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1、 实验三实验三南华大学病原学实验中心南华大学病原学实验中心微生物学与免疫学教研室微生物学与免疫学教研室1、细菌的人工培育讲授、细菌的人工培育讲授2、细菌的培育方法：、细菌的培育方法： 固体培育基接种法自做；固体培育基接种法自做； 半固体、液体培育基接种法示教半固体、液体培育基接种法示教3、葡萄球菌、链球菌培育及生化示教、葡萄球菌、链球菌培育及生化示教4、细菌的形状察看、细菌的形状察看 自阅片：甲型链球菌、结核杆菌自阅片：甲型链球菌、结核杆菌 示教片：淋球菌、肉毒杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、炭示教片：淋球菌、肉毒杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、炭疽杆菌疽杆菌实验内容实验内容第四节第四节 细菌的人
2、工培育细菌的人工培育 p31 p31一、培育基一、培育基culture mediumculture medium：是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁衍是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁衍运用的混合营养物制品。运用的混合营养物制品。常用培育基的种类常用培育基的种类 按营养组成和用按营养组成和用途分途分厌氧培育基厌氧培育基根底培育基根底培育基增菌培育基增菌培育基选择培育基选择培育基鉴别培育基鉴别培育基二、细菌在培育基中的生长情况二、细菌在培育基中的生长情况 据物理形据物理形状分状分1 1、液体培育基：、液体培育基：均匀混浊、沉淀生长、外表生长菌膜；均匀混浊、沉淀生长、外表生长菌膜；多用
3、于增菌多用于增菌均匀混浊均匀混浊对照对照沉淀生长沉淀生长2 2、固体培育基：、固体培育基： 含含1.5%1.5%琼脂脂 用于分用于分别培育培育菌落：菌落：单个个细菌分裂繁衍成一堆肉菌分裂繁衍成一堆肉眼可眼可见 的的细菌集菌集团。纯培育：挑取一个菌落，移种到另培育：挑取一个菌落，移种到另一培育一培育 基中，生基中，生长出来的出来的细菌均菌均为纯 种，称种，称为纯培育。培育。菌落特征大小、外形、菌落特征大小、外形、颜色、气色、气味、透明度、光滑或粗糙、潮湿或味、透明度、光滑或粗糙、潮湿或枯燥、隆起或扁平、枯燥、隆起或扁平、边缘整整齐与否、与否、能否溶血等能否溶血等有助于有助于细菌菌鉴定定菌落菌落S
4、型型菌苔菌苔菌落菌落R型型光滑型光滑型(S型型)粗外型粗外型(R型型)粘液型粘液型(M型型) 3 3、半固体培育基：含、半固体培育基：含0.3%0.5%0.3%0.5%琼脂脂 鞭毛菌鞭毛菌混混浊生生长沿穿刺沿穿刺线呈云呈云雾状状/ /羽毛状羽毛状 无鞭毛菌无鞭毛菌沿穿刺沿穿刺线呈呈线状生状生长 用于用于检测细菌的菌的动力和保管菌种力和保管菌种斜面划线表示图斜面划线表示图4 4、斜面培育基接种法、斜面培育基接种法运用：短期保管菌种运用：短期保管菌种三、人工培育细菌的用途三、人工培育细菌的用途u在医学中的运用在医学中的运用u 1. 1.感染性疾病的病原学感染性疾病的病原学诊诊断：明确病因，指点用断
5、：明确病因，指点用药药u 2. 2.细细菌学的研菌学的研讨讨：细细菌菌遗传遗传、变变异、耐异、耐药药性性u 3. 3.生物制品的制生物制品的制备备：疫苗、：疫苗、类类毒素、抗毒素毒素、抗毒素u在工在工农业农业消消费费中的运用中的运用 抗生素、抗生素、维维生素、生素、酶酶制制剂剂等等 u在基因工程中的运用在基因工程中的运用 基因工程菌基因工程菌乙肝疫苗乙肝疫苗 进入实验内容讲授进入实验内容讲授1 1、固体培育基、固体培育基( (平板平板) )接种法接种法分区划线法分区划线法延续划线法延续划线法第一区划线第一区划线灭菌接种环灭菌接种环第二区划线第二区划线灭菌接种环灭菌接种环第三区划线第三区划线灭菌
6、接种环灭菌接种环灭菌接种环，取菌预备灭菌接种环，取菌预备分区划线法分区划线法原划线原划线标本：混合菌液标本：混合菌液分组：分组：1人一个固体平板人一个固体平板延续划线法延续划线法菌落表示图菌落表示图细菌在固体培育基中的生长景象细菌在固体培育基中的生长景象细菌在固体培育基中的生长景象细菌在固体培育基中的生长景象 菌菌 落落 菌落特征：大小、外形、菌落特征：大小、外形、颜色、气味、透明度、色、气味、透明度、外表光滑或粗糙、潮湿或枯燥、外表光滑或粗糙、潮湿或枯燥、边缘整整齐与否、溶与否、溶血性等。血性等。 菌落菌落类型：型： S S型、型、 R R型、型、 M M型菌落。型菌落。 菌菌 苔：指多个菌
7、落交融在一同构成的苔：指多个菌落交融在一同构成的细菌堆菌堆积物。物。菌落菌落S型型菌苔菌苔菌落菌落R型型光滑型光滑型(S型型)粗外型粗外型(R型型)粘液型粘液型(M型型)本卷须知本卷须知1、无菌操作、无菌操作2、密而不重叠、密而不重叠3、勿划破琼脂、勿划破琼脂4、做好标志，第二天察看结果、做好标志，第二天察看结果2、葡萄球菌培育示教、葡萄球菌培育示教营养要求不高，普通培育基生长良好营养要求不高，普通培育基生长良好 菌菌 落：落： S S型菌落，型菌落，金黄色、表皮、腐金黄色、表皮、腐生葡萄球菌各自构生葡萄球菌各自构成金黄色、白色、成金黄色、白色、柠檬色柠檬色- -脂溶性色素脂溶性色素血平板：血
8、平板： 金黄色葡萄球金黄色葡萄球菌构成的菌构成的-溶溶血血环金黄色色素金黄色色素白色色素白色色素3 3、链球菌培育示教、链球菌培育示教 血平板上的菌落：血平板上的菌落： 甲型溶血性链球菌构甲型溶血性链球菌构成草绿色溶血景象，乙型溶血性链球菌构成草绿色溶血景象，乙型溶血性链球菌构成透明的完全溶血景象，丙型链球菌无溶成透明的完全溶血景象，丙型链球菌无溶血景象。血景象。甲甲链溶血溶血草草绿色溶血色溶血乙乙链溶血溶血丙链丙链不溶血不溶血4、常见致病菌的形状与染色性、常见致病菌的形状与染色性甲型溶血性甲型溶血性甲型溶血性甲型溶血性链链球菌球菌球菌球菌取材：纯培育物取材：纯培育物染色法：革兰染色染色法：革
9、兰染色放大倍数：放大倍数：10X100自阅片之一自阅片之一结结核分枝杆菌核分枝杆菌核分枝杆菌核分枝杆菌取材：痰涂片取材：痰涂片染色法：抗酸染色染色法：抗酸染色放大倍数：放大倍数：10X100自阅片之二自阅片之二菌体染成红色，菌体染成红色，细长略微弯曲杆细长略微弯曲杆菌，单个或分枝菌，单个或分枝状陈列；状陈列；非抗酸菌及细非抗酸菌及细胞染成蓝色胞染成蓝色淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌示教片之一示教片之一取材：泌尿道脓性分泌物取材：泌尿道脓性分泌物染色法：革兰染色染色法：革兰染色放大倍数：放大倍数：10X100淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌中性粒细胞分叶核中性粒细胞分叶核淋球菌
10、染成红色淋球菌染成红色/G-，肾形或豆形，成，肾形或豆形，成双陈列双陈列肉毒梭菌肉毒梭菌肉毒梭菌肉毒梭菌示教片之二示教片之二取材：纯培育物取材：纯培育物染色法：革兰染色染色法：革兰染色放大倍数：放大倍数：10X100G+粗短杆菌，粗短杆菌，芽胞呈椭圆形，芽胞呈椭圆形，比菌体粗，次极比菌体粗，次极端，细菌呈汤匙端，细菌呈汤匙状或网球拍状状或网球拍状产产气气气气荚荚膜梭菌膜梭菌膜梭菌膜梭菌示教片之三示教片之三取材：小鼠腹腔渗出液取材：小鼠腹腔渗出液染色法：革兰染色染色法：革兰染色放大倍数：放大倍数：10X100G+粗大杆菌，粗大杆菌，两端几乎平切，两端几乎平切，在被感染得人在被感染得人或动物体内构
11、或动物体内构成明显的荚膜成明显的荚膜炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌示教片之四示教片之四取材：纯培育物取材：纯培育物染色法：革兰染色染色法：革兰染色放大倍数：放大倍数：10X100G+粗大杆菌，粗大杆菌，有氧条件下构有氧条件下构成椭圆形芽胞，成椭圆形芽胞，位于菌体中央位于菌体中央白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌取材：纯培育物取材：纯培育物染色法：美蓝染色染色法：美蓝染色放大倍数：放大倍数：10X100取材：纯培育物取材：纯培育物染色法：染色法：Neisser染色染色放大倍数：放大倍数：10X100示教片之五示教片之五菌体细长弯曲的杆菌，粗细不一，常一菌体细长弯曲的杆菌，粗细不一
12、，常一端或两端膨大呈棒状；陈列不规那么，端或两端膨大呈棒状；陈列不规那么，呈栅栏状、呈栅栏状、V字形或字形或L字形。异染颗粒字形。异染颗粒1、细菌的人工培育讲授、细菌的人工培育讲授2、细菌的培育方法：、细菌的培育方法： 固体培育基接种法自做；固体培育基接种法自做； 半固体、液体培育基接种法示教半固体、液体培育基接种法示教3、葡萄球菌、链球菌培育及生化示教、葡萄球菌、链球菌培育及生化示教4、细菌的形状察看、细菌的形状察看 自阅片：甲型链球菌、结核杆菌自阅片：甲型链球菌、结核杆菌 示教片：淋球菌、肉毒杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、炭疽杆菌示教片：淋球菌、肉毒杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、炭疽杆菌第
13、第2页：页： 实验称号：细菌平板划线分别法实验称号：细菌平板划线分别法 记录实验结果绘一简图并描画平板上的菌落特征记录实验结果绘一简图并描画平板上的菌落特征第第3页页 ： 实验称号：细菌的形状察看绘图实验称号：细菌的形状察看绘图甲型链球菌、结核杆菌、淋球菌、肉毒杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、炭疽杆菌甲型链球菌、结核杆菌、淋球菌、肉毒杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、炭疽杆菌 实验内容实验内容第第1页：页： 实验称号：细菌培育及形状察看实验称号：细菌培育及形状察看甲型溶血性甲型溶血性甲型溶血性甲型溶血性链链球菌球菌球菌球菌取材：取材：取材：取材：纯纯培育物培育物培育物培育物染色法：革染色法：革染色法
14、：革染色法：革兰兰染色染色染色染色放大倍数：放大倍数：放大倍数：放大倍数：10X10010X100结结核分枝杆菌核分枝杆菌核分枝杆菌核分枝杆菌取材：痰涂片取材：痰涂片取材：痰涂片取材：痰涂片染色法：抗酸染色染色法：抗酸染色染色法：抗酸染色染色法：抗酸染色放大倍数：放大倍数：放大倍数：放大倍数：10X10010X100 淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌取材：泌尿道取材：泌尿道取材：泌尿道取材：泌尿道脓脓性分泌物性分泌物性分泌物性分泌物染色法：革染色法：革染色法：革染色法：革兰兰染色染色染色染色放大倍数：放大倍数：放大倍数：放大倍数：10X10010X100肉毒梭菌肉毒梭菌肉毒梭菌肉毒梭菌
15、取材：取材：取材：取材：纯纯培育物培育物培育物培育物染色法：革染色法：革染色法：革染色法：革兰兰染色染色染色染色放大倍数：放大倍数：放大倍数：放大倍数：10X10010X100产产气气气气荚荚膜梭菌膜梭菌膜梭菌膜梭菌取材：小鼠腹腔渗出液取材：小鼠腹腔渗出液取材：小鼠腹腔渗出液取材：小鼠腹腔渗出液染色法：革染色法：革染色法：革染色法：革兰兰染色染色染色染色放大倍数：放大倍数：放大倍数：放大倍数：10X10010X100炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌取材：取材：取材：取材：纯纯培育物培育物培育物培育物染色法：革染色法：革染色法：革染色法：革兰兰染色染色染色染色放大倍数：放大倍数：放大倍数：放大倍数：10X10010X100白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌取材：取材：取材：取材：纯纯培育物培育物培育物培育物染色法：染色法：染色法：染色法：NeisserNeisser染色染色染色染色放大倍数：放大倍数：放大倍数：放大倍数：10X10010X100
