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1、血培养血培养 Q & ACLSI血培养的原则和操作程序血培养的原则和操作程序推荐（推荐（Approved）指南）指南Proposed Guideline 2006年年10月出月出版：版：M47-PApproved Guideline 2007年年5月出版月出版: M47-A2005-09-08出版：出版：BSOP 37 第第5版版http:/www.hpa-standards.org.uk/pdf_sops.asp参编单位：参编单位：医学微生物协会医学微生物协会, 临床微生物协会临床微生物协会 苏格苏格兰微生物协会兰微生物协会, IBMS, Welsh微生物协微生物协会会统一由卫生防护署统一由
2、卫生防护署 （Health Protection Agency）领导领导英国英国HPA 的血培养的研究的血培养的研究及操作程序及操作程序Question血培养的适应症是什么血培养的适应症是什么? 发热发热( 38C) 体温过低体温过低 ( 10.000/l)粒细胞减少粒细胞减少( 1.000/l)低血压低血压局部感染：肺炎、尿路感染、脑膜炎、局部感染：肺炎、尿路感染、脑膜炎、 突发精神萎靡的儿童或老年人突发精神萎靡的儿童或老年人虚弱、精神状态错乱、体重突然下降的老年人虚弱、精神状态错乱、体重突然下降的老年人肾功能不全、无法解释的白细胞增多及精神状态改变肾功能不全、无法解释的白细胞增多及精神状态
3、改变免疫功能低下的患者免疫功能低下的患者CRPPCTAnswer（血培养适应症）（血培养适应症）（血培养适应症）（血培养适应症）CUMITECH Blood Cultures IV, ASM Press 2005Mylotte and Tayara EJCMID 2000Qestion血培养最佳的采血时机血培养最佳的采血时机?Answer最佳采血时机最佳采血时机尽可能在抗菌药物使用前尽可能在抗菌药物使用前尽可能在寒颤和发热初起时尽可能在寒颤和发热初起时03060Time (min)Temp体温体温Chills寒战寒战Blood Cultures血培养血培养BACTEREMIALEVEL菌血症的
4、水平菌血症的水平Question血培养瓶的种类血培养瓶的种类?我院常用血培养瓶采集标本前：采集标本前：于室温保存，切勿冷冻。如冷藏需恢复至室温使用。采集标本后：采集标本后：尽快送微生物室，如无法及时送检，应置于室温，不能置 于冰箱或温箱，以免影响检出。Question血培养应该采几套血培养应该采几套?每套包括几个瓶子每套包括几个瓶子?AnswerCLSI要求每次采集2-3套标本,每套应包括一个需氧培养瓶,一个厌氧培养瓶成年病人不能只采1瓶血培养标本，采血量不足和只做1套血培养所得得结果是很难正确解释的采血套数CockerillCockerill, CID 2004, CID 2004血培养套数
5、与阳性检出率（）65809699采血套数Weinstein et al. Detection of Bloodstream Infections in Adults: How Many Weinstein et al. Detection of Bloodstream Infections in Adults: How Many BloodCulturesBloodCultures Are Needed J Are Needed J ClinClin MicrobiolMicrobiol. 2007; 45:3546-3548. 2007; 45:3546-3548ICU1ICU1区区ICU2
6、ICU2区区ICUICU保保1313区区1 1瓶瓶1104%1 1套套03618%3 3瓶瓶1104%2 2套及以上套及以上4（66）5（50）28（82.4%)74%广东省人民医院广东省人民医院34月月ICU1/2/13区血培共分离出区血培共分离出50株可疑致病株可疑致病菌株（不含菌株（不含CNS） 菌株检出与采血套数的关系：菌株检出与采血套数的关系：CNS:凝固酶阴性葡萄球菌Question一套血培养为何选择一套血培养为何选择1个需氧个需氧+1个厌氧的组合个厌氧的组合?Answer研究表明：用需氧瓶加厌氧瓶的组合检测出的葡萄球菌，肠杆菌科菌中某些菌和苛氧菌比一对需氧瓶多。2001年Khan
7、na数据7072份血培养，640份阳性，阳性率为9组别阳性率需氧瓶厌氧瓶均报阳55仅需氧瓶报阳26仅厌氧瓶报阳19Eur J Clin Microbiol Infect DDis, 2001,20:217-219储从家数据（2000年）组别阳性率需氧瓶厌氧瓶均报阳50份仅需氧瓶报阳7份仅厌氧瓶报阳23份591份血培养，81份阳性，阳性率为13.17中华检验医学杂志，中华检验医学杂志，2000，23：285ODonnel试验8620份血培养，704株组别阳性菌株数阳性率2组均报阳487株69.2%2个需氧瓶组均报阳86株12.2%1个需氧瓶1个厌氧瓶组131株18.6%Clin Infect D
8、is, 1999,29:1309-1311报告时间提前报告时间提前出现阳性时间：出现阳性时间： 需氧瓶有需氧瓶有9%9%比厌氧瓶早比厌氧瓶早1 1天报告结果天报告结果 厌氧瓶有厌氧瓶有5%5%比需氧瓶早比需氧瓶早1 1天报告结果天报告结果因此因此, ,只做需氧菌不做厌氧菌培养只做需氧菌不做厌氧菌培养, ,将有将有19%19%的菌的菌株不能发现株不能发现, ,另有另有5%5%的血培养延迟的血培养延迟1 1天报告阳性天报告阳性结果结果 Khanna P, Collignon P. Anaerobic bottles are still important in blood culture sets
9、. Eur J ClinMicrobiol InfectDis, 2001, 20: 217-219结论结论 如果血培养只做需氧瓶培养，漏检的如果血培养只做需氧瓶培养，漏检的不仅是严格厌氧菌不仅是严格厌氧菌, ,也会影响兼性厌氧菌的也会影响兼性厌氧菌的分离率及报告阳性结果的时间分离率及报告阳性结果的时间Qestion如何采集第二套血培养如何采集第二套血培养?Answer一个静脉穿刺点只能采集1套血培养，采集第2套血培养应该选择第2个静脉穿刺点Qestion患者应采集多少血液患者应采集多少血液?Answer即寒战升温之间采血20ml，分装两个瓶内，各分配10ml,当采血量不足20ml,应先注入需
10、氧瓶,这样首先满足需氧瓶的采血量可以更好地分离出真菌、绿脓杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌。Qestion儿童的血培养应如何采集儿童的血培养应如何采集?(用何种类的瓶子用何种类的瓶子,采集多少血液采集多少血液,需要采几套需要采几套)Answer儿童厌氧菌感染极少 ，建议只采用儿童瓶厌氧培养只考虑针对特殊的高危儿童对于婴幼儿患者，采血量不超过患者总血量的1 1 月: 0.5 mL 1 月 36月: 1.0 mL 36 月: 4.0 mLConnell TG. Pediatrics 2007;119(5):891.Connell TG. Pediatrics 2007;119(5):891.新生儿败血症 最
11、低的采血量不确定，通常0.75-1.0ml的血量是推荐的。 文献证实只采一套血培养大约1015的败血症不能检出 即使血培养阴性，根据临床症状败血症仍然可以被怀疑Long:Principles and Practice of Pediatric infectious Diseases,2nd ed.,2003儿童专用培养瓶：儿童专用培养瓶： 领取时注意：粉红色标签 专门为儿童设计，采血量仅为1-3 ml 添加特殊促进细菌生长因子，采用树脂专利技术 低SPS浓度可提高儿童特征性病原菌（如耐瑟氏菌） 的检出率树脂颗粒能中和抗生素Qestion皮肤和血培养瓶的消毒方法皮肤和血培养瓶的消毒方法?Answ
12、er美国美国CLSI推荐皮肤的消毒方法为：推荐皮肤的消毒方法为： 首先确定静脉穿刺点，首选70异丙醇消毒并待干，然后用主要消毒剂（洗必泰、碘酊、碘伏）消毒并待干，使之作用足够的时间，整个过程要求严格无菌操作血培养瓶的消毒方法：血培养瓶的消毒方法： 弃去瓶顶塑料帽，用75乙醇消毒瓶顶橡皮塞，待干60秒Qestion每次采集血培养的间隔时间？每次采集血培养的间隔时间？Answer 每份血培养间隔应不超过30分钟，因为网状内皮系统对于一过性菌血症和间歇性菌血症在1530分钟内可清除（CLSI规定每份血培养应同时获得，或尽可能短的时间内）关于采血的一些问题：1、血培养采血建议从外周静脉采，不建议采动脉
13、血，为什么？ 对检出结果无明显差异，但动脉穿刺危险性较大2、常规血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置取血，为什么？ 污染菌或定植菌的可能性较大，除非怀疑CRBSI3、如果需要从导管处取血，初段血或导管内的补液是否需要弃去？为什么？ 不能弃去，以便于判断污染菌、定植菌或病原菌4、如果用注射器采血，采好后注入血培养瓶之前是否需要更换针头？为什么？ 无需更换，对提升阳性率无统计差异，增加了针刺伤的几率Qestion已接受抗菌药物治疗的患者，使用含树脂培养已接受抗菌药物治疗的患者，使用含树脂培养瓶是否有助于提高检出率？瓶是否有助于提高检出率？BD BACTECTM Resin树脂技术CHCHCH2CH2
14、CHCH2CHCH2CH2CHCH2CHCHCH2CH2CHCH2SO3- H+SO3- H+阳离子交换树脂阳离子交换树脂多价吸附树脂多价吸附树脂树脂包含有非离子树脂和阳离子交换树脂，能患树脂包含有非离子树脂和阳离子交换树脂，能患者在（预）治疗过程中，可能存在的中和各种抗者在（预）治疗过程中，可能存在的中和各种抗菌药物和其它可能的抑制细菌生长的物质。菌药物和其它可能的抑制细菌生长的物质。有助于溶解血细胞，以便释放被吞噬的细菌，使有助于溶解血细胞，以便释放被吞噬的细菌，使其更为快速生长其更为快速生长为细菌生长提供生长中心（为细菌生长提供生长中心（growth-centres），），以提高生长速度
15、，提高检出率（高达以提高生长速度，提高检出率（高达40%多）。多）。一个一个BACTEC血培养瓶的树脂作用表面相当于血培养瓶的树脂作用表面相当于5个标准足球场的面积个标准足球场的面积.革兰氏染色镜检不受干扰革兰氏染色镜检不受干扰Gram stain readingsCharcoal based systemsMeta-分析分析BACTEC树脂培养瓶的性能树脂培养瓶的性能43份临床评估19821996评估130503份血培养树脂对非树脂结果总计：提高18.3%治疗患者：提高35.4%Qestion怀疑导管相关的血流感染怀疑导管相关的血流感染(CRBSI)时应如何送时应如何送检检?CLSI对非隧道
16、式和隧道式的中心静脉导管和输液港对非隧道式和隧道式的中心静脉导管和输液港(Venous Access Ports, VAP) 推荐的培养方法推荐的培养方法目标人群目标人群: 携带深静脉导管超过48小时,出现原因不明的发热、低血压的患者，儿童患者出现低体温者送检方法：送检方法： 首先判断导管是否有保留的必要性，按导管保留与否分别采取不同的送检方法送送检方法：保留情况方法：保留情况n采取至少采取至少2 2套血培养，其中至少套血培养，其中至少1 1套来自外周静脉，套来自外周静脉，并做好标志，另外的并做好标志，另外的1 1套则从导管中心或硅酮隔套则从导管中心或硅酮隔膜无菌采获，两个来源的采血时间必须接
17、近膜无菌采获，两个来源的采血时间必须接近（ 5min5min），各自做好标记。），各自做好标记。送送检方法：不保留情况方法：不保留情况n从独立的外周静脉无菌采集从独立的外周静脉无菌采集2 2套血培养套血培养n无菌状态下取出导管并剪下无菌状态下取出导管并剪下5cm5cm导管尖端或近导管尖端或近心端交付实验室进行心端交付实验室进行MakiMaki半定量平板滚动培养半定量平板滚动培养或者定量培养或者定量培养Qestion血培养对血培养对CAP、HAP的检出率如何？的检出率如何？Answer CAP菌血症发生率菌血症发生率n住院患者住院患者：4 % - 14%n重症患者：重症患者：18%n大多数大多数
18、CAPCAP的指南推荐住院的患者进行血培养的指南推荐住院的患者进行血培养 HAP菌血症发生率：菌血症发生率：10%-31%n所有怀疑所有怀疑VAP的患者均应行血培养的患者均应行血培养Qestion如何解读血培养报告？如何解读血培养报告？Answern n一般超过一般超过一般超过一般超过72727272小时报警的往往为污染菌小时报警的往往为污染菌小时报警的往往为污染菌小时报警的往往为污染菌n n 单纯一次的凝固酶阴性表皮葡萄球菌阳性往往为污染单纯一次的凝固酶阴性表皮葡萄球菌阳性往往为污染单纯一次的凝固酶阴性表皮葡萄球菌阳性往往为污染单纯一次的凝固酶阴性表皮葡萄球菌阳性往往为污染可能可能可能可能n
19、 n 一次的肺炎链球菌或金黄色葡萄球菌或真菌药警惕致一次的肺炎链球菌或金黄色葡萄球菌或真菌药警惕致一次的肺炎链球菌或金黄色葡萄球菌或真菌药警惕致一次的肺炎链球菌或金黄色葡萄球菌或真菌药警惕致病原可能病原可能病原可能病原可能n n 多次血培养为同一种菌或和其他体液培养结果一致可多次血培养为同一种菌或和其他体液培养结果一致可多次血培养为同一种菌或和其他体液培养结果一致可多次血培养为同一种菌或和其他体液培养结果一致可排除污染可能排除污染可能排除污染可能排除污染可能n n 不能仅凭血培养报告定义血流感染，要密切结合临床不能仅凭血培养报告定义血流感染，要密切结合临床不能仅凭血培养报告定义血流感染，要密切结合临床不能仅凭血培养报告定义血流感染，要密切结合临床排除污染排除污染排除污染排除污染
