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1、技能训练 常用培养基的制备 熟悉培养基制备的基本程序会制备常用的培养基 实训目标高压蒸气灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、量筒、漏斗、试管、培养皿、烧杯、三角烧瓶、等 仪器材料方法步骤（一）（一）肉汤培养基肉汤培养基（二）（二）琼脂培养基琼脂培养基（三）（三）半固体培养基半固体培养基（四）（四）血液琼脂培养基血液琼脂培养基制备制备培养基培养基 方法方法步骤步骤计算称量溶化调PH分装灭菌无菌检验备用 （一）（一）肉汤培养基肉汤培养基（二）（二）琼脂培养基琼脂培养基（三）（三）半固体培养基半固体培养基（四）（四）血液琼脂培养基血液琼脂培养基（一）肉汤培养基（一）肉汤培养基1成分 牛肉膏35g，蛋白胨
2、10g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。2制法 将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠加蒸馏水后，加热溶解。矫正pH至7.47.6，过滤分装。置高压蒸气灭菌器内，121.3灭菌20min即成。3用途 可供一般细菌生长，同时也是制作一般培养基的基础原料。供营养要求较高的细菌分离培养，亦可供溶血性的观察和保存菌种。（二）（二）固体固体琼脂培养基琼脂培养基1计算：计算： 1000 ml蒸馏水中应加营养琼脂粉31.3g，再根据培养基的需要量确定营养琼脂粉的用量。 营养琼脂粉的量=31.315n/1000 （g） 其中： 15代表一个平板需要营养琼脂约15 ml； n代表要做的培养基平板的数量 2称量：用普通天平准确
3、称量出营养琼脂粉的量，用量筒量出相应的 蒸馏水的量，要尽量准确。 3溶化：将营养琼脂粉和蒸馏水倒入搪瓷缸中，于电炉上加热溶化，边加热边搅拌，沸腾时立即从电炉上拿下，等泡沫消失后再放在电炉上加热，注意不能让琼脂溢出，煮沸23次。 4分装：倒平板或倒试管若做平板培养基应倒于培养皿中，每板约15ml左右，以刚好覆盖平皿底为易。若做斜面培养基应倒入试管中，量为试管的1/3包扎：包扎：包扎：包扎：加加加加塞塞塞塞后，试管通常每后，试管通常每后，试管通常每后，试管通常每7 7支一起，包上一层牛皮纸或两层报纸，支一起，包上一层牛皮纸或两层报纸，支一起，包上一层牛皮纸或两层报纸，支一起，包上一层牛皮纸或两层报
4、纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。灭菌时包牛皮纸灭菌时包牛皮纸灭菌时包牛皮纸灭菌时包牛皮纸5灭菌：用高压灭菌器灭菌包扎好，直立
5、放入内筒中，在121.3灭菌20-30min。灭菌完毕后，将平板培养基拿出平放于桌面，凝固前勿动；将试管培养基摆成斜面，凝固前勿动。 6无菌检验： 随机抽取几个平板或试管培养基于温箱中培养24小时，若无菌 生长则为合格。7备用：将合格的培养基放入冰箱，在0-4中保存备用。（三）半固体培养基（三）半固体培养基肉汤培养基中加入0.3%0.5%琼脂粉制成，用于菌种的保存或观察细菌的运动性。 （四）血液琼脂培养基（四）血液琼脂培养基将灭菌的营养琼脂冷至4550，以无菌操作，加入5%10%的无菌血液（或脱纤维血），然后倾注平皿或分装试管制成斜面。 课后作业1.写出实习报告；2.掌握普通营养琼脂培养基的制备过程
