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1、组长组长:刘晓斌刘晓斌组员组员:夏敏，夏亮，乐乐，夏敏，夏亮，乐乐， 谢晔，孙敏杰谢晔，孙敏杰指导老师指导老师:陈旭，戴小峰陈旭，戴小峰VB2的生理作用vVB2，又称核黄素，分子式C17H20N4O6，它是人体必需的13种维生素之一，作为维生素B族的成员之一，vVB2对于人体的生理作用为：1.促进发育和细胞的再生；2.促使皮肤，指甲，毛发的正常生长；3.帮助消除口腔内，唇，舌的炎症； 4.增进视力，减轻眼睛的疲劳； 5.和其他的物质相互作用来帮助碳水 化合物，脂肪，蛋白质的代谢。国内外研究方法近年来对VB2测定方法报道较多，如：1.高效液相色谱法高效液相色谱法2.流动注射化学发光法流动注射化学
2、发光法3.多元线性分光光度法多元线性分光光度法4.荧光分光光度法荧光分光光度法这些方法操作麻烦，时间较长，本实验用紫外分光光度法和荧光法测定VB2含量 。实验思路1.VB2片的紫外测定片的紫外测定VB2的避光措施4mg/L VB2 全扫描图VB2片全扫描标准曲线的绘制StandardConcentration mg/LReadingsStd 110.000.3158Std 212.000.3777Std 314.000.4432Std 416.000.5059Std 518.000.5676Std 620.000.6301浓度：1020mg/L标准曲线A=0.03278C+3.3059*10-
3、3VB2片的浓度计算结论：所测样品的含量为4.563mg/片VB2紫外线性范围浓度：0.224mg/LA=0.0312c+0.0069R2=0.9998StandardConcentration (mg/L)ReadingsStd 10.20.0082Std 20.50.0211Std 31.00.0378Std 41.50.0523Std 52.00.0705Std 64.00.1299Std 78.00.2672Std 8120.3828Std 9160.5063Std 10200.6280Std 11240.7528VB2的紫外加标回收率测定VB2样品量VB2标准液（200mg/L)Re
4、adings平均值回收率5ml0ml0.03110.03030.03075ml0.2ml0.04040.04050.0404132%5ml0.3ml0.04320.04210.0426108%5ml0.5ml0.04790.04800.047993.5%紫外分光光度法VB2检出限SampleReadingssample 1-0.0027sample 2-0.0018sample 3-0.0023Sample 4-0.0030sample 5-0.0017sample 6-0.0028Sample 7-0.0031sample 8-0.0015sample 90.0005sample 10-0.
5、0020sample 11-0.0020紫外分光光度计的检出限为0.2515mg/L。2.VB2片荧光法测定荧光工作参数荧光工作参数灯管类型灯管类型:R928电压电压:700V激发波长激发波长:450nm发射波长发射波长:530nm激发狭缝激发狭缝:6.0nm发射狭缝发射狭缝:6.0nm滤光片状态滤光片状态:打开打开搅拌子搅拌子:高速高速标准曲线：I=465.728C+4.562 R=0.9998浓度：0.0480.96mg/L计算得，VB2药片样品含量为5.874mg/片Ref.IDRef.IDConc.Conc.IntIntStd1aStd1a0.0480.04824.55224.552S
6、td1bStd1b0.0480.04824.57524.575Std2aStd2a0.0720.07236.07236.072Std2bStd2b0.0720.07236.01936.019Std3aStd3a0.0960.09649.46149.461Std3bStd3b0.0960.09649.48149.481Std4aStd4a0.120.1260.40160.401Std4bStd4b0.120.1260.19160.191Std5aStd5a0.1440.14470.77070.770Std5bStd5b0.1440.14470.61070.610Std6aStd6a0.1920.
7、19293.95293.952Std6bStd6b0.1920.19294.27594.275Std7aStd7a0.240.24121.567121.567Std7bStd7b0.240.24121.107121.107Std8aStd8a0.2880.288140.029140.029Std8bStd8b0.2880.288139.698139.698Std9aStd9a0.3840.384185.399185.399Std9bStd9b0.3840.384184.989184.989Std10aStd10a0.480.48228.367228.367Std10bStd10b0.480.4
8、8227.593227.593Std11aStd11a0.720.72336.366336.366Std11bStd11b0.720.72336.975336.975Std12aStd12a0.960.96452.284452.284Std12bStd12b0.960.96452.125452.125荧光线性范围浓度：0.0480.96mg/L I=465.728c+4.562 R=0.9998VB2荧光药片加标回收率*加入标准溶液的浓度为200mg/LVB2样品量I回收率3ml104.944104.7703ml+30l164.083163.967106.04%3ml+50l198.70319
9、8.270100.73%3ml+100l289.369288.962 99.24%荧光光度法检出限SampleReadingssample 10.828sample 20.818sample 30.879Sample 40.841sample 50.817sample 60.842Sample 70.782sample 80.829sample 90.842sample 100.804sample 110.839LOD=(XL-XB )/m=KSb/mSb=0.02486LOD=1.49*10-2g/L方法学评价维生素B2片紫外分光光度法荧光分光光度法线性范围0.224mg/L0.0480.9
10、6mg/L相对标准偏差5.776*10-4检出限0.2515mg/L1.49*10-2g/L加标回收率低浓度132%106.04%中浓度108%100.73%高浓度93.5%99.24%vt=vS平=t=28.480t0.01结论紫外分光光度法和荧光分光光度法差异极显著VB2片t检验法VB2片测定小结v紫外：VB2片含量片4.563mg/片v荧光： VB2片含量5.874mg/片分析：1.由于两种方法的检出限不同，因而VB2片稀释倍数不同，并在稀释操作过程中产生误差，致使检测结果有较大差异2.紫外分光光度法和荧光分光光度法差异极显著实验思路果蔬中维生素B2的紫外测定菠菜菠菜黄瓜黄瓜红苋菜红苋菜
11、大白菜大白菜苹果苹果鸡毛菜鸡毛菜各个样品的全扫描图人参果青菜芹菜（叶）生菜黑木耳水果蔬的紫外全扫描结论与分析讨论v结合以上几张果蔬的紫外全扫描图可以看出实验中所选的几类果蔬在波长445nm附近没有很特征的吸收峰，故不适宜使用紫外可见分光光度法来测定其中VB2的含量。v经过查阅资料，讨论分析，初步得出可能原因：样品的预处理比较粗糙，果蔬中有物质在波长445nm附近较大范围亦有吸收会影响VB2的吸收峰；VB2的浓度经过预处理而降低了，如抽滤过程中舍去了初滤液，将样品液定容等。果蔬中维生素果蔬中维生素B2的荧光测定的荧光测定 空白溶剂荧光全扫描空白溶剂荧光全扫描如左图所示，空白溶如左图所示，空白溶剂
12、（剂（0.1M的盐酸和醋的盐酸和醋酸酸-醋酸钠缓冲液）在醋酸钠缓冲液）在530nm的发射波长和的发射波长和450nm的激发波长下的激发波长下荧光值极低，对样品荧光值极低，对样品测定的影响很小测定的影响很小样品荧光全扫描样品荧光全扫描芹菜芹菜生菜生菜如上图所示，芹菜与生菜在如上图所示，芹菜与生菜在530nm发射波长与发射波长与450nm激发波激发波长的附近有比较特征的荧光，结合文献即确定该波长可作为荧长的附近有比较特征的荧光，结合文献即确定该波长可作为荧光测定的发射与激发波长。光测定的发射与激发波长。果蔬样品的测定 加入硫代硫酸钠前荧光强度加入硫代硫酸钠后荧光强度黑木耳22.7088.307生菜
13、26.24512.082青菜28.39414.085芹菜（叶）47.83123.914人参果9.1656.702VB2标准溶液（0.096mg/L）55.64420.032数据处理及计算v样品VB2 含量(g/ 100g) = ( FAO- FA) / ( FSO - FS) c 50 100/wvFAO 样品加入Na2S2O3前的荧光值vFSO标准液加入Na2S2O3前的荧光值vFA样品加入Na2S2O3后的荧光值vFS标准液加入Na2S2O3后的荧光值vw样品重量(g)vc标准液的浓度样品VB2含量黑木耳38.8g/100g生菜38.2g/100g青菜38.6g/100g芹菜（叶） 64.
14、5g/100g人参果6.64g/100g添加硫代硫酸钠所制成的标准曲线VB2标液浓度 (mg/L)加入前荧光值加入后荧光值0.02413.3975.4190.04825.0839.8930.07236.31012.6700.09648.23617.6540.12059.68621.2590.14470.52325.0240.240114.77440.8200.288136.87745.7950.384182.34059.340I=316.55c+0.1245 R2=0.9994浓度：浓度：0.0240.384mg/L以标准曲线法测定样品中VB2含量样品VB2含量（g/100g）黑木耳45生菜4
15、4.3青菜44.8芹菜（叶）75.2人参果7.4果蔬VB2测定小结v紫外果蔬中VB2的预处理比较粗糙，VB2的浓度经过预处理而降低了，如抽滤过程中舍去了初滤液，将样品液定容等。使得紫外分光光度法无法测得果蔬中VB2的含量。v比较单点法和标准曲线两种方法求得果蔬VB2的含量，两者之间有较大的差异，这是因为果蔬中除VB2还有其他物质与硫代硫酸钠反应，而标准维生素B片中没有，使计算误差产生。结论vVB2的荧光特征性强于紫外特征性。检测VB2时，运用荧光分光光度法优于紫外分光光度法。v荧光检出限低于紫外，能测定较低浓度VB2溶液。v硫代硫酸钠具有还原性，且安全无害，可代替含有较强毒性的连二亚硫酸钠作为还原剂，与维生素B2反应，效果十分明显。创新点v在现有的大多数文献中，测定VB2所用的试剂为连二亚硫酸钠，此试剂对人体危险有毒，操作困难，所以本实验用硫代硫酸钠替代连二亚硫酸钠，硫代硫酸钠对人体无毒无害，并将硫代硫酸钠配制成溶液参与实验中的反应，操作方便简单。v本实验中，首次采用添加硫代硫酸钠还原维生素B2方法制作标准曲线来测定VB2含量。这是其它文献中没用采用过的方法。收获v我们学会了分析课题，查找文献并设计实验方案，以及对实验的严谨态度。v学会独立操作紫外分光光度计和荧光分光光度计，并了解其工作原理。v了解了维生素B2的特性及富含维生素B2的食物。
