Cycle Section 1 Introduction 细胞周期（细胞周期（cell cycle））就是指细胞生长与分就是指细胞生长与分裂的周期，即细胞在一次分裂结束开始生长，裂的周期，即细胞在一次分裂结束开始生长，到下一次分裂完成所经历的过程到下一次分裂完成所经历的过程 1. Phases of Cell Cycle细胞周期一般包含下列四个阶段：细胞周期一般包含下列四个阶段：①①G1期：从有丝分裂完成到期：从有丝分裂完成到DNA复制之前的复制之前的一段时期；一段时期；②②S期：为期：为DNA复制的时期；复制的时期；③③G2期：从期：从DNA复制完成到有丝分裂开始的复制完成到有丝分裂开始的一段时期；一段时期；④④M期：从细胞分裂开始到结束的时期期：从细胞分裂开始到结束的时期 Phases of Cell CycleG0 2. Characteristics of Cell Cycle Phases①①G1期：期：Ø细胞周期的大部分时相处于细胞周期的大部分时相处于G1期，动物细期，动物细胞一般为胞一般为6~12小时该期主要的生化活动小时。
该期主要的生化活动是合成是合成RNA和蛋白质和蛋白质②②S期：期：Ø此期一般持续此期一般持续6~8小时，其长短主要由基小时，其长短主要由基因组的复杂度决定该期主要的生化活动因组的复杂度决定该期主要的生化活动是复制是复制DNA ③③G2期：期：Ø是最短的时相该期主要的生化活动是合是最短的时相该期主要的生化活动是合成一些与有丝分裂有关的蛋白质成一些与有丝分裂有关的蛋白质④④M期：期：Ø该期很短，一般持续该期很短，一般持续0.5~2小时该期生化小时该期生化合成停止，细胞形态发生改变，一个母细合成停止，细胞形态发生改变，一个母细胞分裂成胞分裂成2个子代细胞个子代细胞 3. Checking Points of Cell Cycle真核细胞的分裂增殖必须经过两个关键的调控真核细胞的分裂增殖必须经过两个关键的调控点：即点：即DNA合成开始时的合成开始时的G1→S期的转换期的转换和有和有丝分裂开始时的丝分裂开始时的G2→M期的转换期的转换细胞必须在顺利经过这两个调控关键点之后，细胞必须在顺利经过这两个调控关键点之后，才可能完成细胞的分裂增殖，即细胞周期才可能完成细胞的分裂增殖，即细胞周期除此之外，细胞由除此之外，细胞由G0→G1期的转换期的转换，也涉及另，也涉及另外一个调控点。
外一个调控点 细胞周期中各关键点的转换，是通过各种调控细胞周期中各关键点的转换，是通过各种调控因子相互作用，构成级联网络调控系统来实现因子相互作用，构成级联网络调控系统来实现的这一调控系统的核心就是这一调控系统的核心就是周期素依赖的蛋白激周期素依赖的蛋白激酶（酶（cyclin-dependent protein kinase，，CDK））家族正是该家族成员的顺序激活和对家族正是该家族成员的顺序激活和对关键底物的磷酸化促进细胞周期的有序进程，关键底物的磷酸化促进细胞周期的有序进程，启动并完成启动并完成G1→S期和期和G2→M期的转换期的转换 Section 2 Regulation of Cell Cycle 1. Growth Factors and their Receptors生长因子，如生长因子，如EGF、、PDGF、、TGF、、FGF、、NGF、、IL-2等，与相应的靶细胞膜受体结合后，等，与相应的靶细胞膜受体结合后，即可通过细胞信号转导，调节相关结构基因的即可通过细胞信号转导，调节相关结构基因的表达，启动细胞增殖过程表达，启动细胞增殖过程 2. Structure and Function of Cyclin周期素都是周期素都是CDK的调节亚基，分别在细胞周期的调节亚基，分别在细胞周期的不同时期积累，激活的不同时期积累，激活CDK，使其具有催化关，使其具有催化关键底物的磷酸化修饰并调节其活性。
键底物的磷酸化修饰并调节其活性在高等真核细胞中，周期素至少分为在高等真核细胞中，周期素至少分为A、、B、、C、、D、、E、、F、、G等几大类等几大类 周周期期素素的的家家族族成成员员 五大类周期素中都含有由五大类周期素中都含有由100～～150个氨基酸残个氨基酸残基组成的保守区，称为基组成的保守区，称为周期素盒（周期素盒（cyclin box）），是与，是与CDK相互作用的活性区域相互作用的活性区域此外，还可含有此外，还可含有降解盒（降解盒（destruction box））或或PEST序列（脯序列（脯-谷谷-丝丝-苏）苏），可通过定时降，可通过定时降解或快速转换来调节周期素的水平解或快速转换来调节周期素的水平 按周期素表达及作用的细胞周期阶段的不同，按周期素表达及作用的细胞周期阶段的不同，可将其分为可将其分为G1期期（（D、、E）和）和M期期（（A、、B））两大类 The Expressional Levels of Cyclins during Cell Cycle The Relationship of Cyclin Expressional Levels with DNA Replication 是指在是指在G1期或期或G1→S期转换点发挥作用，并能期转换点发挥作用，并能启动细胞周期，促进启动细胞周期，促进DNA合成的周期素。
合成的周期素G1期周期素主要包括周期素期周期素主要包括周期素C、、D、、E等，这些等，这些周期素通常在细胞周期的周期素通常在细胞周期的G1期时活性升高，而期时活性升高，而在在S期以后则逐渐降至较低的水平期以后则逐渐降至较低的水平2.1 Cyclins during G1 Phase ①①周期素周期素C：：Ø周期素周期素C的的C-端存在一个端存在一个PEST序列，其细序列，其细胞内的水平在胞内的水平在G1期中点达高峰期中点达高峰 ②②周期素周期素D：：Ø周期素周期素D至少有至少有D1、、D2、、D3三种亚型三种亚型Ø周期素周期素D的的C-端存在一个端存在一个PEST序列；序列；N-端端含有一个与含有一个与DNA肿瘤病毒转化蛋白共同的肿瘤病毒转化蛋白共同的顺序顺序Leu-X-Cys-X-Glu ，是周期素，是周期素D与与p110Rb等蛋白结合所必需等蛋白结合所必需 不同亚型周期素不同亚型周期素D在在细胞内的表达模式不细胞内的表达模式不同，但主要是在同，但主要是在G1期处于较高的表达水期处于较高的表达水平 ③③周期素周期素E：：Ø有有E1和和E2两种亚型，其细胞内的水平在两种亚型，其细胞内的水平在G1/S调控点达峰值。
调控点达峰值 Ø是指在是指在G2→M期转换处发挥作用，诱导细胞期转换处发挥作用，诱导细胞分裂的周期素，包括周期素分裂的周期素，包括周期素A和和B两类Ø这这 类类 蛋蛋 白白 在在 其其 N-端端 含含 有有 一一 个个 降降 解解 盒盒（（destruction box）），，在在M期期通通过过泛泛素素（（ubiquitin）途径降解途径降解2.2 Cyclins during M Phase ①①周期素周期素A：：Ø包括三种亚型：包括三种亚型：A1、、A2和和A3Ø在细胞周期的在细胞周期的DNA合合成之前出现，并不断成之前出现，并不断增加，与启动增加，与启动DNA复复制有关，主要在制有关，主要在S期期发挥作用发挥作用Cyclin A3 ②②周期素周期素B：：Ø周期素周期素B在人类有两种亚型，在人类有两种亚型，B1和和B2Ø周期素周期素B水平的变化主要由其降解速率来水平的变化主要由其降解速率来调控Ø周期素周期素B在在S晚期出现，在细胞进入晚期出现，在细胞进入M期之期之前，其水平呈线性增高，当达到一定阈值前，其水平呈线性增高，当达到一定阈值时，促使时，促使CDK激活；当细胞进入激活；当细胞进入M期后，期后，周期素周期素B降解速率增加，水平骤然下降，降解速率增加，水平骤然下降，CDK失活。
失活 3. Structure and Function of CDK 人们对人们对CDK的认识，最初是通过研究培养细胞的认识，最初是通过研究培养细胞和酵母细胞而得到的和酵母细胞而得到的目前已经确定的目前已经确定的CDK有：裂殖酵母中有：裂殖酵母中CdC2；；酿酒酵母中的酿酒酵母中的CdC28、、PHO85、、KIN28以及人以及人类细胞中类细胞中CDK1～～10 3.1 Types and Characters of CDK CDK Family in Human CDK的分子量一般为的分子量一般为35～～40kD，不同，不同CDK的的氨基酸组成有氨基酸组成有40%以上的同源性以上的同源性典型的典型的CDK催化亚基的活性中心约由催化亚基的活性中心约由300个氨个氨基酸残基组成，当处于单体或非磷酸化状态时，基酸残基组成，当处于单体或非磷酸化状态时，CDK没有催化活性没有催化活性 Molecular Structure of CDK2 CDK的的催催化化活活性性受受到到激激活活因因素素与与抑抑制制因因素素两两方面的调节方面的调节在在激激活活因因素素中中，，目目前前认认为为CDK与与周周期期素素的的结结合合以以及及保保守守的的苏苏氨氨酸酸残残基基的的磷磷酸酸化化是是较较为为重重要的两种调节因素；要的两种调节因素；而而在在抑抑制制因因素素中中，，CDK的的N-端端氨氨基基酸酸残残基基的的抑抑制制性性磷磷酸酸化化以以及及抑抑制制蛋蛋白白的的结结合合是是主主要要的的调节因素。
调节因素3.2 Regulation of CDK Activity ①① 周期素的激活作用：周期素的激活作用：Ø周周期期素素中中的的“周周期期素素盒盒”结结构构域域直直接接和和CDK的的结结合合，，并并与与CDK的的激激活活相相关关，，周周期期素是素是CDK的正性调节剂的正性调节剂Ø周周期期素素的的这这两两种种功功能能是是密密切切相相关关的的，，而而这这种种结结合合与与激激活活作作用用主主要要通通过过周周期期素素在在细细胞胞周期中的浓度波动来调控周期中的浓度波动来调控3.2.1 Activation of CDK CyclinA-CDK2 Complex with ATP Bound ②②磷酸化修饰的激活作用：磷酸化修饰的激活作用：ØCDK的激活还必须依赖于其保守的苏氨酸的激活还必须依赖于其保守的苏氨酸残基的磷酸化，如在人残基的磷酸化，如在人CDK1（（p34cdc2）的）的Thr161和和CDK2的的Thr160的磷酸化，就与这的磷酸化，就与这两个酶的激活相关两个酶的激活相关 Ø催化催化CDK1和和CDK2磷酸化的酶是磷酸化的酶是CAK，，该酶该酶是一种寡聚体，其催化亚基为是一种寡聚体，其催化亚基为CDK7，调节，调节亚基为亚基为周期素周期素H，，另需一组装蛋白因子另需一组装蛋白因子MAT1以稳定结构。
以稳定结构MAT1——CDK-activating kinase assembly factor 1 Complex of CDK7 –CyclinH-MAT1 Cyclin HCDK7MAT1 ①① 磷酸化修饰的抑制作用：磷酸化修饰的抑制作用：Ø在在人人的的CDK1和和CDK2中中，，Thr14和和Tyr15残残基的磷酸化可抑制基的磷酸化可抑制CDK的催化活性的催化活性Ø其其原原因因在在于于上上述述残残基基的的侧侧链链位位于于该该酶酶活活性性中中心心ATP结结合合部部位位的的顶顶端端，，因因而而对对激激酶酶的的磷酸化作用产生了阻碍磷酸化作用产生了阻碍3.2.2 Inhibition of CDK Ø催化催化Thr14和和Tyr15磷酸化的是两种不同的蛋白磷酸化的是两种不同的蛋白激酶，使激酶，使Thr14磷酸化的为蛋白激酶磷酸化的为蛋白激酶Myt1 ，使，使Tyr15磷酸化的是蛋白激酶磷酸化的是蛋白激酶Wee1/Mik1 Ø催催化化Thr14和和Tyr15脱脱磷磷酸酸化化的的是是蛋蛋白白磷磷酸酸酶酶CDC25Ø因因此此，，蛋蛋白白激激酶酶Wee1和和Myt1及及蛋蛋白白磷磷酸酸酶酶CDC25的的相相对对活活性性，，决决定定CDK1和和CDK2的的活活性高低。
性高低 Regulation of CDK ActivityCAK ②②抑制蛋白的作用：抑制蛋白的作用：Ø近年来，已分离并鉴定了若干能够与周期近年来，已分离并鉴定了若干能够与周期素素-CDK复合物特异性结合并抑制其活性复合物特异性结合并抑制其活性的蛋白因子，这些蛋白因子被称为的蛋白因子，这些蛋白因子被称为周期素周期素依赖性蛋白激酶抑制蛋白（依赖性蛋白激酶抑制蛋白（CKI））Ø大部分大部分CKI都是抑癌基因的编码产物都是抑癌基因的编码产物 Ø在哺乳动物细胞中，目前已经确定的在哺乳动物细胞中，目前已经确定的CKI主主要有：要有：P21WAF1/CIP1、、P27KIP1、、P16INK4和和P15INK4B，可分别抑制各型，可分别抑制各型CDK的活性 ①①P21WAF1/CIP1：：Ø是由抑癌基因是由抑癌基因WAF1/CIP1编码合成的蛋白编码合成的蛋白质，几乎能与所有的周期素质，几乎能与所有的周期素-CDK复合物复合物结合，抑制其蛋白激酶活性，使细胞停留结合，抑制其蛋白激酶活性，使细胞停留在在G1期 ②②P27KIP1：：Ø是由抑癌基因是由抑癌基因KIP1编码合成的蛋白质，也编码合成的蛋白质，也能与几乎所有的周期素能与几乎所有的周期素-CDK复合物结合，复合物结合，抑制其蛋白激酶活性，使细胞停留于抑制其蛋白激酶活性，使细胞停留于G1期。
期 p27-cyclin-cdk complex ③③P16INK4A和和P15INK4B：：Ø是是分分别别由由抑抑癌癌基基因因INK4A/MTS1和和INK4B/ MTS2编编码码合合成成的的蛋蛋白白质质，，能能专专一一性性的的与与CDK4和和CDK6结结合合，，并并阻阻止止其其与与周周期期素素的的结结合合反反应应，，从从而而抑抑制制其其蛋蛋白白激激酶酶活活性性，，使使细胞停留于细胞停留于G1期 ④④P53：：Ø由由抑抑癌癌基基因因p53编编码码合合成成的的蛋蛋白白质质，，是是WAF1/CIP1基因的转录激活因子基因的转录激活因子Ø因因此此，，P53的的表表达达可可促促进进P21WAF1/CIP1的的转转录表达，从而抑制录表达，从而抑制CDK的蛋白激酶活性的蛋白激酶活性 Function of P53 ⑤⑤PRb：：Ø是是由由Rb抑抑癌癌基基因因编编码码合合成成的的蛋蛋白白质质，，有有低低磷酸化型磷酸化型和和高磷酸型高磷酸型两种型式两种型式Ø低低磷磷酸酸化化型型的的PRb可可与与转转录录因因子子E2F形形成成复复合合体体，，抑抑制制其其转转录录激激活活作作用用，，阻阻止止细细胞胞分分裂裂；；而而高高磷磷酸酸化化型型的的PRb则则不不能能与与E2F形形成成复复合合体。
体Ø催催化化PRb由由低低磷磷酸酸化化型型转转变变为为高高磷磷酸酸化化型型的的蛋白激酶就是各型蛋白激酶就是各型CDK Rb function is linked to other tumor suppressors 细细胞胞周周期期的的调调控控机机制制 Smad3/4 —— Mothers against decapentaplegic homolog 3/4ATM —— Serine-protein kinase ATMATR —— Serine-protein kinase ATR SKP2 —— S-phase kinase-associated protein 2SCF —— Skip1-cullin/cdc53-F-box proteinGSK3 —— Glycogen synthase kinase 3HDAC —— Histone deacetylaseDP-1 —— Transcription factor Dp-1 Chapter 8 Cell Apoptosis Section 1 Introduction 细胞死亡也是一种重要的生命过程目前，细胞死亡也是一种重要的生命过程。
目前，经经““细胞死亡命名委员会细胞死亡命名委员会( (NCCD)”)”确认的细确认的细胞死亡类型至少有胞死亡类型至少有10余余种其中，由其中，由NCCD明确鉴定的细胞死亡类型包括：明确鉴定的细胞死亡类型包括：细胞坏死细胞坏死(cell necrosis)、、细胞凋亡细胞凋亡(cell apoptosis)和和细胞自噬细胞自噬(cell autophage) 1. Concept of Cell Apoptosis细胞凋亡（细胞凋亡（cell apoptosis））是指细胞自杀机是指细胞自杀机制被活化而引发的一种以细胞固缩为主要形态制被活化而引发的一种以细胞固缩为主要形态学改变的程序性细胞死亡学改变的程序性细胞死亡细胞凋亡的发生受凋亡相关基因的调控细胞凋亡的发生受凋亡相关基因的调控凋凋亡亡细细胞胞的的形形态态学学改改变变主主要要发发生生在在细细胞胞核核凋凋亡亡时时，，由由于于细细胞胞膜膜保保持持完完整整，，无无内内容容物物溢溢出出，，故一般不会引起炎症反应故一般不会引起炎症反应 2. Morphologic and Biochemical Characters of Cell Apoptosis凋亡细胞出现特征性的形态学改变：凋亡细胞出现特征性的形态学改变：①①染色质密集，呈边缘化；染色质密集，呈边缘化；②②核固缩核固缩；；③③DNA链断裂链断裂；；④④出现凋亡小体。
出现凋亡小体 2.1 Morphologic Characters Processing of Cell Death Comparison of Necrotic with Apoptotic Cellsnormal cellapoptotic cellnecrotic cell Apoptotic Cell and Macrophage 凋亡细胞的典型生化凋亡细胞的典型生化改变是将其基因组改变是将其基因组DNA进行琼脂糖凝胶进行琼脂糖凝胶电泳时，电泳时，DNA片段表片段表现为间隔现为间隔180~200bp的阶梯状条带的阶梯状条带2.2 Biochemical Characters 3. Physiological Significances of Cell Apoptosis细胞凋亡是多细胞生物生命活动过程中的重要细胞凋亡是多细胞生物生命活动过程中的重要内容细胞凋亡贯穿于动物全部生命周期中，是保证细胞凋亡贯穿于动物全部生命周期中，是保证个体发育成熟所必需的过程个体发育成熟所必需的过程 Section 2 Genes and Their Proteins Related to Apoptosis 1. Ced Gene FamilyCed基基因因家家族族是是线线虫虫的的细细胞胞凋凋亡亡相相关关基基因因，，包包括括Ced-3、、Ced-4、、Ced-9等。
等其其中中，，Ced-3基基因因编编码码产产物物与与人人半半胱胱氨氨酸酸蛋蛋白白酶酶（（如如ICE））同同源源，，Ced-4基基因因编编码码产产物物与与人人Apaf-1蛋蛋白白同同源源，，Ced-9的的编编码码产产物物与与人人的的bcl-2有同源性有同源性 Ced基因家族的表达产物中，基因家族的表达产物中，Ced-3和和Ced-4能促进细胞凋亡；而能促进细胞凋亡；而Ced-9能与能与Ced-3和和Ced-4形成复合物并抑制其活性，从而抑制细胞凋亡形成复合物并抑制其活性，从而抑制细胞凋亡 Regulation of Ced Proteins for Cell Apoptosis 2. rpr Generpr基基因因是是果果蝇蝇的的凋凋亡亡相相关关基基因因，，该该基基因因编编码码一一种种与与Fas的的DD结结构构域域同同源源的的小小分分子子多多肽肽，，以以Fas介介导导凋凋亡亡类类似似的的方方式式激激活活ICE/Ced-3样样蛋蛋白酶白酶，促进细胞凋亡促进细胞凋亡 3. bcl-2 Gene Superfamilybcl-2基基因因定定位位于于人人第第18号号染染色色体体上上，，与与线线虫虫的的ced-9基基 因因 同同 源源 ，， 能能 编编 码码 26kD的的 Bcl-2 和和22kD的的Bcl-2 两种蛋白。
两种蛋白bcl-2基基因因为为凋凋亡亡抑抑制制基基因因，，其其表表达达产产物物是是膜膜整整合蛋白 Bcl-2（（Bcl-XL）蛋白具有下列抗凋亡作用：）蛋白具有下列抗凋亡作用：①①能能抑抑制制线线粒粒体体PT孔孔（（通通透透性性转转变变孔孔））开开放放，，减少减少Cyt c和和凋亡诱导因子凋亡诱导因子（（AIF）的释放；）的释放；②②能能结结合合和和灭灭活活Apaf-1，，阻阻断断其其对对caspase-9活化；活化；③③能特异地结合能特异地结合Cyt c，阻止其诱导细胞凋亡阻止其诱导细胞凋亡 现现已已发发现现至至少少存存在在29个个bcl-2基基因因的的同同源源物物，，它们粒体介导的凋亡途径中起调控作用它们粒体介导的凋亡途径中起调控作用 Bcl-2蛋蛋白白家家族族成成员员都都含含有有1~4个个Bcl-2同同源源结结构构域域（（BH1~4）），，并并且且通通常常有有一一个个羧羧基基端端跨跨膜膜结构域（结构域（transmembrane region，，TM） 一一般般说说来来，，BH4是是抗抗凋凋亡亡蛋蛋白白所所特特有有的的结结构构域域，，BH3则是与促进凋亡有关的结构域则是与促进凋亡有关的结构域。
因因此此，，根根据据结结构构不不同同，，bcl-2家家族族成成员员中中，，有有些些具有抗凋亡活性，有些则具有促凋亡活性具有抗凋亡活性，有些则具有促凋亡活性 根据功能和结构可将根据功能和结构可将Bcl-2家族分为两大类：家族分为两大类：①①抗抗凋凋亡亡的的（（anti-apoptotic））：：如如Bcl-2、、Bcl-xL、、Bcl-w、、Mcl-1等②②促促凋凋亡亡的的（（pro-apoptotic））：：包包括括多多结结构构域域的的（（如如Bax、、Bak、、Bok））和和只只有有BH3结结构构域域的的（（如如Bad、、Bid、、Bim、、Bik等等））两两种种亚类 Molecular Structure of Bcl-2 Protein Family B Bc cl l- -2 2蛋蛋白白家家族族成成员员 Bcl-2蛋白主要定位于线粒体外膜，可与促凋亡蛋白主要定位于线粒体外膜，可与促凋亡蛋白形成复合体，抑制其作用，因而具有拮抗蛋白形成复合体，抑制其作用，因而具有拮抗促凋亡蛋白的功能促凋亡蛋白的功能而大多数而大多数Bcl-2家族的促凋亡蛋白则主要定位于家族的促凋亡蛋白则主要定位于细胞浆，一旦细胞受到凋亡因子的诱导，即可细胞浆，一旦细胞受到凋亡因子的诱导，即可向线粒体膜转位。
向线粒体膜转位 这些促凋亡蛋白通过寡聚化，粒体外膜形这些促凋亡蛋白通过寡聚化，粒体外膜形成跨膜通道成跨膜通道 ；或者开启线粒体的；或者开启线粒体的通透性转变孔通透性转变孔（（permeability transition pore，，PT）），促，促使线粒体内的凋亡因子（使线粒体内的凋亡因子（cyt c）释放，激活蛋）释放，激活蛋白水解酶白水解酶caspase，引发细胞凋亡引发细胞凋亡 Anti-apoptosis and Pro-apoptosis Effects of Bcl-2 Related Proteins 4. Caspase Gene Superfamily哺乳动物中存在的哺乳动物中存在的白介素白介素-1 -转化酶（转化酶（ICE））是细胞凋亡蛋白酶，与线虫的是细胞凋亡蛋白酶，与线虫的Ced-3同源，都同源，都属于属于胱胱-天蛋白酶天蛋白酶家族（家族（cysteine aspartate-specific protease，，caspase）这些蛋白酶是引起细胞凋亡的关键酶，一旦被这些蛋白酶是引起细胞凋亡的关键酶，一旦被信号途径激活，能将细胞内的蛋白质降解，使信号途径激活，能将细胞内的蛋白质降解，使细胞不可逆的走向死亡。
细胞不可逆的走向死亡 Active site: CysteineCleavage site: Asparatic acid Cysteine Asparatic acid specific proteaseAsp-Xxx天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶 在人类细胞中已发现在人类细胞中已发现13个个ICE同源物，分为同源物，分为2个亚家族：个亚家族：①①ICE亚家族亚家族——包括包括caspase-1、、4、、5、、11、、12、、13等，主要参与炎症反应；等，主要参与炎症反应；②②CED-3亚家族亚家族——包括包括caspase-2、、3、、6、、7、、8、、9、、10等，主要参与细胞凋亡等，主要参与细胞凋亡 Types of ICE Related Proteins 目前已经鉴定的目前已经鉴定的caspase的水解底物包括：的水解底物包括：Ø多聚（多聚（ADP-核糖）聚合酶（核糖）聚合酶（PARP）；）；Ø纤层蛋白（纤层蛋白（lamins）；）；Øcaspase依赖的依赖的DNA酶抑制蛋白（酶抑制蛋白（ICAD）；）；Ø小核蛋白体蛋白（小核蛋白体蛋白（HnRNP proteins））等等20多种。
多种 The Substrates of Caspases Ø多聚（多聚（ADP-核糖）聚合酶（核糖）聚合酶（PARP））是一种与是一种与DNA损伤修复、基因完整性监护有关的聚合酶，损伤修复、基因完整性监护有关的聚合酶，其作用是将其作用是将NAD+分子中的分子中的ADP转移到与转移到与DNA修修复相关的酶分子上，提高其催化效率复相关的酶分子上，提高其催化效率Ø当细胞凋亡启动时，当细胞凋亡启动时，PARP被被caspase剪切，导剪切，导致受致受PARP负调控的核酸内切酶活性增高，进而负调控的核酸内切酶活性增高，进而裂解核小体之间的裂解核小体之间的DNA，引发细胞凋亡引发细胞凋亡 Ø纤层蛋白（纤层蛋白（lamins））属于中间纤维丝蛋白家族，属于中间纤维丝蛋白家族，参与构成支撑核内膜的网架结构，同时对染色参与构成支撑核内膜的网架结构，同时对染色质的定向和组织起作用质的定向和组织起作用Ø小核糖体蛋白（小核糖体蛋白（HnRNP proteins））则参与构则参与构成小核蛋白体，与成小核蛋白体，与hnRNA的成熟加工有关的成熟加工有关 5. Apaf-1 GeneApaf-1基因表达的基因表达的Apaf-1蛋白为蛋白为凋亡酶激活因凋亡酶激活因子子-1（（apoptotic protease activating factor-1），与线虫的），与线虫的Ced-4蛋白同源，粒体介导蛋白同源，粒体介导的凋亡途径中起重要作用。
的凋亡途径中起重要作用 Apaf-1含有含有3个不同的结构域：个不同的结构域：①①CARD（（caspase recruitment domain））结构域，结构域，能召集能召集caspase-9；；②②Ced-4 同源结构域同源结构域，能结合，能结合ATP/dATP；；③③C端端结结构构域域，，含含有有色色氨氨酸酸/天天冬冬氨氨酸酸重重复复序序列列，，当当细细胞胞色色素素c结结合合到到这这一一区区域域后后，，能能引引起起Apaf-1多聚化而激活多聚化而激活 Apaf-1具有激活具有激活caspase-3的作用，而这一过的作用，而这一过程又需要细胞色素程又需要细胞色素c（（Apaf-2）和）和caspase-9（（Apaf-3）参与Apaf-1-细胞色素细胞色素c复合体与复合体与ATP/dATP结合后，结合后，Apaf-1就可以通过其就可以通过其CARD结构域召集结构域召集caspase-9，形成，形成凋亡体（凋亡体（apoptosome）），，激活激活caspase-3，启动，启动caspase级联反应级联反应 凋凋亡亡体体的的形形成成 凋凋亡亡体体与与c ca as sp pa as se e级级联联反反应应 Fas基因，定位于人第基因，定位于人第10号染色体上，其编码产号染色体上，其编码产物为物为45kD的跨膜受体，属于的跨膜受体，属于TNF受体家族。
受体家族Fas受体（又称受体（又称APO-1或或CD95）的分子结构可分）的分子结构可分为三个区，即具有三个富含半胱氨酸的为三个区，即具有三个富含半胱氨酸的胞外区胞外区、、跨膜区跨膜区和具有和具有死亡结构域（死亡结构域（Death domain，， DD））的的胞内区胞内区 6. Fas and FasL Genes Fas的的胞胞内内区区DD结结构构域域可可与与接接头头蛋蛋白白FADD （（Fas associated death domain protein））偶偶联联，，然然后后再再通通过过FADD的的死死亡亡效效应应结结构构域域（（ death effecter domain，， DED）） 与与 Pro-caspase-8偶偶联联，，从从而而将将胞胞外外的的凋凋亡亡信信号号传传递递到细胞内到细胞内 F Fa as s的的分分子子结结构构DD —— death domainDED —— death effector domainFADD —— Fas associated death domain Fas与与其其配配体体（（FasL））的的相相互互作作用用，，是是引引发发细细胞凋亡的主要途径之一。
胞凋亡的主要途径之一Fas与与其其抗抗体体或或FasL结结合合后后，，可可迅迅速速激激活活caspase级联反应，裂解级联反应，裂解DNA，诱发细胞凋亡诱发细胞凋亡 FasL基基因因定定位位于于人人第第1号号染染色色体体上上，，主主要要在在活活化化的的淋淋巴巴细细胞胞表表面面表表达达，，产产生生凋凋亡亡信信号号；；也也可可在在T细胞激活过程中被诱导表达细胞激活过程中被诱导表达Fas与与FasL的的协协同同表表达达，，对对胸胸腺腺中中T淋淋巴巴细细胞胞的的发发育育、、分分化化与与凋凋亡亡以以及及细细胞胞毒毒活活性性起起调调节节作作用 7. IAP Gene Superfamily细细胞胞凋凋亡亡抑抑制制因因子子（（inhibitor of apoptosis，，IAP））超超家家族族的的成成员员较较多多，，如如c-IAP1，，c-IAP2，，XIAP，，NIAP 和和Survivin等等，，新新的的成成员员仍仍在在不不断断被发现IAP家家族族成成员员有有一一个个共共同同的的特特征征，，含含有有一一个个或或多多个个70个个氨氨基基酸酸的的重重复复序序列列（（BIR）），，类类似似于于zinc指指状状的的结结构构。
c-IAP1、、 c-IAP2和和XIAP还还含含有有环指状结构域（环指状结构域（RING） Molecular Structure of Human Cellular IAPs BIR功功能能域域和和之之间间的的连连接接区区域域介介导导对对caspase的的抑抑制制作作用用，，而而环环指指状状结结构构域域（（RING））则则具具有有泛泛素素化化蛋蛋白白连连接接酶酶的的作作用用，，介介导导caspase-3和和-7的泛素化降解作用的泛素化降解作用 p53基基因因定定位位于于人人的的第第17号号染染色色体体上上，， 是是一一种种多多功功能能基基因因，，其其表表达达产产物物P53能能在在G1期期监监视视DNA的的完完整整性性如如有有损损伤伤，，则则抑抑制制细细胞胞增增殖殖，，直直到到DNA修修复复完完成成；；如如受受损损DNA不不能能修修复复，，则则诱导细胞进入凋亡程序诱导细胞进入凋亡程序8. p53 Gene P53作作为为一一种种转转录录因因子子，，是是Bax的的正正调调节节因因子子，，Bcl-2的负调节因子的负调节因子当当细细胞胞受受到到射射线线照照射射后后，，P53可可迅迅速速上上调调Bax的表达，从而促进细胞凋亡。
的表达，从而促进细胞凋亡 c-myc基基因因也也是是一一种种多多功功能能 基基因因，，定定位位于于人人第第8号染色体，编码分子量为号染色体，编码分子量为62kD的蛋白质的蛋白质c-Myc蛋蛋白白位位于于细细胞胞核核内内，，具具有有转转录录因因子子活活性性，，一一方方面面能能激激活活控控制制细细胞胞增增殖殖的的基基因因，，另另一一方方面面也也能能激激活活促促进进细细胞胞凋凋亡亡的的基基因因表表达达，，故故具具有有促促进进细细胞增殖和凋亡的双重效应胞增殖和凋亡的双重效应9. c-Myc Gene c-Myc与与Bcl-2之间存在协同作用之间存在协同作用Bcl-2能能抑抑制制c-Myc所所致致细细胞胞凋凋亡亡，，但但不不影影响响其其促促有有丝丝分分裂裂作作用用，，即即当当生生长长因因子子存存在在、、Bcl-2表表达达时时，，c-Myc促促进进细细胞胞增增殖殖，，反反之之则则细胞凋亡细胞凋亡 c-Myc蛋蛋白白的的作作用用机机理理与与另另一一种种转转录录因因子子Max形形成成异异源源二二聚聚体体有有关关此此复复合合物物可可与与特特定定的的DNA序列相结合，发挥调节基因表达的作用序列相结合，发挥调节基因表达的作用。
已已知知这这两两种种转转录录因因子子可可形形成成Myc-Max和和Max-Max两两种种不不同同的的二二聚聚体体，，但但它它们们都都能能与与同同一一DNA序列相结合，产生不同的调节效应序列相结合，产生不同的调节效应当当缺缺乏乏生生长长因因子子时时，，更更多多的的形形成成Myc-Max复复合合物，从而诱导细胞凋亡物，从而诱导细胞凋亡 Complexes of Myc, Max and Mad Regulating Roles of Myc Section 3 Molecular Mechanisms for Cell Apoptosis 目目前前已已知知，，细细胞胞凋凋亡亡可可分分为为caspase依依赖赖和和caspase不不依依赖赖两两种种机机制制，，而而caspase依依赖赖的细胞凋亡又包括三种方式：的细胞凋亡又包括三种方式：①①受体介导的细胞凋亡（外源通路）；受体介导的细胞凋亡（外源通路）；②②线粒体介导的细胞凋亡（内源通路）；线粒体介导的细胞凋亡（内源通路）；③③内质网介导的细胞凋亡（内源通路）内质网介导的细胞凋亡（内源通路） 由存在于细胞膜上的由存在于细胞膜上的死亡受体死亡受体介导，将外源性凋亡信号传递介导，将外源性凋亡信号传递到细胞内，引发细胞调亡。
到细胞内，引发细胞调亡常见的死亡受体包括：常见的死亡受体包括：TNFR、、Fas、、DR3、、DR4、、DR5等1.1 Cell Apoptosis Mediated by Death Receptor1. Caspase-dependent Cell Apoptosis Process of Cell Apoptosis Mediated by Death Receptor死亡受体与配体结合，使受体三聚化死亡受体与配体结合，使受体三聚化受体胞内受体胞内DD区构象改变，与接头蛋白区构象改变，与接头蛋白FADD的的DD区结合区结合FADD的的N端端DED区与区与caspase-8（或（或-10）前体蛋）前体蛋白结合，形成凋亡诱导的信号复合体（白结合，形成凋亡诱导的信号复合体（DISC）） caspase-8、、10自身剪切激活，启动自身剪切激活，启动caspase级联反应级联反应caspase-3，，-6，，-7激活激活降解降解CAD抑制蛋白（抑制蛋白（ICAD/DFF-45），释放出），释放出caspase依赖的依赖的DNase（（CAD））降解降解DNA，引发细胞凋亡，引发细胞凋亡 Death Receptor Apoptotic PathwayFADD（（Fas-associated death domain）；）； DD（（death domain）；）；DED （（death effector domain）。
1.2 Cell Apoptosis Mediated by Mitochondria 物理或化学凋亡信号物理或化学凋亡信号激活激活Bax、、Bad、、Bid等促凋亡蛋白，等促凋亡蛋白，线粒体线粒体PT孔开放或形成孔开放或形成线粒体凋亡因子（线粒体凋亡因子（Cyt c等）渗透出线粒体等）渗透出线粒体Process of Cell Apoptosis Mediated by Mitochondria Cyt c与与Apaf-1及及pro-caspase-9组成凋亡体组成凋亡体caspase-9激活并启动激活并启动caspase级联反应级联反应降解降解ICAD及细胞功能或结构蛋白，引发细胞凋亡及细胞功能或结构蛋白，引发细胞凋亡 Mitochondrial Apoptotic Pathway 1.3 Cell Apoptosis Mediated by Endoplasmic Reticulum内内质质网网在在维维持持细细胞胞内内钙钙离离子子内内环环境境稳稳定定、、膜膜蛋蛋白的合成、修饰和折叠等方面有关键性作用白的合成、修饰和折叠等方面有关键性作用Caspase-12 位位于于内内质质网网膜膜，，是是内内质质网网应应激激诱诱导凋亡所必须的。
导凋亡所必须的内内质质网网应应激激导导致致Ca2+释释放放进进入入胞胞浆浆，，激激活活Calpain（（钙钙激激活活的的中中性性蛋蛋白白酶酶）），，水水解解并并激激活活caspase-12 ，，同同时时也也导导致致caspase-7的的激激活，最终导致细胞凋亡活，最终导致细胞凋亡 Ask1 —— Apoptosis signal regulating kinase 1NIK —— Nuclear factor-kappa B-inducing kinaseIAP —— Apoptosis inhibitor IAPJNK —— c-Jun N-terminal kinasep90RSK —— 90kD Ribosomal protein S6 kinaseFKHR —— Forkhead box protein O1AGSK3 —— Glycogen synthase kinase 3APP —— Amyloid precursor proteinAIF —— Apoptosis-inducing factor 1 FLIP —— CASP8 and FADD-like apoptosis regulator SMAC —— Second mitochondria-derived activator of caspase RAIDD —— Caspase and RIP adapter with death domain PIDD —— p53-induced protein with a death domainSIR2 —— NAD-dependent histone deacetylase HtrA2 —— Serine protease HTRA2Calpain —— Calcium-activated neutral proteinase 2. Caspase-independent Cell Apoptosis实实验验证证明明，，caspase的的抑抑制制不不能能阻阻断断细细胞胞凋凋亡亡的的发发生生，，表表明明细细胞胞凋凋亡亡还还以以不不依依赖赖于于caspase 的方式发生。
的方式发生不不依依赖赖caspase的的细细胞胞凋凋亡亡涉涉及及到到Bax诱诱导导的的细细胞胞死死亡亡，，也也涉涉及及到到其其他他蛋蛋白白酶酶，，如如钙钙蛋蛋白白酶酶、、蛋白酶体及丝氨酸蛋白酶诱导的细胞死亡蛋白酶体及丝氨酸蛋白酶诱导的细胞死亡 丝丝氨氨酸酸蛋蛋白白酶酶与与核核酸酸内内切切酶酶白白细细胞胞弹弹性性蛋蛋白白酶酶抑抑制制剂剂的的细细胞胞死死亡亡途途径径有有关关，，这这一一途途径径的的关关键键分子是分子是LEI（丝氨酸蛋白酶抑制剂）丝氨酸蛋白酶抑制剂）LEI在在酸酸性性pH或或蛋蛋白白酶酶作作用用下下，，经经翻翻译译后后水水解解加加工工，，分分子子量量降降低低，，并并伴伴随随着着核核酸酸内内切切酶酶活活性性的出现，从而导致的出现，从而导致DNA的降解和细胞死亡的降解和细胞死亡 Section 4 Cell Apoptosis and Diseases The Diseases Associated with Apoptosis Regulation Abnormalities细胞凋亡不足细胞凋亡不足细胞凋亡过度细胞凋亡过度肿瘤肿瘤肝癌、恶性血液肿瘤、肝癌、恶性血液肿瘤、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、胶质瘤、前列腺癌等胶质瘤、前列腺癌等发育异常发育异常 气管气管-食管瘘、房（室）食管瘘、房（室）间隙缺损、唇（腭）裂、间隙缺损、唇（腭）裂、短肢畸形、尿道下裂以短肢畸形、尿道下裂以及多囊肾等及多囊肾等发育异常发育异常 先天性消化道、胆道、先天性消化道、胆道、肛门狭窄或闭锁、动脉肛门狭窄或闭锁、动脉导管未闭、两性畸形、导管未闭、两性畸形、甲状舌骨囊肿等甲状舌骨囊肿等CNSAlsheimer病、病、Parkin-son病、肌萎缩性侧索病、肌萎缩性侧索硬化症、色素性视网膜硬化症、色素性视网膜病，脊肌肉萎缩、早老病，脊肌肉萎缩、早老性痴呆性痴呆免疫系统免疫系统 系统性红斑狼疮、糖尿系统性红斑狼疮、糖尿病、类风湿性关节炎、病、类风湿性关节炎、桥本甲状腺炎、多发性桥本甲状腺炎、多发性的硬化症等的硬化症等免疫系统免疫系统 免疫缺陷病、免疫缺陷病、AIDS 复 习思 考 题1.试叙述细胞周期的时相及其特征。
试叙述细胞周期的时相及其特征2.试叙述周期素及试叙述周期素及CDK的种类、结构与功能的种类、结构与功能3.试叙述细胞周期的调控机理试叙述细胞周期的调控机理4.细胞凋亡的形态及生化特征有哪些？细胞凋亡的形态及生化特征有哪些？5.试试叙叙述述细细胞胞凋凋亡亡相相关关基基因因及及其其表表达达产产物物的的作作用机制6.试叙述细胞凋亡调控的主要通路试叙述细胞凋亡调控的主要通路。