《抗M2自身抗体》由会员分享，可在线阅读，更多相关《抗M2自身抗体（21页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、抗线粒体M2 抗体ELISA系统化检测方法的建立及临床意义探讨 首都医科大学附属北京佑安医院 闫惠平闫惠平 研究员，教授研究员，教授 背景介绍自身免疫性疾病自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID)是是严重影响人重影响人类健康的疾病之一健康的疾病之一,可累及人体的可累及人体的各系各系统、组织和器官和器官,涉及涉及临床各床各专业学科。学科。自身抗体自身抗体对疾病疾病诊断、断、鉴别诊断有重要价断有重要价值。自身抗体主要自身抗体主要检测方法：方法： 间接免疫接免疫荧光法、光法、 ELISA、 免疫印迹免疫印迹 等多种方法等多种方法首都医科大学附属北京佑安医院目前自身抗体检测普遍
2、问题间接免疫荧光法（IFA)：操作技术水平要求较高、仪器试剂要好，有一定局限性。ELISA法：多以手工操作为主，全自动酶联分析仪检测技术应用不普遍；检测结果存在较大的不一致性；迫切需要解决检测的系统化和规范化问题。国产自身抗体检测ELISA试剂：上市时间较短；许多缺乏大规模临床应用质量评价；其正常参考区间以及对临床疾病诊断的灵敏度和特异性等还缺乏大规模的经临床验证的可靠数据。原发性胆汁性肝硬化原发性胆汁性肝硬化 Primary Biliary Cirrhosis, PBC 多发于中年女性；多发于中年女性； 慢性胆汁淤积表现：慢性胆汁淤积表现：ALP和和 -GT升高升高AMA(9095%)、AM
3、A-M2阳性；阳性； 肝内胆小管进行性非化脓性炎症；肝内胆小管进行性非化脓性炎症； 肉芽肿性破坏，并进行性胆管消失；肉芽肿性破坏，并进行性胆管消失；熊去氧胆酸可以显著改善生化指标熊去氧胆酸可以显著改善生化指标肝纤维化、肝硬化最终肝衰竭。肝纤维化、肝硬化最终肝衰竭。首都医科大学附属北京佑安医院抗抗-AMA-M2对PBC具有明确的疾病具有明确的疾病诊断意断意义，而且具有，而且具有较高的疾病特异性，高的疾病特异性，问题：抗：抗-AMA-M2阳性也常阳性也常见于其他肝病或干燥于其他肝病或干燥综合征等自身免疫性疾病，或者出合征等自身免疫性疾病，或者出现检验结果果时阴阴时阳，阳，给临床床诊断与断与鉴别诊断
4、断带来困惑。来困惑。原因可能有多种：原因可能有多种： 临床：床：如如HCV/HBV合并自身免疫病；自身免疫合并自身免疫病；自身免疫现象象 检验： 检测试剂的特异性、的特异性、标准化；准化； 项目本身的参考区目本身的参考区间是否合适等是否合适等 乙肝患者的自身免疫异常表现乙肝患者的自身免疫异常表现肝外病理体征肝外病理体征肝外病理体征肝外病理体征例数（例数（例数（例数（%）感觉运动神经病变感觉运动神经病变10 (5)肌肉痛肌肉痛6 (3)肾小球肾炎肾小球肾炎5 (3)关节痛关节痛5 (3)干燥综合征干燥综合征6 (3)雷诺综合征雷诺综合征3 (2)葡萄膜炎葡萄膜炎3 (2)Cacoub,etCac
5、oub,et al al J.Hepatol.J.Hepatol.,43:764 (2005),43:764 (2005)自身抗体自身抗体自身抗体自身抗体例数（例数（例数（例数（%）SMA14 (7)ANA6 (3)Nucleosome4 (2)Cryoglobulineamia3 (2)LKM-13 (2)SLA0 (0)AMA0 (0)全世界全世界4亿亿HBV感染者中，约感染者中，约20%的患者出现肝外临床症状体征。的患者出现肝外临床症状体征。结节性多动脉炎（结节性多动脉炎（PAN）和膜性肾小球肾炎最严重最受关注。）和膜性肾小球肾炎最严重最受关注。对对190名慢性乙肝患者肝外病理体征（包括
6、自身免疫疾病）和自身抗体名慢性乙肝患者肝外病理体征（包括自身免疫疾病）和自身抗体的研究表明，两者的阳性率（至少一项阳性）分别达到的研究表明，两者的阳性率（至少一项阳性）分别达到16%和和15%。83例肝癌患者自身抗体检出率 组别组别 例数例数 自身抗体阳性自身抗体阳性 ANA CS SMA ANA CS SMA AMA AMA A A 组组 64 2364 23（35.935.9） 16(25.0) 8(12.5) 5(7.8) 3(4.7)16(25.0) 8(12.5) 5(7.8) 3(4.7) B B 组组 16 816 8（50.050.0） 4(25.04(25.0） 3(18.8
7、) 3(18.8) 1(6.3)3(18.8) 3(18.8) 1(6.3) C C 组组 3 0 0 0 0 03 0 0 0 0 0 合计合计 83 31(37.383 31(37.3） 20(24.120(24.1） 11(13.3) 8(9.6) 11(13.3) 8(9.6) 4(4.8)4(4.8) A: HBV肝癌肝癌; B: HCV肝癌肝癌; C:其他原因肝癌其他原因肝癌HBV/HCV组自身抗体检出率差异无统计学意义。组自身抗体检出率差异无统计学意义。 赵海琳赵海琳.闫惠平等，中国免疫学杂志闫惠平等，中国免疫学杂志2010, 26:1127建立抗建立抗-M2 ELISA系统化检
8、测方法系统化检测方法仪器：ADC ELISA 400流水线式 全自动酶联免疫工作站试剂：抗M2型线粒体抗体检测试剂盒(上海科新生物技术股份有限公司)检测范围：25-800RU/ml；阴性25RU/ml。研研究究方方法法和和试试剂剂 研究内容与方法研究内容与方法一、一、全自全自动酶联免疫工作站系免疫工作站系统重复性和精密重复性和精密度的度的评估估。1）对阴性、弱阳性、中阳性和阴性、弱阳性、中阳性和强阳性阳性4种不同种不同浓度的度的样品各一品各一例例进行行复孔复孔检测；重复以上；重复以上检测6次。次。以以评价价该检测方法的精密度和重方法的精密度和重现性。性。计算每一个算每一个样品的品的CV值。 2
9、）设备单通道、多通道通道、多通道针对不同不同浓度度样本、不本、不同取同取样量的量的结果均一性的果均一性的评价。价。 研究内容与方法研究内容与方法二、不同疾病二、不同疾病组标本的本的检测结果和果和临床床意意义初步初步评价价研究对象：PBC 组 112例 HBV组77例 NC 组78例合计267例首都医科大学附属北京佑安医院1全自全自动酶联免疫工作站系免疫工作站系统重复性和精密度的重复性和精密度的评估估在6次重复检测中，分别对阴性（OD=0.032）、弱阳（OD=0.389）、中阳、（OD=0.752）和强阳（OD=2.027）4例不同抗体浓度的样品各一份进行复孔检测，以评价该检测方法的精密度和重
10、现性。表表1：不同：不同浓度度检测样本的本的SD和和CV值阴性弱阳性中阳性强阳性SDCV（%）SDCV（%）SDCV（%）SDCV（%）组内0.01340.0250.01320.074组间0.01340.0130.01550.052 结果结果结果结果2、 ADC ELISA 400设备单通道、多通道针对不同浓度样本、不同取样量的结果均一性比较：CV均5%；表明该设备的稳定性和重复性好。结果果-3抗抗AMA-M2AMA-M2抗体在抗体在不同疾病不同疾病组检测结果和果和评价价3组别例数抗AMA-M2抗体N阳性数（例）阳性率（）PBC11210089.3HBV感染者7745.2正常对照组7845.1
11、合计26710840.4表2:抗AMA-M2抗体在不同分组中的阳性率 不同疾病组中抗不同疾病组中抗AMA-M2阳性浓度值的分布阳性浓度值的分布高通量高通量ELISAELISA检测抗抗M2M2抗体抗体对于于PBCPBC诊断的敏感性断的敏感性（sensitivity）为89.3%。抗M2抗体对于PBC诊断的ROC曲线见图1，曲线下面积（areaundercurve,AUC）为0.980。 图图1、抗、抗M2抗体对于抗体对于PBC诊断的诊断的ROC曲线曲线2 结果-4 抗 AMA-M2 手工法与手工法与ELISA仪器法的比较评价仪器法的比较评价 结果-4 抗 AMA-M2 冻存与新鲜样本冻存与新鲜样
12、本ELISA仪器法的比较评价仪器法的比较评价 本研究的认识1.1.国产国产全自动酶联免疫工作站系统重复性和全自动酶联免疫工作站系统重复性和精密度的评估精密度的评估：加样稳定性、重复性均好。：加样稳定性、重复性均好。组内组间差异均较小。组内组间差异均较小。2.2.与国产试剂配套应用与临床常规，抗与国产试剂配套应用与临床常规，抗AMA-AMA-M2M2检测结果与疾病的符合率达到以往国内检测结果与疾病的符合率达到以往国内外的报道。外的报道。3.3.全自动酶联免疫全自动酶联免疫法可以达到系统化、标准法可以达到系统化、标准化，弥补手工法的一些缺陷。化，弥补手工法的一些缺陷。 本研究的认识本研究的认识系统
13、化检测使系统化检测使PBCPBC与病毒性肝炎在检测数值上与病毒性肝炎在检测数值上有了明显差异，期待有助于疾病的鉴别诊断。有了明显差异，期待有助于疾病的鉴别诊断。下一步：下一步：国产国产全自动酶联免疫工作站全自动酶联免疫工作站检测标准化检测标准化不同试剂间同样单位值有无可比性？不同试剂间同样单位值有无可比性？扩大病种病例观察检测数值对临床诊断与鉴扩大病种病例观察检测数值对临床诊断与鉴别诊断价值？别诊断价值？ELISAELISA系统化与免疫印迹法的比较系统化与免疫印迹法的比较卫生部医药卫生科技发展研究中心烟台艾德康生物科技有限公司上海科新生物公司北京佑安医院张海萍、赵丹彤、廖慧钰、李卓敏等致谢致谢
