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1、精品文档 RNA 浓度的 OD 比值说明 OD260/OD280=1.92.0 说明 RNA 居多，纯度已经很高了。 纯 DNA：OD260/OD2801.8(1.9，表明有 RNA 污染；1.6，表明有蛋白质、酚等污染） 纯 RNA：1.7 OD260/OD2802.0（1.7 时表明有蛋白质或酚污染；2.0 时表明可能有异硫氰酸残存 一般来说 OD260代表核酸的吸光度， OD280代表蛋白质的吸光度， OD230代表其他杂质 （多糖等）的吸光度。A 代表吸光值，而 OD 是光密度值，一个意思。 当 A260 读数处在 0.1-0.5 之间，A200 到 A320 之间的数值构成一条光滑的
2、曲线时， 少量苯酚（30 ul/ml）残留会使 A230，A260，A280 均变大（差不多增加一倍） ，但 A260/A280 和A260/A230 均在 2 左右。 少量异硫氰酸胍（132 uM）残留使 A230 变大，但 A260，A280 几乎不变，所以 A260/A280仍在 2 左右，而 A260/A230 大大低于 2。 大量异硫氰酸胍（2.4 M）残留使 A230，A260，A280 均变大，根本就没有办法测定了。 PEG （6.25%） 残留使 A230， A260， A280 均变大， 但对 A230， A260 影响更大， 所以 A260/A280比 2 大不少，而 A2
3、60/A230 仍在 2 左右。 核酸抽提中常用的试剂，如 Phenol，GuanidineIsothiocyanate，PEG 都能使 A260 和 A280 的值变大，但是却可能使二者的比值与高纯度核酸的比值一致。因为 A260 值几乎是峰值，所以有必要在其两边各取一个：A280 和 A230。干净的核酸 A260/A230 应该在 2 左右。如果有在 230 nm 处的强吸收提示污染有酚盐离子等有机化合物 解决办法： 1. 蛋白质污染：确保不要吸入中间层及有机相。减少起始样品量，确保裂解完全、彻底。加入氯仿后首先要充分混匀，并且离心分层的离心力和时间要足够。如果所得 RNA 的OD260
4、/OD280比值偏低，则用氯仿重新抽提一次，再沉淀，溶解。 精品文档 2. 苯酚残留：确保不要吸入中间层及有机相。加入氯仿后首先要充分混匀，并且离心分层的离心力和时间要足够。 3. 多糖或多酚的残留：一些特殊的组织和植物中，多糖、多酚含量较多，这些残留也会导致 OD260/OD280比值偏低。因此，从这类材料中提取 RNA 时，需要注意多糖、多酚杂质的去除。 4. 设备限制：测定 OD260及 OD280数值时，要使 OD260读数在 0.10.5 之间。此范围线性最好。用水稀释样品：测 OD 值时，对照及样品稀释液请使用 10 mM Tris，pH7.5。用水作为稀释液将导致比值偏低。 比值低可能有蛋白污染，高了可能有 DNA 污染，建议你抽提的 RNA 分三管，两管保存，另一管用来跑胶和测定 OD，跑胶是最直观的，1%的胶就可以，抽提后马上跑，一般不会降解很多， 所以设备材料不需要去酶处理不会有影响的。 你的 OD 比值低可能是溶解时用的水的 PH 值偏酸。可以试着调到 8.0 左右再测，这样就会上来了。
