《放射免疫分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《放射免疫分析（5页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、放射免疫分析 放射免疫分析 放射免疫分析是利用放射性核素可探测的灵敏性、精确性和抗原抗体反应特异性相结合的一种免疫技术。 放射免疫技术 放射免疫分析 免疫放射分析 放射免疫分析技术的应用 放射免疫技术 具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域中各种微量蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标志物的定量分析，对相关学科的发展起到了极大的推动作用。 基本类型及原理 1.放射免疫分析（RIA） 2.免疫放射分析（IRMA） 常用的放射性核素 放射免疫技术常用的放射性核素有125、131、3H、14C 等。使用最广泛的是125，可采用
2、探测射线的晶体闪烁计数器测量。 标志物制备及鉴定 125以放射性碘原子通过置换被标志物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。 （1）氯胺 T（ch-T）法。 （2）乳过氧化物酶标记法。 （3）间接标记法。 放射性标志物的纯化 （1）凝胶过滤法：分子筛。 （2）离子交换层析法：极性差异。 （3）聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）：电荷和直径。 （4）高效液相色谱法。 放射性标志物的鉴定 1.放射化学纯度：大于 95%。 2.免疫活性：标志物与抗体结合的能力。 3.比放射性：标志物中所含的放射性强度。 方法学评价 除常规的灵敏度、精密度、准确性、特异性和稳定性等指标外，还应注意以下指标： （
3、1）可靠性。 （2）剂量-反应曲线。 （3）高剂量钩状效应。 放射免疫分析 放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA）是以放射性核素标记的抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合有限的特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法。 Ag*+Ag+AbAg*-Ab+Ag-Ab+Ag*+Ag 分离结合与游离标志物 1.第二抗体沉淀法。 2.聚乙二醇（PEG）沉淀法。 3.PR 试剂法：先将二抗与 PEG 按一定比例混合成悬液后进行试验。 4.活性炭吸附法。 放射性测量及数据处理 可对标记抗原抗体复合物（B）或游离标记抗原（F）进行放射性测量，绘制标准曲线，查出相应的待检抗原浓度。
4、 免疫放射分析 免疫放射分析（immunoradiometric assay，IRMA）是以过量125标记抗体与待测抗原进行非竞争性免疫结合反应，用固相免疫吸附剂对 B 或 F 进行分离，其灵敏度和可测范围均优于 RIA，操作程序较 RIA 简单。 Ag+Ab*Ag-Ab*+Ab* 单位点 IRMA 过量标记抗体与待测抗原进行反应，平衡后，再用固相抗原结合反应液中剩余的未结合标记抗体并将其分离，测定上清液的放射量。 双位点 IRMA 形成固相抗体-抗原-标记抗体复合物，洗弃反应液中剩余的标记抗体，测定固相上的放射性。 RIA 与 IRMA 的比较 RIA IRMA 标记物质 核素标记 Ag 核
5、素标记 Ab 反应速率 较慢 较快 反应原理 竞争抑制 非竞争性结合 特异性 特异性较低 特异性较强 分析误差 较大 较小 标记物量 限量 过量 应用 可测大分子量、小分子量的物质 测定 2 个以上抗原表位的物质 放射免疫分析技术的应用 常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物和药物等微量物质的测定。 由于放射污染和危害，常用放射性核素半衰期短，试剂盒有效期不长，无法自动化分析等诸多不足。 【习题】 下列何种物质不常用放射免疫技术分析 A.激素 B.微量蛋白质 C.肿瘤标志物 D.药物 E.抗核抗体 正确答案E 答案解析放射免疫技术分析常用于检测抗原类的物质。 125I 标记物的放射化学纯度要求
6、 A.80% B.90% C.95% D.98% E.99% 正确答案C 答案解析125I 标记物的放射化学纯度要求95%。 关于 RIA，下列说法正确的是 A.标记抗原限量 B.标记抗体限量 C.抗体限量 D.标准抗原限量 E.待测抗原限量 正确答案C 答案解析 RIA 是以放射性核素标记的抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合有限的特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法 关于 IRMA 说法正确的是 A.反应中加入过量的标记抗原 B.反应中加入定量的标记抗原 C.反应中加入过量抗体 D.反应中加入过量的标记抗体 E.反应中加入定量的标记抗体 正确答案D 答案解析IRMA 是以过
7、量125标记抗体与待测抗原进行非竞争性免疫结合反应，用固相免疫吸附剂对 B 或 F 进行分离，其灵敏度和可测范围均优于 RIA，操作程序较 RIA 简单。 关于单位点 IRMA 说法正确的是 A.首先加入固相抗原与待测标本 B.然后加入标记抗体 C.测定固相免疫复合物的放射量 D.测定上清液的放射量 E.待测抗原需含二个以上表位 正确答案D 答案解析单位点 IRMA，过量标记抗体与待测抗原进行反应，平衡后，再用固相抗原结合反应液中剩余的未结合标记抗体并将其分离，测定上清液的放射量。 关于 IRMA 与 RIA，说法错误的是 A.IRMA 较 RIA 特异性高 B.IRMA 较 RIA 灵敏度高 C.IRMA 较 RIA 标准曲线工作范围宽 D.IRMA 所用抗体较少 E.RIA 所用抗体较少 正确答案D 答案解析RIA 所用抗体较少。
