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1、微生物学基础微生物学基础1二二微微生生物物类类群群病毒病毒原核生物原核生物真菌真菌原生动物原生动物一、微生物的含义结构简单，形体微小的单细胞、多细结构简单，形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的生物。胞或没有细胞结构的生物。HIV病毒、病毒、H1N1禽流感病毒等禽流感病毒等细菌、蓝藻、放线菌等细菌、蓝藻、放线菌等酵母菌、霉菌、蘑菇等酵母菌、霉菌、蘑菇等变形虫、草履虫等变形虫、草履虫等21、病毒、病毒病毒的形态、结构病毒的形态、结构3病毒的增殖：病毒的增殖：42、细菌、细菌细菌的结构细菌的结构5 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的圆形的休
2、眠体休眠体，叫做，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，。芽孢的壁很厚，对干旱、低对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细。例如，有的细菌的芽孢，煮沸菌的芽孢，煮沸3 3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌芽孢又可以萌发，形成一个细菌. .6细菌的外形与大小图图1-1 常见的三种细菌典型形态常见的三种细菌典型形态A.球菌球菌 B.杆菌杆菌 C.弧菌弧菌7细菌的营养类型细菌的营养类型 根据细菌所利用的
3、根据细菌所利用的能源和碳源能源和碳源的不同，的不同，将细菌分为两大营养类型。将细菌分为两大营养类型。自养菌自养菌: :异养菌异养菌: :光合自养型光合自养型:光合细菌光合细菌化能自养型化能自养型:硝化细菌硝化细菌,铁细菌铁细菌,硫细菌硫细菌8不种种类微生物代谢类型不同硝化细菌硝化细菌大肠杆菌大肠杆菌乳酸菌乳酸菌醋酸杆菌醋酸杆菌酵母菌酵母菌根瘤菌根瘤菌自养需氧型自养需氧型异养兼性厌氧型异养兼性厌氧型异养厌氧型异养厌氧型异养需氧型异养需氧型异养兼性厌氧型异养兼性厌氧型异养需氧型异养需氧型9细菌的分裂生殖细菌的分裂生殖102、放线菌、放线菌1 1、结构：、结构：微生物中发现了几千种微生物中发现了几千
4、种抗生素抗生素，其中，其中2/32/3是是由放线菌产生的由放线菌产生的 ，例如，例如链霉素、土霉素、四环链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素素、氯霉素、红霉素、庆大霉素 2 2、应用、应用: :单细胞原核生物单细胞原核生物11如图是酵母菌电子显微如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构镜下的形态结构3、酵母菌和霉菌、酵母菌和霉菌青霉青霉12三、微生物的菌落：单个或少数细菌单个或少数细菌(真菌真菌)在在固体培养基固体培养基上大量上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的
5、重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。1314细菌的菌落细菌的菌落 菌落表面光滑、菌落表面光滑、湿润，有黏稠湿润，有黏稠性，多数透明性，多数透明或半透明，但或半透明，但也有的干燥有也有的干燥有皱褶。皱褶。15放线菌的菌落特征菌落表面是紧密菌落表面是紧密的绒状，坚实多的绒状，坚实多皱，长孢子后就皱，长孢子后就呈粉末状。菌落呈粉末状。菌落培养基底部和菌培养基底部和菌落表面都有不同落表面都有不同颜色，菌落不易颜色，菌落不易用接种环挑动。用接种环挑动。16酵母菌的菌落特征红酵母的菌落啤酒酵母的菌落菌落表面光滑，菌落表面光滑，有黏稠性，多有黏稠性，多数乳白色，少数乳白色，少数呈红色。数呈红色。17霉菌的菌
6、落青青霉霉的的菌菌落落曲曲霉霉的的菌菌落落菌落绒毛状，菌落绒毛状，孢子有各种颜孢子有各种颜色，容易区分。色，容易区分。18四、微生物的营养四、微生物的营养碳源碳源氮源氮源生长因子生长因子无机盐无机盐水水微生物需要的五大类营微生物需要的五大类营养要素物质养要素物质19概念概念来源来源作用作用碳源碳源凡是能为微生凡是能为微生物提供所需碳物提供所需碳元素的营养物元素的营养物质质无机碳源无机碳源 COCO2 2 NaHCO NaHCO3 3等等有机碳源有机碳源 糖类糖类 脂肪酸脂肪酸 石油石油 等等构成细胞物构成细胞物质和一些代谢质和一些代谢产物产物异养微生物异养微生物的能源的能源（1）微生物的碳源）
7、微生物的碳源1.1.1.1.微生物需要的营养物质及功能微生物需要的营养物质及功能微生物需要的营养物质及功能微生物需要的营养物质及功能20概念概念来源来源作用作用氮源氮源无机氮源无机氮源 N N2 2、NHNH4 4+ +、 NONO3 3- -、NHNH3 3等等有机氮源有机氮源尿素、牛肉膏、蛋尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸白胨、氨基酸 等等凡是能够凡是能够为微生物为微生物提供提供N N元元素的营养素的营养物质物质主要用于合成主要用于合成蛋白质、核酸蛋白质、核酸及含及含N N的代谢产的代谢产物物（2）微生物的氮源）微生物的氮源21概念概念概念概念成分成分成分成分作用作用作用作用为什么不可缺少？为
8、什么不可缺少？为什么不可缺少？为什么不可缺少？常见的生长因子常见的生长因子常见的生长因子常见的生长因子微生物生长不可缺少的微量有机物微生物生长不可缺少的微量有机物微生物生长不可缺少的微量有机物微生物生长不可缺少的微量有机物有机物有机物有机物有机物酶和核酸的组成成分酶和核酸的组成成分酶和核酸的组成成分酶和核酸的组成成分缺乏合成这些物质所需酶或合成能力有限缺乏合成这些物质所需酶或合成能力有限缺乏合成这些物质所需酶或合成能力有限缺乏合成这些物质所需酶或合成能力有限维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等（3 3）生长因子）生长因
9、子22【典例解析典例解析】 例例1 1关微生物营养物质的叙述中，正确的关微生物营养物质的叙述中，正确的A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于生物的具体情况分析。对于A A、B B选项，它的表达是不完整的。有的选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如碳源只能是碳源，如二氧化碳二氧化
10、碳；有的碳源可同时是氮源，如；有的碳源可同时是氮源，如NHNH4 4HCOHCO3 3；有的碳源同时是能源，如；有的碳源同时是能源，如葡萄糖葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能；有的碳源同时是氮源，也是能源，如源，如蛋白胨蛋白胨。对于。对于C C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如多样。如二氧化碳二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；，可作为自养型微生物的碳源；NaHCONaHCO3 3，可作为，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而自养型微生物的碳源和无机盐；而NaClNaCl则只能提供无机盐。对于则只能提供无机盐。对于D D选项，无机氮源提供能量的
11、情况还是存在的，选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如如NHNH3 3可为硝化细菌提可为硝化细菌提供能量和氮源。供能量和氮源。答案：答案：D23微生物学基础第二课时24五、培养基五、培养基 培养基（培养液）是由人培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。物生长繁殖使用的混合营养液。25根据根据物理性质物理性质分分固体培养基固体培养基固体培养基固体培养基用于微生物的分离计数用于微生物的分离计数用于微生物的分离计数用于微生物的分离计数半固体培养基半固体培养基半固体培养基半固体培养基观察微生物的运动观察微生物的运动观察微生物的运动观察微
12、生物的运动, , , ,鉴定菌种鉴定菌种鉴定菌种鉴定菌种液体培养基液体培养基液体培养基液体培养基常用于工业生产常用于工业生产常用于工业生产常用于工业生产根据根据化学成分化学成分分分合成培养基合成培养基合成培养基合成培养基成分明确成分明确成分明确成分明确, , , ,常用于分类常用于分类常用于分类常用于分类, , , ,鉴定鉴定鉴定鉴定天然培养基天然培养基天然培养基天然培养基成分不明确成分不明确成分不明确成分不明确, , , ,常用于工业生产常用于工业生产常用于工业生产常用于工业生产1.1.1.1.培养基的种类培养基的种类培养基的种类培养基的种类图图261.1.培养基的种类培养基的种类根据根据用
13、途用途分分选择培养基选择培养基在培养基中加入某种化学物质在培养基中加入某种化学物质, ,以抑制不以抑制不需要的微生物的生长需要的微生物的生长, ,促进所需要的微生促进所需要的微生物的生长。物的生长。 （举例举例）鉴别培养基鉴别培养基在培养基中加入某种指示剂或化学药品在培养基中加入某种指示剂或化学药品, ,用以鉴别不同种类的微生物用以鉴别不同种类的微生物大肠杆菌，在加入伊红美蓝大肠杆菌，在加入伊红美蓝的培养基上，菌落呈深紫色，的培养基上，菌落呈深紫色，有金属光泽。有金属光泽。28 目的要明确目的要明确根据所培养的微生物的种类、培养的目的配制根据所培养的微生物的种类、培养的目的配制根据所培养的微生
14、物的种类、培养的目的配制根据所培养的微生物的种类、培养的目的配制P21P21P21P21 营养要协调营养要协调注意各种营养物质的浓度和比例注意各种营养物质的浓度和比例注意各种营养物质的浓度和比例注意各种营养物质的浓度和比例, , , ,最重要为碳源和氮最重要为碳源和氮最重要为碳源和氮最重要为碳源和氮源的比，如：源的比，如：源的比，如：源的比，如：谷氨酸生产中谷氨酸生产中谷氨酸生产中谷氨酸生产中 C:N=4:1 C:N=4:1 C:N=4:1 C:N=4:1，菌体数，菌体数，菌体数，菌体数谷氨酸谷氨酸谷氨酸谷氨酸。 C:N=3:1 C:N=3:1 C:N=3:1 C:N=3:1，菌体数，菌体数，
15、菌体数，菌体数谷氨酸谷氨酸谷氨酸谷氨酸。 pH pH要适宜要适宜 细菌细菌 pH6.57.5 pH6.57.5 放线菌放线菌 pH7.58.5 pH7.58.5 真菌真菌真菌真菌 pH5.06.0pH5.06.0pH5.06.0pH5.06.02.2.2.2.培养基的配制原培养基的配制原培养基的配制原培养基的配制原则则则则30（二）无菌技术（二）无菌技术 获得纯净培养物的关键是获得纯净培养物的关键是防防止外来杂菌的入侵止外来杂菌的入侵，无菌技术围绕，无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开。着如何避免杂菌的污染展开。 避免操作者自身被感染。避免操作者自身被感染。31无菌技术无菌技术（1 1）对实验
16、操作的空间、操作者的衣着和）对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和手，进行清洁和消毒消毒；（2 2）将用于培养的器皿、接种用具和培养）将用于培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行基等器具进行灭菌灭菌；（3 3）实验操作应在酒精灯）实验操作应在酒精灯火焰火焰附近进行；附近进行；（4 4）避免已经灭菌处理的材料用具与周围）避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。的物品相接触。32消毒与灭菌消毒与灭菌消毒与灭菌消毒与灭菌 消毒消毒是指使用较为温和的物理或化学是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体方法仅杀死物体表面或内部一部分表面或内部一部分对人体有对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢
17、子）害的微生物（不包括芽孢和孢子） 灭菌灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物是指使用强烈的理化因素杀死物体内外体内外所有的微生物（包括芽孢和孢子）所有的微生物（包括芽孢和孢子）33最常用的消毒方法：最常用的消毒方法：1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法煮沸消毒法煮沸消毒法： 100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：巴氏消毒法：巴氏消毒法：巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学消毒法化学消毒法化学消毒法化学消毒法：用用75%75%酒精、新洁尔灭酒精、新洁尔灭等进行等进行皮肤消毒皮肤消毒; ;氯气氯气消
18、毒水源消毒水源4 4、紫外线消毒法紫外线消毒法紫外线消毒法紫外线消毒法34干热灭菌法干热灭菌法(1)(1)焚烧：焚烧：是一种彻底的灭菌方法，但仅是一种彻底的灭菌方法，但仅适用于废弃物品或尸体等。适用于废弃物品或尸体等。(2) (2) 灼烧：灼烧：直接用火焰灭菌，适用于微生直接用火焰灭菌，适用于微生物学实验室的接种环、试管口等的灭菌物学实验室的接种环、试管口等的灭菌（图）。（图）。(3)(3)干烤：干烤：用烤箱灭菌。一般加热至用烤箱灭菌。一般加热至160160170170经经2 2小时。适用于高温下不变质、小时。适用于高温下不变质、不蒸发的物品，不蒸发的物品， 如玻璃器皿、瓷器等。如玻璃器皿、瓷
19、器等。35高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法：是灭菌是灭菌是灭菌是灭菌效果最好、目前应用最广效果最好、目前应用最广效果最好、目前应用最广效果最好、目前应用最广的灭的灭的灭的灭菌方法。方法是在一密闭蒸锅菌方法。方法是在一密闭蒸锅菌方法。方法是在一密闭蒸锅菌方法。方法是在一密闭蒸锅高压蒸汽灭菌器内进行高压蒸汽灭菌器内进行高压蒸汽灭菌器内进行高压蒸汽灭菌器内进行的。加热时蒸汽不能外溢，容器内温度随蒸汽压的增加的。加热时蒸汽不能外溢，容器内温度随蒸汽压的增加的。加热时蒸汽不能外溢，容器内温度随蒸汽压的增加的。加热时蒸汽不能外溢，容器内温度随蒸汽压的增加而升高，杀菌力也大为增
20、强。通常而升高，杀菌力也大为增强。通常而升高，杀菌力也大为增强。通常而升高，杀菌力也大为增强。通常 在在在在1.05kg/cm1.05kg/cm1.05kg/cm1.05kg/cm2 2 2 2的压力的压力的压力的压力下，温度达下，温度达下，温度达下，温度达121.3,121.3,121.3,121.3,维持维持维持维持1515151530303030分钟，可杀死包括细菌分钟，可杀死包括细菌分钟，可杀死包括细菌分钟，可杀死包括细菌芽胞在内的所有微生物。芽胞在内的所有微生物。芽胞在内的所有微生物。芽胞在内的所有微生物。 此法适用于耐高温和不怕潮湿此法适用于耐高温和不怕潮湿此法适用于耐高温和不怕潮
21、湿此法适用于耐高温和不怕潮湿物品的灭菌。物品的灭菌。物品的灭菌。物品的灭菌。湿热灭菌法湿热灭菌法36无菌操作的重要设备超净工作台无菌操作的重要设备超净工作台37灭菌的方法：灭菌的方法：1 1、灼烧灭菌灼烧灭菌2 2、干热灭菌：干热灭菌：160-170 160-170 下加热下加热下加热下加热1-2h1-2h1-2h1-2h。3 3 3 3、高压蒸气灭菌：高压蒸气灭菌：高压蒸气灭菌：高压蒸气灭菌：100kPa100kPa100kPa100kPa、121 121 121 121 下维持下维持下维持下维持15-15-15-15-30min.30min.30min.30min.381.1.无菌技术除了
22、用来防止实验室的培养物无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。菌。如果需要，请选择合适的方法。（1 1） 培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3） 实验操作者的双手实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；）需要灭菌；（3）需
23、要消毒。）需要消毒。39微生物培养的基本操作程序微生物培养的基本操作程序1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板/ /搁置斜面搁置斜面5 5、无菌检查、无菌检查6 6、微生物接种、微生物接种7 7、恒温箱中培养、恒温箱中培养8 8、菌种的保存、菌种的保存403、配制培养基、配制培养基（用于培养细菌用于培养细菌）413、配制培养基、配制培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（1 1 1 1）计算计算计算计算 根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例，根据
24、牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例，根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例，根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例，计算配制计算配制计算配制计算配制100ml100ml100ml100ml的培养基，各种成分的用量。的培养基，各种成分的用量。的培养基，各种成分的用量。的培养基，各种成分的用量。（2 2 2 2）称量称量称量称量 准确称取各种成分。准确称取各种成分。准确称取各种成分。准确称取各种成分。易吸潮，动作要迅易吸潮，动作要迅易吸潮，动作要迅易吸潮，动作要迅速。速。速。速。42 （3 3 3 3）溶化溶化溶化溶化 将称好的牛肉膏放入烧杯，加入少量的水，加热。将称好的牛肉膏放入烧杯，加入少量的水，加热。将称好的
25、牛肉膏放入烧杯，加入少量的水，加热。将称好的牛肉膏放入烧杯，加入少量的水，加热。加入蛋白胨和氯化钠，使其溶解。加入琼脂，用玻璃棒加入蛋白胨和氯化钠，使其溶解。加入琼脂，用玻璃棒加入蛋白胨和氯化钠，使其溶解。加入琼脂，用玻璃棒加入蛋白胨和氯化钠，使其溶解。加入琼脂，用玻璃棒不断搅不断搅不断搅不断搅拌（防止琼脂糊底而导致烧杯破裂）拌（防止琼脂糊底而导致烧杯破裂）拌（防止琼脂糊底而导致烧杯破裂）拌（防止琼脂糊底而导致烧杯破裂），加热使其熔化。完全熔，加热使其熔化。完全熔，加热使其熔化。完全熔，加热使其熔化。完全熔化后，补加自来水至化后，补加自来水至化后，补加自来水至化后，补加自来水至100mL100
26、mL100mL100mL。 （4 4 4 4）调节）调节）调节）调节PHPHPHPH （5 5 5 5）灭菌灭菌灭菌灭菌 将配制好的培养基转移至锥形瓶中，塞上棉花塞，将配制好的培养基转移至锥形瓶中，塞上棉花塞，将配制好的培养基转移至锥形瓶中，塞上棉花塞，将配制好的培养基转移至锥形瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，用皮筋勒紧，再放入高压蒸气灭菌锅，在包上牛皮纸，用皮筋勒紧，再放入高压蒸气灭菌锅，在包上牛皮纸，用皮筋勒紧，再放入高压蒸气灭菌锅，在包上牛皮纸，用皮筋勒紧，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为压力为压力为压力为100kPa100kPa100kPa100kPa、温度为、温度为、温度为、温度为121
27、121121121，灭菌，灭菌，灭菌，灭菌1515151530min30min30min30min。将培养皿用旧报纸包。将培养皿用旧报纸包。将培养皿用旧报纸包。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在裹，放入干热灭菌箱内，在裹，放入干热灭菌箱内，在裹，放入干热灭菌箱内，在160160160160170 170 170 170 下灭菌下灭菌下灭菌下灭菌2h2h2h2h。43将培养皿用旧报纸包裹，将培养皿用旧报纸包裹，5858套一组放入干热灭菌套一组放入干热灭菌箱内，在箱内，在160160170 170 下下灭菌灭菌2h2h。44微生物学基础微生物学基础第三课时45复习巩固1、分离自养微生物应用
28、、分离自养微生物应用 培养基。培养基。2、欲观察某种微生物的菌落特征，应将该生物接、欲观察某种微生物的菌落特征，应将该生物接种在种在 培养基上；要让该微生物大量繁殖应培养基上；要让该微生物大量繁殖应用用 培养基培养。培养基培养。3、请说出配制培养基的原则及过程。、请说出配制培养基的原则及过程。4、什么是消毒、灭菌、什么是消毒、灭菌5、以下物品应选择哪种方法消毒或灭菌？、以下物品应选择哪种方法消毒或灭菌？某养鸡场感染某养鸡场感染H1N1致死的鸡、配制好的致死的鸡、配制好的LB培养培养基基(含尿素含尿素/含葡萄糖含葡萄糖)、培养皿、接种时用的接种、培养皿、接种时用的接种针、实验员的手针、实验员的手
29、6、微生物培养的操作程序包括：、微生物培养的操作程序包括：46微生物培养的基本操作程序微生物培养的基本操作程序1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板/ /搁置斜面搁置斜面5 5、无菌检查、无菌检查6 6、微生物接种、微生物接种7 7、恒温箱中培养、恒温箱中培养8 8、菌种的保存、菌种的保存47（1 1 1 1）将灭过菌的培养皿放在）将灭过菌的培养皿放在）将灭过菌的培养皿放在）将灭过菌的培养皿放在火焰旁火焰旁火焰旁火焰旁的桌面上，右手拿装的桌面上，右手拿装的桌面上，右手拿装的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔
30、有培养基的锥形瓶，左手拔有培养基的锥形瓶，左手拔有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。出棉塞。出棉塞。出棉塞。（2 2 2 2）右手拿锥形瓶，使）右手拿锥形瓶，使）右手拿锥形瓶，使）右手拿锥形瓶，使瓶口瓶口瓶口瓶口迅速通过火焰迅速通过火焰迅速通过火焰迅速通过火焰。倒平板操作倒平板操作待培养基冷却到待培养基冷却到50 左右时，在酒精灯附近倒平板。左右时，在酒精灯附近倒平板。48（3 3）用左手的拇指和食指将）用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。即盖上培养皿
31、的皿盖。（4 4）等待平板冷却凝固，大）等待平板冷却凝固，大约需要约需要5 510min10min。然后，将。然后，将平板平板倒倒过来放过来放置置，使，使皿盖在皿盖在下、皿底在上下、皿底在上。倒平板操作倒平板操作49 1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？的温度？ 答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。以进行倒平板了。2.2.为什么需
32、要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。污染培养基。503.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，
33、既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的防止皿盖上的冷凝水冷凝水落入培养基落入培养基，造成污染。，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。板培养微生物。51无菌检查无菌检查如何检查？如何检查？将未接种将未接种的培养基在恒温箱中保温的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d，观察培养基上是否是菌落生长，观察培养基上是否是菌落生长， 如果未接种的培养基在恒温箱中保如果未接种的培养基在恒温箱中保温温1 12 d2
34、d后无菌落生长，说明培养基的制后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。备是成功的，否则需要重新制备。526、微生物的接种技术、微生物的接种技术平板划线法平板划线法一旦划破，会造成划线不均匀，难一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。处生长，会形成一个条状的菌落。53 1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然前都要灼烧
35、接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。目逐渐减少，以
36、便得到菌落。划线结束后灼烧划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。免细菌污染环境和感染操作者。54 2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：答：划线后，线条末端细菌的数目比线划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次
37、划线的末端开始，条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。556、微生物的接种技术、微生物的接种技术稀释涂布法稀释涂布法566、微生物的接种技术、微生物的接种技术稀释涂布法稀释涂布法57涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第一想，第2 2步应如何进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证应从操作
38、的各个细节保证“无菌无菌”。例。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。围等等。587、微生物的恒温培养、微生物的恒温培养59（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合所培养菌种的形状、大小基本一致，并符合所培养菌种的菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种如果培养基上出现了其他菌落，
39、则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。原因，再次练习。 608、菌种的保存、菌种的保存（1 1）临时保藏：接种到固体斜面培养基，）临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于菌落长成后置于44冰箱保存。冰箱保存。（2 2）长期保存：甘油冷冻管藏法）长期保存：甘油冷冻管藏法主要靠低温来降低微生主要靠低温来降低微生物活性，达到保存的目物活性，达到保存的目的。加甘油是为了避免的。加甘油是为了避免水结冰产生冰晶损伤细水结冰产生冰晶损伤细胞。胞。 61本课题知识小结本课题知识小结: :62例例2 2下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程
40、中灭菌的理解不正确不正确不正确不正确的是的是A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.消灭杂菌消灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前答案：答案：B 解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；所以是正确的；B B是错误的，是错误的，因为灭菌的目的是防止杂因为灭菌的目的是防止杂菌污
41、染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。部微生物。C C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。种也杀死。63编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFe
42、SOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100ml100ml例例3 3右表是某微生物培右表是某微生物培养基成分，请据此回答：养基成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培养）右表培养基可培养的微生物类型是的微生物类型是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，如不想浪费此培养基，可再加入可再加入 . .自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 64（3 3）若除去成分）若除去成分，加入，加入（CH2OCH2O），该培养基可用于培），该培养基可用于培养养 。（4 4）表中营养成分
43、共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各种）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的成分都溶化后分装前，要进行的是是 。（6 6）右表中各成分重量确定的）右表中各成分重量确定的原则是原则是 。（7 7）若右表培养基用于菌种鉴）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分定，应该增加的成分 。固氮微生物固氮微生物 3调整调整pHpH 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂） 编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2O O100ml100ml6566大肠杆菌的革兰氏染色67
