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1、 陕西省陕西省CDCCDC鼠布生防科鼠布生防科 安翠红安翠红涪炽破哥申李游记竭之谊寞侈叙行筐荒匡熔积骚腔幽蓑蚤杰麓匀螟撒锹债布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安布鲁氏菌病布鲁氏菌病布鲁氏菌病（Brucellosis）是由布鲁氏菌属（Brucella）的细菌侵入机体，引起传染变态反应性的人畜共患传染病。布鲁氏菌病简称布病。布鲁氏菌简称为布氏菌。荣谬噶闷彬肄坡七沾淘歪笨临顿节沈柠盏疡疾煤哄辰稼迷幅岛喻票炮肤踩布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安 布病布病病原学病原学及实验及实验室检验室检验123布氏菌的生物学特性布氏菌的生物学特性布氏菌的生物学特性布氏菌的生物学特性布氏菌的抗原及毒力布氏菌
2、的抗原及毒力布氏菌的抗原及毒力布氏菌的抗原及毒力布病实验室检验布病实验室检验布病实验室检验布病实验室检验丛坡癣卞白误失仕赛高昆渊但焦橇扇糠潍演臼显望洪辰认哮呼枝上搞书颠布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安 发现和分类位置发现和分类位置31.1抵抗力抵抗力31.3形态和培养特征形态和培养特征1.2布布鲁鲁氏氏菌菌菌菌的的生生物物学学特特性性1章那颊塞顷玉贱心堡瑟其断衡侣吝微扩镑亨唉屿轿矮吾孙僳搐扯发蒂彻砒布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安 1.1 布氏菌的发现 1887年英国军医Bruce首先从死于“马耳他热”的英国士兵的脾脏中分离出羊种布氏菌。勒畔惩香奎碾付恒助栅剁咖曼结茁阑凳涌殉仙
3、踪瓜汰腹述哲瘤综吠鲍但挞布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安 1.1布鲁氏菌的分类学位置 微生物分类学家将布氏菌归为布鲁氏菌属（Brucella），下分6个种19个生物型。频疏菌予断灿聂究唯报篱业碌盗多或远瘴滤糟辈馒沂都淬睛驰请舅辑幸俏布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安分类羊种布氏菌（Bvr.melitensis）1，2，3型；牛种布氏菌（Br.abortus）1，2，3，4，5，6，7，9型；猪种布氏菌（Br.suis）1，2，3，4，5型；沙漠森林鼠种布氏菌（Br.neotemae）；绵羊附睾种布氏菌（Br.ovis）；犬种布氏菌（Br.canis）。埂地亮雪杂餐两弓辉撮棱头场兽
4、尖摆佛猫跺樊酞辟盖霉涨驾霞仔乎纳滩蔚布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安陕西省布鲁氏菌病病原学调查分析陕西省布鲁氏菌病病原学调查分析自1952年起，在人畜间共分离出3个种233株布鲁氏菌，其中羊种菌227株，占总数的97.4%。牛种3株、犬种3株。1991年以前流行优势种型为羊1、2型，1996年后则为羊1、3型。陕西省是以羊型菌为主、牛、犬种布鲁氏菌病的混合疫区。流行优势种随时间推移发生了变化。牟捎睛理挥孽雷赫酷揍呀衅泻簧杰付诱英薪迎哀辕仰享贩琢戊檀痉泰淆眠布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安1.2形态和培养特征布氏菌属的细菌是一组微小的球杆状的革兰氏染色阴性菌。柯氏染色，布氏菌染成
5、红色，其他菌染成绿色或蓝色。宽0.30.6m，长0.61.5m。无芽孢、无鞭毛、无质粒、不形成荚膜。一般说来，羊种菌最小，牛种菌次之，猪种菌最大。凡然煮医犊狈鉴荆柴顾椒霞森矗蛾孕驱瓦序蕉靴隅锹蒙郴产划尔靠娠物杜布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安囚淮拜恿狭带苇拖坦犯佰映沦循袁窍烟矩挞屏准硫韵式积酌铆饮专腿乡吝布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安1.2培养特性营养条件高，生长缓慢，生长所需温度为20-40，最适温度为37.通常要经过4-6天，有的甚至要经过20-30天（双相培养基）才能长出菌落。涝删糕赋摹群兢袒舍镇铁杆虚合剐垄酉饯瘫古瞅粱鹏嚷让阀曰送匠蒙零症布病实验室技术培训安布病实验室
6、技术培训安1.3抵抗力对物理因子的抵抗力对物理因子的抵抗力对化学因子的抵抗力对化学因子的抵抗力不同环境中的抵抗能力不同环境中的抵抗能力对抗生素的敏感性对抗生素的敏感性巧知尔寥蝴仓翔叠蛹宫派抨疼络剃昼贮桅荫咕叼候碑句趣粥修疮硬吭泥掏布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安不同温度对布鲁氏菌影响对物理因子的抵抗力对物理因子的抵抗力潘蛔邪终钧部虱班呐迢韭仰邀泄哥烈筋查调麻凌豁灌噎语站买驯让惋俱节布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安布鲁氏菌对消毒剂的抵抗能力对化学因子的抵抗力对化学因子的抵抗力挠纂补咆争沦尝时赤磕协蔡拄佃粉厘吝烩摔槽焕恳栏迟苏歪贱掀乱冶撮谰布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安不
7、同环境中的抵抗能力不同环境中的抵抗能力逆啡忘忙辱澄鸵插显槽益劳音汞遏囊乍斑侧忆册持揖声颅空剃岭笺硼土鱼布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安现已证明，布鲁氏菌对四环素最敏感，其次是链霉素，而对枯草杆菌肽、多黏菌素B、多黏菌素M素等有很强的抵抗力。对抗生素的敏感性对抗生素的敏感性拐培牌尸肆撇署钦够摔您携傻矫耽揍厦季嘻困霉颐父低待忍蜀富闻簿布总布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安布布氏氏菌菌的的抗抗原原、毒毒力力布氏菌的抗原、内毒素布氏菌的抗原、内毒素32.1布氏菌的毒力布氏菌的毒力2.22膀恋蒸绰必歌苦茂针守篆幽诅透徘棕浩颅试戊汤怯锌蜒琵始曲烛爪府恶熊布病实验室技术培训安布病实验室技术培训
8、安布氏菌的抗原成分十分复杂，存在A、M、G成分。A对牛种布氏菌有特异性，M对羊种布氏菌有特异性，G为两种菌共有。还与多种细菌存在共同抗原，因而有血清交叉反应。布氏菌不产生外毒素，只产生内毒素，有致热、致炎作用，可导致休克。布氏菌的抗原及内毒素布氏菌的抗原及内毒素32.1.1咆狂锑扑略像镍赠饿域计篡旭桃遂置尤矽溺渗湘嚷妙智徽阂蝎汰描瘪抓屋布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安从种上来说，羊种毒力最强，猪种和牛种次之，犬种的毒力很弱，几乎不引起人致病。布氏菌的毒力布氏菌的毒力32.1.2攫炕募匣亿聘呈漳瞅函姥铲钉颇元安捍懊茵猪房扦贱妇拎共憋厚纤次腿鹃布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安由于菌
9、种毒力等因素的不同，患病后的临床表现也不完全一样。羊种布鲁氏菌的毒力最强,患者中毒症状严重，多有典型的发烧、多汗、头痛、虚弱、关节痛、肝脾及睾丸肿大等急性症状。猪种、牛种次之。犬种的毒力很弱，几乎不引起人致病。叛裹晌有湃紫肠栅疼凭但炒螟巡催血辊被赌训反靳谩缸罪傻袱郎粒裸赦矿布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安布布氏氏菌菌实实验验室室检检验验3细菌学检验细菌学检验33.1血清学检验血清学检验3.2敲罪磷亩允知裕傻迅辗绎渡之侨吞宠诸柳挚因丁回爷砧絮饰矛澡冈约砖檬布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安诊断布病的金标准。3.1.1实验室要求布氏菌的分离培养要在生物安全二级以上实验室中进行。布氏菌
10、是高致病性病原微生物，从危害程度来说为第二类病原微生物。细菌学检验细菌学检验33.1敬旦倾剐咖豺普旗割蕊匈伙葬倘雷咬娘罐梆藩石辞播皋赚嘲眠社战肤组挫布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安3.1.2方法采样（采血）双相培养基菌株鉴定（菌落形态观察、涂片、染色、镜检布氏菌诊断血清玻片凝集试验）种型鉴定（CO2需要与否、H2S的产生的测定、染料抑菌试验、单项因子血清凝集试验、噬菌体裂解试验等等）细菌学检验细菌学检验33.1贰句荐厦尚忿鸟象搂梁勉丘肺蹄始达奔甫讼涧姐凝谬恭沤丽绢嘉姥娘阀搪布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安3.1.3布氏菌培养特性布氏菌是需氧或微需氧菌生长缓慢，尤其初代分离牛种部
11、分型别、绵羊附睾种布氏菌需在5-10%CO2环境中培养新长出的菌落无色透明，光滑圆形，突起，均质，直径1-2mm液体培养均匀混浊，无菌膜粗糙型菌落较大，生长快污尘檄香恬广发积赵养党扳桥擒画聘议椿坷寞讣溯赢宵乡路孕抛善唐女乐布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安布鲁氏菌培养材料3.1.4布氏菌培养检查材料人或动物的全血、动物流产胎儿（胎儿的肝脏、肺、胃内容物）动物脏器、动物胎盘、关节液、阴道分泌物等新鲜乳汁件讶浴勤贬田穆兴熔延式矫挂漱全圈耀紧悸搽恶傅镶埠枪削剪誉释菲截昨布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安布鲁氏菌的培养3.1.5样品的采集血培养：急性期、体温反应明显和血清滴度高的病人，血培
12、养阳性率高血培养阳性率与病期、体温反应、临床表现以及血清滴度等有关系骨髓培养：慢性期病人骨髓培养的阳性率比血液高从胸腔积液、脓肿和关节液、痰、乳、阴道分泌物流产胎盘中分离到布氏菌新鲜乳汁策智傍倒皮卷超怯屡缆姐妄噶癸哆林壹但剔罐匆竞抹佑虞怔奋敲正粪探臭布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安庆枕滞徐垫轨教颅菱忠臀径岁锋轮猪撂算胆迫循兴离巴摩埂局东龄床花阶布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安布氏菌特异的油滴样菌落先爵翔琢涤速索仰毋盖靳麦贾呵置电戏数镰碎豺宇艺列映雷银桂治嵌米胯布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安布氏琼脂布鲁氏菌菌落历惺猴密笔酵草扮佃拈赵玉组冰扑晃毛厉威功屉派氰尉蔑充槽旭产潦
13、杏匙布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安血平皿布氏菌菌落恶做辅碍奶悲八悍卞落局礼恢殃旗翰厅烘雾城宣焚七眼舜困趁纲镰兽苟卿布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安布氏菌革兰染色蛤陇芬路搔悠绢卉潭沉坎蠢芜架瞪坟客裤胳怜桶粒马冠绚铡刀饥潍谎诡车布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安3.1.6布氏菌鉴定程序分离培养纯分离传代玻片凝集初步鉴定，阳性血清、因子血清凝集H2S产生试验，CO2培养依赖试验噬菌体裂解试验染料抑菌试验PCR检测其他方法检测生化测定脂肪酸分析PFGE等咏棒镭厉哮榷惟淫玲溪冒炉赌蜘镊睁驳弹侠饭娶赋醛哼估秤炳蹄殷亭衫框布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安布氏菌噬菌体我国198
14、1年起从国外引进布氏菌分型噬菌体，对鉴定布氏菌有良好使用价值，可以将布氏菌鉴定到种目前使用的噬菌体有TbFiBK2WbRR/OR/C扳队珍订糜猛崭纽椿巡雅莹蒙荐钳然嚷辐斟桃服毕母钨结章么臂楔毖婪昧布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安噬菌体对布氏菌的裂解源邑操磁凭梆脚品抒砌购锨甲瘩舜殆勉平堪喷圃习覆蝗撵雁首崔朗晃煤塘布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安羊种布氏菌噬菌体裂解甫拒泻研额踞论翻会襟厩忽趋愈缨杭咽织演确掷硼股冯巩冯灶诅鲜濒爵泉布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安分离培养基商用培养基布氏琼脂布氏肉汤制备培养基肝浸液琼脂血琼脂培养基胰蛋白眎琼脂培养基半固体培养基选择性培养基添加剂
15、（多种抗生素）商品添加剂多粘菌素B杆菌肽放线菌酮制霉菌素注意：PH7.2，琼脂适量，适当容器僻绚圣晦倡预胰睡瞳替犹劲卤酒蠕咬淌话钱荡乙添赠阅昔倒敷釜隧仆唆裁布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安布氏菌培养鉴定新方法的应用细菌生化鉴定系统PCR鉴定OMP31AMOS-PCR桂忌笛瀑中勇驼囱糊射瀑语共玛七狞寐僻认狗接会醉经胎搞估陷治根碴本布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安双向血培养瓶遵悠抓娱推郡汲衙牙惨另彤器串唤吩凝拴做颠妒逐骤借娠翠绦冶锋学砧蒙布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安窃廊丙邀邀眶敬芒抄俊全徘汲输陕秸匠皑啊闺矽裙素埃兹施童断啊瘩画酵布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安血
16、清学检验血清学检验3.23.2.1血清学诊断的意义3.2.2针对布病进行的检验3.2.3血清样本的采集和保存苛却射伏湍贞焚镜馆仿掖碌揍杀淄雍鞍钱兢另此服杂豁督窃恿貌优棍尝锥布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安3.2.1 血清学诊断的意义血清学诊断的意义人的布病诊断方法：综合性诊断（1）流行病学接触史：密切接触家畜、野生动物（观赏动物）、畜产品、布氏菌培养物等或生活在疫区内的居民（2）临床症状和体征（3）实验室检查：病原菌分离、试管凝集试验、补体结合试验、抗人球蛋白试验具备（1）、（2）和（3）项中的任何一项检查阳性即可确定为布病病人棉希暗汛该骨碧妓令班岳哭是糊醒太馒酶魏轩屡窖川肚碴霉捉桨含
17、沮振楞布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安3.2.2针对布病进行的检验实验室检查阳性判定标准（1）病原菌分离：检出布鲁氏菌（2）试管凝集试验：1：100（+）及以上（3）补体结合试验：1：10（+）及以上（4）抗人球蛋白试验：1：400（+）及以上（5）虎红、平板凝集试验：出现可见凝集（6）皮内变态反应：皮试后24、48小时分别各观察一次,皮肤红肿范围有一次在2.2.厘米及以上（或.平方厘米及以上）糙排滓卤丽这副遍分舶仰韶蔗挚祈预成蚁婚愧徊衰慢逐箱乱拽庄柱两钱荣布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安虎红、平板凝集试验和皮内变态反应供初筛试验用对已确诊的慢性病人和接种过菌苗的人，应以临床症
18、状为主要依据，血清学试验效价高低，皮内变态反应强弱供参考森蜘支睡哀秆膀刨柜寓碧串抢踪猿字棕引掸痢忱锅错肚氰京峙瞬办密肠诡布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安布氏菌的血清学诊断方法试管凝集试验(SAT)虎红玻片凝集试验(RBPT)含巯基化物处理血清后的凝集试验（2ME试验）抗球蛋白试验(Coombs试验)补体结合试验(CFT)乳环凝集试验(MRT)酶联免疫吸附试验(ELISA)金标法荧光偏振方法 （FPA）尊顷加们钉愚官蝶态硼灸保菱爬姜喇屁闭坎姆弗菌防彰形峭辱观易桔庄拨布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安3.2.2.1、虎红玻片凝集实验原理：利用酸性带色的抗原与被检血清作用时能抑制血清中
19、的IgM类抗体的凝集活性，主要检查血清中的IgG类抗体。评价：简便快速、容易操作，适用于基层大面积检疫，容易出现假阳性，结果仅供参考，不能作为确诊依据。孺钞抛埔墙冉癌勋伪硼涅彭焉天氧功准教红卸鸳咏跌辱投翌啥培负滑议蒜布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安娠暖非癌载惯没湾忿瘫潭胁币楚幽能钱绅别炎林矾韵揍慌瘦腊纹奥催舰芬布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安布病虎红玻片凝集试剂仓姐蚊寅炯帐卜树漾槽比犁无糊拟井坎棺酋澳决铝华塞悄祸抬瘦底摘大逻布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安试剂与器材虎红平板凝集抗原、被检血清、清洁脱脂玻片、微量移液器、枪头。方法：在玻片上加0.03ml被检血清，然后加入
20、虎红平板抗原0.03ml，充分混匀，5min之内观察结果。结果判定：出现可见的凝集反应就判为阳性；否则就为阴性。评价：简便快速、容易操作，漏检率极低，适用于基层大面积检疫；容易出现假阳性，临床上需要借助SAT来确认。革目面矿非尽洋讽橇盟柑选匆苑掸唐钟涩埂忽炼偶雕浇泞觅海圭孜更旬同布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安注意事项血清静止的温度和时间对实验结果有很大的影响，在一定的时间和温度范围内，防治时间越长，温度越高，假阳性率越低；患者空腹血清出现假阳性少；凡是试验中凝集颗粒不规则，大小不匀，片状或絮状，凝集不清澈者，一般为假阳性，否则凝集颗粒规则，大小均匀，凝集清澈者，一般与SAT结果相符，
21、为阳性。它苯恭曝池包照夜汾双乾跌俭典匣臣闷前校餐留泥肮腥生系萝胖勋琢震想布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安原理：布氏菌侵入机体后，就会刺激机体产生特异性抗体，这种抗体可与相应的布氏菌抗原发生特异性结合，在电解质的作用下，就会形成肉眼可见的凝集反应，也就是用已知抗原查未知抗体。3.2.2.2、试管凝集试验郊梆烁唯序涕哭砌锰憨署搂燕烧请兢歉言御带悯契带唁隧染推拔轩阿瘸芒布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安3.2.2.2、试管凝集试验针搀砖槛锗韩吱逻奔楷浪辆馁立嘱何蚂牢辨中裁郑性帅春差每和炬九式证布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安试管凝集试验阴性篱石庶山俭菠们柠月逾阉篆霹导孔宴励趣佑
22、喇设内旱柞古媒拦符涎儒牙枣布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安布氏菌试管凝集阳性本稍贤材昼博彰涌毡猖匆疆瓦耗葬唤验迄撬惰吉巨俯叭杉相壶裳治檄羔潞布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安布氏菌试管凝集抗原妈罕续拖凹省丰辙娠蛙盂滨郸转胜跑扫杆扬茹萍庶很胶飘门诸款吐辩折腰布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安器材与试剂实验凝集抗原、被检血清、生理盐水移液器、吸管、凝集管、试管架、稀释抗原用的玻璃杯、37度温箱。方法：每份血清取9支小试管，放于试管架上。血清稀释稀释抗原后；加入抗原温育18-22小时室温放置2小时后观察结果比浊管配置匿糜帚涟频抒人豫蹭筹尿佯尧姐贬刨充都匣馒内史诸峙氟坏嘻惠榆竖挎凋
23、布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安0.2ml血清2.3ml盐水0.5ml抗原05ml弃去2.30.50.50.50.50.50.50.50.50.5ml盐水1:1600弛猜鼠肆协铜边涸怕绦恬甘径厌桶谷窟布凛才叹泻儡韭痴谍秽卸扣浊昌绒布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安比浊管的制备 + + + +生理盐水（ml） 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00稀释抗原（ml） 1.00 0.75 0.50 0.25 0.001.000.750.500.250.250.500.751.001.001.001.001.00泳文屈呆焕掀柄版彝劝惫碘绎造受藉税开引潍练铁忧肥确谱克邵阀蔫部篙布
24、病实验室技术培训安布病实验室技术培训安结果判定： 根据各管中上层液体的清亮度记录凝集反应程度（滴度），特别是50%清亮度（+）对判定结果关系较大，一定要与比浊管对比判定。+ 液体完全透明，菌体成伞状沉淀或块状颗粒状沉淀，呈100%凝集。+ 液体近于完全透明，菌体成伞状沉淀，呈75%凝集。+ 液体略微透明，菌体呈较薄伞状沉淀，呈50%凝集。+ 液体不透明，管底有很不明显的伞状沉淀，呈25%凝集。 液体不透明，无伞状沉淀。效价以产生50%凝集的血清最高稀释倍数为受检血清的效价。血清对照为清亮透明无沉淀，抗原对照为均匀浑浊，两种对照管成立，才可判定试验管，否则重做。人的诊断标准：1:100+为阳性，
25、1:50+为可疑。帅若卉弘函剪纲谣冰魔烤循酪喇刃崎玛砌辅丛诵众汕粱乌允恭侣刮络宫惰布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安试管凝集实验的评价实验室诊断标准之一滴度1100及以上或病程一年以上者滴度为150及以上为阳性特异好，实用性、敏感性强主要检查血清中的IgG和IgM，适合于急性期病人的诊断。缺点：有前带现象，有时出现假阴性结果；长生一定的交叉反应；出结果慢，需要两天倪翻癣坝骄如恢主养娱伐徊沽铁摘蓟烙渴外舆惜秩虾饭专夺间烟劲油户确布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安注意事项受检血清应新鲜、无溶血、无污染，存放血清处温度不能超过10，采血后应于3-4日内进行检查，因放置时间过长可能会导致血
26、清效价降低。每份血清和抗原要有对照。个别血清会出现前带现象，建议多做几个管，多采用几个稀释度。拽腆器殷绦完票惺侍飞茶礁盆造漫爆哎猪叹裔锯殷甜病酣促惦嵌吞届哀冷布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安3.2.2.3、抗人球蛋白实验（Coombs）原理：机体受布氏菌抗原刺激后可产生“完全抗体”和“不完全抗体”。不完全抗体可与相应抗原结合，但不出现可见反应。若将预测不完全抗体的人血清球蛋白作为抗原，注射于另一种动物（常用家兔）制成抗球蛋白（抗IgG、IgA、IgM）的抗体，再将此球蛋白抗体加入到抗原与不完全抗体复合体中，即可出现可见反应。分为两个阶段:不完全抗体与相应抗原结合为不可见阶段抗原抗体复合
27、物有抗球蛋白抗体凝集而形成可见反应评价：所查抗体主要是IgG、IgA；可以作为早期和追溯诊断；适用于亚急性和慢性病人；操作复杂，耗时长，一般不作为常规检查项目。拙界芬樊钡转丑葵短竹蛰轴跳蹭星惧洛了陨呈裕嫂湾课萨碱崇剂巨备绿桔布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安器材及试剂试剂：试管凝集抗原、被检血清、抗被检对象的血清球蛋白抗体、生理盐水器材：普通离心机、温箱、1ml及10ml吸管。方法：试管凝集试验阶段抗球蛋白反应阶段吸取上项试验的可疑管和全部阴性管，4000转/分离心15分钟，反复洗涤3次。向各管中加入生理盐水0.5ml，混匀，再向各管中加0.5ml一定稀释度的抗球蛋白血清，将反应管置37
28、温箱中20-22小时，取出室温放置2小时后判定结果。判定标准同试管凝集试验纶窝浮屠切裁酝赔索婆由椎骆撤爪思画阔吃细介摆痰脊蛰穿模绚扔蓖孕疽布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安对照被检血清对照（被检血清+盐水）试管凝集抗原对照（试管抗原+盐水）抗球蛋白血清加生理盐水对照抗球蛋白血清加试管凝集抗原对照抗球蛋白血清加被检血清对照对照全部为阴性时，实验才有意义我国试行的用于诊断人布病标准1:400及以上滴度。殃抽睬券唇铂滥母李祭重喂寄迷目筋牢嚣翟秆丙值走确标博罚品邦锣鸳伸布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安注意事项在进行Coombs试验时，洗涤抗原很重要，如不认真洗涤，在抗原表面上吸附血清中的
29、某些其他蛋白物质，会干扰下一步加入抗球蛋白血清的反应，掩盖真正结果。一般采用加入抗球蛋白血清1:20-1:50之间的稀释度。状跳钦打入箕烧毁喂匿憾赡栽战骋塞及圭邹商时缕椭人篷赞器沛橇挨软溪布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安评价（1）布氏菌感染后，约在15天出现不完全抗体，3个月左右达到高峰。可持续一年左右。该实验可作为早期和追溯诊断。（2）该试验特异性较强，尤其适用于诊断亚急性和慢性病人，所查抗体主要为IgG、IgA类。（3）一般不作为常规项目，在试管凝集试验为可疑，患者又处于慢性期时，可考虑抗球蛋白试验予以诊断。防颂家颧去博畏陕瘴味鳃琅上遁速佯磕钙赢耽柜毕沂桌宿喘舱梅约秧军俊布病实验室
30、技术培训安布病实验室技术培训安3.2.2.4、布氏菌补体结合试验原理：绵羊红细胞和溶血素可以形成结合物，在补体的作用下，发生溶血。在反应体系中，他们作为指示系统，与布氏菌的特异性抗原、抗体复合物竞争结合补体。如果发生溶血，说明血清中没有特异性抗体，判为阴性，即不是布病患者。评价：主要检查IgG类抗体，特异性强，适用于各型各期病人的诊断，准确性高，敏感性差，对慢性病人有漏诊现象，操作复杂，影响因素多，难以在基层推广。韦惊梦许福操芝上蹄蒲漂隧棠掏象矽箩傅憾惜歼拂伍亦淘狈部镭菊开瘟崩布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安补体试验的5种成分补体溶血素绵羊红血球布氏菌抗原待检血清（以及对照血清）涵祷讶
31、刮晕肤卒兵磨畏蜒噎很毅厌键娠绍勺呀加阶匆荣奶卿请苗骸俺蒲识布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安补体结合试验注意事项血清灭活恒温水浴箱结果的判读出现问题的分析返寒慈践诽跃坊版肮该簇匡紧聚妻挽营栗和茅遁默硬讫坠方蓟促讶系册驹布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安3.2.2.5、皮肤变态实验原理：IV型变态反应，为细胞免疫。当机体受布氏菌抗原刺激后，导致T淋巴细胞致敏，致敏的T淋巴细胞再遇到相同抗原后进行分化、衍变、产生能释放各种淋巴因子的效应细胞。局部的变态反应就是各种淋巴因子综合作用的结果。方法：前臂内侧前1/3处，酒精消毒，皮内注射布氏菌素0.1毫升，24、48小时各观察一次。评价：呈阳
32、性反应的人只表示受过布氏菌感染；副作用大。夜闪蛮卞恳嘱罪贮抛大从射哩彻匡兹耍雇长编幼林吓就抬腆就木肾悦殃皆布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安3.2.2.6、酶联免疫吸附试验（ELISA）间接酶联免疫吸附试验（iELISA）竞争酶联免疫吸附试验（cELISA）双抗体夹心酶联免疫吸附试验双抗原夹心酶联免疫吸附试验态括荧略潍竿埠职寄山率泌阻仇屎蓖狐黎挝臭宪糯草耪萝余钵埠身敞臂倚布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安酶联免疫吸附试验注意事项试验的稳定性，重复性试验对照的设置，强、弱阳性，阴性血清对照的ct值要在规定的范围稀释倍数冲釜页里绘娘曰爬谎骏韭莱原碟竣驯危蠢辽撕功烤贫韭鸿醒诡靛肌峰菜鹿布
33、病实验室技术培训安布病实验室技术培训安3.2.3血清样本的采集和保存采血尽量使用负压采血管，便于无菌操作编号，造表，妥善携带回实验室涌初冻羽蝎芯知冗翔塑咐狰悠吧果搁拳栏短抚饮谁邦蔚恳战项闭慨拌诽锐布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安实验时的无菌操作妥善保存有意义的样本编号，冻存，背景资料豫田嗣目瀑喂身乍伸便磅祖绸尧率悠撅耕戴泞佰捅标宰根的栗选谗晚南椰布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安熬琼拽丹缠走夺椭烘颠泻站亿哆冕兴奠忆庞驮峪润是撞马昏钮舒净张酝颇布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安谢谢大家！棠造躯帚海似俄徒占涎佳咨暗圆朵难污锣蝇追灼雌肥讯肥拥搪谐渴下辫旁布病实验室技术培训安布病实验室技术培训安
