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1、实验一 显微镜的使用一、目的要求: 学习与掌握油镜的使用技术二、原理及说明 微生物是个体微小、结构简单、肉眼无法看到的微小生命体。因此，我们要借助显微镜来进行观察。显微镜的种类很多，但基本构造可分为两大部分 ：一是机械装置，而是光学系统。（下面以普通光学显微镜为例）。1、机械装置由镜座、镜臂、镜筒与物镜转移器、载物台、移动器粗细调节器组成。2光学系统由目镜、物镜、聚光镜、反光镜、光圈组成。（1）目镜：装在镜筒的上端，一般各有8x、10x、15x、16x等种不同的放大倍数的目镜。目镜只能把物镜成的像再次放大，没有辨析能力。（2）物镜：显微镜的物镜是由一组特殊的透镜组成。一般有低倍镜（ 10x ）
2、、高倍镜（ 40x ）和油镜（ 100x ），它们各有一定的放大率，不仅可以放大标本，而且有辨析能力。低倍镜：它的视野的实际范围最大，易于发现目标，但不易看清微生物个体的形态。高倍镜：搞倍镜视野的实际范围较低倍镜小些。可以看清个体较大的微生物个体或菌丝体形态，但个体较小的微生物以及其内含物和特殊结构也无法辨清。油镜：一般在镜头上有黑圈或红圈表示的为油镜物镜，也有的以“OI”或“HI”字样表示，油镜的镜面很小，工作距离很近。使用时，在载玻片和油镜物镜之间加上一低油（常用香柏油）（而使用低倍、高倍镜时，是隔以空气）。当光线通过载波片时，由于玻璃与香柏油的折射率相近，可直接通过香柏油进入物镜而不发生
3、折射，这样就可以增加照明度，是镜检物清晰（参见表1）。表1 光线通过几种介质的折射率（n）比较：介质空气水石蜡油香柏油玻璃折射率1.01.331.471.5151.52R=0.5波长/N.AN.A=n.sina/2三、材料 仪器1、显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸2、枯草杆菌（Bacillus subtillis）菌株3、载波片、无菌水四、操作步骤：1、置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验台过沿约为一寸左右，镜检者姿势要端正。一般用左眼观察，右眼便与绘图或记录，两眼必须同时睁开，以减少疲劳。2、调光：一般采用散射光，如果光线弱时可用日光灯。（1）低倍镜旋到镜筒下方，旋转粗调节器。是镜头与载物台相
4、距0.5cm。（2）打开聚光器，使之与载物台同样高度。（3）左眼看目镜，观察光源强弱，使全视野内均匀明亮。凡检查染色体标本时，光线就强，检查为染色标本时，光线不以太强。可通过扩大或缩小光圈、升降聚光器，旋转反光镜调节光线。3、低倍镜观察待见标本必须先用低倍镜观察，因为低倍镜视野较大，已发现目标和确定检查位置将待检标本置镜台上，用标本夹夹住，移动推动器，使观察标本处于接物镜正下方。眼由左侧水平测视显微镜平台，转动粗落选，使接物镜下降之距标本约0.5cm处由接目镜观察。然后慢慢地提升镜筒 ，直到视野内出现物像后，改用细调节器，调节到物像清楚为止，认真观察标本各部位，找到目的物并将其移到视野中心，准
5、备用高倍镜观察。4、高倍镜观察将高倍镜转正至镜筒正下方。在转换时，需用眼在侧面观察，避免镜头与玻片相幢。从接目镜观察，再仔细调节光圈。使光线明亮度适宜。同时用粗调节器慢慢提升镜筒至出现物像后，改用细调节器调节至物像清楚为止。找到最适当于观察的部位区，移至视野中心，准备用油镜观察。5、油镜观察（1）、将油镜转至正下方，用粗调节器将油镜头升约距平台2cm。（2）手执玻片标本，在镜检部位滴上一滴香柏，油小心将此玻片进入显微镜平台。3）小心下降镜筒：以粗调下降镜头，此时从侧面注视油镜慢慢浸在香柏油中，几乎与标本相碰，特别注意：不能将油镜头压在标本上，更不能用力过猛，否则不仅压碎玻片，也会损坏镜头。4）
6、从目镜观察，进一步调节光线，使视野达到最高程度（全开虹彩光圈）。5）用粗调节器将镜筒徐徐上升（此时不准下降镜筒）。直到视野出现模糊物像为止，然后再用细调节器校正焦距。如果油镜头已离开泽面而仍未见物像，用粗调节器将油镜升高距平台约2cm后，必须在从侧面观察，将油镜下降重复，上述操作到物像看清为止。6）用同样的方法观察各个待检染色体标本。并绘出形态图。7)观察完毕，上旋镜筒，取出标本片之后，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后沾取少许二甲苯。擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦去残留的二甲苯。勿用手或其他纸擦镜头，以免损坏镜头。用绸布擦镜显微镜的机械部分8）将各部分还原，反光镜垂直于镜座、将物镜转成八字
7、形在向下旋，同时把聚光镜降下，才可以镜入镜箱内。注意事项：1)取显微镜时，必须一手拿镜臂，另一手托住镜座，并保持镜身上下垂至切不可一只手提起，以免坠落和甩出反光镜及目镜。2）使用油镜之前须如上述顺序，先用低倍镜找到被检物，然后转换成高被镜，将被检物观察的部位移至视野中心，然后转换油镜观察3)由于油镜工作距离很短，因此用粗条路螺旋下降镜筒时，一定要从侧面注视油镜头移动情况，在进行观察时，只能在油镜头提升过程找物像，而绝不能用粗调螺旋或细调螺旋将镜头下降，以防镜头与标本相碰撞。（4）镜检完毕后，及时用擦镜纸擦去残油，再用二甲苯擦净，最后用一张擦镜纸擦去二甲苯，防止损坏镜头。简单染色：一、目的要求：
8、1、掌握细菌的普通染色法和革兰氏染色法。2、了解芽孢染色法，细菌荚膜染色法。二、原理及说明细菌除了体积小，而且是无色透明或半透明的。要观察它们形态以及特殊结构，除了借助于显微镜以外，常常还需借助染色法，染色法是使细胞着色，与背景形成鲜明的对比，这样易于在显微镜下进行观察。染色可分为简单染色和特殊染色前者只用一种染料，适于菌体一般形态的观察；后者采用两种以上的染料，用于研究细胞的构造。三、材料、仪器：1、菌种：枯草杆菌2、染色液：石炭酸复红染色液四、方法与步骤：涂片 干燥 固定 染色 洗涤干燥 镜检涂片：染色：洗涤干燥:注意事项：（1）涂片不宜过厚，否则难以干燥。（2）涂片时滴加无菌水不宜多，否
9、则难以干燥。（3）固定时，通过火焰速度宜适度，过快达不到固定目的，过慢易使菌体变形，绝不能在火焰上烤，招致原形毁坏。（4）标本必须干燥，才能置于油镜下观察。p$mYiVeRbN7K4G0Dzv-s&o!kXhTdQaM6J2F:Bzv-r&o!kXhTdQ9M6I2F;Bzv-r&o#kXgTdP9M5I2F;Byv)r&n#kWgTdP9M5I2E;Bx=t(q$mZjVfSbO8K4H0D.zw-s*p!lYhUeQaN6J3F:Cyu)r&n#kWgTcP9L5I1E;Ax=t(q$mZiVfRbO7K4G0D.zw-s*o!lXhUdQaM6J3F:Czv-s&o!kXhUdQaM6J
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