药物的杂质检查5

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1、第三章第三章 药物的杂质检查药物的杂质检查基本要求基本要求第二节第二节 杂质的检查方法杂质的检查方法第三节第三节 一般杂质的检查方法一般杂质的检查方法返回主目录返回主目录第一节第一节 概述概述练习与思考练习与思考第四节第四节 特殊杂质的检查与鉴定方法特殊杂质的检查与鉴定方法药物的杂质检查(5)基本要求基本要求一、掌握一般杂质检查的原理、方法和计算。一、掌握一般杂质检查的原理、方法和计算。二、熟悉特殊杂质检查的方法和原理。二、熟悉特殊杂质检查的方法和原理。三、了解热分析在药物分析中的应用。三、了解热分析在药物分析中的应用。返 回药物的杂质检查(5)一、药物的纯度要求一、药物的纯度要求1 1药物纯

2、度的药物纯度的概念概念：药物的纯度是指药物的纯净程度。：药物的纯度是指药物的纯净程度。2. 2. 药物纯度的药物纯度的要求要求是不断提高：是不断提高： 例如：度冷丁例如：度冷丁19481948年收入年收入BPBP，19701970年经年经GCGC分离鉴定出两种分离鉴定出两种 无效异构体（无效异构体（）和（）和（），有时高达），有时高达20%20%30%30%。 再如：再如：ASAASA中除了中除了SASA外，还存在乙酰水酸酐、乙酰水杨酰水外，还存在乙酰水酸酐、乙酰水杨酰水 杨酸等杨酸等SASA的衍生物，具有致敏作用。的衍生物，具有致敏作用。 第一节第一节 概述概述药物的杂质检查(5)杂质（im

3、purities）是指：1.有毒副作用的物质：砷盐、重金属砷盐、重金属2.本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效的物质：水分水分3.本身无毒副作用，也不影响药物的稳定性和疗效，但影响药物的科学管理的物质，如一般杂质检查中的氯化物，少量的氯离子为什么还要进行检查呢？药物的杂质检查(5)二、药物中杂质的来源二、药物中杂质的来源1.生产过程中引入（1）原料、反应中间体及副产物（2）试剂、溶剂、催化剂类（3）生产中所用金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质药物的杂质检查(5)如阿司匹林以苯酚为原料生产，产品如阿司匹林以苯酚为原料生产，产品中可能存在苯酚、水杨酸、醋酸苯酯、水中可能存在

4、苯酚、水杨酸、醋酸苯酯、水杨酸苯酯、乙酰水杨酸苯酯等杂质。杨酸苯酯、乙酰水杨酸苯酯等杂质。制备工艺：制备工艺：药物的杂质检查(5)制剂过程中可能产生新物质制剂过程中可能产生新物质如：如： 制备过程中加热灭菌制备过程中加热灭菌盐酸普鲁卡因注射剂盐酸普鲁卡因注射剂 进一步脱羧转化进一步脱羧转化对氨基苯甲酸对氨基苯甲酸 苯胺苯胺 引起毒性反应引起毒性反应杂质的来源杂质的来源药物的杂质检查(5)2.贮藏过程中产生水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等如麻醉乙醚、利血平如麻醉乙醚、利血平药物的杂质检查(5)易发生水解反应的结构：易发生水解反应的结构： 酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类酯、内酯

5、、酰胺、卤代烃、苷类等等易发生氧化反应的结构：易发生氧化反应的结构： 醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、双键等双键等药物的杂质检查(5)问题1：在药物生产过程中引入杂质的途径为A.原料不纯或部分未反应完全的原料造成B.合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成C.需加入的各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等造成D.所用金属器皿及装置等引入杂质E.由于操作不妥，日光曝晒而使产品发生分解引入的杂质药物的杂质检查(5)例例2、药物及其制剂的成分中不属于杂、药物及其制剂的成分中不属于杂质范畴的是质范畴的是A、药物中的残留溶剂、药物中的残留溶剂B、药物中的多晶型、药物中的多晶型C

6、、药物合成中的副产物、药物合成中的副产物D、阿司匹林中的游离水杨酸、阿司匹林中的游离水杨酸E、维生素、维生素AD胶丸中的植物油胶丸中的植物油药物的杂质检查(5)三、杂质的分类三、杂质的分类1.药物中的杂质按来源分为1).一般杂质：如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。一般杂质其检查方法收载在中国药典的附录中。药物的杂质检查(5)2).特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。药物的杂质检查(5)2.按化学类别和特性分类按化

7、学类别和特性分类3.按毒性分类按毒性分类无机杂质、有机杂质、有机挥发无机杂质、有机杂质、有机挥发性杂质性杂质信号杂质、毒性杂质信号杂质、毒性杂质药物的杂质检查(5)问问题题：中中国国药药典典（2010年年版版）中中规规定定的一般杂质检查中不包括的项目是的一般杂质检查中不包括的项目是A.硫酸盐检查B.氯化物检查C.溶出度检查D.重金属检查E.砷盐检查药物的杂质检查(5)四、药物的纯度与化学试剂的纯度四、药物的纯度与化学试剂的纯度药物的纯度考虑杂质的生理作用，药品只有两个等级：合格或不合格。化学试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯（GR）、分析纯（AR）、化学纯（CP）、色谱纯、光谱纯。药物的杂质检

8、查(5)第三章第三章例如：硫酸钡（例如：硫酸钡（BaSO4）试剂规格试剂规格 对可溶性钡盐不做检查对可溶性钡盐不做检查. . 检查：检查：氯化物、铁、灼烧失重等氯化物、铁、灼烧失重等药用规格药用规格 如存在可溶性如存在可溶性钡盐则导致钡盐则导致 医疗事故医疗事故. . 检查：检查：酸溶性钡盐、重金属、砷盐等酸溶性钡盐、重金属、砷盐等 化学试剂不能代替药品使用化学试剂不能代替药品使用药物的杂质检查(5)例.临床所用药物的纯度与化学品及试剂纯度的主要区别是A.所含杂质的生理效应不同B.所含有效成分的量不同C.所含杂质的绝对量不同D.化学性质及化学反应速度不同E.所含有效成分的生理效应不同药物的杂质

9、检查(5)四、杂质限量四、杂质限量指药物中允许杂质存在的最大量，通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示杂质量杂质量 杂质限量杂质限量 杂质量杂质量药品合格药品合格药品不合格药品不合格药物的杂质检查(5)1.对照法限量检查法（LimitTest）特点：不需知道杂质的准确含量药物的杂质检查(5)供试品供试品供试液供试液对照品对照品对照液对照液平行操作平行操作色斑色斑比较比较色斑色斑颜色颜色比色比色浑浊浑浊比浊比浊杂质最大杂质最大允许量允许量药物的杂质检查(5)2.灵敏度法系指在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下，不得有正反应出现。特点：不需对照品药物的杂质检查(5)3.比较法测定特定待检杂

10、质的参数与规定的限量比较，不得更大，如测定吸收度、pH值等。特点：不需对照品药物的杂质检查(5) 杂质限量的计算杂质限量的计算药物的杂质检查(5)药物的杂质检查(5)对乙酰胺基酚中氯化物的检查：取对乙酰胺基酚中氯化物的检查：取本品本品2.0g，加水，加水100ml，加热溶解后，冷，加热溶解后，冷却，滤过，取滤液却，滤过，取滤液25ml，依法检查，与，依法检查，与标准氯化钠溶液标准氯化钠溶液5.0ml（每（每1ml相当于相当于10ug的的Cl）制成的对照液比较，浊度不得）制成的对照液比较，浊度不得更大。问氯化物限量为多少？更大。问氯化物限量为多少？药物的杂质检查(5)问题：检查某药物中的砷盐，取

11、标准砷溶液2ml（每1ml相当于1g的As）制备标准砷斑，砷盐限量为0.0001，应取供试品的量为A.0.20gB.2.0gC0.020gD.1.0gE.0.10g药物的杂质检查(5)已知：c1g/ml1106g/mlV2mlL0.0001%药物的杂质检查(5)问题：检查维生素C中的重金属时，若取样量为1.0g，要求含重金属不得过百万分之十，问应吸取标准铅溶液（每1ml0.01mg的Pb）多少ml？A.0.2mlB.0.4mlC2mlD.1mlE.20ml药物的杂质检查(5)药物的杂质检查(5)98：87、药物纯度合格是指、药物纯度合格是指A、含量符合药典的规定、含量符合药典的规定B、符合分析

12、纯的规定、符合分析纯的规定C、绝对不存在杂质、绝对不存在杂质D、对病人无害、对病人无害E、不超过该药物杂质限量、不超过该药物杂质限量的规定的规定药物的杂质检查(5)例例1、药物中含有超过限量的杂质，、药物中含有超过限量的杂质，就可能使就可能使A、理化常数超过规定范围、理化常数超过规定范围B、外观发生变化、外观发生变化C、含量偏低或活性降低、含量偏低或活性降低D、毒副作用增加、毒副作用增加E、鉴别反应不明显、鉴别反应不明显药物的杂质检查(5)例例2、称取柠檬酸钠、称取柠檬酸钠2.0g，加水溶解，加稀，加水溶解，加稀醋酸醋酸10mI与水适当使成与水适当使成25ml，依规，依规定方法检查重金属，与定

13、方法检查重金属，与1.0ml标准铅标准铅溶液（溶液（10 g/ml）用同法制成的对照）用同法制成的对照液比较，不得更深。重金属限量应为液比较，不得更深。重金属限量应为A、2ppmB、4ppmC、5ppmD、百万分之三、百万分之三E、百万分之十、百万分之十药物的杂质检查(5) 第二节第二节 杂质的检查方法杂质的检查方法一、杂质的研究规范一、杂质的研究规范（一）有机杂质在质量标准中的项目名称（一）有机杂质在质量标准中的项目名称1.以杂质的名称作为项目名称以杂质的名称作为项目名称药物的杂质检查(5)中国药典（中国药典（2010）收载硝苯地平有）收载硝苯地平有关物质中杂质关物质中杂质、杂质、杂质药物的

14、杂质检查(5)2.以某类杂质的总称作为项目名称以某类杂质的总称作为项目名称杂质结构不明确，如硝酸毛果芸香碱中的杂质结构不明确，如硝酸毛果芸香碱中的“其他生物碱其他生物碱”3.以检测方法作为项目名称以检测方法作为项目名称杂质结构未知，也没有具体类别；如杂质吸光度杂质结构未知，也没有具体类别；如杂质吸光度溶液透光率溶液透光率药物的杂质检查(5)(二）杂质检查项目的确定二）杂质检查项目的确定由质量研究和稳定性研究中检出的，并在由质量研究和稳定性研究中检出的，并在批量生产中出现的杂质和降解产物。批量生产中出现的杂质和降解产物。根据其起始原料、生产工艺及稳定性情况根据其起始原料、生产工艺及稳定性情况确定

15、。确定。药物的杂质检查(5)（三）杂质限度的确定（三）杂质限度的确定药物的杂质检查(5)药物的杂质检查(5)药物的杂质检查(5)药物的杂质检查(5)药物的杂质检查(5)药物的杂质检查(5)（二）、化学性质的差异（二）、化学性质的差异（一）、物理性质的差异（一）、物理性质的差异二二 杂质常用的检查方法杂质常用的检查方法（三）、光学性质的差异（三）、光学性质的差异（四）、色谱性质的差异（四）、色谱性质的差异药物的杂质检查(5) u臭味及挥发性差异臭味及挥发性差异u颜色差异颜色差异u溶解行为差异溶解行为差异u旋光性质的差异旋光性质的差异u对光吸收性质的差异对光吸收性质的差异u吸附或分配性质的差异吸附

16、或分配性质的差异一一物物理理性性质质差差异异药物的杂质检查(5) 2.杂质无挥发性杂质无挥发性利用药物在室温或加热挥发后利用药物在室温或加热挥发后,遗遗留残渣于一定温度加热至恒重留残渣于一定温度加热至恒重,其重其重量不得超过规定量不得超过规定.例：例：乙醇中不挥发物的检查乙醇中不挥发物的检查.(一一)嗅味及挥发性差异嗅味及挥发性差异1.杂质有特殊气味：杂质有特殊气味：例：例：乙醇中的杂醇油（异臭）乙醇中的杂醇油（异臭）一一物物理理性性质质差差异异药物的杂质检查(5) 药物药物自身无色自身无色 生产中引入有色的有关物质生产中引入有色的有关物质或分解产物或分解产物. . 例：例：磺胺嘧啶磺胺嘧啶原

17、料药颜色检查原料药颜色检查取本品2.0g,加氢氧化钠试液10ml溶解后，加水至25ml，溶液应澄清无色；如显色，与黄色3号标准比色夜比较，不得更深。 磺胺苯环上胺基被氧化生成磺胺苯环上胺基被氧化生成有色偶氮苯化合物有色偶氮苯化合物. .(二二)颜色差异颜色差异一一物物理理性性质质差差异异药物的杂质检查(5) 根据药物与杂质溶解度的差异根据药物与杂质溶解度的差异例：葡萄糖中糊精的检查例：葡萄糖中糊精的检查(三三)溶解行为的差异溶解行为的差异一一物物理理性性质质差差异异药物的杂质检查(5) 1.药物有旋光度而杂质没有药物有旋光度而杂质没有例例:黄体酮在乙醇中黄体酮在乙醇中+186+198(四四)旋

18、光性质的差异旋光性质的差异2.杂质有旋光度而药物没有杂质有旋光度而药物没有例例:硫酸阿托品中莨菪碱的检查硫酸阿托品中莨菪碱的检查,供试供试品水溶液品水溶液50mg/mL不得过不得过-0.4一一物物理理性性质质差差异异药物的杂质检查(5) 1 1 酸碱性的差异酸碱性的差异例：苯巴比妥中苯基丙二酰脲检查例：苯巴比妥中苯基丙二酰脲检查, ,甲基橙不得显红色甲基橙不得显红色2 2 氧化还原性的差异氧化还原性的差异 例：氯化物中碘化物检查例：氯化物中碘化物检查供试品与含亚硝酸钠的淀粉指示剂不得显蓝。供试品与含亚硝酸钠的淀粉指示剂不得显蓝。 Cl Cl的氧化电位高的氧化电位高(1.35)(1.35)不能被

19、氧化为不能被氧化为ClCl2 2. . I I- -的氧化电位低的氧化电位低(0.53)(0.53)能被氧化为能被氧化为I I2 2 二二化化学学性性质质差差异异药物的杂质检查(5) 3 3 杂质与一定试剂反应产生沉淀杂质与一定试剂反应产生沉淀 间苯二酚中邻苯二酚检查间苯二酚中邻苯二酚检查4 4 杂质与一定试剂反应产生颜色杂质与一定试剂反应产生颜色 AspirinAspirin中游离水杨酸的测定中游离水杨酸的测定5 5 杂质与一定试剂反应产生气体杂质与一定试剂反应产生气体 盐酸乙基吗啡中胺盐检查盐酸乙基吗啡中胺盐检查. .二二化化学学性性质质差差异异药物的杂质检查(5)检查原理检查原理紫堇色（

20、有酚羟基）紫堇色（有酚羟基）阿司匹林阿司匹林+Fe3+（无酚羟基）（无酚羟基）水杨酸水杨酸+Fe3+AspirinAspirin中游离水杨酸的测定中游离水杨酸的测定水杨酸鉴别反应水杨酸鉴别反应药物的杂质检查(5)色谱法色谱法(一一)薄层色谱法薄层色谱法(TLC)(二二)高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)(三三)气相色谱法气相色谱法(GC)三三色色谱谱行行为为差差异异药物的杂质检查(5)根据药物与杂质对吸附根据药物与杂质对吸附剂的吸附或对展开剂的解析剂的吸附或对展开剂的解析能力不同能力不同(Rf值的差异值的差异),加加以分离和检查以分离和检查.(一一)薄层色谱法薄层色谱法(TLC)三三色色

21、谱谱行行为为差差异异药物的杂质检查(5)本法灵敏、简便、快速；本法灵敏、简便、快速；不需特殊的设备、费用低；不需特殊的设备、费用低；分离和鉴定同步进行分离和鉴定同步进行.1.TLC法特点法特点三三色色谱谱行行为为差差异异药物的杂质检查(5)1) 1) 杂质对照品法杂质对照品法适用于杂质已知并有杂质适用于杂质已知并有杂质对照品的情况对照品的情况.方法方法根据杂质限量根据杂质限量,取供试品溶取供试品溶液和一定浓度的杂质对照品溶液液和一定浓度的杂质对照品溶液,分别点于同一薄层板上展开分别点于同一薄层板上展开,定位定位后进行检查后进行检查.三三色色谱谱行行为为差差异异2. 2. TLC法法应用应用药物

22、的杂质检查(5)供试品对照品判判断断：供试品中所含杂质斑点不得超过相应的杂质对照斑点优优点点：同一物质，同一Rf值比较，准确度高、直观性强；缺点：缺点：需要杂质对照品。药物的杂质检查(5)适用于杂质的结构不适用于杂质的结构不能确定或无杂质对照品的能确定或无杂质对照品的情况情况. .2) 2) 供试品溶液自身稀释对照法供试品溶液自身稀释对照法三三色色谱谱行行为为差差异异2. 2. TLC法法应用应用药物的杂质检查(5)例：氢化可的松中例：氢化可的松中“其他甾体其他甾体”检检查查供试液供试液:3mg/ml对照液对照液:60 g/ml(供试液稀释供试液稀释50倍倍)判断判断:供试液的杂质斑点数供试液

23、的杂质斑点数 3个个,且供试液的杂质斑点颜色且供试液的杂质斑点颜色 对照液主对照液主斑点颜色斑点颜色.仅限于杂质斑点颜色与主成分斑点颜仅限于杂质斑点颜色与主成分斑点颜色相同或相近色相同或相近药物的杂质检查(5)优点：优点：以供试品的稀溶液作为对照液，以供试品的稀溶液作为对照液，不需要杂质对照品，简单、价不需要杂质对照品，简单、价廉，还可配成几种限量的对照廉，还可配成几种限量的对照溶液溶液缺点：缺点：不同物质，不同不同物质，不同Rf值的比较，值的比较，准确度差、直观性差准确度差、直观性差药物的杂质检查(5) 选用质量符合规定的与供选用质量符合规定的与供试品相同的药物作为对照品试品相同的药物作为对

24、照品.3)对照药物法对照药物法三三色色谱谱行行为为差差异异药物的杂质检查(5)样（1)5mg/ml对(3)5mg/ml样（2)0.2mg/ml马来酸麦角新碱中马来酸麦角新碱中有关物质的检查有关物质的检查判断：）主斑点颜色与位置判断：）主斑点颜色与位置应与）主斑点颜色与位置一致，应与）主斑点颜色与位置一致，所显杂质斑点颜色不得深于）所显杂质斑点颜色不得深于）中对应的杂质斑点，并不得有）中对应的杂质斑点，并不得有）以外的杂质斑点；以外的杂质斑点；）除主斑点外，不得显）除主斑点外，不得显任何杂质斑点。任何杂质斑点。药物的杂质检查(5) 4)杂质对照品与供试品溶液自杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照法

25、并用身稀释对照法并用当药物中存在多个杂志，当药物中存在多个杂志，有杂质对照品的采用杂质对照有杂质对照品的采用杂质对照品法检查，没有的则采用供试品法检查，没有的则采用供试品溶液自身稀释对照法检查。品溶液自身稀释对照法检查。药物的杂质检查(5) 根据供试品与杂质的对照品根据供试品与杂质的对照品保留时间保留时间相同相同测定各杂质峰面积测定各杂质峰面积.(二二)高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)特点特点 分离效能高、应用范围广，分离效能高、应用范围广，能准确、快速、分离分析同时进行能准确、快速、分离分析同时进行三三色色谱谱行行为为差差异异药物的杂质检查(5)中国药典规定中国药典规定正文各品种项下

26、的正文各品种项下的HPLC条件条件不得任意改变不得任意改变固定相种类、固定相种类、流动相组分、检测器类型流动相组分、检测器类型可适当改变可适当改变色谱柱内径、长度、色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速固定相牌号、载体粒度、流动相流速和比例、柱温、进样量、灵敏度和比例、柱温、进样量、灵敏度药物的杂质检查(5)、系统适用性试验、系统适用性试验ChP每次检测前，应对仪器进每次检测前，应对仪器进适用性试验，应达到规定要求适用性试验，应达到规定要求理论板数理论板数（n）分离度分离度（R）重复性重复性（RSD）拖尾因子拖尾因子（T）药物的杂质检查(5)（一）理论板数（一）理论板数（n）如测得

27、如测得n低于规定，应改变柱长低于规定，应改变柱长或载体性能、重填色谱柱等以求达到或载体性能、重填色谱柱等以求达到药物的杂质检查(5)（二）分离度（二）分离度（R）除另有规定外，除另有规定外，R1.5药物的杂质检查(5)药物的杂质检查(5)（三）重复性（三）重复性（RSD）15峰面积峰面积33校正因子校正因子RSD2.0%药物的杂质检查(5)（四）拖尾因子（四）拖尾因子（T）除另有规定外，除另有规定外，T应应0.951.05药物的杂质检查(5)1.内标法加校正因子测定供试品中某个杂质的含量准确测定杂质含量方法内标+杂质对照品溶液，进样，测定，计算校正因子药物的杂质检查(5)内标物内标物+杂质对照

28、品杂质对照品校正因子校正因子内标物内标物+样品样品杂质含量杂质含量药物的杂质检查(5)供试品+内标供试品溶液，进样，测定杂质和内标峰面积或峰高，计算杂质量药物的杂质检查(5)2.外标法测定供试品中某个杂质的量供试品供试品溶液杂质对照品对照品溶液进样，测定，计算杂质的含量缺点：不易准确控制进样量，宜用定量环进样药物的杂质检查(5)药物的杂质检查(5)3.加校正因子的主成分自身对照法方法将校正因子载入药品质量标准将校正因子载入药品质量标准药物的杂质检查(5)分别进样，测定供试品溶液中各杂质峰面积分别进样，测定供试品溶液中各杂质峰面积及其总和，分别乘以相应的校正因子后与对照及其总和，分别乘以相应的校

29、正因子后与对照溶液主成分峰面积比较，计算供试品中杂质的溶液主成分峰面积比较，计算供试品中杂质的量。量。药物的杂质检查(5)例：检查红霉素中红霉素例：检查红霉素中红霉素B、C组分及有组分及有关物质。关物质。判断：判断：红霉素红霉素B峰（峰（0.7）和红霉素）和红霉素C（1.0）峰校）峰校正后的峰面积均不得大于对照液主峰面积正后的峰面积均不得大于对照液主峰面积（5.0%）红霉素稀醇醚校正后的峰面积不得大于对照溶红霉素稀醇醚校正后的峰面积不得大于对照溶液主峰面积的液主峰面积的3/5(3.0%)其他单个杂质峰面积的和不得大于对照溶液主其他单个杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（峰面积（5.0%）药

30、物的杂质检查(5)4.不加校正因子的主成分自身对照法杂质峰面积与主成分峰面积相差悬殊时应用。方法药物的杂质检查(5)分别进样，测定供试品溶液中各杂质峰面积，与对照溶液主成分峰面积比较，计算供试品中杂质的量。优点：不需杂质对照品，可同时控制各个杂质及其总量限度缺点：缺点：检测波长处，各杂质和药物的检测波长处，各杂质和药物的吸收强度可能有差异，准确度差吸收强度可能有差异，准确度差药物的杂质检查(5)例：氧氟沙星中有关物质的检查判断：供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积（质峰面积不得大于对照溶液主峰面积（0.2%）各杂质峰面积的

31、和不得大于对照溶液主峰面积各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的的2.5倍。倍。药物的杂质检查(5)5.峰面积归一化法取一定量供试品溶液进样，测定各杂质及药物的峰面积，计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积的百分率，不能超过限量。注意溶剂峰不应计算在总峰面积内。药物的杂质检查(5)药物的杂质检查(5)例如：利巴韦林中有关杂质的检查：例如：利巴韦林中有关杂质的检查：对照品液对照品液(5g/ml)进样进样10l,调灵敏度，调灵敏度，使主峰达满量程的使主峰达满量程的20%25%样品液样品液(0.4mg/ml)进样进样10l,杂质杂质Ai(Ai+A主主）的的1.0%药物的杂质检查(5)优点：不需杂质对

32、照品，简便易行。缺点：检测波长处，各杂质和药物的吸收强度可能有差异，控制杂质峰面积百分率不一定就是杂质限量，准确度差，适用于粗略测量供试品中杂质的含量。药物的杂质检查(5)(三三)气相色谱法气相色谱法(GC)用于药物中挥发性杂质用于药物中挥发性杂质的检查的检查, , 如药物中残留溶剂、如药物中残留溶剂、农药残留量等农药残留量等. .三三色色谱谱行行为为差差异异(四四)毛细管电泳法毛细管电泳法(HPCE)用于酶类药物中酶类杂用于酶类药物中酶类杂质的检查，方法与质的检查，方法与HPLCHPLC相同。相同。药物的杂质检查(5)(一一)紫外分光光度法紫外分光光度法(二二)可见分光光度法可见分光光度法

33、（三）红外光谱法（三）红外光谱法 （四）荧光分析法（四）荧光分析法四四光光谱谱行行为为差差异异光谱法光谱法药物的杂质检查(5)肾上腺素肾上腺酮（一）紫外分光光度法（一）紫外分光光度法利用药物和待检杂质对光利用药物和待检杂质对光选择吸选择吸收性质的差异进行收性质的差异进行 例例: 肾上腺素中肾上腺酮的检查肾上腺素中肾上腺酮的检查四四光光谱谱行行为为差差异异药物的杂质检查(5) 例例: 肾上腺素中肾上腺酮的检查肾上腺素中肾上腺酮的检查药物的杂质检查(5)规定：规定：A A310nm310nm0.050.05方方法法限量计算限量计算杂质限量杂质限量 % % = =10012/1000100= 0.0

34、554530.05 例例: 肾上腺素中肾上腺酮的检查肾上腺素中肾上腺酮的检查肾上腺酮的肾上腺酮的C(g/100mL)=A/EC(g/100mL)=A/E1%1%1cm1cm药物的杂质检查(5)（三）红外分光光度法（三）红外分光光度法主要用于药物中无效或低效晶型的检查。某些主要用于药物中无效或低效晶型的检查。某些多晶型药物由于其晶型结构不同，一些化学键的键长、多晶型药物由于其晶型结构不同，一些化学键的键长、键角等发生不同程度的变化，从而导致红外吸收光谱键角等发生不同程度的变化，从而导致红外吸收光谱中某些特征峰的频率、峰形和强度出现显著差异。利中某些特征峰的频率、峰形和强度出现显著差异。利用这些差

35、异，可以检查药物中低效（或无效）晶型杂用这些差异，可以检查药物中低效（或无效）晶型杂质，结果可靠，方法简便。质，结果可靠，方法简便。药物的杂质检查(5)药物的杂质检查(5)（四）荧光分析法（四）荧光分析法药物的杂质检查(5)五五热分析法热分析法热分析法是在程序控制温度下，热分析法是在程序控制温度下，精确记录待测物质理化性质与温度的精确记录待测物质理化性质与温度的关系，研究其受热过程所发生的晶型关系，研究其受热过程所发生的晶型转变、熔融、升华、吸附等物理变化转变、熔融、升华、吸附等物理变化和脱水、热分解、氧化还原等化学变和脱水、热分解、氧化还原等化学变药物的杂质检查(5)化，对物质进行物理常数（

36、如熔点和化，对物质进行物理常数（如熔点和沸点）的确定、鉴别和纯度检查的方沸点）的确定、鉴别和纯度检查的方法。法。亦可用于药物的稳定性研究及制亦可用于药物的稳定性研究及制剂辅料的优选剂辅料的优选药物的杂质检查(5)1.热重法热重法（TGA）热重法是在程序控制温度下，测量物质质量与温度关系的一种技术。记录质量变化对温度的关系曲线即热重曲线。热重曲线的纵坐标为质量(m)，横坐标为温度(T)或时间(t)。药物的杂质检查(5)m药物的杂质检查(5)药物的杂质检查(5)本本法法适适用用于于药药物物结结晶晶水水的的测测定定和和贵贵重重药药物物或或在在空空气气中中极极易易氧氧化化药药物物的的干干燥失重分析。燥

37、失重分析。特点：准确测量物质的质量变化及变化速度、样品用量少、速度快药物的杂质检查(5)2.差热分析法差热分析法（DTA）差热分析法是在程序控制温度下，测量待测物质和参比物之间的温度差（T）与温度(或时间)之间的关系的一种技术。药物的杂质检查(5)差热分析曲线记录的纵坐标为样品与参比物的温度差(T)，T与热容量差(CRCs)成正比，横坐标为温度。药物的杂质检查(5)T差热分析曲线差热分析曲线无反应无反应吸热反应吸热反应药物的杂质检查(5)本法可鉴别药物或其多晶形，可检查药物的纯度药物的杂质检查(5)药物的杂质检查(5)3.差示扫描量热法差示扫描量热法（DSC）差示扫描量热法是在程序控制温度下，

38、测量输给待测物质和参比物的能量差与温度(或时间)关系的一种技术。药物的杂质检查(5)本法可鉴别药物或其多晶形、纯度检查以及熔点和水分等的测定。药物的杂质检查(5)药物的杂质检查(5)药物的杂质检查(5)药物的杂质检查(5)例例15A.HPLCB.TGAC.TLCD.DSCE.DTA1.差示热分析法差示热分析法2.薄层色谱法薄层色谱法3.热重分析法热重分析法4.高效液相色谱法高效液相色谱法5.差示扫描量热法差示扫描量热法ECBAD药物的杂质检查(5)第三节第三节一般杂质检查一般杂质检查一、一般杂质检查规则一、一般杂质检查规则药品检验操作标准规定：1.遵循平行操作原则药物的杂质检查(5)（1）仪器

39、的配对性如纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超过2mm，砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致（2）对照品与供试品的同步操作药物的杂质检查(5)2.正确的取样及供试品的称量范围1g不超过2%，1g不超过1%3.正确的比色、比浊方法4.检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份药物的杂质检查(5)二、氯化物检查法二、氯化物检查法（一）原理对照法药物的杂质检查(5)样品管对照管1.0mL用水稀释至用水稀释至50mL6.0mL0.60g0.010%(浓度：浓度：10 gCl/ml)（二）检查方法（二）检查方法药典附录药典附录除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品除另有规定外，取各药

40、品项下规定量的供试品葡萄糖中氯化物检查葡萄糖中氯化物检查药物的杂质检查(5)在暗处放置5min(避免避免AgCl分解分解)同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较即得药物的杂质检查(5)（三）测定条件1.标准NaCl溶液10gCl/ml，50ml溶液中含5080g的Cl所显浑浊梯度明显，相当于标准NaCl溶液58ml。2.反应需在硝酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。药物的杂质检查(5)（1）加速AgCl浑浊的形成；（2）产生较好的乳浊；（3）避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀的形成。（4）药物的杂质检查(5)3.试剂：硝酸银5.避光、暗处放置5分钟后比浊，

41、因氯化银见光易分解。4.供试液和对照液稀释后，再加硝酸银溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀药物的杂质检查(5)7.比浊方法：同置于黑色背景上，自比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。上向下观察。6.温度的影响：温度的影响：3040产生浊度最产生浊度最大，且恒定，但作为限度检查，可大，且恒定，但作为限度检查，可在室温进行。在室温进行。药物的杂质检查(5)8.平行操作原则平行操作原则9.最适检出浓度：最适检出浓度：0.050.08mg/50ml药物的杂质检查(5)（四）干扰及排除1.若供试品有色，需经处理后方可检查。（1）内消色法：倍量法，如枸橼酸铁铵中氯化物的检查。（2）外消色法：如高锰酸钾

42、中氯化物的检查，可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。药物的杂质检查(5)a.a.内消色法内消色法如如枸橼酸铁铵枸橼酸铁铵中氯化物的检查中氯化物的检查. . 药物的杂质检查(5)2.当有其它干扰物质存在时，必需在检查前除去（1）碘化物中氯化物的检查（2）溴化物中氯化物的检查（3）碘中氯化物的检查药物的杂质检查(5)a.碘化物中氯化物的检查碘化物中氯化物的检查Cl的氧化电位高的氧化电位高(1.35)不能被氧化为不能被氧化为Cl2I-的氧化电位低的氧化电位低(0.53)药物的杂质检查(5)b.碘中氯化物的检查碘中氯化物的检查反应原理反应原理: : 根据氨中溶解度不同根据氨中溶解度不同AgCl(

43、溶解溶解)AgBr(微溶微溶)AgI(不溶不溶)药物的杂质检查(5)Cl的氧化电位高的氧化电位高(1.35)不能被氧化为不能被氧化为Cl2Br-的氧化电位低的氧化电位低(1.08)c.溴化物中氯化物的检查溴化物中氯化物的检查药物的杂质检查(5)3.不溶于水的有机药物（1）加水振摇，过滤，取滤液进行检查。（2）加热，放冷，过滤，取滤液进行检查。（3）溶于有机溶剂如稀乙醇、丙酮，可加稀乙醇或丙酮溶解后进行检查。药物的杂质检查(5)4.有机药物中有机氯杂质的检查，具体情况，具体分析。药物的杂质检查(5)问题：药物中氯化物杂质检查，是使该杂质在酸性溶液中与硝酸银作用生成氯化物浑浊，所用的稀酸是A.硫酸

44、B.硝酸C.盐酸D.醋酸E.磷酸药物的杂质检查(5)例1.中国药典（2000年版）规定，检查氯化物杂质时，一般取用标准氯化钠溶液（10gCl/ml）58ml的原因是A.使检查反应完全B.药物中含氯化物的量均在此范围C.加速反应D.所产生的浊度梯度明显E.避免干扰药物的杂质检查(5)例2.采用硝酸银试液检查氯化物时，加入硝酸使溶液酸化的目的是A加速生成氯化银浑浊反应B消除某些弱酸盐的干扰C消除碳酸盐干扰D消除磷酸盐干扰E避免氧化银沉淀生成药物的杂质检查(5)例3.当采用比浊法检查氯化物杂质时，若药物本身有颜色而干扰检查的话，应该选用的处理方法为A内消色法B外消色法C比色法D差示比浊法E差示可见分

45、光法药物的杂质检查(5)例4.若要进行高锰酸钾中氯化物的检查，最佳方法是A.加入一定量氯仿提取后测定B.氧瓶燃烧C.倍量法D.加入一定量乙醇E.以上都不对药物的杂质检查(5)例5.下列哪些条件为药物中氯化物检查的必要条件A.所用比色管需配套B.稀硝酸酸性下(10ml/50ml)C.避光放置5分钟D.用硝酸银标准溶液做对照E.在白色背景下观察药物的杂质检查(5)三、硫酸盐检查法三、硫酸盐检查法（一）原理对照法药物的杂质检查(5)（二）测定条件1.标准K2SO4溶液0.1mg/ml，50ml溶液中含0.10.5mg的所显浑浊梯度明显，相当于标准K2SO4溶液15ml。2.反应需在盐酸酸性条件下进行

46、，(盐酸作用？）盐酸作用？）且以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。药物的杂质检查(5)3.试剂：氯化钡5.比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。4.供试液和对照液稀释后，再加氯化钡溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀药物的杂质检查(5)若供试品有色，也可用内消色法即倍量法处理。（三）干扰及排除6.最适检测浓度：最适检测浓度：0.10.5mgSO4-2/50ML药物的杂质检查(5)例：药物中硫酸盐检查时，所用的标准对照液是A.标准氯化钡B.标准醋酸铅溶液C.标准硝酸银溶液D.标准硫酸钾溶液E.以上都不对药物的杂质检查(5)四、铁盐检查法四、铁盐检查法1.原理对照法（一）硫氰酸盐法ChP（2

47、005）、USP（31）药物的杂质检查(5)2.检查方法检查方法药典附录药典附录除另有规定外，取各药品项下除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品：规定量的供试品：（一）硫氰酸盐法4ml25ml稀稀HCl30%硫氰酸铵硫氰酸铵过过硫酸铵硫酸铵50mgH2O50mlH2O 样品样品标准溶液标准溶液3mlHNO3药物的杂质检查(5)3.测定条件（1）用FeNH4(SO4)212H2O（硫酸铁铵）配制标准铁贮备液（加入硫酸防止Fe3+的水解），标准铁溶液临用前稀释而成，标准铁溶液10gFe3+/ml，50ml溶液中含1050g的Fe3+显色梯度明显，一般取标准铁溶液1.05.0ml。药物的杂质检查(

48、5)（2）反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸4ml为宜。（3）试剂：硫氰酸铵。加过量硫氰酸铵，使反应向正反应方向进行（4）检查Fe2+和Fe3+药物的杂质检查(5)（5）铁铁盐盐检检查查时时，加加氧氧化化剂剂氧氧化化Fe2+为为Fe3+。加加过过硫硫酸酸铵铵可可氧氧化化Fe2+为为Fe3+，同同时时可可防防止止光光线线使使硫硫氰氰酸酸铁铁还还原或分解褪色。原或分解褪色。加硝酸后加热也可氧化加硝酸后加热也可氧化Fe2+为为Fe3+药物的杂质检查(5)（6）比色方法：同置于白色背景上，自上向下观察。药物的杂质检查(5)4.干扰及排除干扰及排除（1）为了提高灵敏度或供试管与对

49、照管色调不一致时，可用正丁醇提取后，分取正丁醇层比色。？（2）具环状结构的有机药物，需经700800炽灼破坏处理后再依法检查。（3）干扰离子的影响药物的杂质检查(5)（二）巯基醋酸法BP（2011）对照法本法灵敏度较高，但试剂较贵药物的杂质检查(5)例1.中国药典（2010年版）规定铁盐的检查方法为A.硫氰酸盐法B.巯基醋酸法C.普鲁士蓝法D邻二氮菲法E.水杨酸显色法药物的杂质检查(5)例2.中国药典（2010年版）规定，硫氰酸铵法检查铁盐时，加入过硫酸铵的目的是A.使药物中铁盐都转变为Fe3+B.防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色C.使产生的红色产物颜色更深D防止干扰E便于观察、比较药物的杂质

50、检查(5)例3.某药物（黄色）欲进行铁盐检查，应采用下面哪种方法A.倍量法B.微孔滤膜过滤法C.调色法D.600700炽灼残渣后测定E.以上都不对药物的杂质检查(5)例4.中国药典收载的铁盐检查，主要是检查A.FeB.Fe2+C.Fe3+D.Fe2+和Fe3+E.以上都不对药物的杂质检查(5)五、重金属检查法五、重金属检查法以铅为代表以铅为代表中国药典（2010年版）共收载三法。重重金属是指在实验条件下能与硫金属是指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用呈色的金属代乙酰胺或硫化钠作用呈色的金属.如：如：Ag、Pb、Hg、Cu、Cd、Bi、Sb、Sn、As、Ni、Co、Zn等等.重金属存在影响药

51、物的稳定性及重金属存在影响药物的稳定性及安全性安全性.铅易在体内积蓄中毒铅易在体内积蓄中毒,以以Pb为代表为代表.药物的杂质检查(5)（一）第一法硫代乙酰胺法1.原理对照法适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。药物的杂质检查(5)操作方法操作方法甲管乙管丙管药物的杂质检查(5)判断：判断：1. 1. 当丙管当丙管甲管，乙管甲管，乙管甲管甲管2. 2. 当丙管当丙管 500ugZn、HClKI、SnCl2HgBr2Zn、HClKI、SnCl2Ag-DDCSnCl2HCl黄棕色黄棕色砷斑砷斑红色红色胶态银胶态银棕褐色棕褐色胶态砷胶态砷方法方法适用范围适用范围试剂试剂结果结果古蔡氏古蔡氏法法Ag-DDC法

52、法白田道夫白田道夫法法药物的杂质检查(5)(四四)奇列氏法（次磷酸法）奇列氏法（次磷酸法）BP1.原理原理在盐酸酸性溶液中在盐酸酸性溶液中,次磷酸还次磷酸还原砷盐为棕色的游离砷原砷盐为棕色的游离砷,与标准砷溶与标准砷溶液液同法处理后比较颜色同法处理后比较颜色.NaH2PO2+HClH3PO2+NaCl3H3PO2+H3AsO33H3PO3+2AS棕色棕色药物的杂质检查(5) 2.特点特点不受不受S2-,SO32-,Sb干扰干扰灵敏度较灵敏度较古蔡氏法古蔡氏法低低药物的杂质检查(5)例1.在药物的杂质检查中，其限量一般不超过百万分之十的是A.氯化物B.硫酸盐C.醋酸盐D.砷盐E.淀粉药物的杂质检

53、查(5)例2.在用古蔡法检查砷盐时，导气管中塞入醋酸铅棉花的目的是A.除去I2B.除去AsH3C.除去H2SD.除去HBrE.除去SbH3药物的杂质检查(5)例3.铁盐检查法时，要求酸性条件的原因是A.防止Fe3+水解B.防止Fe2+还原C.使生成颜色稳定D.提高反应灵敏度E.防止Fe3+与Cl-形成配位化合物药物的杂质检查(5)例4.古蔡氏法中，SnC12的作用有A.使As5+As3+B.除去H2SC.除去I2D.组成锌锡齐E.除去其它杂质药物的杂质检查(5)例例5.AgDDC法法检检查查砷砷盐盐的的原原理理为为：砷砷化化氢氢与与AgDDC吡吡啶啶作作用用，生生成成的的物质是物质是A.砷斑B

54、.锑斑C.胶态砷D.三氧化二砷E.胶态银药物的杂质检查(5)例6.中国药典（2010年版）收载的古蔡法检查砷盐的基本原理是A.与锌、酸作用生成H2S气体B.与锌、酸作用生成AsH3气体C.产生的气体遇氯化汞试纸产生砷斑D.比较供试品砷斑与标准品砷斑的面积大小E.比较供试品砷斑与标准品砷斑的颜色强度药物的杂质检查(5)适用于A.古蔡氏（Gutzeit）法B.二乙基二硫代氨基甲酸银法C.A和B均可D.A和B均不可1.在连接砷化氢发生瓶的导管中装入醋酸铅棉花2.使用的标准砷溶液为2m13.测定结果要与标准砷斑相比较4.要测定吸收度5.要用酸碱滴定法CCABD药物的杂质检查(5)例7.用古蔡氏法检查下

55、列药物中的砷盐时，排除干扰的方法：A.先用硝酸或溴水氧化B.先加酸性氯化亚锑还原C.改用白田道夫法D.先加氰化钾掩蔽E.先加草酸生成沉淀1.硫化物2.亚硫酸盐3.硫代硫酸盐4.高铁盐5.锑盐AAABC药物的杂质检查(5)例8.AgDDC法检查砷盐时，所产生的红色溶液为A.HDDC吡啶溶液B.Ag吡啶溶液C.Ag的胶态溶液D.Ag(DDC)溶液E.AsAg3溶液药物的杂质检查(5)例8.ChP（2010）检查葡萄糖酸锑钠中的砷盐时，应选用A.古蔡氏法B.白田道夫法C.碘量法D.AgDDC法E.契列法药物的杂质检查(5)例9.葡萄糖中砷盐的检查，需要的试剂应有APb2+标准液BSnCl2试液CKI

56、试液DZnE醋酸铅棉花药物的杂质检查(5)例10.Ag-DDC法检查砷盐时，加入碘化钾和酸性氯化亚锡的作用为A将As5+还原为As3+B有利于AsH3生成反应C抑制SbH3的生成D形成Zn-Sn齐以均匀而连续地发生氢气E催化加速生成AsH3药物的杂质检查(5)例11.古蔡氏法检砷，药典规定制备标准砷斑时，应取标准砷溶液A.1mlB.5mlC.2mlD.依限量大小决定E.以上都不对药物的杂质检查(5)例12.古蔡氏法检查所用的溶液是A.强碱性溶液B.强酸性溶液C.含稀盐酸10ml/50ml溶液D.含稀硝酸10ml/50ml溶液E.含强氧化剂(硝酸或过硫酸铵)溶液药物的杂质检查(5)A.硝酸银试液

57、B.氯化钡试液C.硫代乙酰胺试液D.硫化钠试液E.硫氰酸盐试液1药物中铁盐检查2磺胺嘧啶中重金属检查3药物中硫酸盐检查4葡萄糖中重金属检查5药物中氯化物检查EACBD药物的杂质检查(5)可用于检查的杂质为A.氯化物B.砷盐C.铁盐D.硫酸盐E.重金属1在酸性溶液中与氯化钡生成浑浊液的方法2在酸性溶液中与硫氰酸盐生成红色的方法3在实验条件下与硫代乙酰胺形成均匀混悬溶液的方法4Ag-DDC法5古蔡法DCEBB药物的杂质检查(5)杂质检查中所用的酸是A.稀硝酸B.稀盐酸C.硝酸D.盐酸E.醋酸盐缓冲液1.氯化物检查法2.硫酸盐检查法3.铁盐检查法4.重金属检查法5.砷盐检查法ABBED药物的杂质检查

58、(5)七、干燥失重测定法干燥失重是指药物在规定条件下经干燥后所减失的重量，主要是水分，也包括其它挥发性物质。测定方法：药物的杂质检查(5)（一）常压恒温干燥法（一）常压恒温干燥法适用于受热较稳定的药物。干燥温度一般为105。干燥失重：第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1h后进行。药物的杂质检查(5)炽灼残渣：第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续炽灼.5h后进行。（二）干燥剂干燥法适用于受热易分解或挥发的供试品。干燥剂：硅胶、浓硫酸、P2O5。药物的杂质检查(5)（三）减压干燥法适用于熔点低，受热不稳定或水分难赶除的药物。除 另 有 规 定 外 ， 压 力 应 在2.67kPa（2

59、0mmHg）以下。药物的杂质检查(5)真空烘箱真空烘箱(带真空泵、干燥瓶）带真空泵、干燥瓶）药物的杂质检查(5)药物的杂质检查(5)例1A干燥失重测定法B炽灼残渣检查C两者皆是D两者皆不是1.有机物杂质检测法2.不溶物的测定法3.杂质检查法4.有机药物中不挥发无机物的检测法5.药物中挥发性物质的检测法DDCBA药物的杂质检查(5)例2.干燥失重测定的方法有A炽灼（500600）法B常压恒温干澡法C减压干燥法D干燥剂干燥法E减压干燥剂干燥法药物的杂质检查(5)例3.干燥失重测定中应注意哪几个方面A.供试品平铺在称量瓶中的厚度一般不超过5mmB.干燥温度一般为105C.可用干燥剂干燥D.主要指水分

60、和挥发性物质E.测定时间不超过3小时药物的杂质检查(5)药物中的水分包括结晶水和吸附水。药物中的水分包括结晶水和吸附水。中国、美国和英国药典收载了费休氏法和中国、美国和英国药典收载了费休氏法和甲苯法。甲苯法。费休氏法（卡尔费休氏法（卡尔费休法）（费休法）（karlfischer）:可以测定结晶水、吸附水和游离可以测定结晶水、吸附水和游离水。水。原理：原理：I2+SO2+H2O2HI+SO3八八水水分分测测定定法法根据消耗碘的量来测定水分的含量。根据消耗碘的量来测定水分的含量。是对于测定水分最为专一，也是最是对于测定水分最为专一，也是最为准确的化学方法为准确的化学方法药物的杂质检查(5)C5H5

61、NSO3+CH3OH C5H5N(H)SO4.CH3 硫酸吡啶 甲醇 甲基硫酸吡啶生生成成硫硫酸酸吡吡啶啶不不稳稳定定，能能与与水水发发生生反反应应，消消耗耗一一部部分分水水而而干干扰扰测测定定，为为了了使使它它稳稳定定，我们可加无水甲醇。我们可加无水甲醇。药物的杂质检查(5)费休法的滴定总反应式可写为费休法的滴定总反应式可写为：（I2+SO2+3C5H5N+CH3OH）+H2O2C5H5NHI+C5H5NHSO4CH31mol1mol水需要与水需要与1mol1mol碘、碘、1mol1mol二氧化硫和二氧化硫和3mol3mol吡吡啶及啶及1mol1mol甲醇甲醇实际操作中，以甲醇为溶剂，各试剂

62、用量摩尔实际操作中，以甲醇为溶剂，各试剂用量摩尔比比为为I I2 2：SOSO2 2：C C5 5H H5 5N=1N=1：3 3：10 10 。因此滴定的标准溶液是：因此滴定的标准溶液是：I I2 2、SOSO2 2、C C5 5H H5 5N N及及CHCH3 3OHOH的混合溶液，称为费休试剂。的混合溶液，称为费休试剂。药物的杂质检查(5)检查不含金属的有机药物或挥发性无机药物中混入的无机杂质(金属氧化物或无机盐类)。1.原理样品炭化后+H2SO4湿润700800炽灼至恒重炽灼残渣（硫酸灰分）限量一般为0.1%0.2%九、炽灼残渣检查法九、炽灼残渣检查法药物的杂质检查(5)2.操作方法药

63、物的杂质检查(5) 3. 注意事项（1）供试品的取样量应根据炽灼残渣限量和称量误差决定。药物的杂质检查(5)（3）若残渣需留作重金属检查，则500600炽灼至恒重。（2）含氟的药物对瓷坩埚有腐蚀，应采用铂坩埚。（4）加硫酸处理是使杂质转化为稳定的硫酸盐，并帮助有机物炭化药物的杂质检查(5)例1.炽灼残渣检查法一般加热恒重的温度为A.500600B.600700C.700800D.8001000E.10001200药物的杂质检查(5)例2.炽灼残渣检查后，将残渣留作重金属检查时，炽灼温度应为A.500600B.600700C.700800D.8001000E.10001200药物的杂质检查(5)

64、例3.炽灼残渣的限量一般为A.1B.0.51C.0.40.5D.0.20.3E.0.10.2药物的杂质检查(5)例4.炽灼残渣检查时，炭化后经硫酸处理后灰化至完全的称为A.灰分B.残渣C.硫酸灰分D.炽灼灰分E.残余灰分药物的杂质检查(5)十、易炭化物检查法十、易炭化物检查法检查药物中遇H2SO4易炭化或易被氧化呈色的微量有机杂质。方法：H2SO4炭化后与对照液比较。药物的杂质检查(5)对照液对照液：（1）“溶液颜色检查”项下的标准比色液；（2）由比色用氯化钴液，比色用重铬酸钾液，比色用硫酸铜液按规定方法配成的对照液；药物的杂质检查(5)比色比色：同置白色背景前，平视观察比较。（3）高锰酸钾液

65、药物的杂质检查(5)十一、有机溶剂残留量测定法十一、有机溶剂残留量测定法1.有机溶剂残留量测定法是用以检查药物在生产过程中引入的有害有机溶剂，包括苯、氯仿、二氧六环、二氯甲烷、吡啶、甲苯及环氧乙烷。药物的杂质检查(5)2.检查方法中国药典采用气相色谱法检查残留有机溶剂色谱条件：色谱条件：固定相：直径为0.250.18mm的二乙烯苯乙基乙烯苯型高分子多孔小球药物的杂质检查(5)载气：氮气检测器：氢火焰离子化检测器检测柱温：80170色色谱谱系系统统适适用用性性试试验验：中国药典规定，在残留溶剂测定前应作色谱系统适用性试验。药物的杂质检查(5)外标法外标法 限度检查：限度检查：根据药典残留溶剂限度

66、检查的规定，供试品所得被测溶剂峰面积不得大于对照品溶液相应的峰面积。内标法内标法 限度检查：限度检查：供试品溶液待测溶剂峰面积与内标峰物质面积之比不得大于对照品溶液相应比值。标准加入法标准加入法当供试品和对照品处于不完全相同的基质中，基质可能对实验结果产生影响。采用标准加入法可以消除基质效应的影响。当其它方法与标准加入法结果不一致时，以标准加入法为准。 限度检查：限度检查： 杂质对照液杂质对照液+ 供试液供试液外标法或外标法或内标法内标法测定总量测定总量总量总量 - 加入的杂质对照品量加入的杂质对照品量 = 杂质量杂质量药物的杂质检查(5)有机溶剂残留量测定方法有机溶剂残留量测定方法中国药典采

67、用中国药典采用气相色谱法气相色谱法检查有机溶剂检查有机溶剂第一法第一法毛细管柱顶空进样等温法毛细管柱顶空进样等温法(适用于挥适用于挥发性大的组分发性大的组分)第二法第二法毛细管柱顶空进样程序升温法毛细管柱顶空进样程序升温法第三法第三法溶液直接进样法溶液直接进样法药物的杂质检查(5)顶空进样概述色谱分析中60的时间用于样品预处理，1015用于色谱分析，其它用于数据处理等。如何加快和简化样品预处理成为提高分析效率的关键。样品预处理的方法很多，如固相萃取（SPE）、固相微萃取（SPME）、超临界流体萃取（SFC）等。当我们只对挥发性成分感兴趣时，顶空气相色谱法是一种简单有效的方法。药物的杂质检查(5

68、)所谓顶空（headspace)GC分析就是取样品基质（固体和液体）上方的气相部分进行色谱分析。也称之为液上色谱分析。顶空分析出现于1939年，比GC早。由于GC是专门用于气体或挥发性物质的，所以GC和HeadspaceAnalysis的结合是很自然的。1958年用顶空GC分析水中氢气含量，1962年出现商品化顶空进样器。现在，顶空GC已成为普遍使用的技术，它可以用于药物（中药或西药）中的溶剂残留、聚合材料中的残留溶剂和单体、废水中的挥发性有机物、食品中的气味成分、血液中的挥发性成分等的分析。药物的杂质检查(5)什么是顶空进样：用于分析挥发性化合物的前处理什么是顶空进样：用于分析挥发性化合物的

69、前处理技术（最初采用水浴的方法进行，存在一定的缺点）技术（最初采用水浴的方法进行，存在一定的缺点）药物的杂质检查药物的杂质检查(5)(5)顶空GC分析基本原理一容积为V、装有体积为Vo浓度为Co的液体样品的密封容器,在一定温度下达到平衡时，气相体积为Vg，液相体积为Vs，气相样品浓度为Cg，液相中样品浓度为Cs,则：平衡常数K=Cs/Cg相比=Vg/VsV=Vs+Vg=Vo+Vg药物的杂质检查(5)因为是密封容器，所以CoVo=CsVs+CgVg=KCgVs+CgVgCo=KCg+CgVg/Vs=KCg+Cg=Cg(K+）Cg=Co/(K+）KCo因此，在平衡状态下，气相组成与样品原组成为正比

70、关系。药物的杂质检查(5)顶空气相色谱分析的优点固相萃取和液相萃取时不可避免地带入共萃取物干扰分析。顶空分析可看成是气相萃取方法，大大减小样品基质对分析的干扰。顶空分析有不同的模式，可适合各种样品。药物的杂质检查(5)气相色谱的进样方式可分为溶液直接进样或顶气相色谱的进样方式可分为溶液直接进样或顶空进样。顶空进样适用于固体和液体供试品中空进样。顶空进样适用于固体和液体供试品中挥发性组分的分离和测定。挥发性组分的分离和测定。顶空顶空GC通常包括三个过程：取样、进样和通常包括三个过程：取样、进样和GC分析。根据取样和进样方式不同，分析。根据取样和进样方式不同，顶空进样分顶空进样分为静态和动态为静态

71、和动态. . 静态顶空静态顶空: :将样品溶液密封在一个容器中在一将样品溶液密封在一个容器中在一定温度下加热一段时间使气液两相达到平衡定温度下加热一段时间使气液两相达到平衡, ,然后取气相部分进入然后取气相部分进入GCGC分析分析. .顶空气相色谱的分类顶空气相色谱的分类药物的杂质检查(5)过程过程: :1)1)样品放到小瓶后迅速封口。样品放到小瓶后迅速封口。2)2)小瓶被放到小瓶被放到顶空进样器上。顶空进样器上。3)3)获得分析结果。获得分析结果。 自动加热使汽液两相达到平衡。自动加热使汽液两相达到平衡。 将液上气体注入到气相色谱并实现分离。将液上气体注入到气相色谱并实现分离。顶空进样顶空进

72、样药物的杂质检查药物的杂质检查(5)(5)需要定量分析挥发性有机物时样品不适合直接进样时想要最少的样品前处理时想要提高分析效率痕量化合物 / 低浓度Turbomatrix 的最高操作温度为210度顶空进样什么时候采用什么时候采用?药物的杂质检查药物的杂质检查(5)(5)l l在汽液平衡达到后就可在汽液平衡达到后就可以获得分配系数以获得分配系数K.K.l lK K 受到如下因素的影响受到如下因素的影响 : : 温度温度 盐浓度等盐浓度等. .l l在方法开发阶段可以用在方法开发阶段可以用MHE MHE 来判断是否达到完全来判断是否达到完全的汽液平衡（判断是否存在的汽液平衡（判断是否存在不完全吸附

73、及不完全平衡）不完全吸附及不完全平衡）顶空进样CS = Analyteconcentration in Sample, CG =Analyte Conc.in Gas Phase原理原理药物的杂质检查药物的杂质检查(5)(5)加热温度加热温度6060度，由于在液体相中盐浓度对度，由于在液体相中盐浓度对气相中乙醇浓度的影响气相中乙醇浓度的影响盐种类 顶空气体中浓度的增加硫酸铵 X5氯化钠 X3碳酸钙 X8氯化铵 X2柠檬酸钠 X5药物的杂质检查药物的杂质检查(5)(5)缺点：顶空瓶内外温度和压力差样品挥发损失药物的杂质检查药物的杂质检查(5)(5)药物的杂质检查药物的杂质检查(5)(5)自动进样

74、装置采用注射器进样 与普通自动进样器类似，只是增加了加热功能，与普通自动进样器类似，只是增加了加热功能，并且采用气密注射器。并且采用气密注射器。 压力平衡进样系统压力控制定量管进样系统药物的杂质检查药物的杂质检查(5)(5)1.气密针可加热；2.温度设定比顶空瓶高3.两次进样之间持续通惰性气体吹洗进样针4.进样针与气相色谱仪进样口准确定位药物的杂质检查药物的杂质检查(5)(5)优点：重现性优异缺点：进样的绝对样品体积无法确定药物的杂质检查药物的杂质检查(5)(5)优点：1.进样量已知 2. 耐高温 3. 重现性优良缺点：交叉污染，鬼峰药物的杂质检查药物的杂质检查(5)(5)具体的顶空样品分析过

75、程药物的杂质检查药物的杂质检查(5)(5)34药物的杂质检查药物的杂质检查(5)(5)药物的杂质检查药物的杂质检查(5)(5)手动顶空和自动顶空的原理是一样的。只是重复性指标存在差别。手动顶空和自动顶空的原理是一样的。只是重复性指标存在差别。手动顶空和自动顶空的原理是一样的。只是重复性指标存在差别。手动顶空和自动顶空的原理是一样的。只是重复性指标存在差别。药物的杂质检查药物的杂质检查(5)(5)Agilent 7694E Agilent 7694E 顶空仪顶空仪 Agilent GC-6890N Agilent GC-6890N 顶空进样气相色谱仪顶空进样气相色谱仪药物的杂质检查药物的杂质检查

76、(5)(5)传输线很细（空毛细管）并且是惰性的。外面的黑传输线很细（空毛细管）并且是惰性的。外面的黑色塑料管子仅仅是保温套。色塑料管子仅仅是保温套。药物的杂质检查药物的杂质检查(5)(5)药物的杂质检查药物的杂质检查(5)(5)十二、溶液颜色检查法十二、溶液颜色检查法控制药物中有色杂质限量的方法。ChP(2010)采用三种方法检查。第第一一法法目目视视比比色色法法即即与与标标准准比比色色液液比较的方法，全波长范围定性观察比较的方法，全波长范围定性观察药物的杂质检查(5)观察方法观察方法药物的杂质检查(5)标准比色液的配制标准比色液的配制药物的杂质检查(5)第二法分光光度法单一波长定量第三法色差

77、计法全波长范围定量本法是通过色差计直接测定溶液的透视三刺激值，对其颜色进行定量表述和分析的方法。测定与水的色差值测定与水的色差值测色仪器一般为光电积分型色差计药物的杂质检查(5)十三、澄清度检查法十三、澄清度检查法检查药物中的微量不溶性杂质，用作注射剂的原料药一般应作此项检查。1.检查方法对照法药物的杂质检查(5)2.浊度标准液的配制中国药典规定用浊度标准液作为澄清度检查的标准。反应原理：乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色浑浊。药物的杂质检查(5)1.00硫酸肼溶液与10乌洛托品溶液等量混合配制浊度标准贮备液浊度标准原液浊度标准液（5个级号）药物的杂

78、质检查(5)3.判断药典中规定的“澄清”，系指供试品溶液的澄清度相同于所用溶剂，或未超过0.5号浊度标准液。“几乎澄清”则指供试品溶液的浊度介于0.5号至1号浊度标准液的浊度之间4.溶剂：水、酸、碱、有机溶剂有机酸的碱金属盐类药物强调用“新沸过的冷水”药物的杂质检查(5)第三章第三章 药物的杂质检查药物的杂质检查v掌握药物纯度、杂质及其限度的概掌握药物纯度、杂质及其限度的概念念,杂质限度表示及计算方式杂质限度表示及计算方式,氯化物、氯化物、重金属、重金属、砷盐等一般杂质检查原理与砷盐等一般杂质检查原理与操作要点操作要点.v熟悉药品与化学试剂标准的区别熟悉药品与化学试剂标准的区别,特特殊杂质检查

79、原理殊杂质检查原理,薄层色谱法在药物分薄层色谱法在药物分析中的应用析中的应用.v了解药物杂质的来源途径了解药物杂质的来源途径.基基本本要要求求药物的杂质检查(5) 练习题：练习题： 溴化钠中硫酸盐检查法如下：称取溴化钠溴化钠中硫酸盐检查法如下：称取溴化钠0.5g，置，置50mL纳氏比色管中，加水使成约纳氏比色管中，加水使成约40mL，加稀盐酸加稀盐酸2mL，加入，加入25%氯化钡溶液氯化钡溶液5mL，用水稀，用水稀释至刻度。精密吸取硫酸钾标准溶液（释至刻度。精密吸取硫酸钾标准溶液（100gSO42-/mL）2.0mL，依法检查，求溴化钠中的硫酸盐的限，依法检查，求溴化钠中的硫酸盐的限量为百分之

80、几？量为百分之几？试述氯化物、硫酸盐、铁的检查原理、反应条试述氯化物、硫酸盐、铁的检查原理、反应条件、标准溶液及最适宜的浓度范围。件、标准溶液及最适宜的浓度范围。药物的杂质检查(5)3. 药典中的杂质检查按照操作方法不同可分为下列药典中的杂质检查按照操作方法不同可分为下列三种类型三种类型对照法对照法 、 灵敏度法灵敏度法 、比较法比较法 。2.药物中存在的杂质，主要来源于两个方面，即药物中存在的杂质，主要来源于两个方面，即 和和 。4.药物中微量的氯化物在药物中微量的氯化物在 酸性条件下与酸性条件下与 反应，反应，生成氯化银的胶体微粒而显白色浑浊，与一定量的生成氯化银的胶体微粒而显白色浑浊，与

81、一定量的标准氯化钠溶液（浓度为标准氯化钠溶液（浓度为 ）在相同条件下产生）在相同条件下产生的氯化银浑浊程度比较，判断供试品中氯化物是的氯化银浑浊程度比较，判断供试品中氯化物是否符合限量规定。否符合限量规定。5. 肾上腺素中肾上腺酮的检查：称取肾上腺素肾上腺素中肾上腺酮的检查：称取肾上腺素0.250g，置于置于25mL量瓶中，加量瓶中，加0.05mol/L盐酸液至刻度，量取盐酸液至刻度，量取5mL置另一置另一25mL量瓶中，用量瓶中，用0.05mol/L盐酸液稀释至刻度，用此液照分光光盐酸液稀释至刻度，用此液照分光光度法，在度法，在310nm处测定吸收度，不得大于处测定吸收度，不得大于0.05，

82、问肾上腺素的限，问肾上腺素的限量是多少？（以百分表示，肾上腺素量是多少？（以百分表示，肾上腺素 Ecm1% =453）药物的杂质检查(5)6 6异烟肼中游离肼的检查：取本品加水制成异烟肼中游离肼的检查：取本品加水制成1ml1ml中含中含50mg50mg的溶液作为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每的溶液作为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每1ml1ml中含中含0.20mg0.20mg（相对于游离肼（相对于游离肼50ug)50ug)的溶液作为对照的溶液作为对照溶液。吸取供试品溶液溶液。吸取供试品溶液10ul10ul与对照品溶液与对照品溶液2ul2ul分别点分别点于同一硅胶薄层板上，以异丙醇丙酮（于同一

83、硅胶薄层板上，以异丙醇丙酮（3:2)3:2)为展开为展开剂，展开后晾干，喷以乙醇制备的对二甲氨基苯甲醛剂，展开后晾干，喷以乙醇制备的对二甲氨基苯甲醛试液。试液。15min15min后检视，在供试品主斑点前方与硫酸肼后检视，在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。试计算游离肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。试计算游离肼的限量。的限量。 药物的杂质检查(5)7.胃复康中检查二苯羟基乙酸的方法如下：取本品胃复康中检查二苯羟基乙酸的方法如下：取本品0.5g，酸性下用乙醚提取后蒸干，残渣用无水乙醇酸性下用乙醚提取后蒸干，残渣用无水乙醇10mL溶解溶解后，在后，在258nm波长处测定

84、吸收度，不得超过波长处测定吸收度，不得超过0.02,求胃求胃复康中二苯羟基乙酸的限量（以百分表示，二苯羟基乙复康中二苯羟基乙酸的限量（以百分表示，二苯羟基乙酸在酸在258nm波长处的波长处的E1 % cm =19.7）8.异戊巴比妥钠中重金属的检查：取本品异戊巴比妥钠中重金属的检查：取本品1.0g，加水，加水43mL溶解后，缓缓加稀盐酸溶解后，缓缓加稀盐酸3mL，随加随用强力振摇，随加随用强力振摇，滤过，弃取初滤液；取续滤液滤过，弃取初滤液；取续滤液23mL，加醋酸盐缓冲液，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2mL，依法检查，含重金属不得超过，依法检查，含重金属不得超过20ppm，求应取标准铅溶液（浓度为，求应取标准铅溶液（浓度为10gPb2+/mL）多少）多少mL？药物的杂质检查(5)