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1、动物传染病学动物传染病学（核心：诊断及防制）（核心：诊断及防制） 1. 病原：病原： 病毒病毒/细菌：形态及（染色）特性、血清分型细菌：形态及（染色）特性、血清分型 物理和化学特性：物理和化学特性： 增殖部位：增殖部位： 增殖的细胞及培养基：增殖的细胞及培养基：2. 流行病学：流行病学： 传染源、传播途径、易感动物：传染源、传播途径、易感动物： 流行特点：流行特点：3. 临床症状和病理变化：临床症状和病理变化： 4. 诊断：诊断： 初步（疑似）诊断：初步（疑似）诊断： 实验室确诊：病原分离与鉴定实验室确诊：病原分离与鉴定 血清学（免疫学）血清学（免疫学） 分子生物学分子生物学5. 防制：（三要
2、素）防制：（三要素）新城疫新城疫(Newcastle Disease，ND)纽卡斯尔联队足球俱乐部纽卡斯尔联队足球俱乐部新城疫新城疫(Newcastle Disease，ND) 由由新城疫病毒新城疫病毒引起的引起的鸡和多种禽类鸡和多种禽类的的急性、高度急性、高度接触性接触性传染病，强毒感染常引起传染病，强毒感染常引起败血症经过败血症经过，主要，主要特征是：特征是： 呼吸困难呼吸困难，下痢下痢、神经紊乱神经紊乱、粘膜和浆膜出血粘膜和浆膜出血。一、历史一、历史二、病二、病 原原三、流行病学三、流行病学四、临床症状四、临床症状五、病理变化五、病理变化六、诊断六、诊断七、防制七、防制八、最新研究进展八
3、、最新研究进展一、历史一、历史v1926年首次爆发于英国的新城，年首次爆发于英国的新城，Doyle(1927)证实了该病由证实了该病由病毒引起，命名为新城疫，（亚洲鸡瘟），以便与当时流病毒引起，命名为新城疫，（亚洲鸡瘟），以便与当时流行于欧洲的行于欧洲的禽流感（欧洲鸡瘟）禽流感（欧洲鸡瘟）区别；区别；v此后，新城疫不断传播，大多数国家和地区均有爆发的记此后，新城疫不断传播，大多数国家和地区均有爆发的记载和报道；载和报道；v目前，广泛存在亚洲、非洲和美洲的国家，目前，广泛存在亚洲、非洲和美洲的国家，欧洲少见欧洲少见NDV。新城疫：亚洲鸡瘟、伪鸡瘟新城疫：亚洲鸡瘟、伪鸡瘟禽流感：欧洲鸡瘟、真性鸡瘟
4、禽流感：欧洲鸡瘟、真性鸡瘟v1928年我国已有本病的记载，年我国已有本病的记载，1935年在我国部分年在我国部分 地区流行；地区流行；v1996年山东某地典型的年山东某地典型的ND流行：最先发生于参流行：最先发生于参赛归来的赛归来的信鸽信鸽，然后引起鸡群暴发。，然后引起鸡群暴发。二、病原二、病原v新城疫病毒（新城疫病毒（ Newcastle Disease virus，NDV），是），是RNA病毒中的病毒中的副粘病毒科副粘病毒科、腮腺、腮腺炎病毒属的禽副粘病毒，为炎病毒属的禽副粘病毒，为单股负链病毒单股负链病毒。v有有囊膜囊膜，呈多形型。，呈多形型。直径直径100-500nm,纤突纤突8nm.
5、v脾、肺、脑含毒量最高。脾、肺、脑含毒量最高。v骨髓骨髓含毒时间最长。含毒时间最长。v培养培养：鸡胚：鸡胚 (SPF，specific-pathogen free) 9-11日龄尿囊腔日龄尿囊腔或或鸡胚成纤维细胞鸡胚成纤维细胞。NDV的理化特性的理化特性v对多种理化因素均敏感，但破坏程度与毒株有关。对多种理化因素均敏感，但破坏程度与毒株有关。v对常用消毒物的抵抗力不强对常用消毒物的抵抗力不强，氢氧化钠、苯酚等，氢氧化钠、苯酚等515min可以灭活。可以灭活。v对热敏感对热敏感，55经经45min，60经经30min可以灭活，可以灭活，直射阳光直射阳光30min可以灭活。可以灭活。NDV的血清分
6、型的血清分型v所有的所有的NDV属于同一种属于同一种血清型血清型，但不同毒株但不同毒株的毒力差异很大。的毒力差异很大。vv根据根据F基因的序列可分为基因的序列可分为9个基因型：其中个基因型：其中VII已取代已取代II-VI型，逐渐成为主导。型，逐渐成为主导。 v血凝血凝活性活性：血凝素蛋白可以与多种动物：血凝素蛋白可以与多种动物RBC上的受体作用，引起上的受体作用，引起RBC发生凝集。发生凝集。v神经氨酸酶活性神经氨酸酶活性：神经氨酸酶可以使已经凝：神经氨酸酶可以使已经凝集的集的RBC慢慢洗脱。慢慢洗脱。NDV生物学特征生物学特征衡量毒株毒力的指数衡量毒株毒力的指数w静脉致病指数（静脉致病指数
7、（Intravenous Pathogenicity Index ，IVPI）：）：取取HA滴度高于滴度高于24的已感染的已感染NDV的新鲜尿囊液，用灭菌等渗盐水作的新鲜尿囊液，用灭菌等渗盐水作1 10稀释。由稀释。由静脉接种静脉接种6周龄的周龄的SPF小鸡，接种小鸡，接种10只，每只鸡接种只，每只鸡接种0.1ml。每每天观察天观察1次，连续次，连续10d，每次观察并记分，每次观察并记分，正常鸡记作正常鸡记作0，病鸡记作，病鸡记作1，瘫，瘫痪鸡或出现其他神经症状记作痪鸡或出现其他神经症状记作2，死亡鸡记，死亡鸡记3（每只死鸡在其死后的每日（每只死鸡在其死后的每日观察中仍记观察中仍记3）。）。I
8、VPI是指是指10天内每天观察每只鸡的记录的平均值。天内每天观察每只鸡的记录的平均值。 （=2 速发型毒株）速发型毒株）w鸡胚平均致死时间（鸡胚平均致死时间（ Mean Death Time ，MDT）：）：最小致死最小致死剂量接种剂量接种10日龄鸡胚，引起鸡胚死亡的平均时间。日龄鸡胚，引起鸡胚死亡的平均时间。临床症临床症状状D1D1D2D2D3D3D4D4D5D5D6D6D7D7D8D8D9D9D10D10总计总计数值数值正常正常101010100 00 00 00 00 00 00 00 020 x 020 x 0= 0= 0发病发病0 00 03 30 00 00 00 00 00 00
9、 03 x 13 x 1= 3= 3麻痹麻痹0 00 04 45 51 10 00 00 00 00 010 x 210 x 2= 20= 20死亡死亡0 00 03 35 59 91010101010101010101067 x 367 x 3= 201= 201总计总计= 224= 224上述例子中的上述例子中的IVPI为：为：224/（10只只*10天）天） = 2.24病毒静脉接种指数（病毒静脉接种指数（IVPI）的测定）的测定 衡量毒株毒力的指数衡量毒株毒力的指数w1日龄鸡的脑内接种致病指数（日龄鸡的脑内接种致病指数（ Intracerebral Pathogenicity Inde
10、x， ICPI）：）： 取取HA滴度滴度24以上的感染了以上的感染了NDV的新鲜尿囊液，用等渗无菌盐水作的新鲜尿囊液，用等渗无菌盐水作10倍倍稀释，不添加抗生素等物质。稀释，不添加抗生素等物质。脑内接种出壳脑内接种出壳24h40h之间的之间的SPF雏鸡雏鸡，共接种共接种10只，每只接种只，每只接种0.05ml。每每24h观察一次，共观察观察一次，共观察8d。每一天观。每一天观察应给鸡打分，察应给鸡打分，正常鸡记作正常鸡记作0，病鸡记录作，病鸡记录作1，死鸡记作，死鸡记作2（每只死鸡在（每只死鸡在其死后的每日观察中仍记其死后的每日观察中仍记2）。ICPI是每只鸡是每只鸡8天内所有每天观察数值天内
11、所有每天观察数值的平均数。的平均数。 最强毒力最强毒力NDV的的ICPI接近最大值接近最大值2.0，而温和型毒株的接近，而温和型毒株的接近0。 试试 验验 方方 法法缓缓 发发 型型 毒毒 株株中发型毒株中发型毒株速发型毒株速发型毒株1日日龄龄雏雏鸡鸡脑脑内内接接种种(1:10尿尿囊囊液液0.05m1)后后的的脑内接种致病指数脑内接种致病指数(ICPI) 0.0-0.25 0.8-1.6 1.7-2.06周龄鸡静脉注射致病指数周龄鸡静脉注射致病指数 (IVPI) 0.00 90 61-90 =24）v中和试验、胶体金、中和试验、胶体金、ELISA、AGIP等方法等方法3. 分子诊断分子诊断vR
12、T-PCRv产物用于病毒的特征和来源分析产物用于病毒的特征和来源分析比较强毒株和弱毒株的关键序列差异，确定比较强毒株和弱毒株的关键序列差异，确定是否为强毒株。是否为强毒株。4. 鉴别诊断鉴别诊断v禽霍乱：禽霍乱：巴氏杆菌，肝脏坏死点巴氏杆菌，肝脏坏死点v传染性支气管炎：传染性支气管炎：主要侵害雏鸡表现为呼吸道症状、成鸡主主要侵害雏鸡表现为呼吸道症状、成鸡主要为产蛋下降。无明显的神经症状和消化道症状要为产蛋下降。无明显的神经症状和消化道症状v高致病性禽流感高致病性禽流感：很难区分；出血更为明显，无明显呼吸和：很难区分；出血更为明显，无明显呼吸和神经症状（神经症状（已不再适合区分！已不再适合区分！
13、），嗉囊内酸臭液体为区分的），嗉囊内酸臭液体为区分的初步依据。主要依靠实验室诊断区分：血凝抑制试验。初步依据。主要依靠实验室诊断区分：血凝抑制试验。七、防制七、防制v国际控制政策：国际控制政策：家禽产品国际贸易的障碍，家禽产品国际贸易的障碍，OIE(http:/www.oie.int/en#)规定规定24h内必须通报的家禽传染病内必须通报的家禽传染病。七、防制七、防制v国际控制政策：国际控制政策：家禽产品国际贸易的障碍，家禽产品国际贸易的障碍，OIE规定规定24h内必须内必须通报的家禽传染病通报的家禽传染病。v发达国家采用发达国家采用净化净化措施（隔离封锁、捕杀销毁）。措施（隔离封锁、捕杀销毁
14、）。v大多数国家采用：大多数国家采用： 养禽场的养禽场的生物安全防控生物安全防控：环境卫生安全措施（人员、野鸟、：环境卫生安全措施（人员、野鸟、带毒禽）。带毒禽）。 免疫接种：免疫接种：是是“最后最后”的策略。的策略。必须的，但不能完全依赖。必须的，但不能完全依赖。1.疫苗种类疫苗种类建议：建议：1. 尽量减少中发型疫苗株的使尽量减少中发型疫苗株的使用用（我国已出现中发型返强而（我国已出现中发型返强而致病的病例）致病的病例）。2. VII型疫苗（刘秀梵院士）型疫苗（刘秀梵院士）v活疫苗活疫苗感染胚尿囊液冻干而成。感染胚尿囊液冻干而成。初免应该用低毒力疫苗株，需要多次接种。初免应该用低毒力疫苗株
15、，需要多次接种。首免饮水免疫，二免用气雾免疫。首免饮水免疫，二免用气雾免疫。v灭活苗灭活苗感染胚尿囊液用福尔马林杀死病毒，与佐剂混合。感染胚尿囊液用福尔马林杀死病毒，与佐剂混合。可以选用强毒株作为疫苗株。可以选用强毒株作为疫苗株。可以制成可以制成二联二联或多联苗。或多联苗。肌注。肌注。活苗与灭活苗的异同活苗与灭活苗的异同2.免疫程序（参考）免疫程序（参考）v首免：首免：1日龄日龄，系或系或系活苗滴鼻、点眼。系活苗滴鼻、点眼。v二二免免：10-12日日龄龄，系系或或系系活活苗苗滴滴鼻鼻、点点眼眼；系灭活苗肌注系灭活苗肌注。v二二免免后后两两周周，进进行行抗抗体体监监测测，免免疫疫合合格格率率低低
16、者者肌肌注注I系灭活苗系灭活苗。但一定要考虑母源抗体的影响？但一定要考虑母源抗体的影响？商品肉鸡（商品肉鸡（45天上市）天上市） v首免、二免同上。首免、二免同上。v三三免免：产产蛋蛋前前（约约140天天）注注射射新新支支二二联联苗苗油油乳乳剂剂灭活苗灭活苗，每两个月监测一次。，每两个月监测一次。种鸡与蛋鸡种鸡与蛋鸡新城疫疫苗喷雾免疫新城疫疫苗喷雾免疫ND疫苗免疫成败的原因？疫苗免疫成败的原因？1.免疫抑制病干扰免疫效果（白血病、（白血病、CAV、IBDV等）等）2. 饲养管理不善造成生长不均，免疫应答不齐3. 母源抗体对活疫苗的影响；4.饮水或喷雾免疫的效果不确切： （饮水免疫或喷雾免疫时剂
17、量不足，个体饮水或喷雾时间差异等）（饮水免疫或喷雾免疫时剂量不足，个体饮水或喷雾时间差异等）5. 早前潜伏感染4. 非典型鸡新城疫的原因非典型鸡新城疫的原因v感染的感染的NDV毒力相对较弱；毒力相对较弱；v有一定的母源抗体水平的时候感染有一定的母源抗体水平的时候感染NDV；v群体免疫水平较低或不均衡，对群体免疫水平较低或不均衡，对NDV有一定抵抗力；有一定抵抗力；v疫苗质量不合格，接种操作不熟练、免疫程序不合理疫苗质量不合格，接种操作不熟练、免疫程序不合理等，影响免疫效果，此时病毒乘机入侵；等，影响免疫效果，此时病毒乘机入侵；v疫苗毒株的毒力较强。疫苗毒株的毒力较强。3.发病后采取的措施发病后
18、采取的措施封锁鸡场封锁鸡场紧急消毒紧急消毒隔离病鸡群隔离病鸡群紧急接种。紧急接种。 中大鸡用中大鸡用I系系灭活疫苗肌注；灭活疫苗肌注； 雏鸡用雏鸡用系或系或系活苗滴鼻、点眼；系活苗滴鼻、点眼； 免疫顺序：假定健康群免疫顺序：假定健康群可疑鸡群可疑鸡群发病鸡群；发病鸡群； 抗新城疫的高免蛋黄液肌注。 v基因基因VII型疫苗：型疫苗：扬州大学扬州大学v热稳定活疫苗热稳定活疫苗（基于（基于NDV耐热毒株）：南方地区耐热毒株）：南方地区。v核酸疫苗核酸疫苗：DNA疫苗（疫苗（F基因）基因）v基因工程疫苗基因工程疫苗：重组禽痘病毒、痘苗病毒、鸽痘病：重组禽痘病毒、痘苗病毒、鸽痘病毒和火鸡疱疹病毒中表达毒
19、和火鸡疱疹病毒中表达F基因，以及在禽痘病毒基因，以及在禽痘病毒中表达中表达HN基因和基因和F基因均可刺激产生保护性免疫。基因均可刺激产生保护性免疫。v新城疫与禽流感新城疫与禽流感二价基因工程疫苗（哈兽所）二价基因工程疫苗（哈兽所）八、最新研究进展八、最新研究进展PNAS , 2006Proceedings of National Academy Society of the United States America思考题思考题1.血凝和血凝抑制试验的原理。血凝和血凝抑制试验的原理。2.新城疫病毒分离鉴定的程序。新城疫病毒分离鉴定的程序。3.新城疫免疫接种的原则和基本程序是什么？新城疫免疫接种的原则和基本程序是什么？4.相关名词：血清型、交叉反应、二价苗与二联苗、相关名词：血清型、交叉反应、二价苗与二联苗、基因工程二价苗。基因工程二价苗。八、最新研究进展八、最新研究进展v体液免疫：体液免疫： Lasota V4v细胞免疫和粘膜免疫：细胞免疫和粘膜免疫： V4 La SotavV4疫苗口服免疫后，疫苗口服免疫后，HI抗体和中和抗体效价很低，抗体和中和抗体效价很低，但能有效抵抗但能有效抵抗NDV强毒的攻击强毒的攻击vV4疫苗免疫后，疫苗免疫后，T细胞免疫应答强于细胞免疫应答强于La Sota（CD4+T/CD8+T）1. La Sota疫苗株与疫苗株与V4疫苗株疫苗株
