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1、食品中食品中兽药残留量的分析残留量的分析第一第一节 概概 述述使用兽药的目的兽药的主要用途有：的主要用途有：防病治病、防病治病、促促进生生长、提高提高饲料利用率、料利用率、改善改善动物性食品的品物性食品的品质等。等。兽药和和兽药残留残留 兽药：预防和治防和治疗畜禽疾病的畜禽疾病的药物；促物；促进生生长、提高生、提高生产性能、改善性能、改善动物性食品的品物性食品的品质；也包括一些化学的、生物的也包括一些化学的、生物的动物保健品或物保健品或饲料添加料添加剂。兽药残留：残留：“兽药在在动物性食品中的残留物性食品中的残留”的的简称，是指称，是指动物物产品的任何可食部分所含品的任何可食部分所含兽药的母体
2、化合物及（或）其代的母体化合物及（或）其代谢物，以及物，以及与与兽药有关的有关的杂质。u 抗生素抗生素类：四：四环素、素、氯霉素、磺胺霉素、磺胺类、呋喃喃类等；等；u- -兴奋剂：盐酸克酸克伦特特罗、己、己烯雌酚、孕雌酚、孕酮等；等；u激素：己激素：己烯雌酚、孕雌酚、孕酮等；等；u 抗抗寄寄生生虫虫类：左左旋旋咪咪唑、苯苯丙丙咪咪唑、克克并并咪咪唑、克克球球酚酚、吡吡喹酮等。等。兽药残留的类型兽药残留的来源残留的来源在食品在食品动物体内或物体内或动物性食品中物性食品中发现的的违章章残留残留,大都是由用大都是由用药错误造成的造成的,其原因主要有其原因主要有:不正确地不正确地应用用药物物,如用如用
3、药剂量、量、给药途径、途径、用用药部位和用部位和用药动物的种物的种类等不符合用等不符合用药指指示示,这些因素有可能延些因素有可能延长药物残留在体内的物残留在体内的时间,从而需要增加休从而需要增加休药的天数的天数;在休在休药期期结束前屠宰束前屠宰动物物;屠宰前用屠宰前用药掩掩饰临床症状床症状,以逃避屠宰前以逃避屠宰前检查; 以未以未经批准批准药物作物作为添加添加剂饲喂喂动物物;药物物标签上的用法指示不当上的用法指示不当,造成造成违章残留物章残留物;饲料粉碎料粉碎设备受受污染染或将盛或将盛过抗菌抗菌药物的容物的容器用于器用于贮藏藏饲料料;接触接触厩舍厩舍粪尿池中含有抗生素等尿池中含有抗生素等药物的
4、物的废水水和排放的和排放的污水水(如猪如猪经常常摄入入这种种污水水);任意以抗生素任意以抗生素药渣喂猪或其他食品渣喂猪或其他食品动物等物等滥用抗生素用抗生素,是出是出现抗生素残留的主要原因。抗生素残留的主要原因。美国食品美国食品药物管理局物管理局(FDA)和美国和美国兽医中心医中心(CVM)的的调查结果表明果表明,引起引起违章章药物残留的常物残留的常见原因原因为:不遵守休不遵守休药期期;使用未使用未经批准的批准的药物物;未做用未做用药记录;饲料加工或运送料加工或运送错误;盛放它种盛放它种药物的物的贮存容器未充分清洗干存容器未充分清洗干净等。等。兽药残留的危害残留的危害v 毒性作用：毒性作用：急
5、性、慢性、三致急性、慢性、三致v 耐耐药性：性：耐耐药菌株菌株传递给人人v 过敏反敏反应：青霉素、磺胺青霉素、磺胺类等等v 激激素素（样）作作用用：潜潜在在致致癌癌性性、发育育毒性（儿童性早熟）等毒性（儿童性早熟）等v 污染染环境境，影影响响生生态：进入入环境境仍仍有有活性活性兽药残留限量残留限量标 90年代开始年代开始监控工作，控工作，2002最新最新动物性食品中最高残留限量物性食品中最高残留限量：可用，不限量：可用，不限量：88可用，需限量：可用，需限量：94可用，不得可用，不得检出出9禁用，不得禁用，不得检出：出：31我国食品中部分我国食品中部分兽药的最高残留限量的最高残留限量药物物食品
6、食品最高残留限量最高残留限量(mg/kg)四四环素素畜禽：肌肉畜禽：肌肉 0.1 肝肝 0.3 肾 0.6氯霉素霉素畜禽肉、水畜禽肉、水产品品不得检出(检出限出限0.01)磺胺磺胺类畜禽（可食性畜禽（可食性组织） 0.1水水产品品 0.1(单种）种）猪肉、猪肉、鸡肉、肉、鸡蛋、牛肉蛋、牛肉0.1(以以总量量计)呋喃喃唑酮水水产品品不得检出鸡肉、肉、鸡蛋蛋 0.1盐酸克酸克伦特特罗(瘦肉精）瘦肉精）畜禽肉畜禽肉不得检出(检出限出限0.01)己己烯雌酚雌酚畜禽肉、水畜禽肉、水产品品不得检出(检出限出限0.05)兽药残留限量残留限量标准准兽药残留分析技残留分析技术的特点的特点待待测物物质浓度低度低样
7、品基品基质复复杂，干，干扰物物质多多兽药残留代残留代谢产物多物多样或不明或不明动物种物种类多多样，对药物代物代谢存在差异存在差异 兽药残留的残留的检验方法方法 对检测方法的要求方法的要求快速快速高通量高通量定量定量准确度和精确度准确度和精确度确确证 兽药残留的残留的检验方法方法 理想的理想的仪器装器装备样品品经简单处理即可上机理即可上机测定定不需萃取和不需萃取和净化化快速、准确的定量分析快速、准确的定量分析自自动的的资料料处理理uELISA：简单、快快速速、灵灵敏敏度度，但但容容易易产生生假假阳阳性性，一一般般只只适用适用进行行样品品粗粗筛，阳性，阳性结果需果需进行确行确证。u GC：灵灵敏敏
8、度度较高高，但但大大多多数数兽药极极性性或或沸沸点点偏偏高高，需需繁繁琐的衍生化步的衍生化步骤，限制了，限制了应用。用。uHPLC：操操作作简单，但但灵灵敏敏度度不不高高；某某些些残残留留，检出出限限达达不不到要求。到要求。u仪器器联用用：分分离离、定定性性、定定量量一一体体，灵灵敏敏、准准确确、选择性性都都高，是国高，是国际公公认的确的确认方法方法。 GC/MS、LC/MS等等兽药残留的分析方法残留的分析方法u 筛选方法方法u 检测和和确确认方方法法：理理化化检验技技术（GC、HPLC、TLC、GC-MS、HPLC-MS等）。等）。微生物微生物检验（微生物抑制（微生物抑制试验）免疫法（免疫免
9、疫法（免疫检测试剂盒）盒）阳性阳性兽药残留的分析方法残留的分析方法u兽药残留的残留的检验分析方法包括分析方法包括筛选、检测和确和确认。GC和和GC-MS的区的区别GC是指气相色是指气相色谱仪。 一般来一般来说 气象色气象色谱仪使用的使用的检测器器 有有npd fid fpd ecd等等等等如果气象色如果气象色谱器没加上述常用器没加上述常用检测器器 而是用而是用质谱当做当做检测器器 那么就是那么就是GC-MS了，了，GC-MS一般指的是一般指的是单级质谱 如果是二如果是二级质谱就是就是 GC-MS-MS了。了。GC就是一个分离装置就是一个分离装置 严格格说 GC是没法是没法单独独用的用的 必必须
10、加加检测器器 只不只不过人人们习惯吧吧 GC-FID 、GC-ECD、GC-FPD等等等等 简称称为GC而而已。已。质谱分析分析Mass Spectrometry，MS质谱分析法是通分析法是通过对被被测样品离子的品离子的质荷比荷比的的测定来定来进行分析的一种分析方法。行分析的一种分析方法。化合物分子受到化合物分子受到电子流冲子流冲击后，形成的后，形成的带正正电荷分子离子及碎片离子，荷分子离子及碎片离子，按照其按照其质量量m和和电荷荷z的比的比值m/z（质荷比）大小依次排列而荷比）大小依次排列而被被记录下来的下来的图谱，称，称为质谱。质谱分析的分析的过程与原理程与原理不同的物不同的物质有不同的有
11、不同的质量量谱质谱，利用，利用这一性一性质，可以，可以进行定性分析（包括分子行定性分析（包括分子质量和相关量和相关结构信息）；构信息）；谱峰峰强度也与它代表度也与它代表的化合物含量有关，可以用于定量分析。的化合物含量有关，可以用于定量分析。化合物化合物C5H12O的的质谱图GC-MS的基本流程的基本流程GC-MS联用的用的优缺点缺点色色谱仪有很有很强的的分离混合物的能力分离混合物的能力，但是，但是对化合物定性的能力差。化合物定性的能力差。质谱分析分析试样必必须是高度是高度纯净物，而物，而质谱本本身无分离混合物的能力，但是能身无分离混合物的能力，但是能用来用来测定化定化合物的相合物的相对分子分子
12、质量和化学量和化学结构构，是一个，是一个优良的定性工具。良的定性工具。GC-MS联用的用的优缺点缺点气相色气相色谱-质谱联用的用的时候，气相色候，气相色谱法分离效能法分离效能高，定量准确，故气相色高，定量准确，故气相色谱仪是是质谱法的理想法的理想分分离器离器；同；同样，质谱法灵敏度高，定性能力法灵敏度高，定性能力强，几，几乎能乎能检查出所有的有机化合物，故出所有的有机化合物，故质谱仪是气相是气相色色谱法的理想法的理想检测器器。气相色气相色谱首先首先对挥发性的物性的物质进行分离、定量；行分离、定量；质谱法再通法再通过测定离子定离子质量和量和强度来度来进行成分分行成分分析和析和结构分析。构分析。因
13、此，采用两者的因此，采用两者的联用，用，综合其合其优点，克服其不足。点，克服其不足。第二第二节 食品中抗生素食品中抗生素类兽药残留残留检验l 四四环素素类抗生素的残留抗生素的残留检验l 氯霉素霉素类抗生素的残留抗生素的残留检验l 磺胺磺胺类兽药残留残留检验l 硝基硝基呋喃喃类兽药残留残留检验四四环素素类抗生素的残留抗生素的残留检验v 常用的四常用的四环素素类四四环素、土霉素、金霉素等素、土霉素、金霉素等允允许使用，最高残留有限量使用，最高残留有限量v 常用的常用的测定方法定方法HPLC、TLC、ELISA等等v HPLC法法测定四定四环素素类兽药残留残留原原理理：样品品提提取取，微微孔孔滤膜膜
14、过滤，反反相相色色谱柱柱（ODS柱）分离，紫外柱）分离，紫外检测器器检测。样品品处理：理：5%高高氯酸提取、离心、酸提取、离心、过滤。测定定时流流动相相中中加加入入NaH2PO4，调节pH=2.5，可可改善分离度及峰形。改善分离度及峰形。当当pHpI时，蛋蛋白白质以以阳阳离离子子形形式式存存在在，高高氯酸酸与之沉淀，离心除去。与之沉淀，离心除去。四四环素素类抗生素的残留抗生素的残留检验（A）空白养殖）空白养殖虾样品品 （B）四种四）四种四环素素类药物的养殖物的养殖虾样品品定量方法定量方法：用系列标准品的浓度峰面积（峰高）绘制标准工作曲线，应该是一条通过原点的直线。 氯霉素霉素类抗生素的残留抗生
15、素的残留检验v 常用的常用的氯霉素霉素类（CAPs）氯霉霉素素、无无味味氯霉霉素素、乙乙酰氯霉霉素素、甲甲砜霉素、弗甲霉素、弗甲砜霉素霉素骨髓骨髓细胞、肝胞、肝细胞毒性胞毒性禁用，不得禁用，不得检出出v 常用的常用的测定方法定方法GC、HPLC、LC-MS、ELISA等等v 气相色气相色谱法法原原理理：样品品提提取取、净化化、衍衍生生化化，毛毛细管管气气相相色色谱柱柱分分离离，电子子捕捕获检测器器检测。样品品处理理：乙乙氰提提取取、离离心心SPEC18柱柱净化化-衍生化衍生化氯霉素霉素类抗生素的残留抗生素的残留检验氯霉素霉素类抗生素的残留抗生素的残留检验v LC-MS法法检测（确（确认检验）原
16、原理理：乙乙酸酸乙乙酯提提取取，浓缩后后水水解解，固相萃取柱固相萃取柱净化，化，LC-MS联用用检测GB-T 22338-2008 动物源性食品中物源性食品中氯霉霉素素类药物残留量物残留量测定定磺胺磺胺类（SAs）兽药残留残留检验v 常用的磺胺常用的磺胺类兽药磺磺胺胺嘧啶、磺磺胺胺甲甲噁噁唑、磺磺胺胺甲甲氧氧嘧啶、磺胺二甲基、磺胺二甲基嘧啶对过敏敏反反应者者有有致致敏敏作作用用；积蓄蓄有有肝肝肾毒性；毒性；还可影响造血系可影响造血系统我国我国规定残留限量定残留限量0.1mg/kg磺胺磺胺类药物物结构构 基本基本结构构为对氨苯磺氨苯磺酰胺，胺，简称磺胺，称磺胺， 具有芳氨基和磺具有芳氨基和磺酰胺
17、基，多胺基，多为两性化合物两性化合物 磺胺磺胺类药物的分子物的分子结构构 磺胺磺胺类兽药残留残留检验v HPLC法法测定磺胺定磺胺类兽药残留残留（最常用）（最常用）原原理理：乙乙腈提提取取，正正己己烷萃萃取取除除脂脂，加加入入正正丙丙醇醇减减压干干燥燥，残残留留物物用用乙乙腈溶溶解解，氧氧化化铝柱柱净化化，加加入入正正丙丙醇醇，减减压干干燥燥，流流动相相溶溶解解，HPLC紫紫外外检测器器检测。方法方法说明明磺胺磺胺类最大吸收最大吸收为260nm280nm，检测时选用用=270nm。样品极性品极性较强，70%乙乙腈的极性要大于的极性要大于95%乙乙腈，洗脱效果更好。，洗脱效果更好。净化化时用碱性
18、氧化用碱性氧化铝。硝基硝基呋喃喃类（NFs）兽药残留残留检验v 概述概述硝硝基基呋喃喃类及及其其代代谢物物可可使使动物物癌癌变和基因突和基因突变禁禁用用，在在动物物性性食食品品和和饲料料中中不不得得检出出常用常用ELISA、HPLC、LC-MS检测v HPLC法法测定禽肉中定禽肉中呋喃喃唑酮原原理理：样品品与与C18柱柱填填料料研研磨磨，混混合合装装柱柱，正正己己烷淋淋洗洗，乙乙酸酸乙乙酯洗洗脱脱，浓缩，溶解，氧化，溶解，氧化铝柱柱净化，化，检测方法方法说明明基基质固相分散技固相分散技术硝基硝基呋喃喃类兽药残留残留检验第三第三节盐酸克酸克伦特特罗残留的残留的检验l 概述概述l 盐酸克酸克伦特特
19、罗兽药残留的残留的检验20世世纪70年年代代末末,美美国国等等发达达国国家家进行行了了盐酸酸克克伦特特罗实用用性性开开发研研究究工工作作,至至80年年代代,盐酸酸克克伦特特罗作作为饲料料添添加加剂被被广广泛泛应用用到到畜畜禽禽生生产中中。1996年年,我我国国一一些些大大专院院校校、科科研研单位位研研究究发现,盐酸酸克克伦特特罗对动物物具具有有加加强脂脂肪肪分分解解,促促进蛋蛋白白质合合成成,实现动物物营养养再再分分配配,提提高高胴胴体体瘦瘦肉肉率率,加加快快动物物生生长等等作作用用。养养猪猪户在在不不改改变管管理理模模式式、不不增增加加饲料料投投入入、不不提提高高蛋蛋白白质的的前前提提下下,
20、在在育育肥肥猪猪出出栏前前2530d投投喂喂盐酸酸克克伦特特罗,就就能能将将瘦瘦肉肉率率提提高高10%,育育肥肥增增重重提提高高10%12%,因因此此在在畜畜牧牧业生生产中被大量使用。中被大量使用。概概 述述概概 述述v 理化性理化性质Clenbuterol，简称称CLB，-兴奋剂溶解性：溶解性：易溶于水、乙醇，微溶于丙易溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙，不溶于乙醚。化化学学性性质稳定定：瘦瘦肉肉精精化化学学性性质稳定定，不不易易破破坏坏。172开开始始分分解解，经260油油煎煎5min才才会会破破坏坏减减半半。口口服服后后在在胃胃肠吸吸收收迅迅速速，10-20min起起效效，2-3h血血液
21、液浓度度达达到到峰峰值，作作用用维持持5h左左右右，半半衰衰期期25-39h，消消除除5个个半半衰衰期期（约97%）需需5-8d。易易在在动物物眼眼睛睛、毛毛发、肝肝、肺肺、肾等等组织中蓄中蓄积。我我国国食食品品中中的的限限量量：马、牛牛肌肌肉肉0.1g/kg，肝肝、肾0.5g/kg，牛奶，牛奶0.05g/kg。概述概述v 药理性理性质和毒性和毒性曾用于防治人、畜支气管哮喘和曾用于防治人、畜支气管哮喘和痉挛后用于促后用于促进动物生物生长、提高瘦肉率、提高瘦肉率人人食食用用含含CLB残残留留畜畜产品品后后的的表表现为危危害害肝肝脏和和肾脏。长期期摄入入可可致致染染色色体畸体畸变，诱发恶性性肿瘤。
22、瘤。概述概述v CLB检验、检疫疫现状状1987年年，欧欧盟盟、美美国国宣宣布布禁禁止止使使用用CLB作作兽用用饲料添加料添加剂目目前前，欧欧盟盟成成员国国已已将将CLB残残留留作作为肉肉品品进口必口必检项目目我我国国政政府府也也于于97年年发文文禁禁止止在在饲料料中中添添加加使用使用CLBCLB残留量的残留量的检验v 感官感官检测 健健康康肉肉暗暗红色色，肉肉质弹性性好好，无无“出出汗汗”现象象；“问题肉肉”特特别鲜红，脂脂肪肪非非常常薄薄，瘦肉瘦肉纤维疏松，有疏松，有“出汗出汗”现象。象。v ELISA法法测定定 特特异异性性强、灵灵敏敏度度高高、酶标板板上上一一次次可可作多份作多份样品品
23、检测；快速；快速筛选方法。方法。GC-MS测定法定法v 原原理理：样品品剪剪碎碎，高高氯酸酸匀匀浆，超超声声波波加加热提提取取，异异丙丙醇醇-乙乙酸酸乙乙酯萃萃取取，浓缩，弱弱阳阳离离子子交交换柱柱分分离离，洗洗脱脱，浓缩后衍生化，后衍生化，测定定GC-MS测定法定法-样品品处理理v 提提取取：肉肉样-高高氯酸酸匀匀浆-超超声声波波提提取取-水水 浴浴 加加 热 -冷冷 却却 离离 心心 取取 上上 清清 -调PH9.50.1-氯化化钠、异异丙丙醇醇-乙乙酸酸乙乙酯提提取取-旋旋转水水浴浴蒸蒸发至至近近干干-Na2H2PO4溶解溶解-过滤- Na2H2PO4定容。定容。GC-MS测定法定法-样
24、品品处理理v净化化和和浓缩：离离子子交交换柱柱-洗洗脱脱液液（乙醇乙醇-氨洗脱）氨洗脱）-氮气氮气浓缩至干。至干。v衍衍生生化化：甲甲醇醇溶溶解解残残渣渣-浓缩至至干干-衍衍生生剂BSTFA-蒸蒸干干-甲甲苯苯定定容容，待待用用。标准系列同准系列同时衍生化。衍生化。GC-MS测定法定法-说明明1.肉要先肉要先绞碎成肉糜。碎成肉糜。2.该方法的方法的检出限是出限是0.5g/kg。3.0.1mol/L的的高高氯酸酸匀匀浆，超超声声波波萃萃取取，离离心心，液液-液萃取，效果好。液萃取，效果好。4.加入加入NaCl，液，液-液萃取液萃取时可防止乳化。可防止乳化。5.衍衍生生化化前前先先净化化，可可以以
25、避避免免杂质衍衍生生化化，干干扰测定。定。HPLC测定法定法v 原原理理：样品品提提取取、净化化，乙乙醇醇-氨氨洗洗脱后脱后浓缩，流，流动相定容后相定容后HPLC测定定v样品品处理理：提提取取、净化化浓缩同同GC-MS，不需要衍生化。，不需要衍生化。HPLC测定法定法v方法方法说明：明：1.该方方法法适适用用于于各各种种食食品品以以及及肝肝、肾等等组织及及汤汁中瘦肉精的汁中瘦肉精的测定。定。2.标准品要准品要临用用时新新鲜配制，避光保存。配制，避光保存。3.除除GC-MS和和HPLC法法外外，还可可用用ELISA法法进行行筛选，再用上述方法确，再用上述方法确认。酶联免疫法免疫法基于抗原抗体反基
26、于抗原抗体反应竞争性抑制争性抑制进行行测定定的。的。 GB/T 5009.192-2003动物性食品中克物性食品中克伦特特罗残留量的残留量的测定定第三法第三法GC/MS法。法。u 基基本本原原理理：微微孔孔板板包包被被有有针对克克伦特特罗IgG的的抗抗抗抗体体；加加入入克克伦特特罗抗抗体体，经过温温育育和和洗洗涤后后；加加入入酶标记物物、标准准或或样品品溶溶液液，克克伦特特罗与与酶标记物物竞争争与与抗抗体体结合合；没没有有连接接的的克克伦特特罗酶标记物物在在被被洗洗涤除除去去；加加入入酶底底物物和和发色色剂并并且且温温育育，结合合的的酶标记物物将将无无色色的的发色色剂为蓝色色的的产物物，加加入
27、入反反应终止止液液使使颜色色有有蓝转变为黄黄色色。在在450nm处比色比色测定定。酶联免疫法免疫法竞争性争性酶联免疫吸附免疫吸附试验法法测抗原的基本原理示意抗原的基本原理示意图酶联免疫法免疫法 氯霉素霉素检测试剂盒盒u 组成成：微微量量测试孔孔；氯霉霉素素标准准溶溶液液；10倍倍浓缩萃萃取取稀稀释液液；10倍倍浓缩洗洗涤液液；氯霉霉素素酶标记物；底物溶液；反物；底物溶液；反应终止液。止液。 主要主要试剂：氯霉素霉素酶联免疫免疫检测试剂盒。盒。酶联免疫法免疫法主主要要仪器器：简易易的的萃萃取取设备、氮氮吹吹仪、离离心心机机、酶标分分析析仪。 酶标仪酶联免疫法免疫法酶联免疫免疫实验设计u 实验的关
28、的关键操作：操作： 试剂盒的盒的选择和准和准备； 试样的的处理（理（同同GC-MS）；）；加加样； 洗洗涤； 比色。比色。第四第四节激素激素类兽药残留的残留的检验l 什什么么是是激激素素：是是生生物物体体内内特特殊殊的的腺腺体体或或组织产生生的的，直直接接分分泌泌到到体体液液中中，通通过体体液液运运送送到到特特定定的的部部位位，从从而而引引起起特特殊殊激激动作用的一群微量的有机化合物。作用的一群微量的有机化合物。 l兽药：同同化化激激素素和和其其他他生生长促促进剂的的简称。称。激素作用激素作用促促进氨基酸氨基酸中中蛋白蛋白质生物合成生物合成 促促进肌肉肌肉变大大变壮壮 促促进食欲食欲 促促进骨
29、骼骨骼的生的生长 刺激刺激骨髓骨髓，促，促进红细胞胞的的产生。生。分分类l 按照来源：按照来源：动物激素和植物激素物激素和植物激素l结构构：甾甾体体（雄雄激激素素类、雌雌激激素素类、孕激素孕激素类）和非甾体）和非甾体类同化激素。同化激素。 l 激激素素的的危危害害：扰乱乱激激素素平平衡衡，导致致内内分分泌泌相相关关肿瘤瘤、生生长缺缺陷陷、生生育育缺缺陷陷、性性早早熟熟、男男性性女女性性化化、女女性性乳乳腺癌、卵巢癌等。腺癌、卵巢癌等。禁止禁止同化同化类激素在食品激素在食品动物中物中使用。使用。测试方方法法：荧光光分分光光光光度度计、GC、HPLC、GC-MS等。等。HPLC法法测定禽肉中己定禽肉中己烯雌酚残留雌酚残留v 原原理理：样品品匀匀浆，甲甲醇醇提提取取，HPLC紫紫外外检测器（器（230nm）测定。定。v 样品品提提取取：肉肉样-甲甲醇醇振振荡提提取取、离离心心（重复（重复2次）次）-合并上合并上层提取液提取液-过滤、备用用v 方方法法说明明：甲甲醇醇可可以以使使蛋蛋白白质的的氢键发生改生改变，蛋白，蛋白质凝集，从而凝集，从而释放出放出药物。物。谢 谢！
