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1、实验二实验二细菌的简单染色与革兰氏染色细菌的简单染色与革兰氏染色主 讲:徐尔尼生命科学学院生物技术系一、目的与要求1 1 1 1、学学学学习习习习微微微微生生生生物物物物涂涂涂涂片片片片、染染染染色色色色的的的的基基基基本本本本技技技技术术术术、掌掌掌掌握握握握细细细细菌菌菌菌的的的的简单染色和革兰氏染色方法。简单染色和革兰氏染色方法。简单染色和革兰氏染色方法。简单染色和革兰氏染色方法。2 2 2 2、了了了了解解解解革革革革兰兰兰兰氏氏氏氏染染染染色色色色法法法法的的的的原原原原理理理理及及及及其其其其在在在在细细细细菌菌菌菌分分分分类类类类鉴鉴鉴鉴定定定定中中中中的重要性。的重要性。的重要
2、性。的重要性。3 3 3 3、掌握无菌操作技术、巩固油镜的使用。、掌握无菌操作技术、巩固油镜的使用。、掌握无菌操作技术、巩固油镜的使用。、掌握无菌操作技术、巩固油镜的使用。二、基本原理基本原理1 1、简单染色法、简单染色法 简简简简单单单单染染染染色色色色法法法法是是是是使使使使用用用用一一一一种种种种染染染染料料料料对对对对细细细细菌菌菌菌进进进进行行行行染染染染色色色色的的的的方方方方法法法法。常常常常采采采采用用用用碱碱碱碱性性性性染染染染料料料料进进进进行行行行染染染染色色色色，因因因因为为为为碱碱碱碱性性性性染染染染料料料料电电电电离离离离时时时时，其其其其分分分分子子子子的的的的染
3、染染染色色色色部部部部分分分分带带带带正正正正电电电电荷荷荷荷，很很很很容容容容易易易易与与与与带带带带负负负负电电电电荷荷荷荷的的的的细细细细菌菌菌菌细细细细胞胞胞胞结结结结合合合合使使使使细细细细菌菌菌菌着着着着色色色色。碱碱碱碱性性性性染染染染料料料料有有有有：美美美美蓝、结晶紫、碱性复红等。蓝、结晶紫、碱性复红等。蓝、结晶紫、碱性复红等。蓝、结晶紫、碱性复红等。 细细细细菌菌菌菌产产产产酸酸酸酸使使使使培培培培养养养养基基基基pHpHpHpH下下下下降降降降时时时时，细细细细菌菌菌菌带带带带正正正正电电电电荷荷荷荷增增增增加加加加，可可可可采采采采用用用用酸酸酸酸性性性性染染染染料料料
4、料。酸酸酸酸性性性性染染染染料料料料有有有有：伊伊伊伊红红红红、酸酸酸酸性性性性复复复复红、刚果红等。红、刚果红等。红、刚果红等。红、刚果红等。2 2、革兰氏染色、革兰氏染色 革兰氏染色是采用二种染料对细菌细胞进行染色，革兰氏染色是采用二种染料对细菌细胞进行染色，革兰氏染色是采用二种染料对细菌细胞进行染色，革兰氏染色是采用二种染料对细菌细胞进行染色，初染采用的是结晶紫，复染采用的是番红。初染采用的是结晶紫，复染采用的是番红。初染采用的是结晶紫，复染采用的是番红。初染采用的是结晶紫，复染采用的是番红。G G G G菌菌菌菌：细细细细胞胞胞胞壁壁壁壁较较较较厚厚厚厚，肽肽肽肽聚聚聚聚糖糖糖糖含含含
5、含量量量量较较较较高高高高，基基基基本本本本不不不不含含含含类类类类脂脂脂脂，肽肽肽肽聚聚聚聚糖糖糖糖分分分分子子子子交交交交联联联联度度度度较较较较紧紧紧紧密密密密，故故故故经经经经乙乙乙乙醇醇醇醇处处处处理理理理后后后后，肽肽肽肽聚聚聚聚糖糖糖糖网网网网孔孔孔孔因因因因脱脱脱脱水水水水而而而而明明明明显显显显收收收收缩缩缩缩，使使使使壁壁壁壁的的的的通通通通透透透透性性性性降降降降低低低低所所所所以以以以仍保留结晶紫碘复合物，细胞显仍保留结晶紫碘复合物，细胞显仍保留结晶紫碘复合物，细胞显仍保留结晶紫碘复合物，细胞显紫色紫色紫色紫色。G G G G- - - -菌菌菌菌：细细细细胞胞胞胞壁壁
6、壁壁薄薄薄薄，肽肽肽肽聚聚聚聚糖糖糖糖含含含含量量量量低低低低，类类类类脂脂脂脂含含含含量量量量高高高高，肽肽肽肽聚聚聚聚糖糖糖糖分分分分子子子子交交交交松松松松散散散散，故故故故经经经经乙乙乙乙醇醇醇醇处处处处理理理理后后后后，壁壁壁壁会会会会出出出出现现现现较较较较大大大大的的的的缝缝缝缝隙隙隙隙，细细细细胞胞胞胞透透透透性性性性增增增增大大大大，结结结结晶晶晶晶紫紫紫紫碘碘碘碘复复复复合合合合物物物物易易易易被被被被洗洗洗洗脱脱脱脱出出出出来来来来，再经番红复染后使细胞显再经番红复染后使细胞显再经番红复染后使细胞显再经番红复染后使细胞显红色红色红色红色。 三、实验器材1 1、菌种：、菌种
7、：、菌种：、菌种：普通变形杆菌、表皮葡萄球菌普通变形杆菌、表皮葡萄球菌普通变形杆菌、表皮葡萄球菌普通变形杆菌、表皮葡萄球菌2 2、染染染染色色色色剂剂剂剂：简简简简单单单单染染染染色色色色液液液液( ( ( (吕吕吕吕氏氏氏氏碱碱碱碱性性性性美美美美蓝蓝蓝蓝染染染染液液液液) ) ) )；革革革革兰兰兰兰氏氏氏氏染染染染色色色色液液液液（草草草草酸酸酸酸铵铵铵铵结结结结晶晶晶晶紫紫紫紫染染染染液液液液、卢卢卢卢戈戈戈戈氏氏氏氏碘碘碘碘液液液液、95%95%95%95%乙乙乙乙醇醇醇醇、番红染液）番红染液）番红染液）番红染液）3 3、仪仪仪仪器器器器或或或或其其其其他他他他用用用用具具具具：载载
8、载载玻玻玻玻片片片片、生生生生理理理理盐盐盐盐水水水水、酒酒酒酒精精精精灯灯灯灯、接接接接种环、香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸、滤纸等种环、香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸、滤纸等种环、香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸、滤纸等种环、香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸、滤纸等四、操作步骤1 1、简单染色、简单染色涂片干燥固定染色涂片干燥固定染色涂片干燥固定染色涂片干燥固定染色 1min1min1min1min水洗干燥水洗干燥水洗干燥水洗干燥 镜检镜检镜检镜检2 2、革兰氏染色、革兰氏染色涂片涂片涂片涂片 干燥固定干燥固定干燥固定干燥固定 结晶紫初染结晶紫初染结晶紫初染结晶紫初染1min1min1min1
9、min水洗水洗水洗水洗碘液媒染碘液媒染碘液媒染碘液媒染1min1min1min1min水洗水洗水洗水洗 95%95%乙醇脱色乙醇脱色乙醇脱色乙醇脱色 30sec30sec30sec30sec 水洗水洗水洗水洗 番红复染番红复染番红复染番红复染1min1min1min1min水洗水洗水洗水洗 镜检镜检镜检镜检操作要点：掌握好乙醇脱色时间。操作要点：掌握好乙醇脱色时间。操作要点：掌握好乙醇脱色时间。操作要点：掌握好乙醇脱色时间。 葡萄球菌葡萄球菌杆菌杆菌五、实验数据及处理结果五、实验数据及处理结果 1 1、根根根根据据据据油油油油镜镜镜镜观观观观察察察察结结结结果果果果，绘绘绘绘出出出出普普普普通
10、通通通变变变变形形形形杆杆杆杆菌菌菌菌和和和和表表表表皮皮皮皮葡萄球菌的简单染色形态图。葡萄球菌的简单染色形态图。葡萄球菌的简单染色形态图。葡萄球菌的简单染色形态图。2 2、列列列列表表表表简简简简述述述述普普普普通通通通变变变变形形形形杆杆杆杆菌菌菌菌和和和和表表表表皮皮皮皮葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌的的的的革革革革兰兰兰兰氏氏氏氏染染染染色色色色油油油油镜镜镜镜观观观观察察察察结结结结果果果果（菌菌菌菌的的的的形形形形态态态态、颜颜颜颜色色色色、革革革革兰兰兰兰氏氏氏氏染染染染色反应）。色反应）。色反应）。色反应）。六、思考与讨论思考与讨论1 1、如果你的涂片未经加热固定，将会出现什
11、么问题、如果你的涂片未经加热固定，将会出现什么问题、如果你的涂片未经加热固定，将会出现什么问题、如果你的涂片未经加热固定，将会出现什么问题？如果加热温度过高、时间太长，又会怎样呢？如果加热温度过高、时间太长，又会怎样呢？如果加热温度过高、时间太长，又会怎样呢？如果加热温度过高、时间太长，又会怎样呢？2 2、革兰氏染色时，初染前能加碘液吗？乙醇脱色后、革兰氏染色时，初染前能加碘液吗？乙醇脱色后、革兰氏染色时，初染前能加碘液吗？乙醇脱色后、革兰氏染色时，初染前能加碘液吗？乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色？么颜色？么颜色？么颜色？下次实验项目：下次实验项目：下次实验项目：下次实验项目：细菌的芽孢染色和鞭毛染色细菌的芽孢染色和鞭毛染色细菌的芽孢染色和鞭毛染色细菌的芽孢染色和鞭毛染色
