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1、血脂及血浆脂蛋白测定n n血脂是血浆中的中性脂肪（TG和TC）和类脂（磷脂、糖脂、固醇、类固醇）的总称。 TG参与人体内能量代谢，而胆固醇主要用于合成细胞膜性物质、类固醇激素和胆汁酸血浆脂蛋白的分类n n1、乳糜微粒n n2、极低密度脂蛋白n n3、低密度脂蛋白n n4、高密度脂蛋白n n在病理状态下，在VLDL和LDL之间出现中间密度脂蛋白（IDL）。颗粒依次变小血浆脂蛋白的组成与结构载脂蛋白n n脂蛋白的蛋白部分称为载脂蛋白，具有结合与转运脂质及稳定脂蛋白结构的功能血浆脂蛋白的代谢n n甘油三酯的代谢途径胆固醇代谢途径胆固醇逆转运途径高脂蛋白血症WHO分型引起继发性高脂血症的病因n n1
2、、糖尿病 常表现为常表现为IVIV型高脂蛋白血症。（胰岛素型高脂蛋白血症。（胰岛素的缺乏，不仅促使肝脏生成的缺乏，不仅促使肝脏生成VLDLVLDL增加，而且因增加，而且因LPLLPL活性活性降低，导致降低，导致VLDLVLDL清除减少，主要表现为血清清除减少，主要表现为血清TGTG、VLDLVLDL水平升高，水平升高，TGTG严重升高者有发生急性胰腺炎的危险性。）严重升高者有发生急性胰腺炎的危险性。）n n2、甲减 常表现为IIa或IIb型高脂蛋白血症患者血TC水平升高可同时血TG水平升高（LPLLPL活力降低，活力降低，IDLIDL代谢障碍、代谢障碍、LDLLDL受体功能下降、血受体功能下降
3、、血浆浆LDLLDL清除减慢等）清除减慢等）n n3、肾脏疾病 肾病综合征时的高脂蛋白血症由脂蛋肾病综合征时的高脂蛋白血症由脂蛋白降解障碍和合成过多双重机制引起。白降解障碍和合成过多双重机制引起。高脂蛋白血症的因素n n4、药物：降压药，利尿剂，受体阻滞剂可TG 和HDL 长期应用糖皮质激素治疗可使TG、TC升高n n5、其他：肝胆系统疾病、胰腺炎、长期过量饮酒低脂蛋白血症表现n n1、家族性低-脂蛋白血症 （肝（肝脏脏LDLLDL受体上受体上调调，伴胆汁酸伴胆汁酸过过度合成，使血度合成，使血浆浆中中VLDLVLDL在在转转化化为为LDLLDL前已被前已被肝肝脏脏分解代分解代谢谢。）。）n n
4、2、-脂蛋白缺乏血症 （ApoB合成分泌缺陷，使含ApoB的脂蛋白如CM、VLDL、LDL合成代谢障碍，伴随脂肪吸收和代谢紊乱，血浆TC也非常低）血脂检测方法及临床意义n n总胆固醇(TC)n n甘油三酯(TG)n n高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)n n低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)n n载脂蛋白A1(ApoA1)n n载脂蛋白B(ApoB)总胆固醇（TC）n n化学测定法化学测定法n nL-BL-B（ALBKALBK）和）和ZakZak法法n nALBKALBK（美国（美国CDCCDC的脂类标准化实验室协同有关学术组织对的脂类标准化实验室协同有关学术组织对AbellAbell法法作了评价
5、和实验条件最适化）采用正己烷抽提，作了评价和实验条件最适化）采用正己烷抽提，L-BL-B显色显色n nAbell法（血清加入醇溶性氢氧化钾，使胆固醇从脂蛋白中分离（血清加入醇溶性氢氧化钾，使胆固醇从脂蛋白中分离出来，同时使胆固醇酯加水分解成游离胆固醇，加石油醚振摇、抽提，出来，同时使胆固醇酯加水分解成游离胆固醇，加石油醚振摇、抽提，使胆固醇移入石油醚层，分离并取一定量的石油醚层，蒸发至干，再使胆固醇移入石油醚层，分离并取一定量的石油醚层，蒸发至干，再进行进行Liebermann-Liebermann-BurchardBurchard 显色反应，显色反应，620nm620nm比色定量。该法可比色
6、定量。该法可用于基本功训练及组织细胞胆固醇的提取定量。用于基本功训练及组织细胞胆固醇的提取定量。）n n酶法酶法n nCEH-COD-PAPCEH-COD-PAP法（法（优点：灵敏度，精确度，线性范围宽。优点：灵敏度，精确度，线性范围宽。缺点：缺点：1.1.胆固醇酯酶对胆固醇酯水解不完全胆固醇酯酶对胆固醇酯水解不完全2.2.表面活性剂吐温表面活性剂吐温-40-40干干扰酯酶的作用扰酯酶的作用3.3.受还原性物质影响如尿酸，胆红素，受还原性物质影响如尿酸，胆红素，V VC C）CEH-COD-PAP法原理n n用胆固醇酯酶水解胆固醇酯生成脂肪酸和胆固醇，胆固醇被胆固醇氧化酶氧化生成4-胆淄烯酮和
7、过氧化氢，然后在过氧化物酶催化下，H2O2与4-氨基安替比林及酚结合，生成红色醌亚胺。醌亚胺的最大吸收峰在500nm左右，吸光度与标本中的胆固醇含量成正比。反应方程式如下：n n胆固醇酯+H2O 胆固醇+游离脂肪酸n n胆固醇+O24-胆甾烯酮+H2O2n n2H2O2+4-氨基安替比林+酚醌亚胺CEHCODPOD血清胆固醇参考范围n nTC5.20mmol/Ln n边缘升高：5.235.69mmol/Ln n升高：5.72mmol/L临床意义n nTC除了作为高胆固醇血症的诊断指标之外，不能作为其他任何疾病的诊断指标，对于动脉粥样硬化和冠心病而言，TC是一个明确的危险因子，与冠心病的发病率呈
8、正相关。n n影响TC水平的因素：1、年龄与性别，(上升)2、长期高胆固醇、高饱和脂肪酸、高热量的饮食3、遗传4、缺少运动，精神紧张等相关疾病n n高TC血症有原发和继发两类，原发的如家族性高胆固醇血症，家族性apoB缺陷症，多源性高TC，混合性高脂蛋白血症等，继发的见于肾病综合征，甲减，糖尿病，妊娠等。n n低TC血症原发和继发，原发如家族性无或低脂蛋白血症，继发如甲亢，营养不良，慢性消耗性疾病等。血清甘油三酯测定n n酶法测定n n磷酸甘油氧化酶法（灵敏度高，试剂稳定，线性范（灵敏度高，试剂稳定，线性范围比较宽）围比较宽）n n乳酸脱氢酶法（结果准确，灵敏度低，试剂不稳定）（结果准确，灵敏
9、度低，试剂不稳定）n n甘油氧化酶法（直接测定甘油的方法）磷酸甘油氧化酶法原理n n用脂蛋白酯酶（用脂蛋白酯酶（LPLLPL）使血清中）使血清中TGTG水解成脂肪酸水解成脂肪酸和甘油，甘油激酶（和甘油，甘油激酶（GKGK）及三磷酸腺苷（）及三磷酸腺苷（ATPATP）将甘油磷酸化，以磷酸甘油氧化酶（将甘油磷酸化，以磷酸甘油氧化酶（GPOGPO）氧化）氧化3-3-磷酸甘油（磷酸甘油（G-3-PG-3-P）产生）产生H H2 2OO2 2，最后以，最后以TrinderTrinder反应显色，反应显色，A500nmA500nm的值与的值与TGTG浓度成正浓度成正比比。n nTG+H2O甘油+脂肪酸n
10、n甘油+ATPG-3-P+ADPn nG-3-P+O2磷酸二羟丙酮+H2O2n nH H2 20 02 2+4-AAP+4-+4-AAP+4-氯酚氯酚苯醌亚胺非那腙苯醌亚胺非那腙+H+H2 2OO2 2甘油三酯临床意义n n原发性高TG血症多有遗传因素，包括家族性高TG血症与家族性型高脂蛋白血症等。继发性高TG血症见于糖尿病，糖原累积病，甲减，肾病综合征，妊娠，口服避孕药，酗酒等。富含TG的脂蛋白是冠心病的独立的危险因子，TG增加表明患者存在代谢综合征，需进行治疗。甘油三酯降低很少见，甲亢，肾上腺皮质功能减退和肝功能严重损伤时可以见到甘油三酯降低。甘油三酯的参考范围n nTG1.70mmol/
11、Ln n升高：1.70mmol/L血清脂蛋白测定n nHDL-C测定n nLDL-C测定HDL-C测定方法及原理n nHDL直接测定法分三类n n1、聚乙二醇/抗体包裹法n n2、酶修饰法n n3、选择性抑制法（国内应用最多）选择性抑制法原理n n分两步：第一试剂用聚阴离子及分散型表面活性剂（反应抑制剂），后者与LDL、VLDL、CM表面的疏水基团有高度亲和力，吸附在这些脂蛋白表面形成掩蔽层，但不发生沉淀，能抑制这类脂蛋白中的胆固醇与酶试剂反应。第二试剂含胆固醇测定酶及具有对HDL表面的亲水基团有亲和力的表面活性剂（反应促进剂），使酶与HDL中的胆固醇起反应HDL临床意义n nHDL-C与冠心
12、病发病呈负相关，HDL-C低于0.9mmol/L是冠心病危险因素。HDL-C大于1.55mmol/L被认为是冠心病的“负”危险因素。n nHDL-C降低多见于脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高TG血症往往伴以低HDL-C，肥胖者的HDL-C也多偏低。吸烟减低，适量饮酒、长期体力劳动和运动会使HDL-C升高。HDL-C参考范围n nHDL-C1.04mmol/Ln n减低：0.91mmol/LLDL测定方法及原理n n直接匀相法n n一类是以-环糊精、硫酸葡聚糖、聚氧乙烯-聚氧丙烯封闭共聚多醚（POE-POP），抑制非LDL脂蛋白以胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶的反应（选择性抑制），从而使LDL-
13、C被酶水解并测定。n n另一类是以不同的表面活性剂的双试剂使非LDL-C与LDL-C分两步水解，因先消除非LDL-C而被称为消除法，（目前应用较广的）LDL临床意义n nLDL-C增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因素。由于TC水平同时也受HDL-C水平影响，所以最好以LDL-C代替TC作为冠心病危险因素指标。LDL-C的参考范围n nLDL-C3.12mmol/Ln n边缘升高：3.153.61mmol/Ln n升高：3.64mmol/L血清载脂蛋白测定n n免疫散射比浊法n n免疫透射比浊法临床意义n nApoA1是HDL的主要结构蛋白，ApoB是LDL的主要结构蛋白，因此，可以反映
14、HDL/LDL的含量。在某些病理情况下，ApoA1与HDL和ApoB与LDL并非成正相关，同时测定载脂蛋白和脂蛋白对病理发生状态的分析很有帮助。冠心病、肾病综合征、糖尿病等都有ApoA1下降和ApoB升高。临床上常将ApoA1和ApoB比值作为冠心病的危险指标。载脂蛋白参考值n nApoA1：1.001.5g/Ln nApoB ：0.81.00g/L糖的来源与去路葡萄糖的测定n n葡萄糖氧化酶法（首选方法）n n己糖激酶法n n葡萄糖脱氢酶法葡萄糖氧化酶法原理n n葡萄糖氧化酶（GOD）将葡萄糖水解为葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶（POD）和色素原性氧受体存在下，将过氧化氢分解为水和氧，
15、同时使色素原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trider反应。其色泽深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。n n葡萄糖葡萄糖+O2+H2O+O2+H2O葡萄糖酸内酯葡萄糖酸内酯+H2O2+H2O2n n2H2O2+4-2H2O2+4-氨基安替比林氨基安替比林+酚酚红色醌类化合物红色醌类化合物血糖的临床意义n n生理性或暂时性增高：餐后，摄入高糖饮食，情绪激动等n n病理性高血糖：糖尿病甲亢，肾上腺皮质功能亢进等应激性高血糖，如颅脑损伤，颅内压增高等脱水引起的血液浓缩，如呕吐、腹泻、高热等严重的肝硬化不能使糖转化为肝糖原储存胰腺病变血糖的临床意义n n生理性或暂时性低血糖
16、饥饿和剧烈运动等n n病理性低血糖 可见于胰岛细胞增生或肿瘤引起的胰岛素分泌过多、严重肝病不能调节血糖。n n药物的影响血糖升高的药物：口服避孕药，儿茶酚胺，咖啡因，甲状腺素，肾上腺素等血糖降低的药物：降糖药，酒精，普萘洛尔等血糖参考值n n成人：3.95.9mmol/L糖耐量实验n n口服葡萄糖耐量试验口服葡萄糖耐量试验n n适应症：适应症：n n空腹血糖水平在临界值（空腹血糖水平在临界值（67mmol/L67mmol/L）而又疑）而又疑为糖尿病患者为糖尿病患者n n空腹或餐后血糖正常，但有发展为糖尿病可能的空腹或餐后血糖正常，但有发展为糖尿病可能的人群人群n n以前耐量试验异常的人群以前耐
17、量试验异常的人群n n妊娠性糖尿病的诊断妊娠性糖尿病的诊断n n临床上出现肾病，神经病变，视网膜病无法给出临床上出现肾病，神经病变，视网膜病无法给出解释的解释的WHO标准化的OGTTn n1.1.实验前三天，受试者每日食物中糖含量应不低实验前三天，受试者每日食物中糖含量应不低于于150g150g，且维持正常活动。，且维持正常活动。n n2.2.影响药物应在三天前停用，空腹影响药物应在三天前停用，空腹10-1610-16小时。小时。n n3.3.坐位去血后坐位去血后5 5分钟内饮入分钟内饮入250ml250ml含含75g75g无水葡萄无水葡萄糖的糖水。（妊娠妇女为糖的糖水。（妊娠妇女为100g100g，儿童按，儿童按1.75g/kg1.75g/kg体重给予，最大不超过体重给予，最大不超过75g75g）n n4.4.服糖后，半小时取血一次，共四次服糖后，半小时取血一次，共四次n n5.5.试验中不能吸烟，喝酒，喝茶或进食。试验中不能吸烟，喝酒，喝茶或进食。n n6.6.于采血同时，每隔一小时留取尿液作尿糖试验于采血同时，每隔一小时留取尿液作尿糖试验参考值n n1.空腹血糖6.1mmol/Ln n2.服糖后30-60分钟升高达峰值10mmol/Ln n3.服糖后2小时内恢复至空腹血糖水平n n4.各时间的尿糖均为阴性。
