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1、生物选修1 生物技术实践专题3 植物的组织培养技术20082008年年8 8月月1212日日1 1陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课课题2 月季的花药培养 霍邱县陈埠职业高级中学 朱传兵2008年8月11日20082008年年8 8月月1212日日2 2陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课课题背景20082008年年8 8月月1212日日3 3陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课课题目标课题目标 说出被子植物花粉发育的过程及花药培说出被子植物花粉发育的过程及花药培养产生花粉植株的两种途径，说出影响花养产生花粉植株的两种途径，说出影响花药培养的因素，学习花药培养的基本技术，药培养的因素，
2、学习花药培养的基本技术，尝试用月季或其他植物的花药进行培养。尝试用月季或其他植物的花药进行培养。课题重点与难点课题重点与难点 课题重点：选取适宜的培养材料和培养基。课题重点：选取适宜的培养材料和培养基。 课题难点：选取适宜的培养材料和培养基。课题难点：选取适宜的培养材料和培养基。20082008年年8 8月月1212日日4 4陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课月季的花药培养月季的花药培养一、基础知识一、基础知识： （一）、（一）、被子植物的花粉发育被子植物的花粉发育 （二）、（二）、产生花粉植株的两条途径产生花粉植株的两条途径 （三）、（三）、影响花药培养的因素影响花药培养的因素20082
3、008年年8 8月月1212日日5 5陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课被子植物的花粉发育被子植物的花粉发育1、雄蕊、雄蕊：花丝花丝花药：囊状结构，内有很多花粉粒花药：囊状结构，内有很多花粉粒 花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞。花粉是单倍体的生殖细胞。 花粉的发育要经历：四分体时期、单核期、双核期花粉的发育要经历：四分体时期、单核期、双核期20082008年年8 8月月1212日日6 6陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课2、展示植物花粉的发育过程20082008年年8 8月月1212日日7 7陈埠职高陈埠
4、职高 朱传兵授课朱传兵授课3、注意注意：二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成）生殖细胞核。（精子在花粉管中形成）三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。时，含有一个营养核和两个精子。两个精子和一个营养核的基因型相同。两个精子和一个营养核的基因型相同。1花粉母细胞花粉母细胞4个小孢子个小孢子减分减分有分有分4个花粉管细胞核个花粉管细胞
5、核4个生殖细胞核个生殖细胞核有分有分8个精子个精子20082008年年8 8月月1212日日8 8陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课产生花粉植株的两条途径产生花粉植株的两条途径1、展示花药培养的生花植株的两种途径示意图：花粉花粉花粉花粉胚状体胚状体愈伤组织愈伤组织从芽从芽从芽从芽生根生根移栽移栽脱脱分分化化分化分化再分再分化化诱诱导导20082008年年8 8月月1212日日9 9陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课2、课题延伸人工种子：又称人造种子、合成种子或无性又称人造种子、合成种子或无性种子，就是将组织培养所产生的种子，就是将组织培养所产生的体细胞胚、体细胞胚、不定芽、顶芽、腋芽或
6、小鳞茎等繁殖体不定芽、顶芽、腋芽或小鳞茎等繁殖体，包，包裹在能提供营养的胶囊（裹在能提供营养的胶囊（人造胚乳人造胚乳）里，再）里，再在外面包上一层具有保护功能和防止机械损在外面包上一层具有保护功能和防止机械损伤的外膜（伤的外膜（人造种皮人造种皮），造成一种类似种子），造成一种类似种子的结构，能在一定的条件下萌发生长，形成的结构，能在一定的条件下萌发生长，形成完整植株。完整植株。20082008年年8 8月月1212日日1010陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课影响花药培养的因素影响花药培养的因素uu1 1、材料的选择、材料的选择、材料的选择、材料的选择uu不同植物不同植物不同植物不同植物u
7、u同一植物的不同生理状况同一植物的不同生理状况同一植物的不同生理状况同一植物的不同生理状况（花期早期初花期）（花期早期初花期）（花期早期初花期）（花期早期初花期）uu合适的花粉发育期合适的花粉发育期合适的花粉发育期合适的花粉发育期（单核居中期与靠边期之间）（单核居中期与靠边期之间）（单核居中期与靠边期之间）（单核居中期与靠边期之间）uu此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等度等度等度等uu2 2、培养基的组成：、培养基的组成：、培养基的组成：、培养基的组成： 小
8、麦中为小麦中为小麦中为小麦中为N6N6，马铃薯、月季中为，马铃薯、月季中为，马铃薯、月季中为，马铃薯、月季中为MSMS，油菜中为，油菜中为，油菜中为，油菜中为B5B5培养基培养基培养基培养基20082008年年8 8月月1212日日1111陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课材料的选择：材料的选择： 花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。一般，月季的花药培养时间选在五月初到植株。一般，月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即月季的初花期。五月中旬，即月季的初花期。 选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重
9、要因素。一般来说，在单核期，细胞核由率的重要因素。一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。 为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。开放的花蕾。 20082008年年8 8月月1212日日1212陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课3、问题思考uu为什么花瓣松动会给材料的消毒带来为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？困难？uu答：花瓣松动后，微生物就可能侵入答：花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。到花药，给材料的消毒带来困难。20082008年年8
10、 8月月1212日日1313陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课4、展示月季花的花蕾：20082008年年8 8月月1212日日1414陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课二、实验操作二、实验操作（一）材料的选取（二）材料的消毒（三）接种和培养20082008年年8 8月月1212日日1515陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课（一）材料的选取（一）材料的选取 选择花药时，一般通过镜检来确定其中选择花药时，一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。的花粉是否处于适宜的发育期。 最常用的方法有醋酸洋红法。但是，某最常用的方法有醋酸洋红法。但是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙
11、些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。成蓝黑色。20082008年年8 8月月1212日日1616陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课（二）材料的消毒（二）材料的消毒1、花蕾用、花蕾用V/V为为70%的酒精浸泡的酒精浸泡30秒秒2、无菌水清洗、无菌水清洗3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4、放入质量分数为、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中的氯化汞溶液中24分钟（也可质量分数为分钟（也可质量分数为1%的次氯的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）5、无菌水冲洗、无
12、菌水冲洗35次次 用于培养花药，实际上多数未熟，由用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。幼穗消毒即可。20082008年年8 8月月1212日日1717陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课（三）接种和培养（三）接种和培养 1、去萼片和花瓣：灭菌后花蕾，要在无菌、去萼片和花瓣：灭菌后花蕾，要在无菌条件下除去萼，并立即将花药接种到培养基上。条件下除去萼，并立即将花药接种到培养基上。 2、数量和温度：通常每瓶接种花药、数量和温度：通常每瓶接种花药7
13、-10个，温度控制在个，温度控制在25左右，不需要光照。幼小左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。植株形成后才需要光照。 3、时间：一般经过、时间：一般经过20-30天培养后，会天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。步分化出再生植株。 4、鉴定和筛选：、鉴定和筛选：20082008年年8 8月月1212日日1818陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课（四）（四）植物组织培养技术与花药培养技术的异同点植物组织培养技术与花药培养技术
14、的异同点项目项目项目项目相同点相同点相同点相同点不同点不同点不同点不同点植物组织培养技术植物组织培养技术植物组织培养技术植物组织培养技术离体的植物组织经脱离体的植物组织经脱离体的植物组织经脱离体的植物组织经脱分化形成愈伤组织，分化形成愈伤组织，分化形成愈伤组织，分化形成愈伤组织，再分化成丛芽，诱导再分化成丛芽，诱导再分化成丛芽，诱导再分化成丛芽，诱导出根，然后进行移栽。出根，然后进行移栽。出根，然后进行移栽。出根，然后进行移栽。外植体为体细胞，染外植体为体细胞，染外植体为体细胞，染外植体为体细胞，染色体数无需加倍。色体数无需加倍。色体数无需加倍。色体数无需加倍。花药培养技术花药培养技术花药培养
15、技术花药培养技术取材为花药，培养的取材为花药，培养的取材为花药，培养的取材为花药，培养的为单倍体幼苗，植株为单倍体幼苗，植株为单倍体幼苗，植株为单倍体幼苗，植株弱小，高度不育，必弱小，高度不育，必弱小，高度不育，必弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，须用秋水仙素处理，须用秋水仙素处理，须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复使染色体加倍，恢复使染色体加倍，恢复使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，正常植株的染色体数，正常植株的染色体数，正常植株的染色体数，而且为纯种。而且为纯种。而且为纯种。而且为纯种。20082008年年8 8月月1212日日1919陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课三、结果
16、分析与评价1.1.你能够通过镜检找到处于适宜的发育期的花粉吗？2.2.你的花药培养出现了被污染的现象吗？如果有，请分析的生污染的原因。3.3.你接种的花药是否长出了花粉愈伤组织或胚状体？20082008年年8 8月月1212日日2020陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课课后作业：见生物选修1教材P40面。20082008年年8 8月月1212日日2121陈埠职高陈埠职高 朱传兵授课朱传兵授课1、许多人企求着生活的完美结局，殊不知美根本不在结局，而在于追求的过程。2、慢慢的才知道：坚持未必就是胜利，放弃未必就是认输，。给自己一个迂回的空间，学会思索，学会等待，学会调整。人生没有假设，当下即是
17、全部。背不动的，放下了；伤不起的，看淡了；想不通的，不想了；恨不过的，抚平了。3、在比夜更深的地方，一定有比夜更黑的眼睛。4、一切伟大的行动和思想，都有一个微不足道的开始。5、从来不跌倒不算光彩，每次跌倒后能再站起来，才是最大的荣耀。6、这个世界到处充满着不公平，我们能做的不仅仅是接受，还要试着做一些反抗。7、一个最困苦、最卑贱、最为命运所屈辱的人，只要还抱有希望，便无所怨惧。8、有些人，因为陪你走的时间长了，你便淡然了，其实是他们给你撑起了生命的天空；有些人，分开了，就忘了吧，残缺是一种大美。9、照自己的意思去理解自己，不要小看自己，被别人的意见引入歧途。10、没人能让我输，除非我不想赢！11、花开不是为了花落，而是为了开的更加灿烂。12、随随便便浪费的时间，再也不能赢回来。13、不管从什么时候开始，重要的是开始以后不要停止；不管在什么时候结束，重要的是结束以后不要后悔。14、当你决定坚持一件事情，全世界都会为你让路。15、只有在开水里，茶叶才能展开生命浓郁的香气。16、别想一下造出大海，必须先由小河川开始。17、不要让未来的你，讨厌现在的自己，困惑谁都有，但成功只配得上勇敢的行动派。18、人生最大的喜悦是每个人都说你做不到，你却完成它了！19、如果你真的愿意为自己的梦想去努力，最差的结果，不过是大器晚成。20、不忘初心，方得始终。
