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1、第六章第六章 渔药安全性评价渔药安全性评价渔渔用用药药物物与与其其他他医医用用、兽兽用用药药品品、农农药药、饲饲料料添添加加剂剂以以及及各各种种工工业业用用及及生生活活用用化化学学药药品品一一样样，在在推推广广应应用用以以前前，均均需需要要检检验验其其毒毒性性和和安安全全性性，即即进进行行毒毒理理学学方方面面的的试试验验研研究究和和安安全全性性的的毒毒理理学学评评价价，只只有有被被试试验验证证明明是是安安全全而而有有效效的的渔渔用用药药物物，才才能能获获准准进进入入临临床床应应用阶段。用阶段。第一节第一节 渔药毒理学简介渔药毒理学简介第二节第二节 渔药的安全评价渔药的安全评价第一节第一节 渔药
2、毒理学简介渔药毒理学简介毒毒理理学学（toxicologytoxicology）：是是研研究究化化学学、物物理理、生物等因素对生物机体负面效应的综合性学科。生物等因素对生物机体负面效应的综合性学科。渔渔药药毒毒理理学学：主主要要是是研研究究渔渔用用药药物物对对水水生生动动、植植物物体体的的有有害害影影响响，包包括括这这些些有有害害影影响响发发生生的的程程度度、频频率率和和发发生生的的机机制制，以以及及如如何何应应用用毒毒理理学学资资料料预预测测渔渔药药对对人人类类和和环环境境生生态态的的潜潜在在危危害害，从而达到控制和预防这类危害发生的目的。从而达到控制和预防这类危害发生的目的。毒理学研究的范
3、围很广，毒理学研究的范围很广，包包括括毒毒物物的的来来源源、化化学学结结构构、理理化化性性质质、毒毒性性、影影响响毒毒性性的的因因素素、毒毒物物代代谢谢动动力力学学、毒毒物物的的生生物物转转化化、作作用用机机理理、中中毒毒的的诊诊断断症症状状、病病理理变变化化、组组织织病病理理、中中毒毒的的诊诊断断、毒毒物物的的检检测测方方法法、中中毒毒的治疗与预防等。的治疗与预防等。此此外外毒毒理理学学还还研研究究毒毒物物的的一一些些特特殊殊作作用用，如如“三三致致”作作用用、免免疫疫抑抑制制作作用用、行行为为异异常常、遗遗传传异异常常、对对生生殖殖的的影影响响、对对生生态态的的影影响响以以及及毒毒物物及及
4、其其他他化化学物质之间的联合作用和相互作用等。学物质之间的联合作用和相互作用等。现现代代毒毒理理学学的的研研究究方方法法可可概概括括为为实实验验室室方方法法、临临床床观观察察和和现现场场调调查查、综综合合危危险险度度评评定定等等三三大大类。类。渔渔药药毒毒理理学学的的研研究究内内容容主主要要包包括括以以下下几几个个方方面面：即即急急性性毒毒性性试试验验、亚亚急急性性毒毒性性试试验验和和慢慢性性毒毒性性试试验验、致致突突变变试试验验、生生殖殖毒毒性性试试验验、致致癌癌试试验验、临床毒性观察和其他毒性试验等。临床毒性观察和其他毒性试验等。渔渔药药毒毒理理学学试试验验又又可可大大致致分分为为两两类类
5、：一一般般毒毒性性试验和特殊毒性试验试验和特殊毒性试验一般毒性试验一般毒性试验指指那那些些不不以以观观察察和和测测定定某某种种特特定定的的毒毒性性反反应应为为目目的的而而设设计计的的毒毒性性试试验验，所所观观察察的的毒毒性性指指标标具具有有广广谱谱性性和和不不确确定定性性等等特特点点，如如急急性性、亚亚急急性性、慢慢性性（或或终终身身）毒性试验毒性试验等。等。特殊毒性试验特殊毒性试验指指以以观观察察和和测测定定药药物物能能否否引引起起某某种种或或某某些些特特定定毒毒性性反反应应为为目目的的而而设设计计的的毒毒性性试试验验，毒性指标明确。毒性指标明确。狭狭义义的的特特殊殊毒毒性性试试验验是是指指
6、致致畸畸、致致突突变变、致癌等致癌等“三致三致”试验。试验。广广义义的的特特殊殊毒毒性性试试验验还还包包括括过过敏敏性性试试验验、局局部部刺刺激激试试验验、免免疫疫毒毒性性试试验验、光光敏敏试试验验、眼毒试验、耳毒试验等。眼毒试验、耳毒试验等。在在毒毒理理学学试试验验研研究究的的设设计计中中，都都应应该该特特别别注注意意剂剂量量、给给药药途途径径、动动物物种种属属和和给给药次数与观测期限药次数与观测期限等方面。等方面。毒性试验毒性试验一、急性毒性试验一、急性毒性试验二、亚急性毒性试验二、亚急性毒性试验三、慢性毒性试验三、慢性毒性试验四、特殊毒理学试验四、特殊毒理学试验五、行为回避反应五、行为回
7、避反应六、毒代动力学研究六、毒代动力学研究一、急性毒性试验一、急性毒性试验急急性性毒毒性性试试验验是是在在1d1d内内单单次次或或多多次次（2 23 3次次）对对实实验验动动物物给给予予药药物物后后，在在7d7d内内，连连续续观观察察实实验验动动物物所所产产生生的的毒毒性性反反应应和和死死亡亡情情况况，观观察察毒毒性性反反应应过过程程中中毒毒性性的的表表现现，分分析析毒毒性性主主要要涉涉及及何何种种组组织织和和器器官官，毒毒性性反反应应出出现现的的时时间间、毒毒性性损害的严重程度，是否可以逆转消失。损害的严重程度，是否可以逆转消失。如如果果实实验验动动物物中中毒毒死死亡亡应应及及时时解解剖剖，
8、进进行行尸尸检检，如果发现病变器官就应该进一步做病理学检查。如果发现病变器官就应该进一步做病理学检查。急性毒性试验的目的急性毒性试验的目的: :1.1.确定受试药物的毒性强度；确定受试药物的毒性强度；2.2.计计算算治治疗疗指指数数（therapeutic therapeutic index,TIindex,TI），半半数数致致死死量量LDLD5050和和半半数数有有效效量量EDED5050的的比比值值即即治治疗疗指数；指数；3.3.观察毒性症状为临床检测毒性提供参考依据，观察毒性症状为临床检测毒性提供参考依据，4.4.为亚急性、慢性毒性的试验设计提供参考资料。为亚急性、慢性毒性的试验设计提供
9、参考资料。药药物物急急性性毒毒性性的的测测定定，可可分分为为静静水水式式生生物物测测试法试法和和流水式生物测试法流水式生物测试法两种。两种。常常以以开开始始致致死死浓浓度度（ILLILL）、半半数数致致死死浓浓度度LCLC5050和和半半数数有有效效量量EDED5050或或半半数数忍忍受受限限（TLmTLm），并并结结合合该该渔渔药药引引起起受受试试生生物物体体中中毒毒的的症症状状和和特特点点，评评价价被被测测试试渔渔药药毒毒性性的的强强弱弱以以及及它它对对水水环环境境的的污污染染程程度度，为为制制定定该该渔渔药药的的最最高高用用药药量量或或环环境境中中最最大大允允许许浓浓度度（MATCMAT
10、C）提提供供基基本数据。本数据。由由于于急急性性毒毒性性试试验验的的水水生生动动物物，常常以以小小型型个个体体为为主主，其其中中主主要要是是各各种种鱼鱼类类。通通常常要要选选择择敏敏感感性性高高、来来源源广广、易易于于饲饲养养的的品品种种，如如鲢鲢、草草鱼鱼，也也可可以以选选用用金金鱼鱼、鲤鲤鱼鱼、黄黄鳝等。鳝等。一一般般选选用用的的动动物物个个体体差差异异不不应应过过大大（同同一一批批试试验验中中，最最大大个个体体与与最最小小个个体体规规格格差差异异应应不不超超过过1.51.5倍倍），以以体体重重小小于于5.0g5.0g体体长长小小于于7.0cm7.0cm的较好。的较好。进进行行毒毒性性试试
11、验验之之前前，首首先先将将受受试试动动物物在在实实验验室室内内养养殖殖7-10d7-10d，剔剔除除有有病病或或畸畸形形个个体体后后随随机机分分组组进行试验。进行试验。试试验验时时，要要控控制制水水温温保保持持恒恒定定：以以温温水水性性鱼鱼类类为为2525，冷冷水水性性鱼鱼类类为为1212为为宜宜。溶溶解解氧氧要要稳稳定在定在5.0mg/L5.0mg/L以上，以上，pHpH控制在控制在6.5-8.56.5-8.5之间。之间。静静水水试试验验每每日日至至少少换换一一次次试试验验溶溶液液，流流式式试试验验每每24h24h要换要换95%95%的新试液。的新试液。试验期间，对照组受试动物的死亡率应低于
12、试验期间，对照组受试动物的死亡率应低于5%5%。在在急急性性毒毒性性试试验验期期间间，对对受受试试动动物物一一般般不不投投喂喂饵饵料料，从从致致毒毒开开始始，观观察察记记录录受受试试鱼鱼类类的的中中毒毒表表现现，生生理理、生生化化变变化化和和死死亡亡情情况。况。并并将将观观察察结结果果采采用用内内插插法法或或几几率率单单位位- -对对数数图图解解法法求求出出实实验验动动物物的的开开始始致致死死浓浓度度（开开始始致致死死水水平平，ILLILL）、全全部部死死亡亡的的最最小浓度（小浓度（LCLC100100）和半数致死浓度）和半数致死浓度LCLC5050。急性毒性的参数：急性毒性的参数：半数致死剂
13、量半数致死剂量LDLD5050在在测测定定药药物物毒毒性性的的实实际际工工作作中中，往往往往要要先先做做预预备备试试验验，大大概概了了解解药药物物引引起起受受试试动动物物全部死亡和不引起死亡的剂量范围，全部死亡和不引起死亡的剂量范围，再再将将受受试试动动物物分分为为几几组组，各各组组给给予予不不同同的的剂量，剂量，然后观察各组的死亡率。然后观察各组的死亡率。各各组组动动物物的的死死亡亡率率随随着着剂剂量量增增加加而而递递升升，但但是是两两者者不不是是直直线线关关系系，呈呈长长尾尾的的“S”S”型型曲曲线线。如如果果将将剂剂量量值值变变换换成成对对数数值值，则则死死亡亡率率的的曲曲线线成成为为一
14、一条条对对称称的的“S”S”型型曲曲线线，这这条条曲曲线线的的两两端端伸伸延延平平坦坦，即即上上升升速速度较缓慢。度较缓慢。药药物物毒毒性性性性试试验验中中，死死亡亡率率从从开开始始上上升升阶阶段段和和邻邻近近100%100%死死亡亡的的终终了了阶阶段段，剂剂量量的的增增加加所所引引起起的的死死亡亡率率上上升升是是比比较较缓缓慢慢的的，即即在在两两端端处处的的剂剂量量稍稍有有变变动动时时，在死亡率上不宜表现出来。在死亡率上不宜表现出来。而而在在中中间间阶阶段段，即即在在50%50%死死亡亡率率处处，剂剂量量稍稍有有增增减减变变动时，便立即会在死亡率上产生明显的差别。动时，便立即会在死亡率上产生
15、明显的差别。由由此此可可见见，位位于于曲曲线线两两端端的的最最小小致致死死量量和和绝绝对对致致死死量量等等指指标标都都不不够够敏敏感感，且且稳稳定定性性较较差差，误误差差较较大大，若若作作为为药药物物毒毒性性测测定定的的主主要要指指标标是不合适的。是不合适的。而而位位于于曲曲线线中中段段的的半半数数致致浓浓度度最最为为敏敏感感，同同时时也也比比较较稳稳定定，误误差差小小，所所以以半半数数致致死死浓浓度度是是用用来来表表示示和和衡衡量量某某药药物物（或或毒毒性性）大大小小较较常用的指标。常用的指标。LCLC5050测测定定方方法法在在许许多多统统计计学学专专著著中中都都有有详详细细的的论述和应用
16、举例。论述和应用举例。LCLC5050测测定定方方法法虽虽然然众众多多，其其实实影影响响LCLC5050测测定定结结果果准准确确性性的的因因素素不不是是计计算算方方法法的的不不同同，其其关关键键是是试试验验设设计计应应符符合合要要求求，药药物物剂剂量量大大小小的的确确定定，药药物物称称量量与与配配制制，受受试试动动物物的的种种类类、体体重重、性性别别、健健康康状状态态，给给药药操操作作的的熟熟练练程程度。度。下面介绍两种简便的测定计算下面介绍两种简便的测定计算LCLC5050的方法的方法1.1.目测概率单位法目测概率单位法 （绘图法、直线内插法）（绘图法、直线内插法）将将试试验验剂剂量量换换算
17、算成成对对数数剂剂量量，死死亡亡率率换换算算成成概概率率（机机率率）单单位位，使使剂剂量量- -死死亡亡率率曲曲线线直直线线化化。即即按按剂剂量量与与死死亡亡百百分分数数直直接接在在图图纸纸上上绘绘出出LCLC5050。步步骤骤如如下：下：1 1）编制计算表）编制计算表将将剂剂量量换换算算成成对对数数剂剂量量（X X）；将将死死亡亡率率换换算算成成概概率率单单位位（Y Y），死死亡亡率率为为0 0或或100%100%者者不不列列入入。计计算算表表应应含含剂剂量量、对对数数剂剂量量、动动物物数数、死死亡亡动动物物数数、死死亡亡率、概率单位等项目。率、概率单位等项目。2 2）用目测法求）用目测法求
18、LCLC5050依依据据计计算算表表中中数数据据，以以图图纸纸的的横横坐坐标标为为对对数数剂剂量量（X X），纵纵坐坐标标为为死死亡亡率率的的概概率率单单位位（Y Y），绘绘制制散散点点图图。然然后后顺顺着着各各点点分分布布的的趋趋势势目目测测较较适适直直线线，可可先先执执一一条条黑黑线线在在点点图图上上移移动动，使使点点子子大大体体上上交交错错分分布布在在直直线线的的上上下下，各各点点至至直直线线的的纵纵向向距距离离应应尽尽量量短短些些，并并重重点点照照顾顾Y=5Y=5附附近近的的点点子子。黑黑线线位位置置确确定定后后，即即用用铅铅笔笔在在图图上上定定下下两两点点，然然后后作作一一直直线线。
19、从从纵纵坐坐标标概概率率单单位位为为5 5处处作作一一水水平平线线，过过水水平平线线与与直直线线的的交交点点作作垂垂直直线线与与横横坐坐标标相相交交，此此处处的的读数极为读数极为LC50LC50的对数值。的对数值。3 3）求）求LCLC5050的可限区间的可限区间上上面面所所求求得得的的LCLC5050是是一一个个样样本本指指标标，只只能能作作为为总总体体LCLC5050的的点点值值估估计计，同同时时也也可可对对总总体体LCLC5050做做范范围围估估计计，即求总体即求总体LCLC5050的可信区间。的可信区间。A.A.按下式求各致死量对数值的标准差按下式求各致死量对数值的标准差B.B.按下列
20、公式求半数致死量对数值的标准误按下列公式求半数致死量对数值的标准误C.C.按下式求半数致死量的按下式求半数致死量的95%95%可信区间可信区间在在实实验验设设计计上上，本本法法要要求求剂剂量量按按等等比比数数级级排排列列，如如出出现现相相邻邻的的重重复复0 0或或100%100%，应应将将靠靠边边的的组组弃弃去去不不计计，是是小小剂剂量量组组只只有有1 1组组0 0，大大剂剂量量组组只只有有1 1组组100%100%。算式如下：。算式如下：其中其中XmXm最大剂量的对数最大剂量的对数ii相邻两剂量比值（高剂量为分子）的对数相邻两剂量比值（高剂量为分子）的对数pp各组的死亡率，以小数表示。各组的
21、死亡率，以小数表示。 2.2.改进寇氏改进寇氏（karber）法法急性毒性试验举例急性毒性试验举例急急性性毒毒性性一一般般根根据据LCLC5050的的大大小小，参参照照急急性性毒毒性的标准进行评价。性的标准进行评价。更多的则是采用渔药的安全浓度进行评价。更多的则是采用渔药的安全浓度进行评价。国国内内外外关关于于药药物物安安全全浓浓度度的的评评价价方方法法，主主要要有有以以下下几几种：种：1.1.经经验验公公式式，即即安安全全浓浓度度=96h=96h的的半半数数致致死死浓浓度度（96h 96h LC50LC50）0.10.12.2.律律纳纳方方法法（ReineyaReineya），即即试试验验生
22、生物物1010个个或或2020个个在在不不同同的的药药液液浓浓度度中中养养殖殖，10d10d能能全全部部存存活活的的药药液液浓浓度度极极为为该渔药的安全浓度。该渔药的安全浓度。3.3.特伦堡（特伦堡（TumbellTumbell）公式）公式 4.Pichering4.Pichering等等方方法法 通通过过试试验验得得出出该该渔渔药药对对实实验验动动物物的的最最高高允允许许浓浓度度（MATCMATC），然然后后除除以以96h96h的的LC50LC50，得得出出其应用系数（其应用系数（AFAF），带入下公式求出安全浓度：），带入下公式求出安全浓度：二、亚急性毒性试验二、亚急性毒性试验亚亚急急性性
23、毒毒性性试试验验：是是为为了了观观察察受受试试动动物物在在较较长长的的时时间间内内（一一般般在在相相当当于于1/101/10左左右右的的生生命命时时间间内内），少少量量多多次次地地反反复复接接触触受受试试渔药所引起的损害作用或产生的中毒作用。渔药所引起的损害作用或产生的中毒作用。亚亚急急性性毒毒性性试试验验又又称称短短期期试试验验、亚亚慢慢性性毒毒性试验。性试验。亚亚急急性性毒毒性性试试验验是是评评价价渔渔药药毒毒性性重重要要和和有有效方法之一。效方法之一。进行亚急性毒性试验的进行亚急性毒性试验的目的目的：为为了了进进一一步步了了解解受受试试渔渔药药在在受受试试动动物物体体内内有有无无蓄积作用
24、；蓄积作用；实验动物能否对受试渔药产生耐受性；实验动物能否对受试渔药产生耐受性；测测定定受受试试渔渔药药毒毒性性作作用用的的靶靶器器官官和和靶靶组组织织，初初步估计出最大无作用剂量及中毒阈剂量，步估计出最大无作用剂量及中毒阈剂量，并并确确定定是是否否需需要要进进行行慢慢性性毒毒性性试试验验，为为慢慢性性毒毒性试验剂量的选择提供依据。性试验剂量的选择提供依据。亚急性毒性试验亚急性毒性试验常用的试验方法常用的试验方法有：有：1.1.细胞培养细胞培养 如如敌敌百百虫虫、六六氯氯苯苯、汞汞、锌锌对对细细胞胞有有丝丝分分裂裂的的抑抑制制作作用用；苯苯能能引引起起细细胞胞染染色色体体损损伤伤和和畸畸变变率
25、率增增高高。测测定定培培养养细细胞胞中中RNARNA的的合合成成，可可反反应应药药液液或污染物对细胞的毒性作用。或污染物对细胞的毒性作用。2.2.组织病变组织病变 如如鱼鱼类类接接触触苯苯酚酚，可可影影响响肝肝脏脏正正常常功功能能，使使肝肝组组织织空空泡泡化化；重重金金属属能能破破坏坏鳃鳃组组织织，使使鳃鳃丝丝上上皮肿胀，柱状细胞分解及坏死。皮肿胀，柱状细胞分解及坏死。3.3.生理生化等指标的测定生理生化等指标的测定 如如锌锌能能使使鱼鱼类类血血液液中中淋淋巴巴细细胞胞数数量量减减少少；有有机机磷磷农农药药和和氨氨基基甲甲酸酸酯酯农农药药对对胆胆碱碱酯酯酶酶的的活活性有特异的抑制作用。性有特异
26、的抑制作用。4.4.对鱼类呼吸活动影响对鱼类呼吸活动影响 一一般般是是通通过过测测定定耗耗氧氧率率、鳃鳃盖盖活活动动频频率率或或呼呼吸率等指标研究药物对鱼类呼吸活动影响。吸率等指标研究药物对鱼类呼吸活动影响。亚急性毒性的评价方法亚急性毒性的评价方法是是将将试试验验数数据据汇汇总总成成表表，进进行行相相应应的的统统计计处处理理和和分分析析，并并根根据据中中毒毒时时出出现现的的症症状状，以以及及停停药药后后组组织织和和功功能能损损害害的的发发展展和和恢恢复复情况做出综合性评价。情况做出综合性评价。三、慢性毒性试验三、慢性毒性试验慢慢性性毒毒性性试试验验：是是指指向向受受试试动动物物反反复复多多次次
27、给给药药，连连续续给给药药超超过过90d90d，对对水水产产动动物物而而言言，给给药药时时间间几几乎乎占占去去生生命命周周期期的的大大部分时间甚至终生。部分时间甚至终生。慢慢性性毒毒性性试试验验的的目目的的是是为为了了观观察察受受试试动动物物长长期期连连续接触药物对机体的影响。续接触药物对机体的影响。通通过过实实验验动动物物了了解解药药物物的的毒毒性性反反应应、剂剂量量与与毒毒性性反反应应的的关关系系、药药物物毒毒性性的的主主要要靶靶器器官官、毒毒性性反反应应的的性性质质和和程程度度及及可可逆逆性性等等，动动物物的的耐耐受受量量、无无毒毒性性反反应应的的剂剂量量、毒毒性性反反应应的的剂剂量量及
28、及安安全全范范围围，毒毒性性产产生生时时间间、达达峰峰时时间间、持持续续时时间间及及可可能能反反复复产产生生毒毒性性反反应应的的时时间间，有有否否迟迟发发性性毒毒性性反反应应，有有否否蓄积性或耐受性等。蓄积性或耐受性等。总总之之，通通过过慢慢性性毒毒性性试试验验，可可以以了了解解短短期期试试验验所所不能测得的反应，从而可以确定最大无作用剂量。不能测得的反应，从而可以确定最大无作用剂量。慢慢性性毒毒性性试试验验的的方方法法与与亚亚急急性性毒毒性性试试验验在在试验设计、观察指标等方面基本相同。试验设计、观察指标等方面基本相同。慢慢性性毒毒性性试试验验一一般般是是在在急急性性毒毒性性试试验验和和亚亚
29、急急性性毒毒性性试试验验的的基基础础上上进进行行的的，根根据据急急性性和亚急性毒性试验数据设置试验浓度。和亚急性毒性试验数据设置试验浓度。试试验验可可从从胚胚胎胎或或鱼鱼苗苗阶阶段段开开始始，也也可可从从性性腺腺还还未未发发育育成成熟熟的的幼幼鱼鱼开开始始，一一直直延延续续到到鱼的生长发育成熟，以至产卵孵化。鱼的生长发育成熟，以至产卵孵化。由由于于试试验验时时间间较较长长，一一般般需需要要使使用用流流水水装装置置，以以保保持持药药液液浓浓度度恒恒定定和和鱼鱼类类生生存存的的良良好好条条件件。此此外外，还还要要注注意意食食物物、氧氧气气、pHpH等适宜鱼类的生长条件；等适宜鱼类的生长条件；所所得
30、得到到的的存存活活率率、生生长长率率、产产卵卵率率和和孵孵化化率率等等数数据据，采采取取统统计计的的方方法法进进行行处处理理，以以此此求求出渔药对试验对象的最大允许浓度。出渔药对试验对象的最大允许浓度。除除此此之之外外，检检测测鱼鱼体体内内的的蓄蓄积积也也有有较较大大的的价价值值。有有些些药药物物，不不仅仅在在试试验验的的第第一一个个生生活活周周期期，而而且且持持续续三三代代仍仍可可检检出出有有蓄蓄积积的的现现象象，如如甲甲基基汞汞在在鱼鱼体体内内迅迅速速蓄蓄积积，第第二二代代和和第第三三代代的的鱼鱼卵卵和和胚胚胎胎中中均均有有从从亲亲鱼鱼转转移移下下来来的的大大量汞残留。量汞残留。由由于于慢
31、慢性性试试验验的的周周期期较较长长，为为了了缩缩短短周周期期，可可寻寻找找成成熟熟时时间间短短的的无无脊脊椎椎动动物物作作为为试试验验对对象象，还还可可探探索索采采用用短短期期毒毒性性试试验验的的方方法法预预测测慢慢性性毒毒性性的的可可能性。能性。慢慢性性毒毒性性试试验验是是毒毒理理学学研研究究中中试试验验周周期期最最长长、困困难难最最大大、耗耗资资最最高高、难难以以进进行行重重复复的的试试验验，对对于于新药研究成功与否具有重要的作用。新药研究成功与否具有重要的作用。慢慢性性毒毒性性试试验验是是临临床床前前安安全全性性评评价价的的主主要要内内容容，它它还还为为临临床床安安全全用用药药的的剂剂量
32、量设设计计以以及及毒毒副副作作用用监监测提供参考依据。测提供参考依据。四、特殊毒理学试验四、特殊毒理学试验特殊毒理学试验特殊毒理学试验也称专门毒性试验，也称专门毒性试验，主主要要包包括括繁繁殖殖试试验验、致致畸畸试试验验、致致突突变变试试验验和和致癌试验致癌试验等。等。1.1.繁殖试验繁殖试验是是检检验验受受试试药药物物对对实实验验动动物物生生殖殖机机能能影影响响的的一一种种方方法法。试试验验项项目目有有一一般般生生殖殖毒毒性性试试验验（喂喂养养致致畸畸试试验验）、传传统统致致畸畸试试验验和和喂喂养养繁繁殖试验。殖试验。在水产动物中还广泛应用在水产动物中还广泛应用胚胎毒性试验胚胎毒性试验。试试
33、验验目目的的是是为为了了了了解解药药物物对对实实验验动动物物生生殖殖机机能能的的影影响响以以及及胚胚胎胎毒毒性性，并并为为致致畸畸试试验验提提供供资料。资料。实实验验动动物物为为小小鼠鼠或或大大鼠鼠，有有时时也也用用兔兔。一一般般设设计计3 3个个药药物物剂剂量量组组和和1 1个个对对照照组组。最最高高剂剂量量应应产产生生轻轻度度毒毒性性反反应应；最最低低剂剂量量为为治治疗疗有有效效剂量的剂量的2 23 3倍。给药途径与临床用药相同。倍。给药途径与临床用药相同。给给药药时时间间：一一般般生生殖殖毒毒性性试试验验为为雄雄性性交交配配前前60d60d，雌雌性性交交配配前前14d14d。繁繁殖殖试试
34、验验为为大大鼠鼠断断奶奶后后开开始始饲饲喂喂受受试试药药物物，直直到到90d90d。传传统统致致畸畸试试验验为为胚胚胎胎器器官官形形成成期期（7-15d7-15d）开开始始饲饲喂喂受试药物。受试药物。胚胚胎胎毒毒性性，广广而而言言之之是是渔渔药药对对动动物物胚胚胎胎产产生生的毒性作用。的毒性作用。如如以以鱼鱼类类作作为为试试验验对对象象，因因鱼鱼类类胚胚胎胎在在不不同同发发育育阶阶段段，对对药药物物敏敏感感性性会会有有所所不不同同。其其毒毒性性可可以以表表现现出出胚胚胎胎死死亡亡、胚胚胎胎发发育育迟迟缓缓、胚胚胎畸形及胚胎功能不全等四个方面。胎畸形及胚胎功能不全等四个方面。试试验验用用鱼鱼卵卵
35、要要求求对对受受试试药药物物比比较较敏敏感感，并并且且便于观察。便于观察。属属于于半半漂漂浮浮性性的的鲢鲢、鳙鳙、草草鱼鱼、青青鱼鱼的的鱼鱼卵卵符合这个要求。符合这个要求。特特别别是是草草鱼鱼卵卵，其其卵卵胚胚发发育育初初期期有有明明显显的的蓝蓝绿绿色色、比比鲢鲢卵卵胚胚的的淡淡蓝蓝色色（有有的的略略呈呈淡淡灰灰色色）容易观察。容易观察。金金鱼鱼、圆圆尾尾斗斗鱼鱼、食食蚊蚊鱼鱼等等小小型型观观赏赏鱼鱼类类，易易于于繁繁殖殖，便便于于取取材材，也也可可作作为为渔渔药药毒毒性性测测试的鱼卵。试的鱼卵。试试验验鱼鱼数数量量可可以以视视容容器器大大小小，鱼鱼类类品品种种而而定，一般为定，一般为20-1
36、0020-100个。个。为为了了便便于于观观察察胚胚胎胎发发育育，可可采采用用透透明明的的玻玻璃璃皿皿，如如培培养养皿皿、培培养养缸缸等等作作为为试试验验容容器器，但但是是以以能能盛盛溶溶液液200-500ml200-500ml的的容容器器较较好好。去去用用试试验验的的鱼鱼卵卵，必必须须首首先先确确定定它它们们是是受受精精卵卵，一一般般待待发发育育过过原原肠肠中中期期时时方方开开始始毒毒性性试验。试验。胚胎毒性试验处理的方法有两种：胚胎毒性试验处理的方法有两种：一一种种是是以以受受试试药药物物处处理理亲亲鱼鱼，如如对对产产卵卵的的试试验验亲亲鱼鱼每每日日定定时时定定量量投投喂喂含含有有一一定定
37、量量渔渔药药的的饵饵料料，或或者者把把亲亲鱼鱼饲饲养养于于含含有有试试验验渔渔药药的的水水中中，使使其其接接触触吸吸收收药药物物，或或者者对对亲亲鱼鱼人人工工注注射射一一定定剂剂量量的的药药物物，取取其其人人工工授授精精或或自自然然受受精的卵使用。精的卵使用。另另一一种种是是在在正正常常的的鱼鱼卵卵，将将其其直直接接放放入入含含有有受试渔药的溶液中处理。受试渔药的溶液中处理。受受试试药药物物的的浓浓度度，一一般般根根据据96h96h的的LDLD5050值值为为基基础础，按按其其比比例例递递减减的的方方式式设设计计试试验验浓浓度度，但但是是必必须须包包括括鱼鱼卵卵全全部部死死亡亡的的最最小小浓浓
38、度度（LCLC100100）与与鱼鱼卵卵全全部部存存活活的的最最大大毒毒物物浓浓度度（LCLC0 0），以以便便能能获获得得半半数数忍忍受受限限、开开始始致致死浓度及阈浓度等。死浓度及阈浓度等。2.2.致畸试验致畸试验致致畸畸试试验验是是为为了了了了解解受受试试药药物物是是否否通通过过母母体体对对胚胚胎胎发发育育过过程程( (主主要要是是胚胚胎胎的的器器官官分分化化过过程程) )产产生不利影响。生不利影响。对鱼类的致畸试验可以利用亲鱼和受精卵进行。对鱼类的致畸试验可以利用亲鱼和受精卵进行。胚胎畸形是观察指标之一。胚胎畸形是观察指标之一。 其其致畸原致畸原( (teratogensteratog
39、ens) )可以从两个方面分析。可以从两个方面分析。一一是是来来自自亲亲鱼鱼母母体体，由由于于通通过过母母体体的的血血液液循循环环传传递递至至生生殖殖腺腺，如如敌敌百百虫虫、敌敌敌敌畏畏等等许许多多药药物物就就易易于于在在母母体体的的生生殖殖腺腺内内积积累累，经经卵卵母母细细胞胞的的二二次次成成熟熟分分裂裂，脱脱离离滤滤泡泡排排卵卵，产产卵卵受受精精直直至至孵孵化化，于于卵卵黄黄囊囊吸吸收收阶阶段段方方显显示示出出较较强强的的毒毒性性，出出现现畸畸形形胚胚胎胎，导导致致发发育育迟迟缓缓，功功能能不不全全以以致死亡。致死亡。另另一一方方面面，由由于于受受精精卵卵直直接接接接触触外外来来药药物物。
40、尤尤其其以以卵卵胚胚的的早早期期发发育育阶阶段段，特特别别是是在在囊囊胚胚期期之之前前，极极易易引引起起畸畸形形的现象。的现象。对对哺哺乳乳动动物物具具有有致致畸畸性性的的有有毒毒物物质质能能引引起起胎胎儿儿非非致致死死性性的的组组织织或或机机能能变变化化，例例如如导导致致腭腭裂裂、并并趾趾、骨骨化化延延缓缓、肋肋畸畸形形、肾肾发发育不全、畸形足等仔胎畸形。育不全、畸形足等仔胎畸形。致致畸畸试试验验是是在在胚胚胎胎细细胞胞分分化化和和胎胎儿儿组组织织形形成成期期给给受受孕孕动动物物饲饲喂喂受受试试药药物物，然然后后在在分分娩娩期期观观察察仔仔胎胎是是否否出出现现畸畸形形以以判判定定受受试试药药
41、物物的的毒毒性。性。过过早早地地给给予予受受试试药药物物可可能能会会影影响响受受精精卵卵的的着着床床过过程程，此此时时胚胚胎胎对对致致畸畸物物的的反反应应往往往往不不敏敏感感，过过迟迟给给予予受受试试药药物物，则则胚胚胎胎发发育育基基本本成成熟，致畸作用就可能不会显示出来。熟，致畸作用就可能不会显示出来。实验动物常用实验动物常用小鼠小鼠、大鼠大鼠和和兔兔。剂剂量量分分组组方方法法与与慢慢性性毒毒性性试试验验相相同同，至至少少应应用用3 3种种剂剂量量。一一般般以以最最大大无无作作用用剂剂量量用用于于高高剂剂量量组，以其组，以其1 13030左右的剂量用于低剂量组。左右的剂量用于低剂量组。一一般
42、般小小鼠鼠与与大大鼠鼠于于妊妊娠娠6-15d6-15d，兔兔于于妊妊娠娠6-18d6-18d饲饲喂喂受受试试药药物物，至至妊妊娠娠结结束束前前1-2d1-2d，以以手手术术方方法法从从母母体体内内取取出出胎胎儿儿，检检查查每每个个活活胎胎有有无无外外观观畸畸形形，并并进进行行特特殊殊的的固固定定或或染染色色以以检检查查胎胎儿儿脏脏、脑部及骨骼畸形等。脑部及骨骼畸形等。根根据据各各组组动动物物畸畸胎胎出出现现的的数数量量及及所所产产活活胎胎总总数数，计计算算畸畸胎胎发发生生率率。经经统统计计处处理理后后求求出出最最小小致致畸畸剂量，并以致畸指数比较不同毒物的致畸强度。剂量，并以致畸指数比较不同毒
43、物的致畸强度。 致畸指数致畸指数=A=AB B 式中式中AA母体的母体的LD50LD50 B B最小致畸剂量。最小致畸剂量。 一一般般认认为为致致畸畸指指数数在在1010以以下下的的毒毒物物为为非非致致畸畸物物，10-10010-100者为致畸物；者为致畸物；100100者为强致畸物。者为强致畸物。3.3.致突变试验致突变试验致致突突变变毒毒性性是是指指生生物物细细胞胞的的遗遗传传物物质质出出现现可可被被察察觉觉并并可可遗遗传传的的变变化化，它它包包括括基基因因突突变变和和染色体畸变染色体畸变。致突变试验的项目包括致突变试验的项目包括1 1）微生物回复突变试验、）微生物回复突变试验、2 2）哺
44、乳动物培养细胞染色体畸变试验）哺乳动物培养细胞染色体畸变试验3 3）微核试验）微核试验1 1）微生物回复突变试验（）微生物回复突变试验（AmesAmes试验）试验）所所用用微微生生物物为为组组氨氨酸酸缺缺陷陷型型鼠鼠伤伤寒寒沙沙门门氏氏菌菌的的TA97TA97、TA98TA98、TAl00TAl00、TAl02TAl02，或或大大肠肠杆杆菌菌WP2WP2的的若若干株。上述干株。上述4 4株鼠伤寒沙门氏菌常用。株鼠伤寒沙门氏菌常用。应应在在加加肝肝微微粒粒体体酶酶(S9)(S9)混混合合物物和和不不加加S9S9的的平平行行条条件件下下实实验验，受受试试动动物物至至少少5 5个个不不同同剂剂量量，
45、另另设设阴阴性性对照组和阳性对照组。对照组和阳性对照组。最最大大剂剂量量可可达达每每皿皿5.0 5.0 mgmg，最最小小剂剂量量不不得得小小于于有有效浓度和药量。效浓度和药量。2 2）哺乳动物培养细胞染色体畸变试验）哺乳动物培养细胞染色体畸变试验 用用哺乳动物原代或传代培养细胞哺乳动物原代或传代培养细胞进行。进行。设设3 3个个以以上上受受试试药药物物组组，1 1个个阴阴性性对对照照组组，1 1个个阳阳性对照组。性对照组。最最大大剂剂量量应应以以50%50%细细胞胞生生长长抑抑制制浓浓度度为为准准，最最低低剂量不得小于有效治疗剂量的剂量不得小于有效治疗剂量的2 23 3倍。倍。 3 3）微核
46、试验）微核试验 用用性成熟的小鼠性成熟的小鼠进行。进行。最最少少设设3 3个个受受试试药药物物剂剂量量组组，1 1个个阴阴性性和和1 1个个阳阳性对照组。性对照组。最最大大剂剂量量应应以以1 12LD2LD5050为为准准，最最小小剂剂量量不不得得小小于治疗有效剂量的于治疗有效剂量的2 23 3倍。倍。以以上上3 3种种试试验验均均应应按按规规定定的的方方法法作作结结果果判判定定。阳阳性性对对照照药药物物应应获获得得阳阳性性结结果果，溶溶剂剂对对照照的的阴阴性性组组应应获得阴性结果。否则结果无效；应重新试验。获得阴性结果。否则结果无效；应重新试验。根根据据农农业业部部有有关关新新兽兽药药特特殊
47、殊毒毒性性试试验验技技术术要要求求规规定定，致致突突变变试试验验必必须须至至少少做做三三项项试试验验，其其中中AmesAmes试试验验和和微微核核试试验验为为必必做做项项目目，精精子子致致畸畸、睾睾丸丸精精原原细细胞胞染染色色体体畸畸变变、显显性性致致死死突突变变试试验验三三项项可可任任选选一一项项，如如果果前前二二者者任任何何一一项项为为阳阳性性，均均必必做显性致死突变试验。做显性致死突变试验。致致癌癌试试验验较较为为复复杂杂，国国内内因因受受条条件件限限制制，新新兽兽药药的特殊毒性试验中暂未列入。的特殊毒性试验中暂未列入。4.4.致癌试验致癌试验对对于于化化学学结结构构与与致致癌癌有有关关
48、，致致突突变变试试验验为为阳阳性性，或或毒毒性性试试验验提提示示有有可可能能致致癌癌的的药药物物，必必须进行致癌试验。须进行致癌试验。选选择择实实验验动动物物应应根根据据动动物物对对某某种种受受试试药药物物致致癌作用反应的敏感性决定。癌作用反应的敏感性决定。大大鼠鼠或或小小鼠鼠对对多多种种致致癌癌物物的的反反应应较较敏敏感感，故故致致癌癌试试验验一一般般多多选选用用大大鼠鼠或或小小鼠鼠，有有时时还还需需要增加一种非啮齿类动物如犬和猴。要增加一种非啮齿类动物如犬和猴。此此外外，根根据据试试验验要要求求，也也可可选选用用其其他他动动物物，如如雏雏鸭鸭对对黄黄曲曲霉霉毒毒素素诱诱发发肝肝癌癌的的作作
49、用用较较敏敏感感，鸡鸡对对致致食食管管癌因子较为敏感。癌因子较为敏感。选选择择动动物物时时，应应对对所所选选动动物物的的肿肿瘤瘤自自然然发发生生率率有有所所了解。了解。由由于于本本实实验验持持续续时时间间较较长长，为为使使实实验验动动物物的的肿肿瘤瘤发发生生率率与与对对照照组组相相比比具具有有明明显显的的显显著著的的差差异异，并并考考虑虑到到试试验验中中途途动动物物可可能能发发生生死死亡亡等等因因素素，实实验验动动物物的的数数量量不不宜宜太太少少，一一般般情情况况下下，啮啮齿齿类类动动物物每每个个剂剂量量组中雌雄至少各组中雌雄至少各25-5025-50只，犬、猴每组只，犬、猴每组4-64-6只
50、。只。试试验验期期限限通通常常要要求求从从断断乳乳开开始始（有有时时在在断断乳乳前前开开始始）直直到到自自然然死死亡亡，几几乎乎包包括括整整个个生生命命期期，因因为为大大量量的的肿肿瘤瘤多多数数发发生生在在生生命命后后期期。此此外外，试试验验期期限限长长可可使使某某些些致致癌癌性性较较弱弱的的受受试试药药物物充充分显现其作用。分显现其作用。小小鼠鼠试试验验期期至至少少为为一一年年半半，大大鼠鼠至至少少为为2 2年年。若若试试验验已已进进行行一一年年半半或或2 2年年，出出现现肿肿瘤瘤的的情情况况仍仍不不甚甚显显著著时时，则则应应继继续续延延长长，一一般般在在动动物物接接近近自自然然死死亡亡期期
51、前前进进行行病病理理剖剖检检，以以免免因因自自然然死死亡而影响病变的观察。亡而影响病变的观察。试试验验过过程程中中要要求求经经常常观观察察动动物物的的一一般般状状况况，定定期期检检查查和和记记录录肿肿瘤瘤的的总总发发生生率率、各各种种肿肿瘤瘤发生率和肿瘤出现期限等指标。发生率和肿瘤出现期限等指标。病病理理学学检检查查是是评评定定受受试试药药物物致致癌癌作作用用的的主主要要依依据据，在在病病理理剖剖检检时时应应仔仔细细检检查查每每一一个个器器官官，发发现现肿肿瘤瘤或或疑疑似似肿肿瘤瘤的的组组织织器器官官均均应应进进行行细细胞胞病病理理学学检检查查，小小动动物物的的脏脏器器较较小小，应应做做系系统
52、的组织学检查。统的组织学检查。在对照组与试验组在对照组与试验组( (给药组给药组) )之间进行如下比较：之间进行如下比较：对对照照组组中中出出现现的的某某种种肿肿瘤瘤在在试试验验组组中中的的发发生生率率是否增高。是否增高。在在试试验验组组中中是是否否出出现现某某种种在在对对照照组组中中从从未未见见到到的肿瘤。的肿瘤。上述两种情况是否在试验组中同时发生。上述两种情况是否在试验组中同时发生。如如对对某某种种动动物物无无论论多多大大剂剂量量的的药药物物均均发发现现有有明明确确的的致致癌癌作作用用，则则认认为为对对人人有有致致癌癌的的潜潜在在性性，定定为为致致癌癌阳阳性性。如如果果在在受受试试的的两两
53、种种动动物物均为阴性结果，可定为致癌阴性。均为阴性结果，可定为致癌阴性。有有些些化化学学物物质质，在在应应用用高高剂剂量量时时对对实实验验动动物物的的致致癌癌性性轻轻微微，欲欲测测定定其其在在极极低低量量时时是是否否引引起公害则很困难。起公害则很困难。饲饲料料添添加加剂剂及及农农药药残残留留的的致致癌癌问问题题在在动动物物毒毒理学中十分重要。理学中十分重要。关关于于渔渔药药施施药药后后对对水水产产动动物物( (鱼鱼、虾虾等等) )及及人体致毒、致癌评价常用以下公式：人体致毒、致癌评价常用以下公式： 式中式中 HCCHCC一致毒致癌基准一致毒致癌基准(mg(mgL)L)；RAIRAI每日有危险物
54、质摄入量每日有危险物质摄入量(mg(mgkgdkgd) )；W WA A平均体重平均体重(kg)(kg)；W Wt t成人每日消费量成人每日消费量(mg(mgkgdkgd) )；FF鱼虾的消费率；鱼虾的消费率；BCFBCF毒物、药物的生物浓缩因子。毒物、药物的生物浓缩因子。渔渔药药引引起起鱼鱼类类的的回回避避，是是鱼鱼类类对对外外界界环环境境刺刺激激的的一一种种保保护护性性反反应应，它它是是通通过过嗅嗅觉觉、视视觉觉、侧线及其他感受器而实现的。侧线及其他感受器而实现的。回回避避反反应应是是一一种种生生理理效效应应，当当外外界界环环境境物物质质对对鱼鱼类类某某一一感感官官产产生生刺刺激激，就就会
55、会导导致致其其行行为为的改变。的改变。利利用用鱼鱼类类的的回回避避特特性性，可可以以在在一一定定程程度度上上判判定渔药毒性的大小与作用的持续情况定渔药毒性的大小与作用的持续情况。五、行为回避反应五、行为回避反应回回避避试试验验装装置置，是是进进行行回回避避试试验验的的基基本本条条件件。目目前前国国内内外外所所用用的的装装置置种种类类很很多多，形形式式不不一一，且各具特色。且各具特色。主主要要装装置置有有：管管道道型型回回避避槽槽、分分叉叉型型回回避避槽槽、TLTL一一8181型鱼类回避槽、环型回避槽。型鱼类回避槽、环型回避槽。试试验验时时，先先将将试试验验鱼鱼放放入入回回避避槽槽进进行行驯驯化
56、化，然然后后分分别别放放入入清清水水与与试试液液，记记录录鱼鱼类类在在各各只只槽槽内内的的停停留留时时间间与与进进入入次次数数，计计算算出出不不同同浓浓度度内内鱼鱼类类回回避避的的百百分分率率，以以判判断断试试鱼鱼类类对对受受试试渔渔药药的的回避反应。回避反应。六、毒代动力学研究六、毒代动力学研究急急性性和和慢慢性性毒毒性性试试验验，是是考考察察药药物物在在不不同同剂剂量量水水平平产产生生毒毒性性的的表表现现和和程程度度，剂剂量量和和给给药药时时间间与与毒毒性性的的关关系系，毒毒性性靶靶器器官官与与药药物物的的关关系系等等，但但是是并并未未涉涉及及体体内内药药物物浓浓度度及及其其在在体体内驻留
57、蓄积的问题内驻留蓄积的问题。开开展展毒毒代代动动力力学学研研究究，对对于于理理解解药药物物毒毒性性实实验验结结果果，发发现现毒毒性性的的剂剂量量水水平平和和时时程程的的关关系系，提高毒性研究资料的价值等均具有意义。提高毒性研究资料的价值等均具有意义。毒毒代代动动力力学学试试验验是是毒毒理理学学研研究究的的一一个个重重要要组组成部分。成部分。它它能能提提供供毒毒代代动动力力学学参参数数比比较较全全身身染染毒毒(systemic exposure)(systemic exposure)与毒性的关系。与毒性的关系。与与药药物物代代谢谢动动力力学学研研究究不不同同，毒毒代代动动力力学学是是在在毒毒性性
58、试试验验条条件件下下进进行行研研究究，用用于于解解释释毒毒性性试试验验结结果果，而而不不是是为为了了描描述述药药物物动动力力学学的的基基本特征。本特征。毒代动力学研究的主要目的：毒代动力学研究的主要目的：一一是是在在毒毒性性实实验验条条件件下下药药物物所所达达到到的的全全身身染染毒毒与与毒毒性发现的内在联系；性发现的内在联系；二二是是比比较较实实验验动动物物和和靶靶动动物物的的全全身身染染毒毒来来解解释释毒毒理理实验数据的价值；实验数据的价值；三三是是为为临临床床前前毒毒性性研研究究的的实实验验设设计计，如如动动物物种种属属、实验剂量和用药方案的设计提供依据。实验剂量和用药方案的设计提供依据。
59、最最终终目目的的是是通通过过不不同同毒毒性性实实验验中中的的毒毒代代动动力力学学研研究究，并并与与不不同同的的毒毒性性研研究究结结果果一一起起为为药药物物的的安安全全性性评评价价提供依据。提供依据。1.1.毒代动力学研究的设计毒代动力学研究的设计 毒代动力学试验设计应遵循以下基本原则：毒代动力学试验设计应遵循以下基本原则：首首先先，与与药药代代动动力力学学研研究究一一样样，要要求求建建立立专专属属性好、灵敏度高的血药浓度测定方法。性好、灵敏度高的血药浓度测定方法。其其次次，研研究究采采用用与与药药物物临临床床应应用用和和动动物物毒毒性性研研究究相相同同的的给给药药途途径径和和剂剂型型，以以便便
60、比比较较不不同同种种属属动物的药物全身染毒程度与毒性之间的关系。动物的药物全身染毒程度与毒性之间的关系。其其三三，测测定定目目标标物物可可以以是是原原型型药药物物，也也可可以以是是活活性性代代谢谢物物。当当药药物物代代谢谢成成数数种种活活性性代代谢谢物物时时，而而且且产产生生毒毒性性的的活活性性代代谢谢物物明明显显影影响响组组织织或或靶靶组组织织反反应应时时，应应主主要要测测定定其代谢物的浓度。其代谢物的浓度。其其四四，数数据据和和参参数数统统计计，通通常常以以平平均均值值和和变异系数变异系数( (或相对标准差或相对标准差) )表达。表达。2.2.毒代动力学的研究内容毒代动力学的研究内容 毒毒
61、代代动动力力学学的的研研究究一一般般包包括括在在毒毒性性试试验验中中的的单单剂剂量量试试验验、多多剂剂量量试试验验、组组织织分分布布试试验验、遗遗传传毒毒性性试试验验、致致癌癌试试验验、生生殖殖毒毒性性试试验验以以及及特特殊殊药药物物( (如如生生物物技技术术药药物物) )的的毒毒代代动动力力学学研研究究。研研究究方方案案要要根根据据不不同同的的试试验来制定。验来制定。单单剂剂量量试试验验：单单剂剂量量试试验验中中的的毒毒代代动动力力学学研研究究，有有助助于于确确定定试试验验剂剂赶赶方方案案，预预测测给给药药期期间药物全身染毒的速度、程度和持续时间。间药物全身染毒的速度、程度和持续时间。多多剂
62、剂量量和和慢慢性性毒毒性性试试验验：多多次次给给药药毒毒代代动动力力学学试试验验的的设设计计原原则则是是，试试验验方方案案和和动动物物选选择择应与药效学研究和药代动力学研究相符。应与药效学研究和药代动力学研究相符。组组织织分分布布试试验验：单单剂剂量量给给药药的的组组织织分分布布研研究究，应作为药物临床前安全性评价的组成部分。应作为药物临床前安全性评价的组成部分。出出现现以以下下情情况况时时应应考考虑虑进进行行多多剂剂量量给给药药的的组组织织分分布布试验研究试验研究：单单剂剂量量时时出出现现或或提提示示，药药物物或或代代谢谢物物在在器器官官或或组组织中蓄积分布半衰期较长；织中蓄积分布半衰期较长
63、；在在药药代代动动力力学学和和毒毒代代动动力力学学研研究究中中，血血液液循循环环中中药药物物或或代代谢谢物物的的稳稳态态浓浓度度显显著著高高于于单单剂剂量量给给约约研研究究中所预测的浓度；中所预测的浓度；单单剂剂量量组组织织分分布布试试验验和和药药理理试试验验中中，发发现现关关键键性性组织分布与组织的病理变化相关；组织分布与组织的病理变化相关；拟开发具有特异性分布的靶向释放药物时。拟开发具有特异性分布的靶向释放药物时。 多多剂剂量量给给药药的的组组织织分分布布试试验验的的设设计计，应应有有针针对对性性地选择一定的剂量和特定种属的动物。地选择一定的剂量和特定种属的动物。应应利利用用已已有有的的药
64、药代代动动力力学学和和毒毒代代动动力力学学资资料料，设设计给药时间和选择目标组织进行测定。计给药时间和选择目标组织进行测定。一一般般给给药药不不得得少少于于1 1周周，血血浆浆药药物物或或代代谢谢物物浓浓度度未未达到稳态时也不必长于达到稳态时也不必长于3 3周。周。对对于于半半衰衰期期长长的的药药物物、不不完完全全消消除除的的药药物物，或或具具有有不不可可预预见见的的毒毒性性靶靶器器官官分分布布的的药药物物，多多剂剂量量组组织分布试验方案设计和给药时间的确定应有区别。织分布试验方案设计和给药时间的确定应有区别。第二节第二节 渔药的安全评价渔药的安全评价渔渔用用药药物物的的不不合合理理使使用用，
65、会会对对用用药药的的水水产产动动、植植物物、水水产产食食品品的的消消费费者者( (人人) )和和环环境境生生态态产产生有害影响。生有害影响。为为了了保保障障人人、动动物物健健康康和和环环境境不不被被污污染染，避避免免含含化化学学物物质质残残留留的的水水产产品品对对人人引引起起有有害害反反应应，就就必必须须对对食食品品动动物物所所能能接接触触的的各各种种化化学学物物质质( (如如药药物物、添添加加剂剂、工工农农业业污污染染物物、生生物毒素等物毒素等) )进行安全性评价。进行安全性评价。药物安全性评价药物安全性评价，主要包括，主要包括毒理学评价毒理学评价靶动物毒性评价靶动物毒性评价残留安全性评价残
66、留安全性评价环境的安全性评价环境的安全性评价一、毒理学评价一、毒理学评价毒理学评价主要包括四个阶段：毒理学评价主要包括四个阶段：急性毒性试验阶段急性毒性试验阶段蓄积毒性和致突变试验阶段蓄积毒性和致突变试验阶段亚亚慢慢性性毒毒性性试试验验（包包括括繁繁殖殖试试验验和和致致畸试验畸试验) )和代谢毒性试验阶段和代谢毒性试验阶段慢性毒性试验阶段慢性毒性试验阶段( (包括致癌试验）包括致癌试验）1.1.急性毒性试验急性毒性试验 目目的的是是要要了了解解受受试试药药物物毒毒性性的的强强度度和和性性质质，为为蓄蓄积亚慢性试验的剂量选择提供依据。积亚慢性试验的剂量选择提供依据。试验项目包括测定经口试验项目包
67、括测定经口LDLD5050。如如剂剂量量达达10.0 10.0 g gkg kg b.wb.w仍仍不不引引起起动动物物死死亡亡，则不必继续测定，必要时尚需进行则不必继续测定，必要时尚需进行7d7d喂养试验。喂养试验。如如LDLD5050或或7d7d喂喂养养试试验验的的最最小小有有效效量量小小于于人人可可能能摄摄入入量量的的1010倍倍，此此化化合合物物应应放放弃弃，不不得得用用于于食食品品动动物。如物。如1010倍，可进入下一阶段试验。倍，可进入下一阶段试验。2.2.蓄积试验蓄积试验 急急性性毒毒性性试试验验LDLD505010.0g10.0gkg kg b.wb.w. .者者，可可不不必必进
68、进行蓄积毒性试验。行蓄积毒性试验。蓄积试验可用蓄积系数法或蓄积试验可用蓄积系数法或20d20d试验法。试验法。如如蓄蓄积积系系数数(k)3(k)I00I00倍倍3005050倍倍而而100100100倍倍者者，可可考考虑虑允允许许使使用用于于食食品品动动物物，并并制制订订日日许许量量（ADIADI）。如如果果任任何何一一个个剂剂量量发发现现有有致致癌癌作作用用，且且有有量量效效关关系系，则需进行再评议，以做出评价。则需进行再评议，以做出评价。靶靶动动物物的的毒毒性性评评价价就就是是直直接接用用靶靶动动物物进进行行药药理理学学试试验验，旨旨在在确确定定药药物物在在靶靶动动物物可可能能的的毒毒副副
69、作作用用或或不不良良反反应应、毒毒副副作作用用的的剂剂量量范范围围，从从而而提提出出减减少少或或避避免免毒毒副副作作用用的的办办法。法。 二、药物对靶动物的毒性评价二、药物对靶动物的毒性评价用靶动物进行毒性研究的用靶动物进行毒性研究的目的目的：要要证证明明受受试试药药物物在在推推荐荐使使用用条条件件下下对对靶靶动动物物的的安安全性；全性；了解与受试药物毒性有关的症状和反应；了解与受试药物毒性有关的症状和反应；若若最最大大推推荐荐量量的的5 5倍倍或或不不足足5 5倍倍的的剂剂量量就就能能使使受受实实验验动动物物中中毒毒，毒毒性性研研究究应应证证明明受受试试药药物物对对动动物物的的健康或生产不产
70、生明显副作用的最大剂量；健康或生产不产生明显副作用的最大剂量；确定受试药物对受试动物的安全范围。确定受试药物对受试动物的安全范围。 基本要求基本要求 试验设计要合理试验设计要合理严格对照严格对照，由有经验的研究人员进行。由有经验的研究人员进行。实际工作中用采用盲样法。实际工作中用采用盲样法。受受试试动动物物对对照照动动物物应应具具有有相相同同的的特特点点，一一视视同同仁仁地地对对待待，只是药物暴露不一样。只是药物暴露不一样。在整个试验过程中临床观察应每日记录在整个试验过程中临床观察应每日记录2 2次，每次，每周周7d7d。所有试验组所有试验组都都应采用合适的临床病理学程序。应采用合适的临床病理
71、学程序。若若研研究究中中包包括括组组织织学学检检查查内内容容，组组织织应应从从所所有有动动物物或或每每组组中中一一定定数数量量的的有有代代表表性性的的动动物物( (通通常常为为一一半半或或事事先先规规定定的的量量) )中采取中采取。试验组和对照组都应进行组织学检查。试验组和对照组都应进行组织学检查。如如果果组组织织经经显显微微观观察察有有损损伤伤，下下一一个个较较低低剂剂量量组组的的组组织织也也应做相应检查，直到确定无可察性作用量为止。应做相应检查，直到确定无可察性作用量为止。1.1.动物耐受性试验动物耐受性试验 药药物物在在受受试试动动物物体体内内的的剂剂量量反反应应曲曲线线，是是一一个个从
72、从无无效效到到有有效效再再至至中中毒毒反反应应的的连连续续的的动动力力学学过过程程。人人们们感感兴兴趣趣的的是是有有效效剂剂量量和和中中毒毒剂剂量量，以以及及两两者者之差所之差所代表的安全范围代表的安全范围( (图图42)42)。药药物物的的耐耐受受性性试试验验是是在在对对照照条条件件下下，确确定定靶靶动动物物对对药药物物毒毒性性剂剂量量的的反反应应。即即通通过过诱诱导导毒毒性性和和记记录录受受试试动动物物对对特特定定剂剂量量的的临临床床症症状状来来变变化化。这这可可提提示示药药物物中中毒毒作作用用的的临临床床表表现现。一一般般而而言言，对对于于起起局部作用的动物，不需做耐受性试验。局部作用的
73、动物，不需做耐受性试验。2.2.食用鱼的安全性评价食用鱼的安全性评价 近近年年来来水水产产业业得得到到了了迅迅速速发发展展，无无论论是是淡淡水水还还是是海海水水水水产产养养殖殖生生产产中中都都在在广广泛泛使使用用治治疗疗药药、防防腐腐药药、消毒药、麻醉药、渗透调节增强剂等各种药物。消毒药、麻醉药、渗透调节增强剂等各种药物。进进行行对对食食用用鱼鱼的的安安全全性性评评价价试试验验前前，首首先先应应该该进进行行全全面面的的文文献献检检索索，包包括括拟拟用用于于对对照照的的每每种种疾疾病病或或综综合合征征的的病病原原、受受感感染染鱼鱼的的种种类类、疾疾病病的的流流行行和和危危害害、病病原原学学中中的
74、的环环境境或或其其他他因因素素方方面面的的资资料料，还还应应包包括括控制鱼病的技术资料。控制鱼病的技术资料。 治治疗疗性性化化合合物物可可以以3 3种种方方式式用用于于鱼鱼类类：添添加加于于水水中中浸浸浴浴受受试试鱼鱼类类，混混合合于于饲饲料料投投喂喂鱼鱼类类和和直直接接注注射射鱼体鱼体。一一般般而而言言，对对于于外外寄寄生生虫虫和和体体表表细细菌菌感感染染症症，可可将将药药物物添添加加于于水水中中进进行行浸浸浴浴治治疗疗，对对于于全全身身性性细细菌菌感感染染和和内内寄寄生生虫虫病病，可可通通过过制制作作药药物物饲饲料料或或注注射给药射给药对对水水产产动动物物而而言言，温温度度是是一一种种非非
75、常常重重要要的的外外部部因因素素因因为为鱼鱼类类是是变变温温动动物物。温温度度变变化化也也会会影影响响受受试试水水产产动动物物对对药药物物的的代代谢谢速速度度。其其他他环环境境因因素素的的影响通常都比温度小。影响通常都比温度小。 对对于于口口服服给给药药，试试验验应应选选择择标标准准的的鱼鱼种种。对对于于温温水水鱼鱼疾疾病病预预防防的的相相关关试试验验。可可采采用用斑斑点点叉叉尾尾鮰鮰等等鱼鱼类类进进行行。而而虹鳟等可作为冷水鱼疾病预防试验的试验鱼。虹鳟等可作为冷水鱼疾病预防试验的试验鱼。受试鱼的发育阶段依药物的用途而定。受试鱼的发育阶段依药物的用途而定。试试验验应应在在商商业业养养殖殖条条件
76、件下下至至少少两两种种水水温温( (反反映映生生产产实实践践) )的的范范围围进进行行，例例如如温温水水鱼鱼为为1717和和25 25 ，冷冷水水鱼鱼为为12 12 和和17 17 。受试动物可能出现的副作用至少要连续观察受试动物可能出现的副作用至少要连续观察14d14d。任何可察性反应都应记录和报告，包括流行性和严重性。任何可察性反应都应记录和报告，包括流行性和严重性。为为证证明明药药物物的的有有效效性性，每每种种疾疾病病至至少少要要进进行行两两种种规规范范的的对照研究。对照研究。口口服服给给药药的的渔渔用用药药物物的的有有效效性性和和安安全全性性评评价价应应依据如下步骤：依据如下步骤：1
77、1）在在离离体体条条件件下下，证证明明药药物物的的抑抑制制或或杀杀灭灭病病原原菌的有效浓度，包括时间与剂量关系。菌的有效浓度，包括时间与剂量关系。2 2）用用实实验验感感染染鱼鱼建建立立控控制制病病原原菌菌的的有有效效剂剂量量，测测定时间剂量关系。定时间剂量关系。应应采采用用剂剂量量梯梯度度试试验验测测定定对对典典型型传传染染病病的的效效果果，包包括括1 1个个不不加加药药的的对对照照组组和和3 3个个非非零零的的治治疗疗剂剂量量组组。3 3个剂量中，有个剂量中，有1 1个是所估计的最佳剂量。个是所估计的最佳剂量。其其他他试试验验组组在在特特定定试试验验中中还还用用以以对对比比评评价价受受试试
78、鱼鱼的增重率和饲料报酬。的增重率和饲料报酬。3 3）在在生生产产条条件件下下证证明明药药物物至至少少对对3 3种种流流行行病病的效果。的效果。希希望望在在多多个个地地点点进进行行试试验验，但但是是这这并并非非是是强强制性要求。制性要求。也须设立不感染不加药的对照组。也须设立不感染不加药的对照组。4 4）毒毒性性研研究究应应采采用用外外表表正正常常的的动动物物进进行行，应应能能证证明药品在受试动物的合适安全范围。明药品在受试动物的合适安全范围。安安全全性性研研究究也也包包括括1 1个个非非加加药药的的对对照照组组和和3 3个个非非零零的的药药物物剂剂量量组组。3 3个个剂剂量量应应是是1 1个个
79、推推荐荐剂剂量量，1 1个个估估计计的的毒毒性性剂剂量量和和1 1个个中中等等剂剂量量，或或者者使使用用0X0X、1X1X、33、55的方案。的方案。给药时期应是最大推荐使用的期限的给药时期应是最大推荐使用的期限的3 3倍。倍。所有试验须用已经上市的配合饲料进行。所有试验须用已经上市的配合饲料进行。对对于于拟拟用用于于亲亲鱼鱼的的药药物物，还还要要求求有有繁繁殖殖方方面面的的试试验资料。验资料。5 5）安全性评价的参数。）安全性评价的参数。所所有有的的中中毒毒反反应应应应是是有有特特征征性性的的，还还应应监监测测死死亡率、发病率、增重率、血液学和血液化学。亡率、发病率、增重率、血液学和血液化学
80、。每个治疗组的动物均应进行尸体剖检。每个治疗组的动物均应进行尸体剖检。6 6）试验前应确定统计分析的方法。）试验前应确定统计分析的方法。若若资资料料收收集集后后发发现现所所期期望望的的差差异异很很明明显显，可可不不必进行统计分析。必进行统计分析。 对对于于通通过过浸浸浴浴给给药药的的药药物物，就就是是将将药药物物加加到到养养鱼鱼的的水水中中，或或将将鱼鱼放放入入含含药药的的溶溶液液中中进进行行浸浸浴浴处处理理，使鱼与药物接触一段时间或长期接触。使鱼与药物接触一段时间或长期接触。要用标准的鱼种进行试验。要用标准的鱼种进行试验。受试鱼发育阶段的确定取决于药物的用途。受试鱼发育阶段的确定取决于药物的
81、用途。所所有有药药物物要要在在至至少少两两个个不不同同水水质质条条件件下下进进行行试试验验。水水质质对对药药物物的的有有效效性性和和( (或或) )动动物物的的安安全全不不应应产产生生影影响响( (如如温温度度、pHpH、总总硬硬度度、总总硬硬度度或或有有机机质质负负荷荷) )。所所选选定定的的试试验验条条件件取取决决于于药药物物在在水水中中的的理理化化特特征征。对受试动物应该就副作用等至少观测对受试动物应该就副作用等至少观测14 d14 d。任任何何可可察察性性反反应应均均应应记记录录和和报报告告，包包括括流流行行性性和和严重性。严重性。为为证证明明药药物物的的有有效效性性，每每种种疾疾病病
82、至至少少要要进进行行两两个个规范的对照试验。规范的对照试验。 对浸浴给药的药物的有效性和安全性评价步骤如下：对浸浴给药的药物的有效性和安全性评价步骤如下：1 1）用用离离体体试试验验确确定定抑抑制制或或杀杀灭灭病病原原菌菌的的有有效效浓浓度度，包括时间和剂量关系。包括时间和剂量关系。2 2）建建立立在在特特定定时时间间控控制制实实验验室室使使鱼鱼发发病病病病原原菌菌的的有有效效浓浓度度；例例如如15.0mg15.0mg或或30.0 30.0 mgmg，1 1、4 4、8 8、12 12 h h等等。确确定定时时间间剂剂量量关关系系。用用剂剂量量梯梯度度研研究究法法确确定定对对规规范范的的重重症
83、症感感染染的的效效果果，采采用用不不加加药药的的空空白白对对照照组组和和3 3个个非非零零的的治治疗疗浓浓度度。3 3个个浓浓度度中中有有1 1个个应应该该是是所所估估计计的的最最佳佳药药物物浓浓度度，2 2个个浓浓度度分分别别是是较较低低和和较较高高剂剂量量组组。在在疾疾病病治治疗疗过过程程中中，时时间间剂剂量量关关系系至至关关重重要要。不不感感染染不不加加药药的的对对照照组组用用以以确确定定正正常常或或健健康康鱼鱼的的“正正常常死死亡亡率率，在在特特定定的的试试验验或或测测定定中中，该该对对照照组组也可以对比评价受试鱼的增重率和饲料报酬。也可以对比评价受试鱼的增重率和饲料报酬。 3 3）要
84、要证证明明药药物物在在生生产产条条件件下下至至少少对对2 2种种暴暴发发性性流流行行病病的的有有效效性性。可可在在多多个个地地点点进进行行试试验验，但但是是这这并并非非是是强强制制性性要要求求。也也必须设立不感染不给药的对照组。必须设立不感染不给药的对照组。4 4）安安全全性性试试验验应应使使用用外外表表正正常常的的鱼鱼进进行行，以以证证明明药药品品在在拟拟用用动物种属的安全范围。动物种属的安全范围。安安全全性性试试验验分分组组也也包包括括：1 1个个非非加加药药的的对对照照组组和和3 3个个非非零零药药物物浓浓度度组组，3 3个个浓浓度度应应是是1 1个个拟拟用用浓浓度度、1 1个个估估计计
85、的的毒毒性性浓浓度度和和1 1个个中中等等浓浓度度，或或者者用用推推荐荐应应用用浓浓度度的的倍倍数数00、11、3x3x和和5x5x的的方方案案。给给药药期期应应是是最最大大推推荐荐使使用用期期的的3 3倍倍。所所有有研研究究均均应应使使用用已已经经上上市市的的配配合合饲饲料料进进行行。对对于于拟拟用用于于亲亲鱼鱼的的药药物物还还需需要要药物对繁殖影响的资料。药物对繁殖影响的资料。 j j：5 5）安安全全性性评评价价的的参参数数。所所有有的的毒毒性性反反应应是是具具有有特特点点的的。还还应应监监测测死死亡亡率率、发发病病率率、增增重重率率、血血液液学学和和血血液液化化学学指指标标。每每个处理
86、组的动物应进行尸体剖检。个处理组的动物应进行尸体剖检。 6 6）研究前应确定合适的统计分析方法。）研究前应确定合适的统计分析方法。中中草草药药是是我我国国的的国国粹粹。渔渔用用中中药药的的安安全全性性和有效性评价尚无统一的要求。和有效性评价尚无统一的要求。中药饲料添加剂，一般要做急性毒性试验中药饲料添加剂，一般要做急性毒性试验。如如因因给给药药浓浓度度或或给给药药体体积积过过大大，无无法法测测出出LDLD5050者，可测定最大浓度下的最大容积。者，可测定最大浓度下的最大容积。试试验验一一般般是是在在24h24h内内灌灌服服2 24 4次次，在在7d7d内内观观察动物的表现。察动物的表现。三、中
87、草药的评价三、中草药的评价 对对于于文文献献记记载载有有中中等等毒毒性性的的中中药药，除除进进行行急急性性毒毒性试验外，还应做亚慢性毒性试验。性试验外，还应做亚慢性毒性试验。如如受受试试样样品品体体积积过过大大，难难以以选选出出中中毒毒的的最最大大剂剂量量时，则应参考急性毒性试验。时，则应参考急性毒性试验。 选选择择动动物物能能承承受受的的最最大大剂剂量量或或数数倍倍于于最最大大有有效效量量的的剂剂最最( (高高于于临临界界推推荐荐剂剂量量) )为为高高剂剂量量组组进进行行分分组组试验。试验。给给药药方方式式与与临临床床一一致致；亚亚慢慢性性毒毒性性试试验验常常用用大大鼠鼠，给药和观察期为给药
88、和观察期为606090d90d。按西药的方法测定毒理学指标。按西药的方法测定毒理学指标。中中药药的的临临床床试试验验也也分分实实验验临临床床试试验验和和扩大区域临床试验扩大区域临床试验两部分。两部分。对于对于保健促生长的中药保健促生长的中药，实实验验临临床床试试验验是是在在实实验验室室条条件件下下进进行行，目目的的是是要要确确定定有有效效剂剂量量和和安安全全性性。试试验验分分不不同同剂剂量量组组，每每组组动动物物的的数数量量应应符符合合统统计计学学要要求求。实实验验动动物物为为靶靶动动物物，用用药药方方式式与与推推荐荐的的临临床床应应用用药药方方式式相相同同。应应设设空空白白对对照照组组，有有
89、同同类类有有效效中中药药可可用用的的，还还应应设阳性对照组。设阳性对照组。扩扩大大区区域域的的试试验验是是自自然然生生产产条条件件下下的的较较大大范范围围内内考考察察药药物物的的有有效效性性的的安安全全性性。试试验验设设一一个个对对照照组组和和两两个个剂剂量量组组。两两个个剂剂量量组组中中，一一组组为为推推荐荐的的临临床床有有效效量量，另另一一组组为为高高剂剂量量组组( (剂剂量量为为推推荐荐临临床床剂量的剂量的1 1倍或几倍倍或几倍) )。临临床床试试验验的的观观察察指指标标有有发发病病率率、存存活活率率、增增重重率率、饲料报酬率和动物产品质量等。饲料报酬率和动物产品质量等。对于防治疾病的中
90、药对于防治疾病的中药，实验临床试验实验临床试验应采用人工发病模型进行试验。应采用人工发病模型进行试验。感感染染前前给给药药是是观观察察预预防防作作用用，感感染染后后给给药药以以观观察察治治疗疗作作用。用。受受试试动动物物分分为为空空白白对对照照组组、阳阳性性对对照照组组和和2 23 3个个受受试试药药物组。物组。试验前最好进行体外抑菌试验。试验前最好进行体外抑菌试验。如如果果人人工工感感染染有有困困难难，也也可可利利用用自自然然病病例例。但但是是自自然然病病例的性质、发病的程度等必须诊断确实。例的性质、发病的程度等必须诊断确实。扩扩大大区区域域试试验验前前，应应做做流流行行病病学学调调查查，选
91、选择择合合适适的的常常发发病的动物群体进行试验。病的动物群体进行试验。无无论论预预防防还还是是治治疗疗试试验验，均均需需设设对对照照组组( (空空白白对对照照和和有有效对照效对照) )。对于试验结果应进行统计分析。对于试验结果应进行统计分析。四、残留研究四、残留研究畜畜、禽禽、水水产产动动物物是是人人类类蛋蛋白白质质食食品品肉肉、乳乳、蟹蟹、鱼鱼的的来来源源，因因而而在在畜畜、禽禽、水水产产动动物物饲饲养养过过程程中中所所用用的的化化学学物物质质的的安安全全性性评评价价与与人人类类食食品品中中化化学学物质残留的安全性评价直接相关。物质残留的安全性评价直接相关。同同时时，由由于于兽兽用用药药品品
92、只只是是在在有有限限时时间间内内使使用用，而而大大多多数数化化学学物物质质，不不论论是是像像黄黄曲曲霉霉等等偶偶然然污污染染物物还还是是有有目目的的使使用用的的饲饲料料添添加加剂剂，一一般般都都是是长长期期的的、甚至是对食品动物终生使用。甚至是对食品动物终生使用。 因因此此，对对于于任任何何一一种种饲饲料料添添加加剂剂( (或或饲饲料料污污染染物物) )进行安全性评价，需考虑以下几方面的问题。进行安全性评价，需考虑以下几方面的问题。饲饲料料中中化化学学物物质质对对食食品品动动物物、共共生生微微生生物物以以及及食食品消费者的毒性。品消费者的毒性。畜畜、禽禽、水水产产品品中中作作为为持持久久性性残
93、残留留物物的的添添加加剂剂及及其代谢物的化学性质和数量。其代谢物的化学性质和数量。畜畜、禽禽、水水产产品品中中残残留留物物对对人人的的潜潜在在毒毒性性，动动物物哪哪些些组组织织或或器器官官中中的的含含量量高高。残残留留物物在在食食品品中中的的允许残留量。是否有适宜的监测方法。允许残留量。是否有适宜的监测方法。食食品品加加工工过过程程对对饲饲料料添添加加剂剂在在食食品品中中的的残残留留及及各各种代谢的毒性是否有影响。种代谢的毒性是否有影响。1.1.代谢研究和用于毒性测试残留物的选择代谢研究和用于毒性测试残留物的选择 对对靶靶动动物物使使用用的的化化合合物物，不不一一定定在在可可食食性性产产品品中
94、中出出现现。动动物物体体的的酶酶系系统统或或体体液液可可能能对对此此化化合合起起作作用用，产产生生出出新新的的物物质质（代代谢谢物物和和降降解解物物）。动动物物可可食食产产品品中中的的这这些些物物质质，是是原原型型化化合合物物吸吸收收速速度度与与程程度度、代代谢谢速速度度与与程程度度以以及及原原型型化化合合物物和和代代谢谢物物排排泄泄速速度度的复合函数。的复合函数。受受试试动动物物体体内内化化合合物物的的总总残残留留，由由母母体体化化合合物物、游游离离代代谢谢物物及及与与内内源源性性分分子子共共价价结结合合的的代代谢谢物物组组成成。组组织织中中每每种种残残留留物物的的相相对对量量和和绝绝对对量
95、量，随随着着化化合合物物具具有有不不相相似似的的毒毒性性潜潜能能，因因此此，必必须须研研究究用用药药靶靶动动物物可可食食产产品品中中总总残残留留的的数数量量、持持续续时时间间和和化化学学性性质质，还还要要研研究究化化合合物物在在毒毒性性实实验验动动物物体体内的代谢情况。内的代谢情况。总总残残留留清清除除研研究究：最最后后一一次次给给药药后后，靶靶动动物物可可食食性性组织中与药物有关的总残留的消除应该测定。组织中与药物有关的总残留的消除应该测定。对于水产动物，对于水产动物，可食性组织是主要是肌肉可食性组织是主要是肌肉。这这些些组组织织将将用用以以进进行行原原形形药药物物和和各各个个代代谢谢物物的
96、的定定性性和定量测定。和定量测定。通过这些数据可以用作建立休药期标准。通过这些数据可以用作建立休药期标准。 放射性示踪法放射性示踪法是迄今用于确定药物总残留最有用的技术。是迄今用于确定药物总残留最有用的技术。1414C C是是被被最最为为广广泛泛使使用用的的同同位位素素，因因为为它它的的标标记记不不会会出出现现分分子子间间交换的问题。交换的问题。清清除除研研究究通通常常是是向向过过去去未未用用药药的的足足量量动动物物给给予予放放射射标标记记的的药药物物，最后一次用药后，间隔一定时间将分组的动物处死。最后一次用药后，间隔一定时间将分组的动物处死。所所给给的的化化合合物物具具有有很很高高的的放放射
97、射性性纯纯度度，因因为为放放射射性性标标记记的的污污染染物可能造成一种药物持续残留的假象。物可能造成一种药物持续残留的假象。放放射射性性标标记记的的地地点点，应应保保证证原原形形药药物物中中很很可可能能与与毒毒性性有有关关的的部部分得到了恰当的标记。分得到了恰当的标记。例例如如，如如果果一一个个原原形形化化合合物物中中有有两两个个部部分分可可能能与与毒毒性性有有关关，代代谢谢作作用用可可能能使使它它们们分分解解成成两两部部分分，那那么么就就应应该该测测定定这这两两部部分分的的清清除除情情况况。可可将将每每部部分分分分别别标标记记的的化化合合物物等等摩摩尔尔给给药药，进进行行单单次次研研究究，或
98、或分分别别将将每每部部分分标标记记的的化化合合物物等等分分摩摩给给药药，进进行行两两次次研研究究；或或将将两两种种同同位位素素标标记记如如14C14C和和3H)3H)的的化化合合物物同同时时给给药药，进进行单次研究。行单次研究。 所所给给剂剂量量应应是是打打算算使使用用的的高高剂剂量量，应应按按靶靶动动物物暴暴露药物的方式给药。露药物的方式给药。例例如如，药药物物是是以以某某种种特特定定治治疗疗作作用用而而给给动动物物用用一一次，则放射性标记的药物只给动物用一次。次，则放射性标记的药物只给动物用一次。若若要要延延长长治治疗疗同同时时又又要要零零休休药药期期，就就要要提提供供能能证证明残留浓度已
99、近似达到稳态的资料。明残留浓度已近似达到稳态的资料。残残留留清清除除研研究究可可采采用用7d7d给给药药方方案案。若若无无法法证证明明是是否否达达到到稳稳态态浓浓度度，就就要要确确证证延延长长治治疗疗不不会会产产生生新新的的代代谢谢物物。例例如如，证证明明代代谢谢物物的的类类型型和和组组织织中中代代谢物的相对比例是稳定的。谢物的相对比例是稳定的。测测定定组组织织中中总总残残留留清清除除时时，零零休休药药期期和和随随后后3 3个个时时间至少要各宰杀间至少要各宰杀3 3头动物。头动物。若若为为零零休休药药期期，则则要要向向6 6头头动动物物给给药药足足够够长长时时间间以以证明残留达到稳态，随后在零
100、时宰杀动物。证明残留达到稳态，随后在零时宰杀动物。 靶靶动动物物的的代代谢谢研研究究：新新药药应应能能提提供供靶靶动动物物按按要要求求的的最最大大使使用用剂剂量量给给药药后后可可食食组组织织中中化化合合物物的的代代谢谢命命运运方方面面的资料。的资料。已已发发表表的的文文献献常常常常包包含含密密切切相相关关化化合合物物代代谢谢的的资资料料。这这些些资资料料很很有有参参考考价价值值，但但是是通通常常不不能能代代替替受受试试化化合合物在靶动物体内代谢过程方面的试验观测。物在靶动物体内代谢过程方面的试验观测。代代谢谢研研究究可可使使用用总总残残留留清清除除研研究究采采集集的的组组织织。如如果果组组织织
101、冷冷冻冻储储藏藏了了较较长长时时间间，就就要要证证明明代代谢谢物物在在冷冷冻冻状状态态下下的的稳稳定定性性，如如证证明明代代谢谢物物的的萃萃取取和和分分离离是是否否有有变变化化。如如果果无无合合适适的的组组织织可可用用，则则要要按按前前述述方方法法进进行行总总残残留留清清除除研研究究。应应建建立立代代谢谢物物的的萃萃取取和和分分离离方方法法，这这些些方方法法应应便便于于对对每每种种组组织织的的代代谢谢物物曲曲线线进进行行比比较较。每每种种组组织的曲线还要同实验动物的曲线进行比较。织的曲线还要同实验动物的曲线进行比较。代代谢谢物物的的结结构构鉴鉴定定：对对主主要要化化合合物物是是否否进进行行结结
102、构构鉴鉴定定取取决决于于原原形形药药物物和和其其具具有有潜潜在在活活性性代代谢谢物物的的程程度度。如如果果总总残残留留浓浓度度达达到到峰峰值值时时( (常常指指零零休休药药期期) )代代谢谢物物在在可可食食组组织织的的量量超超过过总总残残留留的的1010，或或者者其其浓浓度度超超过过0.1mg0.1mgkgkg，则则该该代代谢谢物物就就被被认认为为是是主主要要残残留留物物。在在某某些些情情况况下下，对对主主要要代代谢谢物物仅仅进进行行化学性质研究而不必进行严格的结构鉴定。化学性质研究而不必进行严格的结构鉴定。 代代谢谢物物持持续续时时间间：要要测测定定化化合合物物最最后后一一次次给给药药后后可
103、可食食组组织织中中原原形形药药物物和和各各个个代代谢谢物物在在不不同同时时间间的的浓度。浓度。如如果果总总残残留留的的浓浓度度( (即即游游离离代代谢谢物物质质加加共共价价结结合合残残留留) )在在规规定定的的休休药药期期时时刻刻低低于于可可食食组组织织中中所所允允许浓度。则此残留是安全的。许浓度。则此残留是安全的。然然而而，如如果果共共价价结结合合残残留留的的浓浓度度超超过过了了所所允允许许的的残留浓度。则要收集更多的资料以证明其安全性。残留浓度。则要收集更多的资料以证明其安全性。 实验动物的代谢研究实验动物的代谢研究：这这部部分分试试验验的的目目的的，是是要要确确定定人人从从靶靶动动物物组
104、组织织中中所所摄摄入入的的代代谢谢物物也也是是否否能能由由用用于于毒毒性性试试验验的的实实验验动物代谢产生。动物代谢产生。研研究究应应使使用用正正在在做做致致癌癌物物测测试试的的化化合合物物以以及及其其他他毒性终点试验的化合物进行。毒性终点试验的化合物进行。为为便便于于资资料料评评估估，试试验验应应采采用用与与在在靶靶动动物物代代谢谢研研究中所用的相同的色谱和化学鉴定方法。究中所用的相同的色谱和化学鉴定方法。只要对代谢进行定性研究就可以了。只要对代谢进行定性研究就可以了。2.2.用于毒性试验代谢物的选择用于毒性试验代谢物的选择如如果果代代谢谢物物没没有有进进行行自自动动暴暴露露试试验验并并且且
105、毒毒性性潜潜能能显显著著高高于于原原型型化化合合物物，则则应应对对代代谢谢物物分分别别进进行行毒毒理学研究。理学研究。如如果果动动物物产产生生的的代代谢谢物物达达到到以以靶靶动动物物组组织织中中摄摄入入的的残残留留的的9090以以上上，自自动动暴暴露露就就是是一一种种合合适适的的毒毒性测试法。性测试法。若若非非如如此此，则则应应根根据据从从靶靶动动物物收收集集到到的的有有关关该该代代谢谢物物质质浓浓度度、持持续续时时间间、化化学学结结构构或或性性质质等等，决决定是否要分开进行此化合物的毒性试验。定是否要分开进行此化合物的毒性试验。3.3.靶组织和标示残留的确定靶组织和标示残留的确定靶靶组组织织
106、是是筛筛选选出出的的用用以以监监测测靶靶动动物物总总残残留的可食性组织。留的可食性组织。靶靶组组织织常常常常是是( (但但并并非非一一定定就就是是) )残残留留清清除到允许浓度的最后的组织。除到允许浓度的最后的组织。标标示示残残留留物物是是最最后后组组织织中中其其浓浓度度清清除除到到允允许许浓浓度度的残留物。的残留物。标标示示残残留留物物的的浓浓度度与与总总残残留留的的浓浓度度存存在在着着已已知知的的相互关系。相互关系。标标示示残残留留物物可可能能是是受受试试的的化化合合物物，或或其其代代谢谢物物，或常规方法能够测定的残留的复合物。或常规方法能够测定的残留的复合物。选选择择靶靶组组织织或或标标
107、示示残残留留物物，是是要要说说明明标标示示残残留留物物浓浓度度低低于于最最大大允允许许浓浓度度( (RmRm) )时时，每每个个组组织织中中总总残残留的浓度将等于或低于它们的允许浓度。留的浓度将等于或低于它们的允许浓度。毒毒理理学学试试验验是是要要确确定定化化合合物物产产生生副副作作用用的的剂剂量量和和产生无可察性作用的量产生无可察性作用的量(NOEL)(NOEL)。如如果果化化合合物物不不是是致致癌癌物物，在在最最敏敏感感动动物物得得到到的的最最敏敏感感作作用用的的NOELNOEL除除以以安安全全因因子子，就就可可用用于于确确定定药药物残留的日许量物残留的日许量(ADI)(ADI)。如如有有
108、充充足足的的数数据据证证明明此此NOELNOEL不不能能预预测测人人体体毒毒性性，就应采用更合适的就应采用更合适的NOELNOEL建立建立ADIADI。 五、建立安全浓度五、建立安全浓度假假设设一一个个人人每每日日吃吃的的可可食食肌肌肉肉比比器器官官组组织织多多，计计算算药药物物残残留留的的安安全全浓浓度度时时应应考考虑虑这这种种摄摄入入量量的的差差别别，肌肌肉肉、肝肝脏脏和和脂脂肪肪的的摄摄人人值值分分别别是是300.0 300.0 g g、100.0 100.0 g g和和50.0 50.0 g g。这这种种摄摄入入值值适适用用于于所所用用的的动动物物，因因为为当当一一个个人人吃吃饱饱了了
109、一一种种动动物物的的肌肌肉肉后后，他他就就不不可能吃另一种动物的肌肉。可能吃另一种动物的肌肉。奶奶和和蛋蛋是是一一种种单单独独的的食食品品，也也就就是是说说，人人在在吃吃过过肉肉或或器器官官组组织织外外，一一般般还还吃吃奶奶和和蛋蛋。奶奶的的摄摄入入值值为为1.5 L1.5 L，蛋为，蛋为100.0 g100.0 g。每每种种可可食食组组织织中中的的安安全全浓浓度度是是利利用用日日许许量量ADIADI，单单位位mgmg( (kgdkgd)、人人的的平平均均体体重重(60 (60 kg)kg)和和每每日日摄入的产品量摄入的产品量(g(gd)d)计算：计算： 无无论论是是致致癌癌物物还还是是非非致
110、致癌癌物物，只只要要是是准准备备用用于于食食品品动动物物，都都要要建建立立起起一一种种能能够够可可靠靠测测定定标标示示残残留留物物的的分分析析方方法法( (化化学学或或生生物物学学方方法法) )，以以保保证证有有毒毒物质的总残留不超标。物质的总残留不超标。总残留的测量是由下述过程实现的：总残留的测量是由下述过程实现的：(1)(1)选择标示残留物。选择标示残留物。(2)(2)确定标示残留物与总残留之间的定量关系。确定标示残留物与总残留之间的定量关系。(3)(3)计计算算标标示示残残留留物物在在靶靶组组织织中中的的最最大大允允许许浓浓度度( (RmRm) )，以保证有毒物质的总残留不超过允许浓度。
111、，以保证有毒物质的总残留不超过允许浓度。六、残留分析方法六、残留分析方法 休休药药期期是是指指受受试试化化合合物物最最后后一一次次给给药药到到动动物物上上市市( (安安全屠宰、起捕全屠宰、起捕) )可供人安全消费的时间间隔。可供人安全消费的时间间隔。推荐的休药期应满足以下条件：推荐的休药期应满足以下条件：(1)(1)给给生生产产者者提提供供一一个个高高保保险险系系数数，使使食食用用的的动动物物品品质能适合现行的法规。质能适合现行的法规。(2)(2)与动物无公害生产管理规范相一致。与动物无公害生产管理规范相一致。(3)(3)生产者能遵守。生产者能遵守。七、建立休药期七、建立休药期如如果果生生产产者者遵遵守守了了推推荐荐的的休休药药期期，产产品品就就不不会会对对消消费费者者引引起起不不良良影影响响，即即用用药药动动物物的可食性产品的是安全的。的可食性产品的是安全的。 休休药药期期是是依依据据统统计计学学上上的的耐耐受受限限量量方方法法而而建立的。建立的。当当残残留留浓浓度度的的耐耐受受限限量量达达到到或或低低于于允允许许的的浓浓度度时时，休休药药期期就就确确立立了了。如如果果所所计计算算的的休药期是在休药期是在1d1d之内，休药期就应是下一日。之内，休药期就应是下一日。
