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1、实验十、柱色谱法分离实验十、柱色谱法分离 柱柱色色谱谱的的原原理理跟跟薄薄层层色色谱谱、纸纸色色谱谱、气气相相色色谱谱及及高高效效液液相相色色谱谱等等一一样样，即即是是利利用用混混合合物物中中各各组组分分在在某某一一物物质质中中的的吸吸附附或或溶溶解解性性能能（即即分分配配）的的不不同同或或其其它它亲亲和和作作用用性性能能的的差差异异，使使混混合合物物的的溶溶液液流流经经该该种种物物质质，进进行行反反复复的的吸吸附附或或分分配配等等作作用用，从从而而将将组组分分分分开开。流流动动的的混混合合物物称称为为流流动相，固定的物质称为固定相。动相，固定的物质称为固定相。 1 1 柱柱色色谱谱（柱柱上上
2、层层析析）常常用用的的有有吸吸附附柱柱色色谱谱和和分分配配柱柱色色谱谱两两类类。吸吸附附柱柱色色谱谱常常用用氧氧化化铝铝和和硅硅胶胶作作固固定定相相。在在分分配配柱柱色色谱谱中中以以硅硅胶胶、硅硅藻藻土土和和纤纤维维素素作作为为支支持持剂剂，以以吸吸收收较较大大量量的的液液体体作作固固定定相相，而而支支持持剂剂本本身身不不起起分分离离作作用。用。 吸吸附附柱柱色色谱谱通通常常在在玻玻璃璃管管中中填填入入表表面面积积很很大大，经经过过活活化化的的多多孔孔性性或或粉粉状状固固体体吸吸附附剂剂。当当待待分分离离的的混混合合物物溶溶液液流流过过吸吸附附柱柱时时，各各种种成成分分同同时时被被吸吸附附在在
3、柱柱的的上上端端。当当洗洗脱脱剂剂流流下下时时，由由于于不不同同化化合合物物吸吸附附能能力力不不同同，往往下下洗洗脱脱的的速速度度也也不不同同，于于是是形形成成了了不不同同层层次次，即即溶溶质质在在柱柱中中自自上上而而下下按按对吸附剂亲和力大小分别形成若干色带，再用溶剂洗脱时对吸附剂亲和力大小分别形成若干色带，再用溶剂洗脱时2 2 常常用用的的吸吸附附剂剂有有氧氧化化铝铝、硅硅胶胶、氧氧化化镁镁、碳碳酸酸钙钙和和活活性性炭炭等等，一一般般要要经经过过纯纯化化和和活活性性处处理理。颗颗粒粒大大小小均均匀匀，粒粒小小，表表面面积积大大吸吸附附能能力力就就高高，但但过过小小，溶溶剂剂流流速速太太慢慢
4、。氧氧化化铝铝有有：酸酸性性PHPH为为4 4，中中性性PH=7.5PH=7.5，碱碱性性PH=10PH=10，3 3种种，大大多多数数吸吸附附剂剂都都能能强强烈烈吸吸水水，使使活活性性降降低低，通通常常用用加加热热方方法法使使吸吸附附剂剂活活化化。活活性性等等级级可可用用勃勃劳劳克克曼曼标标准准测测定定法法，分分五级。五级。I I级活性最高，级活性最高，V V级吸附力最弱。级吸附力最弱。已已经经分分开开的的溶溶质质可可以以从从柱柱上上分分别别洗洗出出收收集集；或或者者将将柱柱吸吸干干，挤挤出出后后按按色色带带分分割割开开，在在用用溶溶剂剂将将各各色色带带中中的的溶溶质质萃萃取取出出来来。对对
5、于于柱柱上上不不显显色色的的化化合合物物分分离离时时，可可用用紫紫外外光光照照射射后后所所呈呈现现的的荧荧光光来来检检查查，或或在在用用溶溶剂剂洗洗脱脱时时，分分别别收收集集洗洗脱脱液逐个加以鉴定。液逐个加以鉴定。3 3色色层层的的展展开开首首先先使使用用极极性性较较小小的的溶溶剂剂，使使最最容容易易脱脱附附的的组组分分分分离离。然然后后加加入入不不同同比比例例的的极极性性溶溶剂剂配配成成的的洗洗脱脱剂剂，将将极极性性较较大大的的化化合合物物自自色色谱谱柱柱中中洗洗脱脱下下来来。所所用用溶溶剂剂必必须须纯纯粹粹、干干燥燥。吸吸附附剂剂用用量量为为被被分分离离样样品品量量的的30403040倍倍
6、，需需要要时时可可增增至至100100倍倍。柱柱高高与与直直径径之之比比是是7575：1 1。（利用相似相溶原理）。（利用相似相溶原理）本实验采用干法装柱。本实验采用干法装柱。化合物的吸附性与它们的极性成正比。化合物的吸附性与它们的极性成正比。4 4一、一、一、一、 实验目的实验目的实验目的实验目的1 1、了解掌握柱色谱原理和方法、了解掌握柱色谱原理和方法2 2、进一步掌握旋转蒸发仪的使用方法。、进一步掌握旋转蒸发仪的使用方法。二、试剂二、试剂 5g5g氧氧化化铝铝，自自制制乙乙酰酰二二茂茂铁铁（溶溶于于1.5ml1.5ml正正己己烷烷），石石英英砂砂。洗洗脱脱剂剂： 正正己己烷烷，1 1 ：
7、1=1=二二氯氯甲甲烷烷：正正己己烷烷， 9 9 ：1=1=二二氯氯甲甲烷烷：正正己己烷烷， 9 9 ：1=1=二二氯氯甲甲烷烷：甲醇。甲醇。5 5三、装置图三、装置图三、装置图三、装置图溶剂石英砂氧化铝砂芯柱色谱装置柱色谱装置6 6四、操作规程四、操作规程四、操作规程四、操作规程收集黄色产物于一已知重量烧瓶中7 78 8五、操作要点五、操作要点五、操作要点五、操作要点1 1、色色谱谱柱柱一一定定要要干干燥燥，若若潮潮湿湿可可用用吹吹风风机机吹吹干干或或用用无无水有机溶剂（甘油等）清洗。水有机溶剂（甘油等）清洗。2 2、装装柱柱要要紧紧密密均均匀匀，无无裂裂缝缝，无无气气泡泡，是是分分离离效效
8、果果好好坏坏的的关关键键。但但装装填填时时过过分分敲敲击击，又又会会太太紧紧密密而而流流速速太慢。太慢。3 3、加加入入砂砂子子的的目目的的是是在在加加料料时时不不致致把把吸吸附附剂剂冲冲起起，而而影响分离效果。影响分离效果。9 94 4、在在整整个个洗洗脱脱过过程程中中，为为了了保保持持色色谱谱柱柱的的均均一一性性，应应使使柱柱中中洗洗脱脱剂剂液液面面始始终终保保持持不不低低于于石石英英砂砂面面。否否则则柱柱中中溶溶剂剂流流干干时时，就就会会使使柱柱身身干干裂裂，影影响响渗渗滤滤和和显显色的均一性。色的均一性。5 5、 最好用移液管或滴管将分离溶液转移至柱中。最好用移液管或滴管将分离溶液转移至柱中。6 6、 可以每次倒入可以每次倒入10ml10ml洗脱剂进行洗脱。洗脱剂进行洗脱。1010
