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1、2.2.2 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体一、动物细胞融合一、动物细胞融合 动物细胞融合也称为细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合成一个细胞的过程。1.1.动物细胞融合过程动物细胞融合过程 灭活的病毒颗粒黏灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合,形成杂种细胞细胞融合,形成杂种细胞(细胞膜具有一定的流动性)(细胞膜具有一定的流动性)比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、 细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞融合的方法
2、细胞融合的方法 去除细胞壁后诱导去除细胞壁后诱导原生质体融合原生质体融合使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合诱导方法诱导方法物理(离心、振荡、物理(离心、振荡、电刺激)电刺激)化学(聚乙二醇)化学(聚乙二醇)物理、化学方法物理、化学方法(同左)(同左)灭活的病毒灭活的病毒用途用途获得杂种植株获得杂种植株制备单克隆抗体制备单克隆抗体2.2.植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 3. 3.细胞融合技术的优势细胞融合技术的优势 突破了有性杂交方面的局限,使远缘杂突破了有性杂交方面的局限,使远缘杂交成为可能。交成为可能。 4.4.细胞融合技术的应用细胞融合技
3、术的应用 细胞遗传、细胞免疫肿瘤和生物新品种细胞遗传、细胞免疫肿瘤和生物新品种培育等。特别是制备单克隆抗体。培育等。特别是制备单克隆抗体。二、单克隆抗体二、单克隆抗体 抗体:机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 浆细胞(效应B淋巴细胞)产生抗体。 单克隆抗体:由单个B淋巴细胞经过无性繁殖(克隆),形成基因型相同的细胞群,这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点:特异性强、灵敏度高。 所以传统的抗体的生产方法的缺陷是什么?所以传统的抗体的生产方法的缺陷是什么?怎样解决这个问题?怎样解决这个问题?1.B1.B淋巴细胞与抗体的关系:淋
4、巴细胞与抗体的关系: (1) B (1) B淋巴细胞受抗原刺激后,可以产生抗体。淋巴细胞受抗原刺激后,可以产生抗体。 (2) (2) 动物体内的动物体内的B B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体,每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。体,每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 (3) (3) 每一个每一个B B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体。但淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体。但一个一个B B淋巴细胞不能在体外培养条件下无限增殖。淋巴细胞不能在体外培养条件下无限增殖。 传统的抗体的生产方法:向动物体内反复注射传统的抗体的生产方法:向动物体内反复注射某种抗原,使动物
5、产生抗体,然后,从动物血清中某种抗原,使动物产生抗体,然后,从动物血清中分离出所需抗体。产量低、纯度低、特异性差。分离出所需抗体。产量低、纯度低、特异性差。 淋巴细胞能产生抗体;肿瘤细胞能无限增殖。淋巴细胞能产生抗体;肿瘤细胞能无限增殖。利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞。淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞。即具即具有有B B淋巴细胞的特性只分泌一种特异性抗体,淋巴细胞的特性只分泌一种特异性抗体,又具有又具有肿肿瘤细胞的特性能无限增殖。瘤细胞的特性能无限增殖。利用动物利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞。细胞培养
6、技术大量培养杂交瘤细胞。2.2.如何大量生产单克隆抗体如何大量生产单克隆抗体 B淋巴细胞淋巴细胞 注射抗原注射抗原培养培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合细胞融合单单克克隆隆抗抗体体的的制制备备过过程程多种杂交细胞多种杂交细胞在具有筛选作用在具有筛选作用 的培养基上培养的培养基上培养专一抗性专一抗性检验阳性检验阳性克隆上述克隆上述 杂交细胞杂交细胞专一抗性专一抗性检验阳性检验阳性将不同杂种将不同杂种 细胞分开,并细胞分开,并克隆专一抗体,检验阳性细胞克隆专一抗体,检验阳性细胞体外培养体外培养注射到小鼠体内注射到小鼠体内单克隆抗体单克隆抗体3.3.两次筛选:两次筛选:筛选杂交瘤细胞;筛筛选杂交瘤细胞
7、;筛选能分泌特异性抗体选能分泌特异性抗体的杂技瘤细胞。的杂技瘤细胞。(1 1)作为诊断试剂:)作为诊断试剂:体外诊断试剂;纯度高、体外诊断试剂;纯度高、特异性强;准确、高效、简易、快速。特异性强;准确、高效、简易、快速。单克隆抗体单克隆抗体药物药物4.4.单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用(2 2)用于治疗疾病和运载药物:)用于治疗疾病和运载药物:主要用于癌主要用于癌症治疗;制成症治疗;制成“生物导弹生物导弹”。定向寻找目标定向寻找目标杀灭杀灭目目标标 1. 1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同?植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同? 植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术
8、基本相同,不同的是植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同,不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁,然后再融合;动物细胞融合是两植物体细胞融合前需去掉细胞壁,然后再融合;动物细胞融合是两个体细胞直接融合。个体细胞直接融合。 2.2.制备单克隆抗体时,为什么要选用制备单克隆抗体时,为什么要选用B B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞?合形成杂交瘤细胞? 哺乳动物感染抗原后,其体内会形成相应的哺乳动物感染抗原后,其体内会形成相应的B B淋巴细胞,淋巴细胞,B B淋巴淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物
9、在免疫反应的过程中,每一种程中,每一种B B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体,要想获得大量的淋巴细胞能分泌一种特异性抗体,要想获得大量的特异性抗体,必须使能分泌该单一抗体的特异性抗体,必须使能分泌该单一抗体的B B淋巴细胞大量增殖。淋巴细胞大量增殖。B B淋淋巴细胞具有产生单一抗体的能力,但不能在体外增殖;骨髓瘤细胞巴细胞具有产生单一抗体的能力,但不能在体外增殖;骨髓瘤细胞是一种癌细胞,它能在体外培养条件下无限增殖,但不能产生抗体。是一种癌细胞,它能在体外培养条件下无限增殖,但不能产生抗体。因此,把一种因此,把一种B B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,产生杂交瘤淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,
10、产生杂交瘤细胞,它会兼有两个亲本细胞的特性细胞,它会兼有两个亲本细胞的特性在体外培养条件下能不断在体外培养条件下能不断增殖,同时能产生出某种特异性的抗体。增殖,同时能产生出某种特异性的抗体。. .在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中,正确的是:在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中,正确的是:A.A.结果是相同的结果是相同的 B.B.杂种细胞的形成过程基本相同杂种细胞的形成过程基本相同C.C.操作过程中酶的作用相同操作过程中酶的作用相同 D.D.诱导融合的手段相同诱导融合的手段相同C C. .单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B B淋巴细胞诱导融合后,淋巴细
11、胞诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞,在这种培养基上不能存活增殖要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞,在这种培养基上不能存活增殖的细胞是:的细胞是:淋巴细胞;淋巴细胞;小鼠骨髓瘤细胞;小鼠骨髓瘤细胞;B B淋巴细胞自身融合细胞;淋巴细胞自身融合细胞;小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞;小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞;杂交瘤细胞。杂交瘤细胞。A. B. C. D.A. B. C. D. 1.1.科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合,得到杂交细胞,经科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合,得到杂交细胞,经培养可产生大量的单克隆抗体,与骨髓疤细胞融合的是:培养可产生大量的单克隆抗体,与骨髓疤细胞融合的是:A.A
12、.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A AB BD D4.4.动物细胞融合的主要目的是:动物细胞融合的主要目的是:A.A.克服远缘杂交不亲和克服远缘杂交不亲和 B.B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.C.培育新品种培育新品种 D.D.生产杂种细胞生产杂种细胞5.5.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中,正确的是:动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中,正确的是:A.A.诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.B.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 C.C.所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D.D.都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 6.6.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是:单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是:A.A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗体的B B淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 B.B.由小鼠一个由小鼠一个B B淋巴细胞诱导融合而成淋巴细胞诱导融合而成 C.C.由小鼠一个由小鼠一个B B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.D.由小鼠一个由小鼠一个B B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D D