肿瘤细胞增殖动力学

《肿瘤细胞增殖动力学》由会员分享，可在线阅读，更多相关《肿瘤细胞增殖动力学（69页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、肿瘤细胞增殖动力学肿瘤细胞增殖动力学细胞生物学系细胞生物学系刘清华刘清华11.WhatKindofDiseaseIsCancer?2SomeCases病例1：男性76岁，2003年9月3日因干咳、少痰、消瘦就诊。CT检查确诊肺癌3病例3：女性43岁，因上腹部时有疼痛伴返酸2年、加重1个月入院。胃镜活检报告：胃幽门部黏膜内低分化癌。4病例8：患者男性，34岁。因发现右锁骨肿块3月入院。检查右锁骨外段稍隆起，局部膨大，表面皮肤无红肿或静脉怒张，无疼痛；肩关节活动稍受限。X光示右锁骨外段明显骨质破坏及增生。病理报告为右锁骨恶性淋巴细胞瘤。5病例11：女性68岁，阴道不规则流血4-5个月。妇科检查：子

2、宫前位，如妊娠2月大小，可触及数个结节，质地中等。超声检查提示子宫混合性占位性病变。CT诊断：宫体癌，右侧卵巢囊肿。病理诊断：子宫恶性混合性苗勒氏瘤，累及输尿管。6肿瘤学癌发生癌演进临床表现癌治疗癌诊断7CELLCell junctionProliferationExtracellular matrixTelomereSignal transductionDifferentiationApoptosis82.WhatWeHaveKnownabouttheCellCycleControl?9OncogeneAntioncogeneCheckpointsCellDivisionCycleGene,

3、cdcgenes;CyclinsCyclinDependentKinases,CDKsCyclinDependentKinasesInhibitors,CDKIsSphasePromotingFactor,SPFMaturationPromotingFactor,MPF蛋白质水平基因水平103.HowtoControlinaNormalCell?11ControlofG1phaseControlofSphaseControlofG2phaseControlofMphase12ControlofG1phaseProliferationfactorsCheckpoint（G0G1entrance、

4、RPointG1S）Cyclin-CDK（cyclinD-CDK46、cyclinE-CDK2）P105RBCDKI1314ControlofSphaseCheckpoint(DNAsynthesison、off)CyclinCDKPCNA15SPF(cyclinA-CDK1)CyclinE-CDK2作为启动蛋白，识别autonomouslyreplicatingsequence，ARS，激活复制起点可能是originrecognitioncomplex，ORC的组成部分CyclinCDK1617PCNA细胞增殖核抗原DNA聚合酶的亚基直接参与DNA复制和修复18ControlofMphase

5、CheckpointMPF（cyclinB-CDK1)19CheckpointG2M：DNA复制没有完成，激活wee1-mik1蛋白激酶，细胞阻滞于G2期。M中晚期：检查微管蛋白的量、微管组织中心功能、纺锤体极性、微管与动粒附着、或附着在动粒上产生的张力。20MPF的活性调节214.WhatsWronginaTumorCell?22oncogene的过表达antioncogene 的失活cyclin基因和表达蛋白的异常cdki基因和表达蛋白的异常235.HowtoEvaluateCellProliferation?24CellProliferationKinetics研究生物体内各种细胞群体在

6、新生、增殖、消亡过程中处于各种状态的细胞数量、时间参数和分布位置的技术手段。25检测方法1.细胞计数2.生长曲线3.倍增时间4.生长分数265.丢失系数6.标记指数7.分裂指数8.细胞周期参数271.CellCounting直接计数台盼蓝计数法比色半定量四唑盐法28四唑盐法3-4,4-二甲基噻唑2，5二苯基四氮唑溴盐，简称MTT;线粒体的琥珀酸脱氢酶将MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物;比色测定间接反映活细胞数量。29细胞培养显色:加入MTT溶液(5mg/ml)，继续培养4h，加DMSO，振荡10min比色：490nm波长测定光吸收值30Breast Cancer Research and Tr

7、eatmeat 2004;84:251-2606.TheirResearchStrategy?7.TheTechnologyTheyUsed?312.GrowthCurveCellculture;Cellcounting：每次至少3瓶，每瓶至少3次，取平均数；共做7天；作图：培养时间为横坐标，细胞数为纵坐标，在对数坐标纸上作图。320.10246810Time/dayCancerCellNormalCell0.11101001000单层培养单层培养CellNumber0.1330246810Time/day0.11101001000CellNumber悬浮培养悬浮培养NormalCellCan

8、cerCell34353.DoublingTime In vivo :DT=0.1t/logDtlogDoDo:首次测得的肿瘤直径（cm）Dt:t时间后测得的直径（cm）36ComputedTomography37某转移癌：Do2，Dt4，t90DT=0.190/0.6-0.3=30(d)effectivedoublingtime,TDeff：考虑细胞丢失因素的细胞倍增时间potentialdoublingtime,TDpot：不考虑细胞丢失因素的细胞倍增时间38原发性肺癌腺癌6421鳞癌8512间变性癌5511乳腺癌1714结直肠癌1990淋巴瘤274肿瘤类型病例数倍增时间（周）780例人体

9、肿瘤体积倍增时间Steel（1977）（未完）394.GrowthFraction，GF肿瘤中增殖细胞占细胞总数的比例GF=P/P+QP:proliferationQ：quiescent405.丢失系数丢失系数KL/KBKL：细胞群体在增殖过程中的丢失率KB：细胞群体在增殖过程中的生成率416.LabelingIndex,LILINs/NNs:Numbersphase42常用方法：3H-TdRBrdUPCNA、Ki67433H-TdR3H-TdR和细胞短暂孵育；间隔时间取材；放射自显影；图像分析仪计数或液闪计数；SPSS统计分析。4445BrdUBrdU和细胞共孵育较长时间；取材固定；加入Br

10、dU抗体；加入生物素标记的二抗；46加入链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶；DAB显色；图像分析仪计数；SPSS统计分析。47Chinese journal of Cancer 2003;22(11):1127-113448PCNA取材固定；加入PCNA抗体；加入生物素标记的二抗；加入底物；显色；图像分析仪计数；SPSS统计分析。49SynovialsarcomaImmunohistochemicalStrongstainingofPCNAJ. Vet. Sci2004;5(2):173-180 50Ki-67PositivestainingforKi67,CancerCytopathl2004;10

11、2:142-9517.MitoticIndex，MI经典方法免疫荧光方法52经典方法Synovialsarcome.MitoticfiguresJ.Vet.Sci2004;5(2):173-180J Nippon Med Sch 2003; 70（3）219-22653免疫荧光方法548.ParameterofCellCycleTc、TG1、Ts、TG2和TM； 常用的有3H-TdR标记法和流式细胞技术flowcytometry55FlowCytometry利用流式细胞仪flowcytometre，FCM细胞快速、准确、多参数的定量分析体积，DNA含量、蛋白质含量、酶活性、细胞膜受体量、表面抗

12、原量等等5657无菌分类收集活细胞。58Breast Cancer Research and Treatment 2004;84:251-2605960应用肿瘤的周期化、同步化治疗LI检测对化疗药物的敏感性提示疗效和预后癌前病变的检测完61作用特点作用特点药物名称物名称非细胞周期特异性氮芥、其他氮芥类(氮化芥)、芥丁酸等细胞周期特异性（G1期药物）环磷酰胺、噻替派、溶肉瘤素、双氯乙亚硝基脲、放线菌素D、红比霉素、光辉霉素、链氮霉素。氟尿嘧啶时相特异性（S期药物）3H胸腺嘧啶核苷、阿糖胞苷、脱氧核苷、氨甲蝶呤、羟基脲、重氮丝氨酸、喜树碱时相特异性（M期药物）秋水仙素、长春花碱、长春新碱62636465666768癌分子细胞生物学癌相关基因癌遗传学环境致癌69