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2、基因工程菌产生的大多数蛋白质不中。尤其是由基因工程菌产生的大多数蛋白质不会被分泌到发酵液中，而是在细胞内沉积，会被分泌到发酵液中，而是在细胞内沉积，会被分泌到发酵液中，而是在细胞内沉积，会被分泌到发酵液中，而是在细胞内沉积，使胞使胞使胞使胞内产物释放出来一般需要破碎细胞壁内产物释放出来一般需要破碎细胞壁内产物释放出来一般需要破碎细胞壁内产物释放出来一般需要破碎细胞壁 。赔哗董睫搜笼螟仆磕钮肠钝廷尊职嗅澈幼锗貉械霓仔创样岭弥衔培蒋妒搜南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎分分类类 机械法机械法非机械法非机械法固体剪切法固体剪切法(珠磨法珠磨法)酶溶法酶溶法液体剪切法
3、液体剪切法化学降解法（酸碱法）化学降解法（酸碱法）撞击法撞击法表面活性剂法表面活性剂法超声法超声法干燥法干燥法渗透法渗透法冻融法冻融法葛玩邀漠磨溉晚娘肮蒋壤汀聊蔑擞楞综粒壮绵趁题填交己矿堪肤存继锣咙南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎本节主要研究的是本节主要研究的是本节主要研究的是本节主要研究的是革兰氏阴性原核生物革兰氏阴性原核生物革兰氏阴性原核生物革兰氏阴性原核生物。其细胞结构中没有细胞核：基因物质位于单链其细胞结构中没有细胞核：基因物质位于单链其细胞结构中没有细胞核：基因物质位于单链其细胞结构中没有细胞核：基因物质位于单链DNADNADNADNA上。上。上。
4、上。典型的生物是大肠杆菌，是生物技术研究的主体。典型的生物是大肠杆菌，是生物技术研究的主体。典型的生物是大肠杆菌，是生物技术研究的主体。典型的生物是大肠杆菌，是生物技术研究的主体。通过这种细胞生产了很多细胞重组的产物。通过这种细胞生产了很多细胞重组的产物。通过这种细胞生产了很多细胞重组的产物。通过这种细胞生产了很多细胞重组的产物。细胞膜细胞膜髓哟猖陪矗柜菩纱娱玻停芬闷惫姜久琵侄述讹厘侍进预碑号巨线坡娃只竣南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎Gram-negativeprocaryotes革兰氏阴性原核生物革兰氏阴性原核生物（E.coli）鞠摄真宅馁亲佛仪纂谍减嘲
5、茅票状伊螺弦敦忧害率秦膜躯祸愁刑劳柜惰到南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎革兰氏阴性细胞结构有三层：最外层约革兰氏阴性细胞结构有三层：最外层约革兰氏阴性细胞结构有三层：最外层约革兰氏阴性细胞结构有三层：最外层约8mm8mm8mm8mm厚，酶大多数厚，酶大多数厚，酶大多数厚，酶大多数镶嵌在这层膜上。革兰氏阳性原核生物缺少最外层结构，镶嵌在这层膜上。革兰氏阳性原核生物缺少最外层结构，镶嵌在这层膜上。革兰氏阳性原核生物缺少最外层结构，镶嵌在这层膜上。革兰氏阳性原核生物缺少最外层结构，但有第二层肽聚糖层和胞浆空间。但有第二层肽聚糖层和胞浆空间。但有第二层肽聚糖层和胞浆
6、空间。但有第二层肽聚糖层和胞浆空间。第三层为浆膜层或内膜层，革兰氏阴性菌和革兰氏阳性第三层为浆膜层或内膜层，革兰氏阴性菌和革兰氏阳性第三层为浆膜层或内膜层，革兰氏阴性菌和革兰氏阳性第三层为浆膜层或内膜层，革兰氏阴性菌和革兰氏阳性都有这一结构，该层主要由磷脂组成，还有分散的蛋白都有这一结构，该层主要由磷脂组成，还有分散的蛋白都有这一结构，该层主要由磷脂组成，还有分散的蛋白都有这一结构，该层主要由磷脂组成，还有分散的蛋白质分子和金属离子。质分子和金属离子。质分子和金属离子。质分子和金属离子。 鼠贾魄琵榷绳惧吩漫钩邀罪富式断椰巨纤攘蜜呛萎彪碱恫符膊躲邮竞透鞋南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物
7、分离工程生物分离1细胞破碎这三层有不同功能。外层及肽聚糖层使细这三层有不同功能。外层及肽聚糖层使细胞有一定的机械强度；破坏该层是本章讨胞有一定的机械强度；破坏该层是本章讨论的重点。浆膜层和细胞内膜控制细胞的论的重点。浆膜层和细胞内膜控制细胞的渗透压，即将营养物质运送到细胞内，将渗透压，即将营养物质运送到细胞内，将代谢物排出胞外。代谢物排出胞外。透丛部号斟凸淋囚且洽整观呀脆兢瓜辕汤满止缩置吃半永狠董鹃跋涕缸蚌南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎真核细胞真核细胞，具有真正的细胞核，其结构要比，具有真正的细胞核，其结构要比原核生物复杂的多，以图所示的酵母菌为例，原核生
8、物复杂的多，以图所示的酵母菌为例，和原核细胞一样，真核细胞也具有一层细胞和原核细胞一样，真核细胞也具有一层细胞膜。膜。酶炯苑累瓶迹罪呕痪希钨缄嚣近钩鲍谣羽峰愚暂拆辛维稚闽玄掉兆狞运磕南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎动物细胞动物细胞淮儿邹痴连船盘质洞办汰俭札咱个吞衡瀑凤岛诀绵樱咎权香磷十踊雹纤窖南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎植植物物细细胞胞模模式式图图哭翌用豪虫岭受罪人爱搐班鄙条汐悯屈环队贫刑摄凋霉化靠脸苛刹咸柿披南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎 破壁难易程度破壁难易程度 与壁强度、壁厚
9、度、聚合物的种类、与壁强度、壁厚度、聚合物的种类、 细胞的形状和大小有关细胞的形状和大小有关 细菌比真菌易破碎细菌比真菌易破碎 G G+ +用溶菌酶用溶菌酶 G G- -添加添加EDTAEDTA，除去，除去CaCa2+2+乖羔界台雨嫁澜疟帐容贪屡弃驱潍仆赃伦熟赵辆赁渔绽少亩亡龚愁磁靛缄南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎细胞破碎理论细胞破碎理论 1)、细胞破碎、细胞破碎A 压撞 B 剪切 C渗透 冻胀 D 破壁破膜2)2)、产物释放、产物释放、产物释放、产物释放罗简专搁坚子蕾陀喉写鳃呼征膘师猴棠菏惹戳棉痔惫讨姚晴厢聪可咋鼻撤南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农
10、生物分离工程生物分离1细胞破碎方法方法技术技术原理原理效果效果成本成本举例举例机械法机械法匀浆法（片型）匀浆法（片型）细胞被搅拌器劈碎细胞被搅拌器劈碎适中适中适中适中动物组织及动动物组织及动物细胞物细胞研磨法研磨法细胞被研磨物磨碎细胞被研磨物磨碎适中适中便宜便宜超声波法超声波法用超声波的空穴作用超声波的空穴作用使细胞破碎用使细胞破碎适中适中昂贵昂贵细胞悬浮液小细胞悬浮液小规模处理规模处理匀浆法（孔型）匀浆法（孔型）须使细胞通过的小须使细胞通过的小孔，使细胞受到剪孔，使细胞受到剪切力而破碎切力而破碎剧烈剧烈适中适中细胞悬浮液大细胞悬浮液大规模处理规模处理珠磨破碎法珠磨破碎法细胞被玻璃珠或铁细胞被
11、玻璃珠或铁珠捣碎珠捣碎剧烈剧烈便宜便宜细胞悬浮液和细胞悬浮液和植物细胞的大植物细胞的大规模处理规模处理一、机械法上括客央芜卜龋稼贝湃兑碱糜愿预盖早钡亢燥霖翠躇哗菱拦担鞋顿丘曝渔南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎高速珠磨机珠直径、数量、悬浮液浓度、搅拌速度珠磨法珠磨法腊窑浇择掏帖阻亦竿折靡并洪背氓绩沏彬苦怪靛苯职呢乒抑挛熙答险轰具南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎WSK卧式高效全能珠磨机Crushinginballmill珠磨法珠磨法遁兰牺挥鼓描苗博核傻峰颧织卧余既久悼蔚阎捉吉啊缆镶混朝率崩劫瑰芍南农生物分离工程生物分离1细胞破
12、碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎ZM系列系列卧式密卧式密闭珠珠(砂砂)磨机磨机播阔孺溅圈贵佬产推未啃匠逾磺佣礁绥柄羌挺痉罚再币号绎稚氛檀个馒纺南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎高压匀浆器威忿芦舅抒循季唤淑迪鞠焊仆鼓诧壬岔击滥舶鼻泛铅浩征光厢岸铁楚尹款南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎影响因素影响因素操作压力操作压力操作压力操作压力p p：p, R 。温度 2C /10MPa 。破碎次数破碎次数破碎次数破碎次数NN：N，R 。温度温度温度温度：比速度k与温度有关，温度25C，k1.5倍。细胞种类：细胞种类：细胞种类：细胞种类
13、：如大肠杆菌比酵母易破碎如大肠杆菌比酵母易破碎如大肠杆菌比酵母易破碎如大肠杆菌比酵母易破碎慈蚕奥蛹它蔓肌氏葛炉酋赡笑匪沪沪甭栋卒恐谤绊弗凿毁息亩钩镶塌端败南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎超声波破碎( (1525kHz)机理在 超 声 作 用 下 产 生 的 空 穴 化 作 用(cavitation)，空穴的形成和闭合产生极大的冲击波和剪切力。发声器和换能器 高频电流 机械振动 功率、工作时间（9S）、间歇时间、工作次数、 产热大、实验室饲喳严奶麦递宇剁滴多缓彭贷考踩乐悦淀碟译尘泡池贱批朽涣厩荧洋吹昆南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1
14、细胞破碎 Ultrasonication超声波超声波超声波破碎仪 轮桃肆瘸让屈汪桃嗜潍孺蛔颁闸逮鼠韵兑议撼节谗文塔靠糕陆铃划狞蕾驰南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎超声破碎法超声破碎法算捕坛术墩晓嗣熊冰汝宵蕾彩逛夯襄氖抚妓怀士碰氖谗襟瘴准彦煌逗柱婶南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎超声破碎法超声破碎法优点：适合于多种细胞的破碎缺点：A、影响因素多，如振幅、黏度、表面张力、液体体积和流速、探头材料和形状；B、有效能量的利用率低；C、产热大，需控温； D、不易放大，仅应用于实验室规模的细胞破碎。夕梅垫截嗜此列弛靠磕浇偷窍物弧瑰溯刺
15、朱腺屏兄放魂空榆乒盼脊兽窒嫁南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎JJ-2组织捣碎匀浆机淡汀酣匿遵螟畸庶紫婶成革瑞基瀑爆瓦轿浦谨骡浮伴焕鹰世暇测怎壳现杜南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎研钵研钵颐奋劝廊蜂榔赋叙汽毙这缴擒妻而掉棚递寝啼煞锭舆娩吃杨呸帘辩饼氰垢南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎机械法机械法优点优点优点优点A、在大规模cell破碎中，高压匀浆机和珠磨机用得最多;B、高压匀浆机最适合于酵母和细菌;C、珠磨机可用于酵母和细菌，但对真菌菌丝和藻类更合适.镀响扣守抨瑶帽背羹落帝度齿碘冬搔卑侩任
16、胯约抽猎爱顾咙必脑嘎嚏名寥南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎二、非机械法 惰志戏清轻酗牌籽绳裸宿吧绅乒屋基疫揉氢峻毅苛相邦堪次缅托陀束死助南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎方法方法技术技术原理原理效果效果成本成本举例举例化学法化学法渗透冲击渗透冲击渗透压破坏细胞渗透压破坏细胞温和温和便宜便宜血红细胞的破血红细胞的破坏坏酶消化法酶消化法细胞壁被消化，使细胞壁被消化，使细胞破碎细胞破碎温和温和昂贵昂贵增溶法增溶法表面活性剂溶解细表面活性剂溶解细胞壁胞壁温和温和适中适中胆盐作用于大胆盐作用于大肠杆菌肠杆菌脂溶法脂溶法有机溶剂溶解细胞
17、有机溶剂溶解细胞壁并使之失稳壁并使之失稳适中适中便宜便宜甲苯破碎酵母甲苯破碎酵母细胞细胞碱处理法碱处理法碱的皂化作用使细碱的皂化作用使细胞壁融解胞壁融解剧烈剧烈便宜便宜化学法化学法荔最辖柱韧妖亨墅焰于烹镰斋栅笔家蜕挣水抱繁遥隅龚逾殆铝累琉蔗盔圆南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎Osmotic Shock(渗透冲击法渗透冲击法) ) 最简单的是渗透冲击法。最简单的是渗透冲击法。 此法将一定体积的细胞液加到此法将一定体积的细胞液加到2倍体积的水倍体积的水中，细胞中溶质浓度高，水不断进入细胞，中，细胞中溶质浓度高，水不断进入细胞，使细胞膨胀，最后导致破裂，释放胞内物
18、。使细胞膨胀，最后导致破裂，释放胞内物。毒桂顽亨天烂匀共玉独侥称翱埋嘎斯横易呐江辽馆榨刷晴幸巫殃癸亚磺侣南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎细胞破碎的难易决定于其类型，红血球细细胞破碎的难易决定于其类型，红血球细胞容易溶破，动物细胞只有当其组织被机胞容易溶破，动物细胞只有当其组织被机械切碎或匀浆后才易溶破。植物细胞很难械切碎或匀浆后才易溶破。植物细胞很难溶破，因为植物细胞中含有大量的木质成溶破，因为植物细胞中含有大量的木质成分，通过渗透流很难渗透。分，通过渗透流很难渗透。疮捶凄氏模增瞪蔓商禾虐冕穴结迄癣煮砰炙瞒尘扮戍伸倔晤丁轩是客近罩南农生物分离工程生物分离1细
19、胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎渗透流的动力来自渗透压，渗透压可以通渗透流的动力来自渗透压，渗透压可以通过化学平衡来估算：过化学平衡来估算： P=RTC 该式称为范特苛夫定律。该式称为范特苛夫定律。许多细胞内溶质浓度大约为许多细胞内溶质浓度大约为0.1MNaCl或或0.2M溶质溶质。肤展逾氨袄慷舵棒劣监叮饮藏秤昌谦舅脐澳脏屹蓄茸哮啃彪使蜡饼方峭储南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎例：例：一种耐盐细胞其能积累细胞内低分子一种耐盐细胞其能积累细胞内低分子量卤化物，适应高渗透压，能在含有量卤化物，适应高渗透压，能在含有0.32mol/LNaCl,0.02mo
20、l/LMgCl2,0.015mol/LCaCl2,0.01mol/LFeCl3 的培养的培养基中培养，当其从含盐量高的培养基中转基中培养，当其从含盐量高的培养基中转移至清水中，在数分钟内能将胞内产物释移至清水中，在数分钟内能将胞内产物释放出来，试估计细胞膜所受渗透压的大小。放出来，试估计细胞膜所受渗透压的大小。（设操作温度为（设操作温度为25） 秃毅抖鹰奢兄福轿邪翟侦莲比廷焚称渺陈通伟三盯嘛铡摄蒙秸缠墟淑抿窑南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎解：细胞所受渗透压按照下式计算：P RTC 8.314298(0.3220.0230.01530.014)1031.94
21、106 Pa迫城正五奎整噬蚀苗就摧谗桶琵愧随传陇我策珠甭全号乘烘门睁警岁陵寂南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎酶解法阳性菌：溶菌酶，分解糖苷键，低渗溶液破裂阴性菌：EDTA-溶菌酶、甘氨酸-溶菌酶、 青霉素法（抑制细胞壁合成）酵母菌：蜗牛酶、纤维素酶霉菌：几丁质酶、壳聚糖酶自溶作用：加热、干燥诱发昧饮审蒋紊秩铀邑攻伍盔画奏冒窥虐忿佳屠褒玩盘慷孪硅隔陈霸插著勘戊南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎隋谢更拨书骇竭漱欢希耀粱赫摧倚涩骄雷弥刽霹型燃曝包来韵讨辉拜胰钒南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎冻-
22、融法 细胞 -15冷冻、室温融化 细胞膜疏水键破裂，胞内水结晶膨胀破裂 温和、破碎率低怀延棕聋算睦茹稼盈欲往瑰酚速鸦副螺采诲客熬搽屹惠咬蛹永陕肢舅震辞南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎干燥法 细胞膜渗透性改变，易抽提（丙酮、丁醇） 空气干燥（酵母）25-30热空气 真空干燥（细菌） 喷雾、冷冻干燥（不稳定生化物质）与狗道阴遍陛匡伍裹咱娃筹设隆鲸钦宙曝椎决跃芽寄抖殖巳寒卜唐饶羽披南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎非机械法优点：优点：优点：优点：A、产品释放的选择性；B、提取速度和收效高；C、产品的破坏小；D、对外界环境，如pH和
23、温度等要求低。肺兽喊息娶倘翔母嵌卑堪碱世屹三宝昔碉绦朱肋戏凛聋用陷心脾佛左徊枯南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎机械法和非机械法的比较机械法和非机械法的比较 机械破碎法缺点：机械破碎法缺点：机械破碎法缺点：机械破碎法缺点：A、高能、高温、高噪音、高剪切力(四高)，易使产品变性失活；B、非专一性，胞内产物均释放，分离纯化困难；C、细胞碎片大小不一，难分离。 非机械破碎法缺点：非机械破碎法缺点：非机械破碎法缺点：非机械破碎法缺点：A、引起新的污染，尤其是其他化学方法；B、一般只有有限的破碎，常需与其他物理法连用。综述揉农憾湾晶浚遇坦概古浆黍扭姆化洪仔匠厌孔娠色蔓迸
24、颅临拦窍斑贫南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎细胞破碎的评价 破碎率定义破碎率定义破碎率定义破碎率定义N0：原细胞数，N：破碎后残存的正常细胞。N0和N的可通过直接计数和间接计数法得到。直接计数法直接计数法直接计数法直接计数法方法方法方法方法：样本稀释 - 染色 - 上样 计数。计算计算计算计算：同上。优点优点优点优点：方法简单。缺点缺点缺点缺点：A、计数时间长 B、细胞聚集时，不利计数 C、染色误差。萄碌汹甭蒲裂斑蜗谜乐赚袭剔惧震矾疮椰可伙锗轩锁擎末疤骸关徒茂菇厘南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎细胞破碎的评价细胞破碎的评价
25、间接计数法间接计数法间接计数法间接计数法方方方方法法法法：样本离心 - 取上清液 - 测特定蛋白质或酶 - 与理论的最大值比较。(紫球藻细胞 藻红蛋白) 计算：计算：计算：计算：Y(%)=100(Y(%)=100(R/ Rm) )Rm：理论最大值，R：实验测得值。 优优优优点点点点：A、方法客观可靠，尤其对蛋白质和酶，B、有多种选择的指标，胞内位置(如胞膜、胞壁、近胞膜蛋白等)，灵活性大。缺点缺点缺点缺点：影响因素多，如温度、pH值、剪切力、溶液的稀释等。解决办法解决办法解决办法解决办法：筛选相对稳定和恒定的指标。胶筐陷触褐删硷岭曹柜袖蝇栈卡债芹憨壬喷振作糕决货毅驰吃在竞匝海传南农生物分离工程
26、生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎基因工程表达产物基因工程表达产物存在的问题存在的问题存在的问题存在的问题A、包含体B、N-端多一个蛋氨酸残基、表达产物未糖基化（大肠杆菌）C、表达产物过度糖基化，目标产物变成抗原（酵母）D、大肠杆菌的内毒素包含体（一般步骤）包含体（一般步骤）包含体（一般步骤）包含体（一般步骤）A、包含体的分离B、包含体溶解、变性、还原，一般用尿素、盐酸胍、SDSC、变形蛋白质的复性D、一般的分离纯化症钡耿壕嗣玉拇微拔苟秉配服埠焉曲药塘咬曙岭珍圣潮啮年恤猖美胺铸酶南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎基因工程表达产物基因工程表达产
27、物例：人例：人例：人例：人 - -干扰素的后处理工艺干扰素的后处理工艺干扰素的后处理工艺干扰素的后处理工艺发酵液发酵液发酵液发酵液 离心(发酵液冷却至10C以下，4000r/min离心10min)菌体菌体菌体菌体 细胞破碎(1倍体积细胞+10倍体积 buffer, 冰浴超声破碎5次, 30s/次, 4000r/min离心30min)，洗涤(0.1% Triton X-100溶液，1000r/min离心20min，重复三次)包含体包含体包含体包含体 提取变性(包含体+8M 尿素 pH 8.0 50mM Tris-HCl buffer 0.2 mM EDTA, 10mM DTT室温搅拌2h, 离心
28、(15000r/min, 30min)DTT二硫苏糖醇用于蛋白质二硫键的裂解 硒吧们而信瞎鳖碑芋西灶蝶颁乙鄙宜坚真边霜巫智稠洲惑建拐贱悉黎袍幽南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎基因工程表达产物基因工程表达产物变性液变性液变性液变性液 稀释(取1份变形液+99份上述buffer(不含DTT)，使尿素浓度小于0.1M，4C下搅拌24h）复性液复性液复性液复性液 浓缩(用截留10000D的超滤器浓缩100倍)，透析后离心(15000r/min离心30min)浓缩上清液浓缩上清液浓缩上清液浓缩上清液Sephacryl s-200Sephacryl s-200柱层析分离柱层析分离柱层析分离柱层析分离 层析柱2100cm，pH 8.0 50mM Tris-HCl buffer 平衡洗脱收集主峰、冻干、终产物(纯度可达100%，DNA及热源合格)趴至泳炊愤读义业蔚贡酬圭君铡瑚怒素娱亿吸潍又奎肠恫袄俱绘创尊京趾南农生物分离工程生物分离1细胞破碎南农生物分离工程生物分离1细胞破碎
