《医学免疫学教学课件：实验二 细菌接种》由会员分享，可在线阅读，更多相关《医学免疫学教学课件：实验二 细菌接种（33页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、细菌接种法细菌接种法原理：原理： 用接种环（针）沾取细菌或标本，通过划线涂抹等方法，将细菌接种到合适的培养基上，并在一定的条件下使细菌得以生长繁殖。 接种环（针）灭菌俟冷沾取细菌或标本进行接种环灭菌步骤和方法1. 接种工具接种工具n n常用的有常用的有常用的有常用的有接种针、接种环接种针、接种环接种针、接种环接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、玻璃涂棒等。玻璃涂棒等。玻璃涂棒等。玻璃涂棒等。图6接种工具接种工具2.2.接种环境接种环境 接种罩 超净工作台 无菌室3.接种方法接种方法根据待
2、检标本性质、培养目的和所用培养基的性质采用不同的接种方法。1） 平板划线分离培养法：平板划线分离培养法：使标本混杂混杂的多种细菌分散成单单个细菌个细菌。 *连续划线分离法 *分区划线分离法2.连续划线法连续划线法1.分区划线法分区划线法第一区划线第一区划线第一区划线第一区划线灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环第二区划线第二区划线第二区划线第二区划线灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环第三区划线第三区划线第三区划线第三区划线灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环平板分区划线分离法平板分区划线分离法菌菌落落平板分区划线分离混杂菌1、琼脂斜面接种法、琼脂斜面接种法菌种：菌种：葡萄球菌、葡
3、萄球菌、大肠埃希菌等普通大肠埃希菌等普通琼脂培养物；琼脂培养物；培养基：培养基：斜面固体斜面固体培养基；培养基；用途：用途：扩增细菌、扩增细菌、保存菌种；或用于保存菌种；或用于观察其某些生化特观察其某些生化特性。性。琼脂斜面培养基接种法琼脂斜面培养基接种法2）斜面接种法：）斜面接种法： 主要用于纯种移植，以进一步鉴鉴定或保存定或保存菌种菌菌苔苔2、液体接种法、液体接种法菌种：菌种：菌种：菌种：葡萄球菌或大肠埃葡萄球菌或大肠埃葡萄球菌或大肠埃葡萄球菌或大肠埃希菌、枯草杆菌等普通琼希菌、枯草杆菌等普通琼希菌、枯草杆菌等普通琼希菌、枯草杆菌等普通琼脂培养物；脂培养物；脂培养物；脂培养物；培养基：培养
4、基：培养基：培养基：液体培养基；液体培养基；液体培养基；液体培养基；接种方法：接种方法：接种方法：接种方法：液体接种法。液体接种法。液体接种法。液体接种法。 从斜面菌种接入液体从斜面菌种接入液体从斜面菌种接入液体从斜面菌种接入液体培养液；从液体培养液接培养液；从液体培养液接培养液；从液体培养液接培养液；从液体培养液接入液体培养液；入液体培养液；入液体培养液；入液体培养液；用途：用途：用途：用途：扩增细菌，用于观扩增细菌，用于观扩增细菌，用于观扩增细菌，用于观察细菌的生长特性或测定察细菌的生长特性或测定察细菌的生长特性或测定察细菌的生长特性或测定其生化特性。其生化特性。其生化特性。其生化特性。3
5、）液体接种法：）液体接种法：可观察到细菌不同的生长现象细菌在细菌在液体培养基液体培养基中的生长现象中的生长现象混浊：混浊：混浊：混浊：大多数细菌大多数细菌大多数细菌大多数细菌沉淀：沉淀：沉淀：沉淀：多见于链状排列的细菌多见于链状排列的细菌多见于链状排列的细菌多见于链状排列的细菌菌膜：菌膜：菌膜：菌膜：多见于需氧菌多见于需氧菌多见于需氧菌多见于需氧菌3、半固体穿种接种法、半固体穿种接种法菌种：菌种：菌种：菌种：葡萄球菌、大肠埃葡萄球菌、大肠埃葡萄球菌、大肠埃葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂培养物；希菌等普通琼脂培养物；希菌等普通琼脂培养物；希菌等普通琼脂培养物；培养基：培养基：培养基：培养基：半固
6、体培养基半固体培养基半固体培养基半固体培养基接种方法：接种方法：接种方法：接种方法：穿刺接种法。穿刺接种法。穿刺接种法。穿刺接种法。用用用用接种针接种针接种针接种针垂直地穿入培养垂直地穿入培养垂直地穿入培养垂直地穿入培养基中心至底部；然后沿着基中心至底部；然后沿着基中心至底部；然后沿着基中心至底部；然后沿着原接种线原接种线原接种线原接种线将针拔出。将针拔出。将针拔出。将针拔出。用途：用途：用途：用途：检验细菌的运动性检验细菌的运动性检验细菌的运动性检验细菌的运动性或观察细菌的生化反应。或观察细菌的生化反应。或观察细菌的生化反应。或观察细菌的生化反应。4）半固体穿刺接种法：）半固体穿刺接种法：可
7、用于保菌或观察动力细菌在细菌在半固体培养基半固体培养基中的生长现象中的生长现象n n有鞭毛细菌：有鞭毛细菌：有鞭毛细菌：有鞭毛细菌：在在在在培养基中沿穿刺培养基中沿穿刺培养基中沿穿刺培养基中沿穿刺线并向外扩散生线并向外扩散生线并向外扩散生线并向外扩散生长，穿刺线边缘长，穿刺线边缘长，穿刺线边缘长，穿刺线边缘模糊。模糊。模糊。模糊。n n无鞭毛细菌：无鞭毛细菌：无鞭毛细菌：无鞭毛细菌：只只只只沿穿刺线生长，沿穿刺线生长，沿穿刺线生长，沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。穿刺线边缘清晰。穿刺线边缘清晰。穿刺线边缘清晰。四、细菌培养法四、细菌培养法一般培养（需氧培养）：一般培养（需氧培养）：培养温度：培养
8、温度：培养温度：培养温度：35353535（采用恒温培养箱）（采用恒温培养箱）（采用恒温培养箱）（采用恒温培养箱）培养时间：培养时间：培养时间：培养时间：1818181824h24h24h24h二氧化碳培养法：二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培烛缸法、二氧化碳培养箱养箱厌氧培养法：厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等细菌在细菌在固体培养基固体培养基中的生长现象中的生长现象n n菌落：菌落：菌落：菌落：定义：指单个细菌在平板培养基上定义：指单个细菌在平板培养基上定义：指单个细菌在平板培养基上定义：指单个细菌在平板
9、培养基上3737373718-24h18-24h18-24h18-24h的生长繁殖，形成单一的肉眼可见的细菌集团。的生长繁殖，形成单一的肉眼可见的细菌集团。的生长繁殖，形成单一的肉眼可见的细菌集团。的生长繁殖，形成单一的肉眼可见的细菌集团。菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性透明度、湿润度、黏度、溶血性透明度、湿润度、黏度、溶血性透明度、湿润度、黏度、溶血性菌落类型：光滑型（菌落类型：光滑型（菌落类型：光滑型（菌落类型：光滑型（S S S S）
10、、粗糙型（）、粗糙型（）、粗糙型（）、粗糙型（R R R R）、黏液）、黏液）、黏液）、黏液型（型（型（型（M M M M）n n菌苔：菌苔：菌苔：菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。菌落与菌苔菌落与菌苔菌落的形态特征有助于细菌的鉴别菌落的形态特征有助于细菌的鉴别菌落（菌落（S型）型）菌苔菌苔菌落（菌落（R型）型）细菌在固体培养基中的生长现象n菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度
11、、溶血性菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）n菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。菌 落培养基的成分和作用n培养基：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。(1) 营养物质：蛋白胨(氮源)、肉浸液（氮源和碳源）、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类(2) 水(3) 凝固剂：琼脂、明胶(4) 抑制剂：非生长必需，而是选择、鉴定及判断结果的需要(5) 指示剂：便于观察细菌培养基的种类（按用途分类）n基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板n营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板n鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖培养基（KIA）n选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目的菌，如SS平板n增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤。n厌氧培养基：用于培养厌氧菌培养基的种类（按物理性状分类）n液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。n半固体培养基：含0.30.5琼脂，用于观察细菌的动力。n固体培养基：含22.5琼脂，多用于细菌的分离培养。培养基的制备培养基的制备n玻璃器皿的消毒灭菌玻璃器皿的消毒灭菌n制备的程序制备的程序调配调配 溶化溶化 矫正矫正pH 过滤澄清过滤澄清 分装分装灭菌灭菌鉴定鉴定保存保存
