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1、四、血细胞比容测定四、血细胞比容测定血细胞比容（血细胞比容（Hct，HCT， PCV）是指一定）是指一定体积的全血中红细胞所占体积的相对比例。体积的全血中红细胞所占体积的相对比例。HCT高低与红细胞数量、平均体积及血浆量有高低与红细胞数量、平均体积及血浆量有关，主要用于贫血、真性红细胞增多症和红细胞增关，主要用于贫血、真性红细胞增多症和红细胞增多的诊断、血液稀释和血液浓缩变化的测定、红细多的诊断、血液稀释和血液浓缩变化的测定、红细胞平均体积和红细胞平均血红蛋白浓度的计算等。胞平均体积和红细胞平均血红蛋白浓度的计算等。【检测原理检测原理】HCT直接测定采直接测定采用离心法，间接测定采用血液分析用
2、离心法，间接测定采用血液分析仪法。仪法。1离心法离心法常用微量法和温氏常用微量法和温氏法，其检测原理基本相同，但离心法，其检测原理基本相同，但离心力不同。血液离心后分力不同。血液离心后分5层，自上而层，自上而下分别为血浆层、血小板层、白细下分别为血浆层、血小板层、白细胞和有核红细胞层、还原红细胞层胞和有核红细胞层、还原红细胞层和氧合红细胞层。读取结果以还原和氧合红细胞层。读取结果以还原红细胞层为准（图红细胞层为准（图2-19）。）。图2-19 血细胞比容结果判断2血液分析仪法血液分析仪法由红细胞计数和红细由红细胞计数和红细胞平均体积导出胞平均体积导出HCT，HCT红细胞计数红细胞计数红红细胞平
3、均体积。细胞平均体积。【方法学评价方法学评价】HCT测定的方法学评价测定的方法学评价见表见表2-18。【质量保证】 【参考区间参考区间】成年成年男性：男性：0.400.50；女性：；女性：0.370.48。新生儿新生儿0.470.67。儿童：儿童：0.330.42。【临床意义临床意义】HCT的临床意义与红细胞计数相似。的临床意义与红细胞计数相似。HCT减低是诊断贫血的指标，若红细胞数量正常，血减低是诊断贫血的指标，若红细胞数量正常，血浆量增加，为假性贫血；浆量增加，为假性贫血；HCT增加可因红细胞数量绝增加可因红细胞数量绝对增加或血浆量减少所致（表对增加或血浆量减少所致（表2-19）。）。HC
4、T的主要应的主要应用价值为：用价值为：1临床补液量的参考临床补液量的参考2真性红细胞增多症诊断指标真性红细胞增多症诊断指标3计算红细胞平均指数的基础计算红细胞平均指数的基础五、红细胞平均指数五、红细胞平均指数红细胞平均指数包括红细胞平均体积红细胞平均指数包括红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白量（）、红细胞平均血红蛋白量（MCH）和红细胞平均血红蛋白浓度（和红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）。红细）。红细胞平均指数有助于深入认识红细胞特征，为贫胞平均指数有助于深入认识红细胞特征，为贫血的鉴别诊断提供线索。血的鉴别诊断提供线索。【检测原理检测原理】1手工法手工法根据根据RBC、Hb、HC
5、T测定测定结果计算红细胞平均指数（表结果计算红细胞平均指数（表2-20）。）。2血液分析仪法血液分析仪法MCV由血液分析仪由血液分析仪直接测定导出；由仪器测定直接测定导出；由仪器测定HGB、RBC可计可计算出算出MCHHGB/RBC；MCHCHGB/（RBCMCV）。）。【方法学评价方法学评价】手工法红细胞平均指数手工法红细胞平均指数由由RBC、HGB、HCT测定后计算而来，因测定后计算而来，因此，必须采用同一抗凝血标本，且所检测的此，必须采用同一抗凝血标本，且所检测的结果必须准确。仪器法红细胞平均指数的测结果必须准确。仪器法红细胞平均指数的测定同样依赖于定同样依赖于RBC、HGB和和MCV测
6、定的准测定的准确性。确性。【参考区间参考区间】MCV、MCH、MCHC的参的参考区间见表考区间见表2-21。【临床意义临床意义】红细胞平均指数可用于贫血形态学红细胞平均指数可用于贫血形态学分类（表分类（表2-22）及提示贫血的可能原因。但红细胞平）及提示贫血的可能原因。但红细胞平均指数仅反映了红细胞群体平均情况，无法阐明红细均指数仅反映了红细胞群体平均情况，无法阐明红细胞彼此之间的差异。胞彼此之间的差异。图图2-20网织红细胞网织红细胞六、网织红细胞计数六、网织红细胞计数网织红细胞（网织红细胞（Ret，RET）是介于晚幼红细胞和成）是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡细胞，略熟红细胞之间的过
7、渡细胞，略大于成熟红细胞，其胞质中残大于成熟红细胞，其胞质中残存的嗜碱性物质存的嗜碱性物质RNA经碱性染经碱性染料活体染色后，形成蓝色或紫料活体染色后，形成蓝色或紫色的点粒状或丝网状沉淀物。色的点粒状或丝网状沉淀物。ICSH将网织红细胞分为将网织红细胞分为4型（表型（表2-23，图，图2-20）。）。网织红细胞检测的目的：网织红细胞检测的目的：鉴别贫血的类型（增生性、非增生性、增生增鉴别贫血的类型（增生性、非增生性、增生增高性）。高性）。检查骨髓的功能。检查骨髓的功能。检测贫血的治疗效果。检测贫血的治疗效果。评估骨髓移植后、再生障碍性贫血细胞毒药物评估骨髓移植后、再生障碍性贫血细胞毒药物诱导治
8、疗后或诱导治疗后或EPO治疗后的红细胞造血情况。治疗后的红细胞造血情况。【检测原理检测原理】1普通显微镜法普通显微镜法活体染料的碱性着色基团可活体染料的碱性着色基团可与网织红细胞与网织红细胞RNA的磷酸基结合，使的磷酸基结合，使RNA胶体间的负胶体间的负电荷减少而发生凝缩，形成蓝色的点状、线状或网状电荷减少而发生凝缩，形成蓝色的点状、线状或网状结构。结构。2血液分析仪法血液分析仪法特殊染料与网织红细胞中特殊染料与网织红细胞中RNA结合后进行结合后进行RNA定量，可精确计数网织红细胞占定量，可精确计数网织红细胞占成熟红细胞的百分数（成熟红细胞的百分数（Ret%），并可根据），并可根据RNA含量含
9、量将网织红细胞分类及计算网织红细胞其他参数。将网织红细胞分类及计算网织红细胞其他参数。【方法学评价方法学评价】网织红细胞计数的方法学评网织红细胞计数的方法学评价见表价见表2-24。【质量保证质量保证】以手工计数法为重点。以手工计数法为重点。1选择合适的染料选择合适的染料用于网织红细胞检测用于网织红细胞检测的活体染料很多，有煌焦油蓝（的活体染料很多，有煌焦油蓝（brilliantcresylblue）、新亚甲蓝（）、新亚甲蓝（newmethyleneblue）、中性红、亚甲蓝、甲苯胺蓝等。网织）、中性红、亚甲蓝、甲苯胺蓝等。网织红细胞活体染料的评价见表红细胞活体染料的评价见表2-25。2.正确辨
10、认网织红细胞正确辨认网织红细胞外周血液网织外周血液网织红细胞主要为红细胞主要为型，凡含有型，凡含有2个或个或2个以上个以上颗粒、且颗粒必须远离细胞边缘的红细胞均颗粒、且颗粒必须远离细胞边缘的红细胞均应计为网织红细胞。红细胞各种颗粒或包涵应计为网织红细胞。红细胞各种颗粒或包涵体的鉴别见表体的鉴别见表2-26。3网织红细胞计数方法网织红细胞计数方法（1）Miller窥盘法：窥盘法：ICSH及我国卫生部临及我国卫生部临床检验中心推荐使用床检验中心推荐使用Miller窥盘法（图窥盘法（图2-21）进）进行网织红细胞计数。行网织红细胞计数。（2）显微成像系统：）显微成像系统：图2-21 Miller窥盘
11、结构示意图ICSH建议，为控制建议，为控制CV在在10%内，应根据网内，应根据网织红细胞比率，决定在连续视野中织红细胞比率，决定在连续视野中Miller窥盘小窥盘小方格内实际需要计数的红细胞数量（表方格内实际需要计数的红细胞数量（表2-27）。）。【参考区间参考区间】成人、儿童：成人、儿童：0.51.5。新生儿：新生儿：2.06.0。成人绝对值：（成人绝对值：（2484）109/L。【临床意义临床意义】网织红细胞计数是反映骨髓网织红细胞计数是反映骨髓造血功能的重要指标，常见网织红细胞参数及造血功能的重要指标，常见网织红细胞参数及评价见表评价见表2-28。1评价骨髓增生能力，判断贫血类型评价骨髓
12、增生能力，判断贫血类型2评价疗效评价疗效3放疗和化疗的监测放疗和化疗的监测4药物影响药物影响七、嗜碱性点彩红细胞计数七、嗜碱性点彩红细胞计数嗜碱性点彩红细胞是不完全成熟的红细胞，嗜碱性点彩红细胞是不完全成熟的红细胞，胞质内残存的核酸变性、聚集形成颗粒，经碱胞质内残存的核酸变性、聚集形成颗粒，经碱性染料（如亚甲蓝）染色后，细胞内可见到深性染料（如亚甲蓝）染色后，细胞内可见到深染的颗粒；若以染的颗粒；若以Wright染色，则在粉红色的胞染色，则在粉红色的胞质中出现蓝黑色颗粒，故名嗜碱性点彩红细胞。质中出现蓝黑色颗粒，故名嗜碱性点彩红细胞。【检测原理检测原理】制备血涂片，甲醇固定，亚制备血涂片，甲醇
13、固定，亚甲蓝染色。选择细胞分布均匀的区域，油镜下甲蓝染色。选择细胞分布均匀的区域，油镜下计数计数1000个红细胞中嗜碱性点彩红细胞的数个红细胞中嗜碱性点彩红细胞的数量，或油镜下计数量，或油镜下计数50个视野中的嗜碱性点彩红个视野中的嗜碱性点彩红细胞，同时计数细胞，同时计数5个视野中的正常红细胞数量，个视野中的正常红细胞数量，计算百分率。计算百分率。【参考区间参考区间】0.03%。【临床意义临床意义】嗜碱性点彩红细胞计数增嗜碱性点彩红细胞计数增高主要见于铅、汞、银、铋等重金属及硝基苯、高主要见于铅、汞、银、铋等重金属及硝基苯、苯胺中毒，对慢性重金属中毒具有辅助诊断价苯胺中毒，对慢性重金属中毒具有
14、辅助诊断价值。溶血性贫血、巨幼细胞性贫血、白血病、值。溶血性贫血、巨幼细胞性贫血、白血病、恶性肿瘤时也可见嗜碱性点彩红细胞增高。恶性肿瘤时也可见嗜碱性点彩红细胞增高。八、红细胞沉降率测定八、红细胞沉降率测定红细胞沉降率（红细胞沉降率（ESR）简称血沉，是指在）简称血沉，是指在规定条件下，离体抗凝全血中的红细胞自然下规定条件下，离体抗凝全血中的红细胞自然下沉的速率。沉的速率。ESR是传统且应用较广的指标，用是传统且应用较广的指标，用于诊断疾病虽然缺乏特异性，但操作简便，具于诊断疾病虽然缺乏特异性，但操作简便，具有动态观察病情与疗效的实用价值。有动态观察病情与疗效的实用价值。【检测原理检测原理】1
15、魏氏（魏氏（Westergren）法）法将枸橼酸钠抗凝血将枸橼酸钠抗凝血置于特制的刻度血沉管内，在室温下垂直立于血沉架置于特制的刻度血沉管内，在室温下垂直立于血沉架1h后，读取上层血浆的高度，即为红细胞沉降率。血后，读取上层血浆的高度，即为红细胞沉降率。血沉测定实际上是测量单位时间内红细胞下沉后血浆段沉测定实际上是测量单位时间内红细胞下沉后血浆段的高度，而并非真正红细胞沉降的速度。的高度，而并非真正红细胞沉降的速度。2自动血沉仪法自动血沉仪法全自动血沉仪根据红细胞下全自动血沉仪根据红细胞下沉过程中血浆浊度的改变，采用光电比浊法、红外线沉过程中血浆浊度的改变，采用光电比浊法、红外线扫描法或摄影法
16、，动态分析红细胞下沉各个时段血浆扫描法或摄影法，动态分析红细胞下沉各个时段血浆的透光度，以微电脑记录并打印结果。的透光度，以微电脑记录并打印结果。【方法学评价方法学评价】魏氏法为传统方法，为国魏氏法为传统方法，为国内规范方法。内规范方法。ICSH、CLSI以及以及WHO均有血沉均有血沉检测的标准化文件。检测的标准化文件。ICSH方法（方法（1993）及）及CLSI（2000）方法均以魏氏法为基础，建立）方法均以魏氏法为基础，建立了新的了新的ESR检验检验“参考方法参考方法”和供常规使用的和供常规使用的“选择方法选择方法”，后者简称，后者简称“常规工作方法常规工作方法”，分别，分别制定了新的操作
17、规程。血沉测定的方法学评价制定了新的操作规程。血沉测定的方法学评价见表见表2-29。【质量保证质量保证】血沉测定迄今仍未建立决定性方法，血沉测定迄今仍未建立决定性方法，目前首选参考方法，其次为标准化方法（相当于二级参目前首选参考方法，其次为标准化方法（相当于二级参考方法），再次为选择方法即常规工作方法。考方法），再次为选择方法即常规工作方法。1ICSH规定的参考方法规定的参考方法可用于验证其他方法可用于验证其他方法的可靠性的可靠性未稀释标本结果纠正公式为：未稀释标本结果纠正公式为：纠正纠正ESR（mm/h）（未稀释标本）（未稀释标本ESR0.86）12其结果在其结果在95%限定值范围内（表限定
18、值范围内（表2-30），表明方法），表明方法满意。因满意。因ESR影响因素复杂，新方法应建立特定的自身影响因素复杂，新方法应建立特定的自身参考区间。参考区间。2魏氏法对抗凝剂、血液标本及物魏氏法对抗凝剂、血液标本及物理条件的要求理条件的要求魏氏法对抗凝剂、血液标魏氏法对抗凝剂、血液标本及物理条件的要求见表本及物理条件的要求见表2-31。3质控方法质控方法参考方法常作为常规试验参考方法常作为常规试验的质控方法，但参考方法费时、费力，通常采的质控方法，但参考方法费时、费力，通常采用替代的稳定化全血质控品作为每日质控。用替代的稳定化全血质控品作为每日质控。进行质控必须要满足以下条件：进行质控必须要满
19、足以下条件：EDTA抗抗凝，凝，HCT为为0.35左右，左右，ESR在在15105mm/h范围，检测前将标本颠倒混匀范围，检测前将标本颠倒混匀16次。次。4.血沉测定影响因素血沉测定影响因素影响血沉测定的因影响血沉测定的因素见表素见表2-32。【参考区间参考区间】魏氏法：男性魏氏法：男性015mm/h，女性，女性020mm/h。【临床意义临床意义】血沉是一项常规筛检试验，血沉是一项常规筛检试验，虽然特异性差，但仍然具有一定的参考价值。虽然特异性差，但仍然具有一定的参考价值。临床上，血沉主要用于观察病情的动态变化、临床上，血沉主要用于观察病情的动态变化、区别功能性与器质性病变、鉴别良性与恶性肿区别功能性与器质性病变、鉴别良性与恶性肿瘤等。瘤等。1血沉加快血沉加快（1）生理性血沉加快：血沉受年龄、性别、月经）生理性血沉加快：血沉受年龄、性别、月经周期等影响。周期等影响。 （2）病理性血沉加快：对于疾病鉴别和动）病理性血沉加快：对于疾病鉴别和动态观察具有一定参考价值，病理性血沉加快的态观察具有一定参考价值，病理性血沉加快的临床意义见表临床意义见表2-33。2血沉减慢血沉减慢见于真性红细胞增多症、低见于真性红细胞增多症、低纤维蛋白原血症、充血性心力衰竭、红细胞形纤维蛋白原血症、充血性心力衰竭、红细胞形态异常等。态异常等。
