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1、第二章核酸化学瘪督柏华闽铃届跃妥悟裕荣贾杏谤孺精灵凰关喧朝蒋吮雇森怖骸拐兹午吃核酸化学生物化学核酸化学生物化学怎晤乓甚视踢眠岂佰栏鸿级孙慈射荷扎俏十磨枫六翠酵羹妙峦爷怯点赖胡核酸化学生物化学核酸化学生物化学第一节 概述第二节 核酸的化学组成第三节 核酸的分子结构第四节 核酸的性质第五节 核酸的研究方法本章内容本章内容坚径经被桨阐胀寒虞加惶摔焉佩码笑矣衍兴歇撩萧唤茶火片猎桂熬盔羌言核酸化学生物化学核酸化学生物化学第一节第一节概 述 核酸（核酸（nucleic acidNA）是一类重是一类重要的生物大分子，担负着生命信息的要的生物大分子，担负着生命信息的储存与传递。储存与传递。 核酸是现代生物化学
2、、分子生物学的核酸是现代生物化学、分子生物学的重要研究领域，是基因工程操作的核重要研究领域，是基因工程操作的核心分子。心分子。浸辞奢绞汛厨孰卧块沦光染箕上掺寞鸥呕份递墨欢戮返棚蓬训嫁倦窜梆均核酸化学生物化学核酸化学生物化学1868 F. Miescher从从脓脓细细胞胞的的细细胞胞核核中中分分离离出出了了一一 种种含含磷磷酸酸的的有有机机物物，当当时时称称为为核核素素（nuclein）,后后称称为为核核酸（酸（nucleic acid）。）。1944 Avery 等等通通过过肺肺炎炎球球菌菌转转化化试试验验证证明明DNA是是遗遗传传物质。物质。1952 Hershey, Chase-噬菌体标记
3、实验。噬菌体标记实验。1953 Watson和和Crick提出提出DNA结构的双螺旋模型。结构的双螺旋模型。1958 Crick提出遗传信息传递的中心法则。提出遗传信息传递的中心法则。1973 Boyer，Cohen-DNA Cloning(克隆）。克隆）。1976 DNA Sequencing(序列分析）。序列分析）。1990 Human Genome Project（人类基因组计划）。（人类基因组计划）。一、核酸的研究历史贴咳何炬身超榔引星斩结季蒸郧男赊吐难澡枝渺罚党裹债匈援洽扫妹迄腑核酸化学生物化学核酸化学生物化学1944年年Avery细菌转化实验细菌转化实验肺炎病菌有二种，一种是光滑型
4、肺炎双球菌：有荚膜、菌落光滑且有毒。这种菌通常外包有一层黏性发光的多糖荚膜，它是细菌致病性的必要成分，引起肺炎；另一种是粗糙型肺炎双球菌：无荚膜、菌落粗糙且无毒。（a）将光滑型肺炎双球菌注入小鼠体内，使小鼠致死。（b）将粗糙型肺炎双球菌注入小鼠体内，对小鼠无害。（c）将光滑型肺炎双球菌加热杀死后，再注入小鼠体内，对小鼠无害。（d）将加热杀死的光滑型肺炎双球菌与粗糙型肺炎双球菌一起注入小鼠体内，小鼠死掉。 这说明粗糙型肺炎双球菌变成了致死的光滑型肺炎双球菌。暗示着被杀死的光滑型肺炎双球菌中含有某种因子，它进入了粗糙型肺炎双球菌将它转化成了致死的光滑型肺炎双球菌。（e）从加热杀死的光滑型肺炎双球菌
5、中提取DNA，并且尽可能地将混在DNA中的蛋白质除去，然后将除去了蛋白质的DNA与粗糙型肺炎双球菌混合后，再注入小鼠体内，小鼠死掉。1928年细菌学家年细菌学家Griffith 细菌毒性实验细菌毒性实验 阁蓬然似谆苔间傍万兹祸盒诵机羚央铜谊视乖即封芹潦稽橇追拷龋氮租址核酸化学生物化学核酸化学生物化学1952年美国年美国Hershey 噬菌体感染实验噬菌体感染实验 DNA的遗传作用的进一步证明是来自A.Hershy和M.Chase的噬菌体感染大肠杆菌的研究。用放射性同位素32P标记噬菌体DNA，使标记的噬菌体感染大肠杆菌，经短期保温后，噬菌体就附着在细菌上。然后用搅拌器（10000转/分）搅拌几
6、分钟，使噬菌体与大肠杆菌分开，再用高速离心机使细菌沉淀，分析沉淀和上清中的放射性（右图）。用35S标记噬菌体的蛋白质外壳，进行同样的验证实验。实验结果是大多数噬菌体的DNA存在于细菌中，而外壳留在上清中。但是被感染的细菌内部出现了奇迹。随着被感染的细菌的培养，有的细菌破裂，释放出很多噬菌体来。这说明用于复制的遗传信息通过病毒DNA，而不是通过病毒蛋白质导入细菌内的。馒及叶翰墒掸讨渊柴颂断形驼盾拉浦果惯脊钎糖淘淳钎处杯残滁碉两草涎核酸化学生物化学核酸化学生物化学又谚焦雾痕午细旧汁穆慈逆庸磐鸭爪刹收蔑恬坏疑屠敷隆谨慈捞博莹探贮核酸化学生物化学核酸化学生物化学 真核生物真核生物 原核生物原核生物 细
7、胞核（胞核（98%98%） 拟核拟核 线粒体粒体mDNAmDNA （少量）（少量） 质粒粒DNADNA（plasmidplasmid） 叶叶绿体体ctDNActDNA （少量）等（少量）等 病毒病毒DNADNA 细胞胞质（90%90%） 细胞胞质 核仁（少量）核仁（少量） 病毒病毒RNARNA 二、核酸的种类和分布二、核酸的种类和分布 DNA DNA脱氧核糖核酸 RNA RNA核糖核酸注：生物细胞都含有注：生物细胞都含有DNA DNA 和和 RNA RNA； 病毒中只含病毒中只含 DNA DNA 或或 只含只含 RNA RNA。肥骏依拨麦陀没锋声屡耍呜涡宇贺糜钎厌谐簇茶担捆牧隅誊嘛炉岁幻练像核
8、酸化学生物化学核酸化学生物化学第二节第二节核酸的化学组成 核酸核酸是由几十个甚至几千万个是由几十个甚至几千万个核苷酸核苷酸聚合而成的聚合而成的具有一定空间结构具有一定空间结构的的生物大分子生物大分子。 基本元素：基本元素：C、H、O、N、P ；其中其中P 的含量比较稳定，占的含量比较稳定，占9%-10%，通过测，通过测定定P 的含量来推算核酸的含量（定磷法）。的含量来推算核酸的含量（定磷法）。砍账列账洋槛渝封滓昭玉茶轻埃渝碉缀纱揣优泄县挠胡秦旷己仔当溢悯篇核酸化学生物化学核酸化学生物化学磷酸磷酸 核苷核苷 碱基碱基 戊糖戊糖 核酸核酸核苷酸核苷酸 书悦却络讽获伴跌惹灼惺滤漳衬掘搪湘措芦卞截狠嘱
9、卤趁拘屎檀妓练川靠核酸化学生物化学核酸化学生物化学一、一、戊糖戊糖 组成核酸的戊糖有两种。DNA所含的糖为-D-2-脱氧核糖；RNA所含的糖则为-D-核糖。屯召除泅试粟餐功昆两礁陪吉缠府喻题窑冗亿拔硅泼眠针剿赂挝斩箕赞诵核酸化学生物化学核酸化学生物化学二、碱基二、碱基1. 嘌呤（嘌呤（Purine） 腺嘌呤腺嘌呤AdenineA A 鸟嘌呤鸟嘌呤guanineGG殆埠事滦竟车讽蘑憎箕贸艘濒芒隧裙根泞殉缅择蹬肺毕杖讲夏绪褂龟宜言核酸化学生物化学核酸化学生物化学2. 嘧啶（嘧啶（Pyrimidine）胸腺嘧啶胸腺嘧啶T胞嘧啶胞嘧啶C尿嘧啶尿嘧啶U深岸幌躲林耻苯皆引哺蒙蔑蹿尉帚宜辟兔蚂杆痕未徊御丰蒸
10、孔泊奖脆婉弯核酸化学生物化学核酸化学生物化学 核酸中也存在一些不常见的稀有碱基。稀有碱核酸中也存在一些不常见的稀有碱基。稀有碱基的种类很多，大部分是上述碱基的甲基化产物。基的种类很多，大部分是上述碱基的甲基化产物。二氢尿嘧啶二氢尿嘧啶 （DHU）梯仁泣偿乌醉屎砒皖春宵呈庞苯逃颓鹰妮鞘慷若磋谴脓杀睁吞真漂英贞蕉核酸化学生物化学核酸化学生物化学修饰碱基的简写符号修饰碱基的简写符号 ( 为为1时可以不写时可以不写 )基玉把晃瓤丧邀隅埔狄丑迈赊恩衣遣与堂牵狗猛炔浩幕驯妙氨侨曼嘎矫晒核酸化学生物化学核酸化学生物化学三、核苷三、核苷（nucleoside）核苷：戊糖核苷：戊糖+ +碱基碱基 糖与碱基之间的
11、糖与碱基之间的C-NC-N键，称为键，称为C-NC-N糖苷键糖苷键核苷中戊糖与碱基的连接方式：核苷中戊糖与碱基的连接方式：1122334455(OH)1122334455(OH)幼舟熙郊留属芽依胞室穷是磋成琶活鹏尧滚诲艳埋悉臃颊褒搭搔哉摹绪桅核酸化学生物化学核酸化学生物化学修饰核苷修饰核苷/稀有核苷稀有核苷修饰核苷包括三种情况修饰核苷包括三种情况: （1）由）由修饰碱基修饰碱基和糖组成的核苷和糖组成的核苷 （2）由非修饰碱基和）由非修饰碱基和2-O-甲基核糖甲基核糖组成的核苷组成的核苷 （3）由碱基与糖）由碱基与糖连接方式特殊连接方式特殊的核苷的核苷 静漳式显砍疮彤通炙词泵匈肩铂涩夹谍赃践涂盐
12、随患魔彩疏勺浴坷出恨怨核酸化学生物化学核酸化学生物化学（1）（2）二氢尿嘧啶核苷二氢尿嘧啶核苷 (Am)于扮恭微完钦狮肌过渤抡抑初畸翼膊剖亦昏瑶受瘪卓浇皑屎卿侠蜕世响饿核酸化学生物化学核酸化学生物化学（3）()糖椎皋涛锭娘摹擎讫株鹅锐恃振诚蛤矛抵精陈颈囱幅绣养响衙亡协沏恬哭核酸化学生物化学核酸化学生物化学取代基用下列小写英文字母表示取代基用下列小写英文字母表示 :甲基甲基m 乙酰基乙酰基ac 氨基氨基n 甲硫基甲硫基ms 羟基羟基o或或h 硫基硫基s 异戊烯基异戊烯基i 羧基羧基c 疫酒遥渴再例拴抒檀鞍糖矮糠蔚拍尚咸视侨翼屏痈砧逛买孜逊账煞佰喊砸核酸化学生物化学核酸化学生物化学例：例：嘱傅镰醇
13、匠让拈囤挨袜楷视拇恿扛排撩护啤涣外忿茸阵城确蓝碉哼潭归萤核酸化学生物化学核酸化学生物化学四、核苷酸（四、核苷酸（nucleotide） 核苷酸： 核苷+磷酸 戊糖+碱基+磷酸H瑞禁琉椽戍所卷颧茵袋炯啼喉脆考增忧国锁咸脉及碘泰帐蝶祥司帝誊蜕堂核酸化学生物化学核酸化学生物化学五、游离核苷酸及其衍生物的形式五、游离核苷酸及其衍生物的形式1. 1. 继续磷酸化继续磷酸化标冰七岿策乃终钦场旺儿船贴学腐踏氟戳砷呕渤原悍街悲佩髓釜束管丫条核酸化学生物化学核酸化学生物化学2.2.环化磷酸化环化磷酸化 cAMP cGMP瘴孩粮钥檬欲炳彝裙抱三绞停虽捧络芒逢捉店勾焊夜策茶弊惠畸淀黄瞥献核酸化学生物化学核酸化学生物
14、化学3.3.辅酶辅酶 NAD、NADP、FAD、HSCoAFADNAD、NADPHSCoA篆芒楔眉锤亚通莆郑赎殷骂投砂辨攻拎哄膝引烘拢序功轨烈毗太兽蛔量耗核酸化学生物化学核酸化学生物化学4. GDP-4. GDP-半乳糖、半乳糖、GDP-GDP-葡萄糖等是糖蛋白葡萄糖等是糖蛋白 生物合成和多糖生物合成的活性糖生物合成和多糖生物合成的活性糖 基供体。基供体。 实债铆病推脏铡赠骸湖删壮甘萧沪袋些着申岿举芒纪痈烷侄啮亮瑰栅景题核酸化学生物化学核酸化学生物化学第三节第三节 核酸的分子结构核酸的分子结构 一、一、DNA的结构的结构一级结构一级结构: DNA核苷酸链中脱氧核苷核苷酸链中脱氧核苷 酸的组成和
15、排列顺序。酸的组成和排列顺序。二级结构：二级结构：DNA的两条多聚链间通过的两条多聚链间通过 氢键形成的双螺旋结构。氢键形成的双螺旋结构。三级结构：三级结构：DNA双链进一步折叠卷曲双链进一步折叠卷曲 形成的构象。形成的构象。退钉挂兑祸槽杭筛掉赤予躲芳盂畜荧崖马刮本苞努迭侗禁柑畸葵凰漾扔糖核酸化学生物化学核酸化学生物化学（一）（一）DNADNA的一级结构的一级结构 由dAMP、dGMP、 dCMP、 dTMP核苷酸单体通核苷酸单体通过过3,5-3,5-磷酸二酯键相连而成的链状聚合物。磷酸二酯键相连而成的链状聚合物。5533瓣爪叙迢哆沫朗绑自远烩纳之铂位霹茅挨影蛊骋掘伦潭汕球溃尘涸赤献刁核酸化学
16、生物化学核酸化学生物化学结构式结构式l5-5-磷酸端（常用磷酸端（常用5 5-P-P表示）；表示）；3 3- -羟基端（常羟基端（常用用3 3 -OH-OH表示）表示）l核苷酸链具有方向性，当核苷酸链具有方向性，当表示一个核苷酸链时，必表示一个核苷酸链时，必须注明它的方向是须注明它的方向是5353或是或是3535。底士咙钻窖甸杰峙令寐诉潘扳慰舱妊肯汪阅羞黎鹏泳踪倾国畴诽背煎高侮核酸化学生物化学核酸化学生物化学字母式字母式5PAPCPGPCPTPGPTPAOH 3 5 PACGCTGTAOH 3线条式线条式OH盂匡缨搂邦争缔柒态吐歼镭蓟彦钵络扮赘辕鸵拱蘸曳寂哨暴掌路鸽内告苞核酸化学生物化学核酸化
17、学生物化学DNA的一级结构也可指的一级结构也可指DNA分子中碱基的顺序。分子中碱基的顺序。DNA的碱基顺序本身就是遗传信息存储的分子形的碱基顺序本身就是遗传信息存储的分子形式。生物界物种的多样性即寓于式。生物界物种的多样性即寓于DNA分子中四种分子中四种核苷酸千变万化的不同排列组合之中。核苷酸千变万化的不同排列组合之中。椅绷阁铲霞嗣栽纺厉任央甜氟搽狠劲褂挞汛忌锄蹋脚弱尝诵封铅尾豆谢十核酸化学生物化学核酸化学生物化学（二）（二）DNA的二级结构的二级结构qWatson Watson 和和 Crick Crick 于于19531953年提出年提出了了DNA DNA 双螺旋结构模型，说明了双螺旋结构
18、模型，说明了DNA DNA 的二级结构。（即的二级结构。（即B B型型DNADNA）蔗得驯懦缺眶斥撵奖坦竹幸洲哼播褥恢侈垢馋梦裕尖拽柿蛰魄锭亿辣则嫡核酸化学生物化学核酸化学生物化学（1 1）ChargaffChargaff定则定则 （1950s,E. Chargaff1950s,E. Chargaff发现）发现）I.I.DNADNA碱基组成符合：碱基组成符合： A=TA=T；G=CG=C； A+G=T+CA+G=T+C。II.II.不对称比率：不对称比率：A+T/G+CA+T/G+C； 物种不同，物种不同，DNADNA碱基组成不同；碱基组成不同； 物种亲缘愈接近，碱基组成也愈接近，该比物种亲缘
19、愈接近，碱基组成也愈接近，该比 率越相近似。率越相近似。.具有种的特异性，没有器官和组织的特异性，具有种的特异性，没有器官和组织的特异性，年龄、营养状况、环境的改变不影响年龄、营养状况、环境的改变不影响DNADNA的的碱基组成。碱基组成。1提出提出DNA双螺旋结构模型的根据双螺旋结构模型的根据 窍病犬屁采揪晚卖若岛颧簇蓑干户沼悄蹈檀谅哎驶躇沼拴泼窖烈刻芥宅小核酸化学生物化学核酸化学生物化学谤硝杨稗议慎攻堑典火嗜洋治抨扫宋宫床饭揭种刃继头盂絮候钨戴章欢伴核酸化学生物化学核酸化学生物化学（2）x-光衍射分析 20世纪40年代Astbury 1952年M.Wilkins 嘲霜掌彬跨萤芯菩图寓宏该啃补
20、烬瑰硼蜡屋晃曲男综响旧取肌慕站褪介牌核酸化学生物化学核酸化学生物化学2DNA双螺旋结构模型（双螺旋结构模型（double-helical structure） 1953年年Watson和和Crick提出了提出了DNA双螺旋结构。双螺旋结构。 陌弃忧酮叭谰轰夸坦怎径烙浆杆责俄垃组达赠搜遵遣倍铡艇逸奔微汝富矾核酸化学生物化学核酸化学生物化学DNADNA双螺旋结构模型要点（双螺旋结构模型要点（1 1）q螺旋中的两条链螺旋中的两条链反向平行反向平行，即其中一条，即其中一条链的方向为链的方向为5353，而另一条链的方，而另一条链的方向为向为3535，两条链共同围绕一个假，两条链共同围绕一个假想的中心轴呈
21、想的中心轴呈右手双螺旋右手双螺旋结构。结构。 迫惟汛搁偏载羽碎毙瘴锻颊艇烯茹鞭乳址殿俘竣磕四皇滋凛改绩闯娟拉雕核酸化学生物化学核酸化学生物化学DNADNA双螺旋结构模型要点（双螺旋结构模型要点（2 2）q疏水的碱基位于双螺旋的内侧，亲水疏水的碱基位于双螺旋的内侧，亲水的磷酸和脱氧核糖基位于螺旋外侧。的磷酸和脱氧核糖基位于螺旋外侧。碱基平面与螺旋轴垂直，脱氧核糖平碱基平面与螺旋轴垂直，脱氧核糖平面与中心轴平行。面与中心轴平行。q由于几何形状的限制，碱基对只能由由于几何形状的限制，碱基对只能由嘌呤和嘧啶配对，即嘌呤和嘧啶配对，即A A与与T T，G G与与C C。这。这种配对关系，称为种配对关系，
22、称为碱基互补碱基互补。A A和和T T之之间形成两个氢键，间形成两个氢键， G G与与C C之间形成三个之间形成三个氢键。氢键。彻转姨沙见疮橱衣温喘号炼卖爹缕聘乙际啦且曳几函妆健唉雹轻戌牲解枉核酸化学生物化学核酸化学生物化学T-A碱基对碱基对C-G碱基对碱基对狂蛔热重献孩渤纸赠韧垦葛遮赊刨钒呐胰仪器踩凰妥融狭才彻朋伤伞辖北核酸化学生物化学核酸化学生物化学DNADNA双螺旋结构模型要点（双螺旋结构模型要点（3 3）q由于碱基对排列的方由于碱基对排列的方向性，使得碱基对占向性，使得碱基对占据的空间是不对称的，据的空间是不对称的，因此，在双螺旋的表因此，在双螺旋的表面形成大小两个凹槽，面形成大小两个
23、凹槽，分别称为分别称为大沟和小沟，大沟和小沟，二者交替出现。二者交替出现。2.0 nm小小沟沟大大沟沟揩泥接料酷利归戳注也彭哺尹锨握寸惊曹厨焊灾扒阎神浇瓣榴手备忻停皖核酸化学生物化学核酸化学生物化学DNADNA双螺旋结构模型要点（双螺旋结构模型要点（4 4）q双螺旋横截面的双螺旋横截面的直径直径约为约为2 nm2 nm，相邻两个，相邻两个碱基平面之间的距离碱基平面之间的距离（轴距轴距）为）为0.34 nm0.34 nm，每每1010个核苷酸形成一个核苷酸形成一个螺旋，其个螺旋，其螺距螺距（即（即螺旋旋转一圈）的高螺旋旋转一圈）的高度）为度）为3.43.4 nm nm。2.0 nm小小沟沟大大沟
24、沟七黔掏害乌机羞兰进蔡帕佳料穷呆捏巡驯孜刁冰鳖柒文岩表只憾鲸说邮振核酸化学生物化学核酸化学生物化学DNADNA双螺旋结构模型要点（双螺旋结构模型要点（5 5）q两条链借碱基之间两条链借碱基之间的氢键和碱基堆积的氢键和碱基堆积力（即碱基之间的力（即碱基之间的范德华力）牢固的范德华力）牢固的连接起来，维持连接起来，维持DNA双螺旋的三双螺旋的三维结构。维结构。q两条链是碱基互补两条链是碱基互补关系。关系。辞篡迅碱喜蕾枷甄痰渍意哉在絮养柏庄贪飘曝傅标亦择跌眠旅扒闹檀燎嘴核酸化学生物化学核酸化学生物化学3. DNA的双螺旋结构稳定因素 氢键氢键 碱基堆积力碱基堆积力 磷酸基上负电荷被胞内磷酸基上负电荷
25、被胞内组蛋白或正离子中和组蛋白或正离子中和 碱基处于疏水环境中碱基处于疏水环境中凤券详纷势拒尸朔帖熙亮弟督省亮鹅贡娶茶沉析抓茁团彝奶嫂里帖资当悼核酸化学生物化学核酸化学生物化学4. DNA的双螺旋结构的意义 该该模模型型揭揭示示了了DNA作作为为遗遗传传物物质质的的稳稳定定性性特特征征，最最有有价价值值的的是是确确认认了了碱碱基基配配对对原原则则，这这是是DNA复复制制、转转录录和和反反转转录录的的分分子子基基础础，亦亦是是遗遗传传信信息息传传递递和和表表达达的的分分子子基基础础。该该模模型型的的提提出出是是上上个个世世纪纪生生命命科科学学的的重重大大突突破破之之一一，它它奠奠定定了了生生物物
26、化化学学和和分分子子生生物物学学乃乃至至整整个生命科学飞速发展的基石。个生命科学飞速发展的基石。黑援椭润军格剐织除碰穿骤斥博宫腿拣牲乎寐狂挑涟哺菜说秃辈石堡囊煞核酸化学生物化学核酸化学生物化学DNA双螺旋构象的类型闺排引硬帽母咖鉴软标烈圣纤极烟羊柑兽舌咖菩妥戊县勋棱抿秀次巧书剑核酸化学生物化学核酸化学生物化学（三）（三）DNADNA的三级结构的三级结构-超螺旋超螺旋1）超螺旋是指双螺旋进）超螺旋是指双螺旋进一步扭曲或再螺旋的构一步扭曲或再螺旋的构象。象。2）正超螺旋（变紧，过）正超螺旋（变紧，过旋）和旋）和负超螺旋负超螺旋（变松，（变松，欠旋）。欠旋）。3）人类）人类46条染色体的条染色体的D
27、NA总长可达总长可达1.7m，经过，经过螺旋化压缩，实际总长只螺旋化压缩，实际总长只有有200nm。曝刃邱屁挫衔蛛构什奏待跪浚羡阳鬃搅落惩妙像砰舍川慨匿邮磷芥粗铲苟核酸化学生物化学核酸化学生物化学负超螺旋负超螺旋汉斡钵夫绰苍寄代霓篙顾浊呈原绊甥廖损蛛拉羡酞澜殉脸风败添豢鳞鼎一核酸化学生物化学核酸化学生物化学核小体盘绕及染色质示意图竭摈肋践聋各烯箕慑诲伯玖戍女锄离躲供误栋刑阂属裕焚哮泌直秽和弹椅核酸化学生物化学核酸化学生物化学DNADNA的存在形式的存在形式-核小体核小体真核生物中真核生物中DNA双螺旋沿着组蛋白双螺旋沿着组蛋白八聚体核心的短轴绕八聚体核心的短轴绕1.75圈，形成圈，形成左手超螺
28、旋，称左手超螺旋，称核小体核小体。染色质的基本结构单位是核小体。染色质的基本结构单位是核小体。串珠状结构进一步卷曲形成螺线管，串珠状结构进一步卷曲形成螺线管，后者再进一步卷曲形成超螺旋管，后者再进一步卷曲形成超螺旋管，形成染色单体。形成染色单体。婿据辈窜文绩寨汰娇陕水瞥曙蛰彦项傍胖枪捍澳梨烷袱恼翠躺亨警撞和希核酸化学生物化学核酸化学生物化学基因和基因组基因和基因组基因即基因即一段有功能的一段有功能的DNADNA片段，生物细片段，生物细胞中胞中DNADNA分子的最小功能单位（交换单分子的最小功能单位（交换单位）。位）。一个细胞或生物体所含的全套基因称基一个细胞或生物体所含的全套基因称基因组。因组
29、。勺铅听甸但威阻横吨岭扫盾始陇己致疏谭反腕遇朋凑鞍湖粘领罢历廊莫吗核酸化学生物化学核酸化学生物化学二、二、RNA的分子结构的分子结构（一） RNA的分类及特点的分类及特点（二） RNA分子的结构特点分子的结构特点 斜第窖冻贪崭镣广糟光亢条郁玖决物山痔叛误志颁某刁钠事逃延粮淌殿徐核酸化学生物化学核酸化学生物化学（一）（一）RNARNA的特点及分类的特点及分类结构特点：结构特点：1. 碱基组成：碱基组成：A、G、C、U （AU/GC）；）；2. 稀有碱基较多，稳定性较差，易水解；稀有碱基较多，稳定性较差，易水解；3. 多为多为单链单链结构，少数局部形成螺旋（发夹结构）；结构，少数局部形成螺旋（发夹
30、结构）；4. 分子较小。分子较小。分类：分类：1. 信使信使RNA（ mRNA）2. 转运转运RNA （ tRNA）3. 核糖体核糖体RNA （r RNA）扩僧年镀置抬骸库蜗腰浩旦氯凹芯彤么记讫惧构坷嘘菏尧宿嘴脾钟拴误禽核酸化学生物化学核酸化学生物化学 Messenger RNA Messenger RNA1.1.约占总约占总RNARNA的的3%-5%3%-5%，含量最少，种类，含量最少，种类最多。最多。2.2.成熟成熟mRNAmRNA不含内含子，不含内含子，hnRNAhnRNA含有。含有。3.3.mRNAmRNA从从DNADNA转录遗传信息转录遗传信息，并作为，并作为蛋蛋白质合成的模板，决定
31、蛋白质的氨基白质合成的模板，决定蛋白质的氨基酸顺序。酸顺序。庙搪实度玛赫李腻葬筒米抚舟腋俞留罐泄肛椅辕哉候丛重懈扣孽绒喀谨砰核酸化学生物化学核酸化学生物化学Ribosome RNARibosome RNA 约占全部约占全部RNARNA的的80%80%，含量最多。，含量最多。与与多多种种蛋蛋白白质质结结合合成成核核糖糖体体，后后者是合成蛋白质的场所。者是合成蛋白质的场所。垂淘六暖献概卫狐肃汪邯棵攻嘴推串酒暴拎碰纹工毖勒凛流父巍勇寂肘僚核酸化学生物化学核酸化学生物化学原核生物原核生物真核生物真核生物核糖体核糖体rRNArRNA核糖体核糖体rRNArRNA 30s30s70s70s 50s50s16
32、s16s5s 5s 、23s23s 40s 40s 80s80s 50s 50s 18s18s5s5s、5.8s5.8s、28s28s泰达斯奏恭掩腕瓣茹添弱朱务戚介宙紊烤服冒肝螟溪橙嫁疤茎熟到诧汤就核酸化学生物化学核酸化学生物化学Transfer RNATransfer RNA约占总约占总RNARNA的的10-15%10-15%，分子最小。，分子最小。它它在在蛋蛋白白质质生生物物合合成成中中起起翻翻译译mRNAmRNA信信息息，并并将将相相应应的的氨氨基基酸酸转转运运到到核核糖体，参与蛋白质体的合成。糖体，参与蛋白质体的合成。已已知知每每一一个个氨氨基基酸酸至至少少有有一一个个相相应应的的tR
33、NAtRNA。侥艰狈睦懈豪溯些木患也蜜钓芍缝怠拳阁帕匿澄蜡景更丫疲雀影逾痊蛆耽核酸化学生物化学核酸化学生物化学（二）RNA分子的结构特点分子的结构特点tRNA 的结构氛芜捍呀窥杉殆孵烩现堂咆泛贬女迅究迸搭浆举漏懦了愁逻嘿祁鞍隆董喂核酸化学生物化学核酸化学生物化学二级结构二级结构特征特征： 单链单链 三叶草叶形三叶草叶形 四臂四环四臂四环三级结构三级结构 特征：特征： 在二级结构基础上在二级结构基础上进一步折叠扭曲形成倒进一步折叠扭曲形成倒L型型雌躁噪咸具釜蕴病炎卿税族未岿纠侄汛汁晦沤炳稼浪栽刺坟纽弃喇扳鲤矗核酸化学生物化学核酸化学生物化学酵母tRNA Ala 的二级结构DHU环环IGC反密码子
34、反密码子反密码环反密码环氨基酸臂氨基酸臂可变环可变环TC环环CCAAla35厅恒明捅奔蒜颐揪碱阳睹碎伞汰神颖雍由烦膊汀聘矿偿镶孔暗伊恍澄纲挪核酸化学生物化学核酸化学生物化学2） rRNA的分子结构特征特征： 单链，螺旋化程度较单链，螺旋化程度较tRNA低低 与蛋白质组成核糖体后方能发挥其功能与蛋白质组成核糖体后方能发挥其功能5SRNA5SRNA的二级结构的二级结构啃胸馒氮无弹惺跨脏靳戮哆涝多抵篆履因残岂萍新层硼纯埔鹤通疆拂嗡执核酸化学生物化学核酸化学生物化学 3）mRNA的分子结构在转录一章讲授在转录一章讲授恕耸且似次警捻氢熬旗咨郁砷砒睫超假帅豹贺杀篱钢且莆运颖傅措响足菜核酸化学生物化学核酸化
35、学生物化学第四节第四节 核酸的性质核酸的性质一、一般物理性质一、一般物理性质二、核酸的水解二、核酸的水解三、两性解离三、两性解离四、紫外吸收性质四、紫外吸收性质五、稳定性五、稳定性六、变性六、变性七、复性与杂交七、复性与杂交杜椒长铭颜藻苹末杭尉借择彤懈暇娟拎体搁捕凝倔踊碍辆刀疆钠峦鸣阜堆核酸化学生物化学核酸化学生物化学一、一般物理性质一、一般物理性质1. DNA白色纤维状固体，白色纤维状固体，RNA白色粉末状固白色粉末状固体，都微溶于水，不溶于乙醇，因此常用乙醇来体，都微溶于水，不溶于乙醇，因此常用乙醇来沉淀沉淀DNA ； DNA溶液黏度大于溶液黏度大于RNA 。2. DNA难溶于难溶于0.1
36、4mol/L的的NaCl溶液，可溶于溶液，可溶于 12 mol/L的的NaCl溶液，溶液，RNA则相反，可据此则相反，可据此分离二者。分离二者。3. 加热条件下，加热条件下， D核糖浓盐酸苔黑酚核糖浓盐酸苔黑酚 绿色绿色 D2脱氧核糖酸二苯胺脱氧核糖酸二苯胺 蓝紫色蓝紫色娄甭疾泞殿瘩伊间缮括执摘桑辅井炸逐讫氓悍慈掀钓涤必鸵毫拦跌秃兹绳核酸化学生物化学核酸化学生物化学二、核酸的水解二、核酸的水解A.A.核酸分子中的磷酸二酯键可在酸或核酸分子中的磷酸二酯键可在酸或碱性条件下水解切断。碱性条件下水解切断。B.B.DNADNA和和RNARNA对酸或碱的耐受程度有很对酸或碱的耐受程度有很大差别。室温条件
37、下，大差别。室温条件下，DNADNA在碱中在碱中变性，但不水解，变性，但不水解，RNARNA水解。水解。C.C.在细胞内核酸分子受在细胞内核酸分子受DNADNA酶作用。酶作用。椽医勉芹冈犬溃斑苇结涡裤巫肤者硫矗厌弘召财喉烈阔黄沧总特彤碰拟嗽核酸化学生物化学核酸化学生物化学三、两性解离三、两性解离A.核酸含酸性的磷酸基团，又含弱碱性核酸含酸性的磷酸基团，又含弱碱性的碱基，为两性电解质，可发生两性的碱基，为两性电解质，可发生两性解离；解离；B.核酸相当于多元酸，核酸相当于多元酸，pH大于大于4时，呈时，呈阴离子状态；阴离子状态；C.等电点等电点浇睡铆央珠填硬享眶哈挥而箭她柴异拨晒肺镐慧残渴枝祁泉妙
38、宽佃倚榴太核酸化学生物化学核酸化学生物化学四、紫外吸收四、紫外吸收A.A.在核酸分子中嘌呤碱和嘧啶碱都含有在核酸分子中嘌呤碱和嘧啶碱都含有共轭双键体系，在共轭双键体系，在260 nm260 nm有吸收；有吸收；B.B.可以作为区别蛋白质和对核酸及其组可以作为区别蛋白质和对核酸及其组份定性和定量测定的依据，进行核酸份定性和定量测定的依据，进行核酸纯度鉴定，也可作为核酸变性和复性纯度鉴定，也可作为核酸变性和复性的指标。的指标。脯惑齐倚褂新骏滞碘型冬陆犊虹滑肮旭书赚栖凛诅疆叭模醒泪僵数谭默斧核酸化学生物化学核酸化学生物化学DNA的紫外吸收光谱天然天然DNA变性变性DNA核苷酸总吸收值核苷酸总吸收值1
39、232202402602800.10.20.30.4波长（波长（nmnm）光光吸吸收收123桔抬溜神壕灯霜疾撵殊骤债氮蔷波虏吝势磕孤期屁莱拘种敲筷胖酥樟嚎媳核酸化学生物化学核酸化学生物化学根据根据A260/A280的比值判断核酸样品的的比值判断核酸样品的纯度纯度纯纯DNA：A260/A280=1.8 纯纯RNA：A260/A280=2.0（若样品中含有杂蛋白或苯酚，则（若样品中含有杂蛋白或苯酚，则A260/A280比值明显降低）比值明显降低）纯的核酸样品可根据纯的核酸样品可根据260nm的光吸收值算出其的光吸收值算出其含量含量若若260nm光吸收值光吸收值为为1相当于相当于50g/ml双螺旋双
40、螺旋DNA或相当于或相当于40g/ml单链单链DNA或或RNA或相当于或相当于20g/ml寡核苷酸寡核苷酸。扛氧笛树阐额鲍栓贰筐洼腐刻辗妓若滁窥歪坤玄盔芭贰淬三径嚏贬眠迫荣核酸化学生物化学核酸化学生物化学五、五、DNADNA的稳定性的稳定性1.DNA1.DNA的溶液呈粘稠状，但实际上的溶液呈粘稠状，但实际上DNADNA的双螺旋结构僵直而有刚性，易断成的双螺旋结构僵直而有刚性，易断成碎片，这也是目前难以获得完整大分碎片，这也是目前难以获得完整大分子子DNADNA的原因。的原因。2.2.溶液状态的溶液状态的DNADNA易受易受DNADNA酶作用而降酶作用而降解，抽干水分的解，抽干水分的DNADNA
41、性质十分稳定。性质十分稳定。脑庞坎谩挡耙催郑拣腹枷旬闹尝量纯吏宏忍崩烹慷薯症班脏喳息似表程请核酸化学生物化学核酸化学生物化学六、六、DNA的变性的变性1. 概念概念2. 变性条件变性条件3. 变性的特征变性的特征虫澳房例告让赫焊阀且球沂挤肢海趁算蹄模喳专竟擦桨踊淌窗址抑产窘筒核酸化学生物化学核酸化学生物化学1. 概念概念是指核酸双螺旋区的多聚核苷酸链间是指核酸双螺旋区的多聚核苷酸链间的氢键断裂，变成单链结构的过程的氢键断裂，变成单链结构的过程。窑英卫官恫终劣咒舆标咳雄辆以键哼侮莫杯毋蒋京框沿帧烤莉撬腹翘免怀核酸化学生物化学核酸化学生物化学2.DNA2.DNA的变性的条件的变性的条件能够引起核酸
42、变性的因素有：能够引起核酸变性的因素有：1）温度升高；）温度升高；2）酸碱度改变、）酸碱度改变、 pHpH（11.311.3或或5.05.0）；）；3）有机溶剂如甲醛和尿素、）有机溶剂如甲醛和尿素、甲酰胺甲酰胺等；等；4 4）低离子强度。）低离子强度。收弥揩绊垃烃兼颈掠紊定弯板砌亚傈映孙遥甭狱延恰搐甭驰消柏需七偏住核酸化学生物化学核酸化学生物化学3.DNA3.DNA变性的特征变性的特征变性核酸将失去其部分或全部的生物变性核酸将失去其部分或全部的生物活性。活性。变性改变了变性改变了DNA的二级结构。核酸的的二级结构。核酸的变性并不涉及磷酸二酯键的断裂，所变性并不涉及磷酸二酯键的断裂，所以它的一级
43、结构以它的一级结构(碱基顺序碱基顺序)保持不变。保持不变。DNADNA的变性过程是突变性的，它在很的变性过程是突变性的，它在很窄的温度区间内完成。窄的温度区间内完成。 DNADNA解链温度解链温度紫外吸收值明显增加，即紫外吸收值明显增加，即增色效应增色效应。粘度降低，沉降系数增加。粘度降低，沉降系数增加。测捶坎礼恤萄篡免醛足朗捞掣车恋酣纲尔体深害尧夯渊岳羹骂扣惠董闯镭核酸化学生物化学核酸化学生物化学DNADNA解链温度（熔点，解链温度（熔点，TmTm ）当当50% 50% 的的DNADNA变性时的温度称为该变性时的温度称为该DNADNA的的解链温度，即增色效应达到一半时的温解链温度，即增色效应
44、达到一半时的温度；度；一般一般DNADNA的的T Tm m值在值在70-8570-85 C C之间。之间。均一均一DNADNA（如病毒）的（如病毒）的T Tm m值范围较小。值范围较小。分子中分子中G G和和C C的含量越高，越不易变性，的含量越高，越不易变性，T Tm m值越高。可通过经验公式计算：值越高。可通过经验公式计算：（G+C)%=(Tm-69.3)X2.44G+C)%=(Tm-69.3)X2.44T Tm m值随溶液盐浓度增加而增大，值随溶液盐浓度增加而增大， T Tm m值较低，易变性，不易保存。值较低，易变性，不易保存。替传惨忌们挪钩耽纫油疥辐珐蔼媚嘘钻酗誉淄厕的李桔捎保剐锁票
45、渣拇肢核酸化学生物化学核酸化学生物化学溶解曲线溶解曲线与与T Tm m。约陷榜绥岳练蹭怪霉凭曲忽阀予沤馆野订巢谦驾困谅啃雹壮袋赛斌满左纲核酸化学生物化学核酸化学生物化学影响影响Tm值的因素值的因素 DNA的均一性的均一性 DNA中中G-C对的含量对的含量 经验式经验式: (G-C)%=(Tm-69.3)2.44 盐离子强度盐离子强度 竞挺弯叫攘辩辜耽葫地眼捏很榨锋缕快奇虱慌惊浚氟逆盼儡虎捂务烯辖简核酸化学生物化学核酸化学生物化学增色效应与减色效应增色效应与减色效应 天然天然DNADNA分子在热变性条件下，双螺分子在热变性条件下，双螺旋结构破坏，碱基暴露，在紫外光旋结构破坏，碱基暴露，在紫外光2
46、60nm260nm波长处的吸收度明显增加，此现象称为波长处的吸收度明显增加，此现象称为增色效应。增色效应。 变性变性DNADNA分子复性形成双螺旋结构时分子复性形成双螺旋结构时其紫外吸收降低的现象称为减色效应。其紫外吸收降低的现象称为减色效应。绸钉拳五场瘴怯量赌朔秽崇摩值进脚阿悼悸种幕韭苛壬脉细始叭纹旁对堪核酸化学生物化学核酸化学生物化学绍恍卵罪卤昧乔胳健华肮绕赣帅葡抬晒扣着绕揪偶饯彬亮溪咏泼磅击仰见核酸化学生物化学核酸化学生物化学七、七、DNADNA的复性的复性A.概念概念B.复性的条件复性的条件3. 影响复性的因素影响复性的因素4. 复性动力学复性动力学5. 分子杂交分子杂交矢试颜童盾叛泌
47、葵屿裹卉阂瓮养贮轻静庆遂伎胖煌墒凸藩仓茬樱篆厦天凡核酸化学生物化学核酸化学生物化学1. 1. 概念概念1.1.变性变性DNADNA在适当的条件下，两条彼此分在适当的条件下，两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构，开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构，其物理性质和生物活性随之恢复，这一过其物理性质和生物活性随之恢复，这一过程称为复性；程称为复性；2.2.对于热变性的对于热变性的DNADNA，在缓慢冷却的条件，在缓慢冷却的条件下可重新结合恢复双螺旋结构，称为退下可重新结合恢复双螺旋结构，称为退火。火。3.DNA3.DNA复性后，一系列性质将得到恢复，复性后，一系列性质将得到恢复，但是生物活性一
48、般只能得到部分的恢复。但是生物活性一般只能得到部分的恢复。酬觉漂眉颂柞挪嘛誓鸵迹孽懦泊誊蹬另州淄阵裴胚诌琉儡毁粪花和铰郴钎核酸化学生物化学核酸化学生物化学DNA的复性图示的复性图示辱啡拷篡拍肋伸拿推鸣介盼掉诲病嘴挞限慎箍郎民尝昏收宫廷巷搞幌迸庞核酸化学生物化学核酸化学生物化学2.DNA2.DNA的复性条件的复性条件1.1.将热变性的将热变性的DNADNA骤然冷却至低温骤然冷却至低温时，时，DNADNA不可能复性。即淬火。不可能复性。即淬火。2.2.将变性的将变性的DNADNA缓慢冷却时，可以复缓慢冷却时，可以复性。退火温度性。退火温度T Tm m25253.3.分子量越大复性越难。浓度越大，分
49、子量越大复性越难。浓度越大，复性越容易。此外，复性越容易。此外，DNADNA的复性需要的复性需要一定的盐浓度，也与它本身的组成和一定的盐浓度，也与它本身的组成和结构有关结构有关。稼匿割寻榴踪民阵未些驹风捧垦蒂细次铰躲勺汐独溯瞧盘囚挛碎黎房晾帮核酸化学生物化学核酸化学生物化学高于高于Tm值值5 复性复性 也称退火也称退火 榆渴糖经舒圭刮司床拟筋陈憋阻讲铅涎抵千爱岛滓稀煤肺众羡纽泞眶勒咸核酸化学生物化学核酸化学生物化学3. 影响复性的因素影响复性的因素 样品的性质样品的性质(G+C) DNA的浓度的浓度 DNA片段的大小片段的大小 温度温度 离子强度离子强度 蛋咒将挺访僻延匹姐锐庚函专闭爽讨卵累标
50、乍枉辽碧羹亮其争拱皂透潮喀核酸化学生物化学核酸化学生物化学5.5.分子杂交分子杂交1.1.在变性的在变性的DNADNA溶液中加入外源溶液中加入外源DNADNA单链分子或单链分子或RNARNA单链分子（与原单链分子（与原DNADNA具有具有同源性同源性），去掉变），去掉变性条件后复性形成双螺旋结构的过程。性条件后复性形成双螺旋结构的过程。2.2.这样形成的新分子称为杂交这样形成的新分子称为杂交DNADNA分子。分子。3.3.利用核酸杂交可检测特定的核苷酸片段或研利用核酸杂交可检测特定的核苷酸片段或研究同源性等。究同源性等。崇蘑闹挺嵌挤狂掺箭纵棒羡现张沤邓忱葫粗欲鸵挤匪空思疤纠胁瞩国闪呕核酸化学生
51、物化学核酸化学生物化学分子杂交分子杂交 探针：探针：用于杂交用于杂交的异源的异源DNA或或RNA序列，其序列，其核苷酸序列是核苷酸序列是人工特定的、人工特定的、已知的，经放已知的，经放射性标记的一射性标记的一条链。条链。虑炭柏续况外途脖捻啥粟读耍签淬扑爸养姐荫膨威乞摄熏愧花吼孤绳揍朽核酸化学生物化学核酸化学生物化学核酸的变性、复性和杂交变性（加热）变性（加热）探针探针杂交（缓慢冷却）杂交（缓慢冷却）复性（缓慢冷却）复性（缓慢冷却）漾症流袭凭戳葛往艇较锚线椽添留掣心顾估偿问楔食撅瑶炔准随都钥庚锑核酸化学生物化学核酸化学生物化学分子杂交的种类分子杂交的种类Southern Blot：DNA-DNA
52、杂交杂交Northern Blot：DNA-RNA杂交杂交Western Blot：抗原：抗原-抗体进行杂抗体进行杂交交原位杂交：活体组织上进行杂交，原位杂交：活体组织上进行杂交，显出荧光显出荧光恐周彬皖动啮会楷妊逞向粹郭流涉护愈卵厕完星种尿乓集有迹我梁卡理啡核酸化学生物化学核酸化学生物化学Southern印迹法DNA分子分子限制片段限制片段限制性酶切割限制性酶切割琼脂糖电泳琼脂糖电泳转移至硝酸纤维素膜上转移至硝酸纤维素膜上与放射性标记与放射性标记DNA探针杂交探针杂交放射自显影放射自显影带有带有DNA片片段的凝胶段的凝胶凝胶凝胶滤膜滤膜用缓冲液用缓冲液转移转移DNA吸附有吸附有DNA片段的膜
53、片段的膜拐老泥耳尤涤僵呻坪蝶砚董伍极乌棺梧猩指硬荚嵌烛泌汲择北迷亢替睛饭核酸化学生物化学核酸化学生物化学第五节第五节 核酸的研究方法核酸的研究方法 一、核酸的分离、提取通则一、核酸的分离、提取通则 为了得到完整的大分子核酸，一般要注意为了得到完整的大分子核酸，一般要注意3点点 ：1保持低温（保持低温（04）。）。2防止过酸、过碱，避免剧烈搅拌。防止过酸、过碱，避免剧烈搅拌。3防止核酸酶的作用。防止核酸酶的作用。 伞抢爹罢险唇祁囱婴纯啤捎焊痰贬滓拍膝殷倚健漳喧权痰兢播幂睛搀鸽末核酸化学生物化学核酸化学生物化学抑制DNase： 可加柠檬酸钠、EDTA等金属螯合剂；或加去污剂 十二烷基硫酸钠（SDS
54、）；或加蛋白变性剂。 抑制RNase： （1）实验器皿高温，或高压灭菌，不能高压灭菌的用 具用0.1%二乙基焦碳酸盐（diethyl pyrocarbonate, DEPC）处理。 （2）加强的蛋白变性剂如硫氰酸胍、异硫氰酸胍等。 （3）加核糖核酸酶阻抑蛋白（RNasin）等RNase的抑制剂。 普伪宝伞焚滓埠叹奢捻贱梦赢隧宵辉灭泄肥鞭锹彝缠签借棺汇馅不货撅复核酸化学生物化学核酸化学生物化学二、大分子二、大分子DNA的提取的提取 1材料的选择 2细胞破碎 际驳滤党瑞国储历曝陇豌宏渤孵董荤掇钝衣婶丧炙骂磨依疥颈沦芳陡憾参核酸化学生物化学核酸化学生物化学3DNA-蛋白质（DNP）的提取 真核细胞D
55、NA与蛋白质结合成核蛋白（DNP），RNA与蛋白质结合成RNP，而且DNP和RNP常常混在一起。利用DNP和RNP在不同浓度NaCl中溶解度的不同来分离DNP和RNP。 可用1mol/LNaCl溶液提取DNP。 相 对 溶 解 度NaCl（mol/L）DNP在NaCl中的溶解度莆兴译吵重泪挽挤水表闲魁吩林纺汕姿狱唉阀汞虚侮遗主偏范衰愁豢狙白核酸化学生物化学核酸化学生物化学4去蛋白质 （1）SDS （2）苯酚法 （3）氯仿法 （4）酚:氯仿:异戊醇25:24:1 筑斯永篙贮擒僳概摔呛醒歌像哟像啼蹈虚池密眺荡失就若煽藻问哮氓隆要核酸化学生物化学核酸化学生物化学5沉淀DNA 6去杂质 （1）去RNA
56、 （2）去多糖 7进一步纯化 生物材料 DNP（RNP） DNP 纤维状DNA 较纯DNA 纯DNA *原核生物的DNA是裸露的，与蛋白质结合不多，分离纯化要简单些。 破细胞1.0mol/L NaCl*去蛋白质酒精沉淀去RNA柱层析，电泳密度梯度离心去多糖厚檬兴缉披契劲翠钠酋鼓先寐桩此封菠针泅石怯嘻恶宠谚纽利吁拨炙炉转核酸化学生物化学核酸化学生物化学三、RNA的提取 1不同种类RNA的提取 2大分子RNA的提取 （1）酚提取 （2）酚-氯仿-SDS法 3mRNA的提取 向芽尘地褪坚蕊很欢剂袁哗钉脱执躺凄芳扮搜生键什欢暇抖衍忿晴顶芹捎核酸化学生物化学核酸化学生物化学四、核酸纯度鉴定 1.A260
57、/A280 2.电泳 腕跌庶扔祈铁芯笼拖梯蓖萨醚毯擒铡缄归猜祁塑盛苑押疾缉育霉淮庐郝狰核酸化学生物化学核酸化学生物化学五、核酸含量的测定 1.定磷法 2.定糖法 3.紫外吸收法 愉嗓尺阅挣制胸胺适制斤戳稽民陨评随挡软份瑚丁蔼箩反马吭趣燃为锭孪核酸化学生物化学核酸化学生物化学本章重点本章重点:1. 核酸的化学本质、结构和性质核酸的化学本质、结构和性质2. DNA双螺旋结构的基本特征双螺旋结构的基本特征赦促庆窄肋臭屁仔尺纂支盏洗闷周谍辊啸缸贿泊乃揭渣沉爪辑罢熙心加冯核酸化学生物化学核酸化学生物化学作业三：名词解释：核酸的变性与复性；分子杂交；名词解释：核酸的变性与复性；分子杂交；DNA DNA 的熔解温度；的熔解温度；增色效应（增色效应（hyper chromic effecthyper chromic effect）；减色效应）；减色效应简答题：简答题：1 1将核酸完全水解后可得到哪些组分将核酸完全水解后可得到哪些组分?DNA ?DNA 和和RNA RNA 的水解产物的水解产物有何不同？有何不同？2 P68 2 P68 二、二、1 1、 5 5农赊机夹究午莆夜灰稼骚双痈豢西疽变愿庸谁蔽它竞赘敝酬钢堤酪悉数嗡核酸化学生物化学核酸化学生物化学
